·107·实用器官移植电子杂志  2013 年第 1 卷第 2 期  Prac J Organ Transplant（Electronic Version）， March 2013，Vol.1，No.2

·论著·

肝细胞肝癌中生长抑素受体 2/5 的表达研究

李姗霓，孙丽莹（天津市第一中心医院器官移植中心移植内科，天津 300192）

【摘要】 目的 观察生长抑素受体（SSTR）-2/5 在人原发性肝细胞肝癌及癌旁组织的表达，探讨其

临床意义。方法　选择 2008 年 2 月至 2010 年 7 月期间在天津市第一中心医院住院手术治疗的 22 例肝细

胞肝癌患者，切取病理组织，采用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测 SSTR-2/5 在

肝癌及癌旁组织中的表达，并比较其与临床病理参数的关系。结果　癌旁组织和肝癌组织中 SSTR-2/5 均

呈阳性表达 ；肝癌组织 SSTR-2/5 表达明显低于癌旁肝硬化组织〔SSTR-2 mRNA（RQ 值）：1.89±0.74 比

2.54±0.80，SSTR-5 mRNA（RQ 值）：3.61±1.66 比 6.78±4.27；SSTR-2蛋白：68.2%（12/22）比 95.5%（21/22），

SSTR-2/5 蛋白均为 95.5%（21/22）；均 P＜0.05〕。全部患者术后平均无瘤生存期为 27.3 个月，SSTR-2/5 高

表达组较低表达组无瘤生存期延长（log-rank＝4.08，P＝0.043）。结论　SSTR 低表达预后相对较差，SSTR

表达的表征可以被用来作为评估肝癌预后的有用参数。

【关键词】 肝细胞肝癌 ；生长抑素受体 ；预后

Characterization of somatostatin receptor 2/5 expression in operable hepatocellular carcinomas

LI Shan-ni，SUN Li-ying. Department of Liver Transplant，First Center Hospital，Tianjin 300192，China

Corresponding author：SUN Li-ying，Email：sunxlx@yahoo.com.cn

【Abstract】 Objects To analyze the expression of somatostatin receptor（SSTR）-2/5 in HBV-related

hepatocellular carcinomas（HCC） and compare its clinicopathological features and follow-up data. Methods 22

patients diagnosed with HCC between February 2008 and July 2010 underwent radical liver resection. Expression of

SSTR-2/5 in HCC and adjacent cirrhotic tissues were examined by immunohistochemistry and real time polymerase

chain reaction（PCR）. Moreover， the relationship between SSTR expression and clinicopathological features were

also compared. The patients had routine follow-up exams until cancer reoccurred. Results Adjacent cirrhotic

liver and HCC expressed SSTR-2/5. Compared to adjacent cirrhotic liver tissues， expression of SSTR-2/5 in tumors

were significantly lower〔SSTR-2 mRNA（RQ）：1.89±0.74 vs. 2.54±0.80，SSTR-5 mRNA（RQ）：3.61±1.66

vs. 6.78±4.27 ；SSTR-2 protein ：68.2%（12/22） vs. 95.5%（21/22），SSTR-2/5 protein ：both 95.5%（21/22），all

P＜0.05〕. The mean progression free survival for all patients was 27.3 months. The high SSTR-2/5 expression

group had significantly improved the progression free survival compared to the low expression group（log-rank＝

4.08，P＝0.043）. Conclusions Down regulation of SSTR transcription may result in loss of a tumor suppressive.

Characterization of SSTR expression can be used as a useful parameter to evaluate the prognosis of HCC.

