Epigenetik Regulasi Delta Dalam Kanker Lambung (Terjemahan PDF)

7/27/2019 Epigenetik Regulasi Delta Dalam Kanker Lambung (Terjemahan PDF)

1/11

Epigenetik regulasi Delta-Like1 aktivasi Notch1 kontrol dalam kanker lambung

PDF | Full Text

Giulia Piazzi1, 2,3, Lucia Fini3, 4, Michael Selgrad3, 5, Melissa Garcia3, Yahya Daoud6,

Thomas Wex5, Peter Malfertheiner5, Antonio Gasbarrini7, Marco Romano8, Richard L.Meyer9, Robert M. Genta10, James G. Fox11, C. Richard Boland3, Franco Bazzoli1and

Luigi Ricciardiello1, 2,3

1Department Kedokteran Klinis, Universitas Bologna di Bologna, Italia

2Center Terapan Biomedical Research (CRBA), S.Orsola-Malpighi Rumah Sakit,

Universitas Bologna di Bologna, Italia

3Department of Internal Medicine, Baylor Research Institute dan Sammons Cancer

Center, Baylor University Medical Center, Dallas, Amerika Serikat

4Department of Gastroenterology, IRCCS, Istituto Clinico Humanitas, Rozzano, Milan,

Italia

5Department of Gastroenterology, Hepatology dan Penyakit Infeksi, Otto-von-Guericke

Universitas Magdeburg, Magdeburg, Jerman

6Institute Penelitian Kesehatan Perawatan dan Perbaikan Baylor Sistem Kesehatan,

Baylor University Medical Center, Dallas, Amerika Serikat

7Internal Kedokteran dan Gastroenterology, Universitas Katolik Roma, Italia

8Department of Internal Medicine-Gastroenterology, Universitas Kedua Napoli, Italia

9Department Patologi, Baylor University Medical Center

10Department Patologi, VA Medical Center, Dallas, Amerika Serikat

11Division Kedokteran Perbandingan dan Departemen Biologi Teknik, Massachusetts

Institute of Technology, Cambridge, Amerika Serikat

Diterima: Desember 28, 2011; Diterima: 31 Desember 2011; Published: 31 Desember

2011;

Kata kunci: kanker lambung, Metilasi, Notch, Delta ingin-1

Korespondensi:

Dr Luigi Ricciardiello, email: luigi.ricciardiello @ unibo.it


2/11

Abstrak

Notch ini sinyal jalur proliferasi drive, diferensiasi, apoptosis, nasib sel, danpemeliharaan sel induk dalam beberapa jaringan. Aktivasi menyimpang dari Notch sinyal

telah dijelaskan pada beberapa tumor dan kanker lambung (GC), Notch1 diaktifkan telah

dikaitkan dengan de-diferensiasi-garis keturunan berkomitmen sel lambung ke nenekmoyang batang dan perkembangan GC. Namun, peran spesifik dari DLL1 ligan Notch1

di GC belum dijelaskan. Untuk menilai peran DLL1 di GC kanker, ekspresi Notch1 dan

ligan DLL1 dan Jagged1, dianalisis dalam 8 jalur sel kanker lambung (KATOIII,SNU601, SNU719, AGS, SNU16, MKN1, MKN45, TMK1). DLL1 ekspresi tidak hadir

di KATOIII,, SNU601 SNU719 dan AGS. Kurangnya DLL1 ekspresi dalam sel-sel ini

dikaitkan dengan hypermethylation promotor dan 5-aza-2'dC disebabkan up-peraturan

DLL1. Peningkatan DLL1 ekspresi dikaitkan dengan aktivasi sinyal Notch1, denganpeningkatan dalam domainnya Notch1 dibelah intraseluler (NICD), dan Hes1 dan down-

regulasi di Hath1. Menurut hitungan, sinyal Notch1 diaktifkan dengan overekspresi

DLL1. Selain itu, Notch1 signaling bersama dengan DLL1 metilasi dievaluasi dalam

sampel dari 52 pasien GC dan 21 kontrol sehat serta di INS-GAS tikus yang terinfeksi H.pylori dan secara acak diobati dengan terapi eradikasi. Pada pasien GC, kami menemukan

korelasi antara DLL1 dan Hes1 ekspresi, sementara DLL1 metilasi dan ekspresi Hath1dikaitkan dengan tipe difus dan campuran dari kanker lambung. Akhirnya, tidak ada

sampel dari INS-GAS tikus yang terinfeksi dengan H. pylori, model usus-jenis

tumorigenesis lambung, menunjukkan metilasi promotor DLL1. Studi ini menunjukkanbahwa aktivitas di Notch1 kanker lambung dikendalikan oleh pembungkaman epigenetik

dari ligan DLL1, dan bahwa penghambatan Notch1 dikaitkan dengan tipe difus kanker

lambung.

