Diferansiyel (Ayırtedici) Diferansiyel (Ayırtedici) BoyamaBoyama

Bakterilerin gruplarını ayırtetmek için kullanılır.

Gram BoyamaAsit-Fast Boyama

GRAM BOYAMAGRAM BOYAMA

En önemli ve en sık kullanılan ayırdedici bir boyama tekniğidir.

Bakterileri hücre duvarlarının kimyasal ve fiziksel özelliklerine göre iki büyük gruba ayırmak için kullanılan bir yöntemdir.Bakteri örneğinin tanılanmasında ilk aşama olan Gr(+)/ Gr (-) ayırımının yapılmasında kullanılır.

Bu metodu bulan kişi Danimarkalı bilim adamı Hans Christian Gram’dır.

Bakteriler Gr(+) ve Gr (-) olarak iki ana gruba ayrılırlar. Bu farklılık gram boyama reaksiyonundan kaynaklanır. Gram reaksiyonu ise bakterilerin hücre çeperi farklılıklarından temellenir.

Cell walls of bacteriaCell walls of bacteria(1)(1)

Gram - Gram +

-Bakterilere dayanıklılığı veren esas yapı çeperde bulunan peptidoglikandır.

- Peptidoglikan esas olarak 2 şeker türevinden ve bir grup amino asitten oluşur.

- Peptidoglikanda bulunan şekerler:

- N-acetylglucosamine (NAG).

- N-acetylmuramic acid (NAM).

-Hücre çeperi hücreyi dış etkilerden korur ve hücreye şakil verir.

-Peptidoglikan tabakada bulunan amino asitler:

-L-alanin-D-alanin-D-Glutamik asit-Lisin (Gr +) veya DAP (Gr -)

PeptidogPeptidogikikanan yapısı yapısı

• Gram Pozitif:

- Peptidoglikan tabakası kalın.

- Teikoik asit oldukça büyük miktarda bulunur.

• Gram Negatif:- Gram (+)’lerden daha kompleksdir..

- Kalın dış membran; lipidleri, lipopolisakkaridleri ve lipoproteinleri içerir.- peptidoglycan tabaka incedir.

The Gram-negative outer The Gram-negative outer membranemembrane(1)(1)

Gram-NegatiGram-Negatiff ve ve Gram-PositiGram-Positif f BaBakkteriteriler Arasındaki Farklılıklarler Arasındaki Farklılıklar

Gram-Negatif Bakteri Gram-Pozitif BakteriHücre çepri kompleks. Kalınlığı 10nm

Basit hücre çeperi. Kalınlığı 20-80nm

Hücre duvarında 2 tabaka var Hücre duvarındaki tabaka sayısı 1

Peptidoglikan ince. Oldukça kalın.

Teikoik asid yok Teikoik asid var

Lipid ve lipoprotein içeriği %58 %0-3

Lipopolisakkarid %13 %0

Protein içeriği %9 %0

Penicilin’e duyarlı değil Duyarlı

Kırmızı pembe görünür Mor renkte görünür.

Gram Gram Boyama ProsedürüBoyama Prosedürü

a small drop of water spread the bacteria/water

mixture a small amount of the bacteri

completely air dry

3 times to heat-fix crystal violet for one minute wash with water

gram's iodine solution for one minute and wash with water.

safranin for one minutes

and wash with water wash with %95 etanol for 10 seconds and wash with water

Gram Gram BoyamaBoyama

ilk boya

mordant

karşıt boya

dekolorizasyon

pozitifnegatif

Gram BoyamaGram Boyama

Gram + hücreler

Gram – hücreler

İlk boya

Crystal violet

Mor Mor

Mordant:

Iodine

Mor Mor

Dekolorize ajan:

Alkol

Mor Renksiz

Karşıt boya:

Safranin

Mor Pembe/kırmızı

Gram Gram BoyamaBoyama

Streptococcus pneumoniaeG+ kok

Proteus vulgaris G-basil

Staphylococcus epidermidis G+ kok

Gram Gram boyamaboyama – – karışık kültürkarışık kültür

Mikrometrik lam (her aralıkMikrometrik lam (her aralık 10 µm= 0,01mm) 10 µm= 0,01mm)

Mikrometrik oküler

Örnek: Mikrometrik okülerde bir streptobasilin boyu 5, eni 1 aralıktır. Mikrometrik okülerin 10 aralığı mikrometrik lamın 1 aralığına eşit ise basilin eni ve boyu kaç µm’dir?

mikrometrik okülerin 10 aralığı 1 lam aralığı ise? mikrometrik okülerin 1 aralığı ?