【Key words】 Hepatocellular carcinomas； Somatostatin receptor； Prognosis

    基金项目：国家高技术研究发展计划（863）项目（2012AA021001）

    通讯作者：孙丽莹，Email：sunxlx@yahoo.com.cn

发率亦高达 40%［1］。因此急需进一步了解肝细胞肝

癌的发生机制，并制定一种有效的肝癌治疗方案。

生长抑素不但可以抑制某些促生长激素分泌，

而且对某些肿瘤的生长也有抑制作用。药理学研

究证实，生长抑素与肿瘤组织中的生长抑素受体

（SSTR）特异结合才能发挥抑制肿瘤生长的作用。

肝细胞肝癌（HCC）是肝硬化患者严重并发症

之一，根治性手术切除是目前主要治疗手段，而根

治术后复发是影响肝癌患者长期生存的关键。肝癌

术后复发率可高达 60% 以上，即使小肝癌术后复

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包括肝癌在内的许多实体肿瘤均存在SSTR的表达，

而且体外受体放射自显影和放射配体结合研究也发

现肝癌组织存在 SSTR［2］。近年来，长效奥曲肽（善

龙）被认为对无法手术切除的原发性肝癌有一定治

疗作用［3］，而其用于预防肝癌术后复发鲜见报道。

本研究采用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链

反应（PCR）的方法检测人肝细胞肝癌及癌旁组织

中 SSTR-2/5 的表达，并探讨分析其临床意义。

1 材料与方法

1.1 患者选择

收集 2008 年 2 月至 2010 年 7 月住院治疗并

经手术切除的 22 例Ⅰ期原发性肝细胞肝癌患者，

其中男性 18 例，女性 4 例 ；年龄 31～60 岁，平均

（48.12±7.25）岁。病例经病理学证实，其中肝右

叶10例，左叶12例；直径＞3 cm 9例，≤3 cm 13例；

高 / 中分化 13 例，低分化 9 例 ；肿瘤内有脉管癌

栓 7 例，无脉管癌栓 15 例。所有患者术后定期来

院复查，随访至 2011 年 10 月，无失访病例。

肿瘤组织离体后，迅速切取部分肝癌及癌旁组

织置入液氮中速冻，-80 ℃冰箱中保存备用 ；另取

同样组织浸泡固定于 10% 中性缓冲甲醛（福尔马

林）溶液，石蜡包埋备用。

1.2 实验试剂和材料

RNA 提取试剂 TRIzol 及 cDNA 第一链合成试

剂盒 SuperscriptTM Ⅲ Power 均为美国 Invitrogen 公

司产品 ；SYBRGreen 定量 PCR 试剂盒 PCR Master

Mix 为美国 ABI 公司产品 ；目的基因 SSTR-2/5 及

内参 GAPDH 引物由南京金思特科技有限公司设

计、合成。免疫组化兔抗人 SSTR-2/5 多克隆抗体

为美国 Abcam 公司产品，免疫组化（SP）检测试

剂盒购自北京中杉生物有限公司。

1.3 实时荧光定量 PCR 检测 SSTR-2/5 mRNA 表达

1.3.1 总 RNA 提取和 cDNA 的合成

取 50 mg 组织加 1 ml TRIzol，操作按照说明书

进行，加入二乙基焦磷酸胺（DEPC）处理水溶解

RNA。经凝胶电泳后，使用紫外分光光度仪检测

提取总 RNA 的质量和浓度，要求 A260/A280 比值为

1.8～2.0，并计算 RNA 含量。取 5 μg 符合上述纯

度的 RNA，按照 Invitrogen SuperscriptTM Ⅲ试剂说

明书操作，逆转录合成 cDNA 第一链。

1.3.2 实时荧光定量 PCR 检测 SSTR-2/5 mRNA

使用 ABI7500 全自动荧光定量 PCR 仪（美国

ABI 公司）进行实验。样本按 20 μl 反应体系进行：

cDNA 1 μl，SYBR Green PCR Master Mix 10 μl，上

下游引物各 0.5 μl，加超纯水定容至 20 μl。样品管

和内参管均为 3 次复管实验。反应条件为 ：95 ℃

10 分钟，然后 95 ℃ 10 秒，60 ℃ 40 秒，72 ℃ 15 秒，

共 40 个循环。反应结束后，电脑自动分析荧光信

号并将其转换 Ct 值。以内参 GAPDH 基因为内标，

通过随机附带相对定量计算分析软件（RQ Study

Software）对各样本 SSTR-2/5 基因进行相对定量分

析，计算 RQ 值（2-ΔΔCt）。

1.4 免疫组化定性分析 SSTR-2/5 蛋白表达

将组织标本制成 4 μm 厚连续石蜡切片，采用

SP 方法染色，选用已知阳性切片作为阳性对照，

用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

SSTR-2/5蛋白SP染色阳性主要定位于胞浆或胞膜，

呈棕黄色。

1.5 统计学分析

对实验数据采用 SPSS 13.0 统计软件包进行

分析，计量资料以均数 ± 标准差（x±s）表示，

组间比较采用两样本均数的 t 检验，生存分析采用

Kaplan-Meier 法。按 α＝0.05 的水准判断差异是否

具有统计学意义。

2 结 果

2.1 肝癌及癌旁组织中 SSTR-2/5 的 mRNA 表达

（图 1，表 1）：在 22 例患者中，肝癌及癌旁硬化

肝组织中均可以检测到 SSTR-2/5 的 mRNA 表达。

SSTR-2 mRNA 在癌旁和肝癌组织的平均表达量

〔相对拷贝（RQ 值）〕分别为 2.54±0.80 〔95% 可信

区间（95%CI）：2.18～2.89〕和 1.89±0.74（95%CI：

1.56～2.22）；SSTR-5 mRNA 在癌旁和肝癌组织的

平均表达量分别为 6.78±4.27（95%CI：4.89～8.67）

和 3.61±1.66（95%CI ：2.87～3.34）。癌旁组织中

SSTR-2/5 mRNA 表达水平均明显高于肝癌组织，

差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。

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图 1  22 例Ⅰ期原发性肝细胞肝癌患者肝癌及癌旁组织中 SSTR-2/5 mRNA 表达水平