Pengenalan

Meskipun ada penurunan di seluruh dunia secara keseluruhan dalam insiden, kankerlambung (GC) masih merupakan kanker lebih umum keempat dan penyebab utama kedua

kematian terkait kanker [1]. Telah diketahui bahwa faktor risiko untuk penyakit ini

termasuk pola makan, Helicobacter (H.) infeksi pylori dan perubahan genetik [2-3].Sampai saat ini, mekanisme mengendalikan agresivitas GC tidak sepenuhnya dijelaskan.

Notch signaling adalah jalur kunci dalam pembaruan diri dari sel induk, sel penentuan

nasib dan diferensiasi terminal sel berkembang biak [4]. Genom mamalia mengkodekanselama empat reseptor Notch (Notch 1-4) dan ligan Notch lima (Delta-Like1, Delta-

Like3, Delta-Like4, Jagged1 dan Jagged2). Setelah mengikat ligan, domain ekstraseluler

Notch yang dibelah oleh protease ADAM dan kemudian mengalami perpecahan lebihlanjut oleh kompleks -secretase dengan rilis dari domaine Notch intraseluler (NICD).

Setelah pemindahan ke inti, NiCd bertindak sebagai faktor transkripsi untuk target hilir

[5-8]. Para efektor Notch terbaik-ditandai adalah protein bHLH Berbulu / Enhancer Split(HES), yang menekan ekspresi gen hilir seperti Neurogenin3 dan Hath1. Yang penting,

gen ini memainkan peran penting dalam komitmen sel keturunan dan nasib sel drive dan

diferensiasi dalam jaringan beberapa [8-9]. Secara khusus, di saluran gastrointestinal

(GI), Notch sinyal drive nasib nenek moyang yang belum matang menuju serap atau garis


3/11

keturunan sekresi. Dalam usus, Notch1 mengontrol diferensiasi terhadap enterosit, dan

hambatan yang mengubah sel-sel kolon crypt proliferasi ke dalam tulisan-mitosis sel

goblet [8]. Selain itu, Hes1-/ - tikus mutan mengembangkan kelainan usus denganpeningkatan relatif dalam mensekresi lendir dan sel enteroendocrine dengan

mengorbankan enterosit serap, sedangkan math1-kekurangan tikus menampilkan

'fenotipe timbal balik' [10-11]. Di perut, aktivitas Notch terlibat dalam penghambatandiferensiasi sel kepala dan Hath1 over-ekspresi meningkatkan ekspresi MUC5AC dalam

sel-sel leher mukosa kelenjar fundic [10, 12]. Notch sinyal terjadi di dalam perut tikus

selama pengembangan dan terbatas pada tanah genting dalam kelenjar dewasa. Baru-baruNotch aktivasi dalam sel epitel lambung garis keturunan berkomitmen telah ditunjukkan

untuk mendorong de-diferensiasi menjadi sel batang, meningkatkan proliferasi dan

adenoma sedangkan Notch aktivasi di bagian antral lambung tidak mempengaruhi

proliferasi [13].

Di antara seluruh panel dari ligan Notch, Delta-Like1 (DLL1) telah dibuktikan sering

terlibat dalam penugasan nasib garis keturunan sel. Dalam usus ikan zebra,

penghambatan Delta-Notch sinyal meningkatkan diferensiasi sekretori [14]. Menariknya,inaktivasi DLL1 pada tikus jaringan usus meniru inaktivasi Notch1 karena menghasilkan

suatu peningkatan jumlah sel goblet, menunjukkan bahwa DLL1 sangat penting dalampengendalian Notch1 dalam sistem ini [15]. Namun, interaksi antara DLL1 dan Notch1

bertanggung jawab untuk mengatur diferensiasi kelenjar dalam pengembangan ayam

perut [16]. Akhirnya, tikus kekurangan DLL1 memiliki diferensiasi dipercepat selendokrin pankreas pada biaya dari komponen eksokrin [17].