图 2  22 例Ⅰ期原发性肝细胞肝癌患者肝癌及癌旁组织中 SSTR-2/5 蛋白表达水平

表 1 22 例Ⅰ期原发性肝细胞肝癌患者癌旁及肝癌组织中 SSTR-2/5 mRNA

表达水平比较（x±s）

标本

来源例数

SSTR-2 mRNA

（RQ 值）

SSTR-5 mRNA

（RQ 值）

肝癌组织 22 1.89±0.74 3.61±1.66

癌旁组织 22 2.54±0.80 6.78±4.27

t 值 2.750 3.250

P 值  0.009 0.003

2.2 肝癌、癌旁组织中 SSTR-2/5 蛋白表达

肝癌组织 SSTR-2 蛋白阳性表达率为 68.2%

（15/22），癌旁肝硬化组织蛋白阳性表达率为 95.5%

（21/22），差异有统计学意义（P＝0.046）；绝大多

数肝癌和癌旁组织中都可以发现 SSTR-5 蛋白表

达，其阳性率均为 95.5%（21/22），两组间无差异

（均 P＝1.00）。SSTR-2/5 蛋白的表达部位主要分布

在肝细胞或肿瘤细胞的胞膜或胞浆中（图 2）。

2.3 肝癌组织中 SSTR-2/5 联合表达（图 3）

肝癌组织中 SSTR-2 mRNA 与 SSTR-5 mRNA

转录水平呈明显负相关（rs＝-0.477，P＝0.025）。

依据 SSTR-2/5 在肿瘤组织中的联合表达情况，以

其平均表达量（xSSTR-2＝1.89，xSSTR-5＝3.61）为标准，

将 22 例患者分为生长抑素受体高表达组和低表达

组，SSTR 低表达组 10 例（占 45.5%），SSTR 高表

达组 12 例（占 54.5%）。

2.4 SSTR 高、低表达组临床病理资料比较（表 2）

SSTR 高表达组与低表达组相比，两者在性别、

年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、脉管是否

存在癌栓方面无差别（均 P＞0.05）。

2.5 随访结果的生存曲线分析（图 4）

采用 Kaplan-Meier 方法分析无瘤生存期，我

们发现平均无瘤生存期 27.3 个月 ；SSTR 高表达组

总体无瘤生存期较低表达组明显改善（log-rank＝

4.08，P＝0.043）。

3 讨 论

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，20 世纪

90 年代以来，我国肝癌死亡率已上升到恶性肿瘤

的第 2 位，每年约有 13 万人死于肝癌。原发性肝

癌病情发展快，若不经治疗，自然生存期平均为 4.3

个月，即使手术切除预后也不理想，5 年生存率为

37.2％，小肝癌手术后 5 年生存率也仅为 53.5％［4］。

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表 2 SSTR 高表达与低表达组肿瘤临床病理资料的比较