Dalam studi ini kami menilai peran DLL1-Notch1 sinyal dalam karsinogenesis lambung,

mengingat bahwa ketidakseimbangan pembaruan diri homeostasis merupakanpersyaratan penting untuk tumorigenesis dan ekspresi deregulasi dari Notch sinyal

komponen sering terjadi pada tumor [7, 18]. Untuk tujuan ini, kami mengevaluasi

kaskade Notch1 dalam baris sel kanker lambung dan kami menemukan korelasi spesifikantara DLL1 ekspresi dan hypermethylation promotor. Hubungan antara DLL1 ekspresi

dan aktivasi Notch1 ditunjukkan in vitro dengan studi farmakologi dan dengan

memanfaatkan model transgenik. Selain itu, dalam data kami vivo menunjukkan bahwamembungkam epigenetik DLL1 dengan represi dari kaskade Notch1 dikaitkan dengan

lambung menyebar karsinogenesis. Hasil ini kemudian ditegaskan oleh model INS-GAS

murine dari karsinogenesis usus lambung, di mana DLL1 diungkapkan dan metilasi

promotor tidak hadir.

Bahan dan Metode

Sel baris dan perawatan

Kanker lambung (GC) sel baris AGS, KATOIII, SNU16, SNU601, TMK1 dan MKN45adalah hadiah semacam dari Dr Antonia R. Sepulveda; MKN1 yang baik yang diberikan

oleh Dr Richard Hamelin; SNU719 yang baik diberikan oleh Dr Dong K. Chang. Profil

STR dilakukan untuk otentikasi sel baris.


4/11

Sel dikultur dalam RPMI-1640 Sedang (Invitrogen, Carlsbad, CA) ditambah dengan 10%

serum janin sapi (Invitrogen), 100 U / ml penisilin, 100 pg / ml streptomisin dan 2mm

glutamin (Invitrogen). Sel dipertahankan pada 37 C dalam inkubator CO2 5%.

5-aza-2'deoxycitidine dibeli oleh Sigma-Aldrich (St.Louis, MO) dan pengobatan

dilakukan pada AGS dan SNU719 baris sel pada 10 M selama 5 hari.

Urutan DLL1 penuh coding dikloning ke dalam vektor ekspresi pCMV-tag1 (Stratagen,

La Jolla, CA), menggunakan enzim restriksi BamHI dan HindIII (NEB, Ipswich, MA).Overekspresi Transient DLL1 dilakukan dengan menggunakan Lipofectamine 2000

(Invitrogen), mengikuti protokol yang disarankan oleh produsen.

Klinis sampel jaringan lambung

Formalin jaringan parafin tetap, tertanam dari 52 pasien kanker lambung yang diperoleh

dari Departemen Patologi di Baylor University Medical Center (Dallas, TX, USA), dan

dari Departemen Gastroenterologi, Hepatologi dan Penyakit Infeksi, Otto-von-GuerickeUniversity Magdeburg (Magdeburg, Jerman). Empat puluh tiga sampel tumor segar

lambung, rekan-rekan mereka cocok normal dan biopsi dari 21 subyek sehat diperolehselama prosedur endoskopi di Departemen Gastroenterologi, Hepatologi dan Penyakit

Infeksi, Otto-von-Guericke University Magdeburg. Informed consent diperoleh sebelum

prosedur. GC karakterisasi histopatologi dan pementasan pasien juga dikumpulkan.Tinjauan persetujuan Dewan Kelembagaan diberikan untuk penelitian ini dari Baylor

University Medical Center dan Otto-von-Guericke Department di Universitas

Magdeburg.

RNA ekstraksi, RT-PCR dan PCR kuantitatif

RNA ekstraksi dari jalur sel GC dan jaringan dilakukan dengan TRIzol (Invitrogen) dan 2ug RNA retrotranscribed menggunakan hexamers acak dan MMLV reverse transcriptase

(Invitrogen). RT-PCR dilakukan dengan menggunakan HotstarTaq Guru Mix Kit

(Qiagen, Valencia, CA). Sekuens primer dilaporkan pada Tabel 1. Produk PCRdipisahkan pada gel agarosa 2%, diwarnai dengan 0,5 mg / ml etidium bromida dan

gambar itu diperoleh dengan pencahayaan UV (Gel Logika Imaging System, Rochester,

NY).

Kuantifikasi relatif HES1 dan HATH1 dilakukan dengan PCR kuantitatif (qPCR)

menggunakan TaqMan Gene Expression Guru Mix (Terapan Biosystems, Foster City,

CA) dan Gene Expression TaqMan Assay untuk HES1 (hs 00172878-m1) dan HATH1(hs 00245453-s1 ). GAPDH digunakan sebagai gen referensi. Kuantifikasi relatif ekspresi

gen dilakukan dengan metode CT komparatif (2-Ct), dengan menggunakan

koresponden wild type garis sel atau kolam subyek sehat sebagai kalibrator a. Setiappenilaian dilakukan dalam rangkap tiga di tiga percobaan independen.

Tabel 1: Primer


5/11

Protein ekstraksi dan western blotting

Ekstraksi protein total dari jalur sel dilakukan dengan menggunakan RIPA Penyangga

(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ditambah dengan protease inhibitor danphophatase (Roche, NJ, USA). Empat puluh mikrogram protein dipisahkan di

HALAMAN-SDS 10%, ditransfer ke membran PVDF (GE Healthcare, NJ, USA) dan

diperiksa semalam dengan antibodi primer berikut: kelinci Notch1 dibelah anti 1:1000(Cell Signaling Teknologi, Boston, MA ), kelinci anti Delta 1:100 (H-265, Santa Cruz

Biotechnology) dan mouse anti aktin 1:1000 (Sigma-Aldrich). Setelah mencuci dengan

TBS-T, membran diinkubasi dengan peroksidase IgG-horseradish anti-kelinci atau anti-

mouse (GE Healthcare) antibodi sekunder pada konsentrasi 1:5000 selama 45 menit padasuhu kamar. Protein divisualisasikan menggunakan ECL sistem Plus Chemiluminescence

dan selaput dipindai dengan STORM 840 Phosphoimager (GE Healthcare). Protein

rumah -aktin digunakan untuk menormalkan tingkat ekspresi protein.

MSP dan bisulfit urutan DLL1 promotor

DNA diekstraksi menggunakan DNA QIAamp Mini kit ekstraksi kit sesuai dengan

protokol produsen (Qiagen). Status metilasi promotor DLL1 dalam baris sel GC dan

jaringan ditentukan oleh sekuensing bisulfit dan metilasi tertentu-PCR (MSP) setelahmengobati 1 mg DNA dengan natrium bisulfit dengan Kit bisulfit Epitect (Qiagen),

mengikuti protokol produsen. Modifikasi DNA digunakan sebagai template untuk reaksi

PCR. Untuk Sequencing bisulfit, primer memperkuat urutan terletak di antara -158 dan

343 dari kodon start transkripsi dan mengandung 56 CpGs dipilih. PCR amplifikasidilakukan selama 14 siklus dengan suhu anil 56,6 C mendarat dari 0,5 C per siklus

selama 30 detik dan tambahan 19 siklus dengan suhu anil 49,6 C selama 30 detik.

Setiap siklus dimulai dengan sebuah denaturasi pada 95 C dan berakhir dengan ekstensipada 72 C, masing-masing selama 30 detik. Dua mikroliter produk PCR diligasi ke

vektor TOPO (Invitrogen, Carlsbad, CA) dan, setelah transformasi, minimal 8 klon per

sampel disekuensing di kedua arah dengan M13 primer. MSP dilakukan di dua wilayahyang berbeda dari promotor, yang mencakup masing-masing antara -532 dan -432

(REG1) dan - 112 dan awal kodon ATG (Reg2). Sekuens primer tercantum dalam Tabel

1.

Metilasi dan ekspresi analisis DLL1 di INS-GAS tikus

Dua belas INS-GAS tikus sebelumnya terinfeksi H. pylori dan diobati pada interval yangditentukan dengan terapi eradikasi antibiotik diberikan pada 8 (n = 3), 12 (n = 3) atau 22

(n = 3) minggu pasca infeksi H. pylori ( WPI) atau tidak diobati (n = 3) [19]. DNA

diekstraksi dari jaringan lambung dari 12 pylori H. tikus terinfeksi dan tikus kontrol 3(tidak terinfeksi dan tidak diobati) dan dimodifikasi dengan pengobatan bisulfit seperti di

atas. DLL1 hypermethylation promotor dianalisis dengan bisulfit Sequencing di dua

wilayah perwakilan promotor (REG1: dari -617 ke -344) dan ekson pertama (Reg2: dari

-65 ke 220). MSP dilakukan di dua wilayah yang berbeda dari promotor, yang mencakup


6/11

masing-masing antara -538 untuk -426 (REG1) dan 119-215 (Reg2). RNA diekstraksi

dari jaringan lambung dan retrotranscribed seperti di atas. DLL1 ekspresi dievaluasi

dengan RT-PCR. Sekuens primer tercantum dalam Tabel 1.