组别 例数

性别（例） 年龄（例） 临床病理特征（例）

男 女 ＜ 50 岁 ≥ 50 岁部位 肿瘤大小 分化程度 脉管癌栓

肝左叶 肝右叶 ≤ 3 cm ＞ 3 cm 高 / 中分化 低分化 无  有

SSTR 低表达组 10 7 3 4 6 4 6   5 5   3 7 6 4

SSTR 高表达组 12 8 4 7 5 6 6 10 2 10 2 9 3

P 值 1.000 0.670 0.691 0.172 0.057 0.652

影响肝癌患者手术治疗效果的主要原因是复发和转

移［5-7］，如何降低肝癌复发风险值得关注。

生长抑素除了具有抑制消化道激素分泌外，还

有抑制消化道肿瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌等肿瘤细

胞增生的作用，因而生长抑素成为潜在的治疗肿瘤

的药物，尤其是对于肝癌，它具有抑制肿瘤生长，

诱导细胞凋亡等作用［8］。目前已有文献报道，将人

工合成的长效生长抑素类似物用于晚期肝癌的治疗

并取得一定效果［9］，而有关生长抑素类似物预防术

后肝癌复发的疗效鲜见报道。

生长抑素多种生物学活性的发挥是通过靶细胞

膜上的特异性受体 SSTR 介导。SSTR 共有5个亚型，

分别为 SSTR-1～5，长效生长抑素类似物主要通过

与 SSTR-2/5 结合而发挥作用。并非所有肝癌患者

的肿瘤组织上都存在 SSTR-2/5 的表达，不同个体

的表达谱和表达水平可能决定生长抑素类似物治疗

肝细胞肝癌的效果。我们推测通过分析肿瘤组织中

SSTR-2/5 的表达，对肝癌术后患者进行选择性生

长抑素治疗有可能起到预防肿瘤术后复发的效果。

本研究结果显示，癌旁及肝癌组织中均存在

SSTR-2/5 mRNA 表达，肝癌组织中 SSTR-2/5 mRNA

较癌旁组织中表达明显下调。这与谢咏梅等［10］的

研究结果基本一致，采用传统逆转录 - 聚合酶链

反应（RT-PCR）比较“正常肝脏 - 肝硬化 - 癌旁 -

肝癌”不同阶段的组织标本，证实生长抑素受体转

录过程中表达数量符合“肝硬化时期轻度升高，癌

前病变期达表达高峰，肝癌期明显减少”的演变规

律。但是传统RT-PCR技术无法精确定量转录水平，

图 4  随访结果的生存曲线分析

图 3  22 例Ⅰ期原发性肝细胞肝癌患者肝癌组织中 SSTR-2/5 mRNA 的联合表达及相关性分析

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很难分辨 mRNA 含量的细微差别对预后的影响。

为实现精确定量，我们利用敏感性较高的实时

定量 PCR 技术，发现肝癌组织中 SSTR-2/5 的平均

表达量（拷贝量）分别为 1.89±0.74 和 3.61±1.66。

以平均拷贝量为基准，将全部患者分为 SSTR-2/5

高表达组（12 例）和低表达组（10 例），进一步对

比分析临床病理参数对表达量的影响及生长抑素类

似物在预防复发方面的效果。研究发现，两组间虽

然在性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、脉管是否

存在癌栓方面无差别，但是 SSTR-2/5 高表达组肿

瘤分化较好，而 SSTR 低表达组肿瘤分化差，恶性

程度高。术后随访发现，SSTR 高表达组术后总体

无瘤生存期明显延长，优于 SSTR 低表达组。

近年研究证实，生长抑素 - 生长抑素受体

（SST-SSTR）调控体系与肿瘤的演变过程有关［11］。

肝硬化 - 癌前病变阶段生长抑素受体显著上调，

SST-SSTR 负性调控机制活化，反映了机体抗肿瘤

机制的应答。目前认为 SSTR-2 为介导生长抑素类

似物（SSTA）抗肿瘤作用的主导亚型，与细胞凋

亡关系密切［12］。该阶段抗肿瘤主导亚型 SSTR-2/5

显著上调，不仅可在临床上用于鉴别癌前病变与肝

硬化，更为 SSTA 用于防止癌前病变进一步恶化提

供了可能。相反，若生长抑素负性调控机制被打破，

肿瘤发生的力量超过了机体制约肿瘤的能力，生长

抑素受体表达则下调，癌前病变转变为癌。因此，

理论上讲生长抑素受体低表达患者预后可能较高表

达者差。本研究随访发现，SSTR高表达组预后较好，

也充分说明这一点。

免疫组化结果从蛋白水平进一步认证了我们的

发现。虽然 SSTR-2/5 在多数癌旁组织中明显表达，

但是 31.8% 的肝癌组织中 SSTR-2 表达缺失。更有

趣的是蛋白表达缺失的患者，其 SSTR-2 mRNA 表

达量均低于平均水平。我们推测这可能与 SSTR-2

转录水平降低及转录后修饰等因素有关。Hasskarl

等［13］在体外研究中发现，SSTR-2 可介导肿瘤细胞

自主凋亡，该受体缺失的患者往往生长抑素治疗无

效。肿瘤组织中是否有 SSTR-2/5 的表达，应当成

为患者是否可以考虑接受 SSTA 治疗的前提。为节

约医疗资源，合理用药，肝癌患者应在用药前检测

肝癌组织中 SSTR-2/5 的表达状况，视受体表达情

况合理接受生长抑素抗肿瘤治疗。

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（收稿日期：2012-12-24）

李姗霓，孙丽莹 . 肝细胞肝癌中生长抑素受体 2/5 的表达研究［J/CD］. 实用器官移植电子杂志，2013，1（2）：107-111.