Analisis statistik

T-test tidak berpasangan digunakan untuk mengevaluasi perbedaan berarti antara dua

kelompok untuk variabel kontinyu. Uji median digunakan untuk mengevaluasi perbedaan

rata-rata antara dua kelompok untuk variabel kontinyu. Analisis varians (ANOVA)digunakan untuk mengevaluasi perbedaan rata-rata antara tiga kelompok untuk variabel

kontinyu. LSD semua Uji Perbandingan Berpasangan diaplikasikan untuk

membandingkan kelompok variabel kontinu. Uji Fisher Exact diaplikasikan untuk

menganalisis variabel kategori. Analisis korelasi digunakan untuk mengevaluasihubungan antara variabel kontinu.

JMP versi 8.02 (Cary, NC; AS) dan SAS versi 9.2 (Cary, NC; USA) digunakan untuk

analisis statistik. Signifikansi ditugaskan pada p


7/11

Karena kita menemukan korelasi tegas antara tidak adanya DLL1 ekspresi dan

hypermethylation promotor, kami mengevaluasi apakah DLL1 tingkat dapat ditingkatkan

di non jalur sel mengekspresikan dengan pengobatan dengan agen demethylating 5-aza-2'deoxycitidine (5-aza-2'dC) . Untuk mengeksplorasi hipotesis ini, Sequencing bisulfit

dari DLL1 pra dan pasca perlakuan promotor 5-aza-2'dC dilakukan pada baris sel AGS

bersama-sama dengan analisis transkrip DLL1 dengan RT-PCR (Gambar 2A). Kamimenemukan bahwa pengobatan dengan 5-aza-2'dC pada AGS disebabkan DLL1

demethylation promotor dan, hitungan, peningkatan ekspresi DLL1 RNA. Untuk

mengkonfirmasi hasil ini, perlakuan dengan 5-aza-2'dC dilakukan juga pada SNU719yang juga menunjukkan peningkatan ekspresi DLL1 RNA dan protein (Gambar 2B).

Selain itu, kami menguji efek DLL1 pada aktivasi Notch1 jalur sinyal. Menariknya,

ekspresi DLL1 menyebabkan peningkatan Notch1 domain protein dibelah intraseluler

(NICD) bersama-sama dengan peningkatan yang signifikan dalam HES1 (p = 0.0018)dan penurunan HATH1 (p


8/11

GC status metilasi dan klasifikasi Lauren. (B) Korelasi antara DLL1 dan HES1 mRNA

pada pasien GC. (C) Asosiasi antara HATH1 ekspresi dan histologi menyebar dan

campuran (* p


9/11

tumor [7], seperti T-sel akut lymphoblastic, leukemia sel kanker payudara, ovarium dan

paru-paru non-kecil, dengan hanya satu pengecualian, dalam keratinosit epidermis , di

mana Notch bertindak sebagai penekan tumor [7, 21-22].

Di perut, Notch sinyal aktivasi yang terlibat dalam fase perkembangan, mengendalikan

komitmen diferensiasi kelenjar dan menindas ekspresi musin lambung. Sebaliknya,penghambatan diperlukan untuk entero-endokrin penentuan nasib sel [6, 12, 14, 16].

Baru-baru Notch aktivasi sinyal dalam garis keturunan-berkomitmen sel epitel lambung

telah terbukti memicu de-diferensiasi menjadi sel induk, akhirnya meningkatkanadenoma proliferasi dan menginduksi dengan aktivasi Wnt fokus [13]. Selain itu, aktivasi

Notch1 telah dikaitkan dengan perkembangan kanker lambung, setidaknya sebagian

melalui siklooksigenase-2 [23]. Namun, peran spesifik dari DLL1 ligan Notch1 dalam

karsinogenesis lambung masih belum jelas.

Kami mempelajari kaskade Notch1 dalam sebuah panel yang luas jalur sel GC

mengevaluasi ekspresi Notch1 dan ligan DLL1 dan Jagged1 pada tingkat RNA. Kami

tidak menemukan perbedaan dalam ekspresi Notch1 dan Jagged1 antara seluruh panelsementara DLL1 itu selektif diekspresikan dalam SNU16,, MKN1 TMK1 dan MKN45.

Sebaliknya, KATOIII, SNU601, AGS dan SNU719 menunjukkan 'fenotipe timbal balik'di mana DLL1 tidak hadir karena hypermethylation promotor. Regulasi epigenetik DLL1

dalam baris-baris sel selanjutnya dikonfirmasikan oleh pengobatan dengan 5-aza-2'dC di

AGS dan SNU719 yang mengakibatkan up-peraturan DLL1. Yang penting, peningkatanDLL1 ekspresi setelah perawatan 5-aza-2'dC mengakibatkan aktivasi dari kaskade

Notch1 dengan perubahan target hilir HES1 dan HATH1. Dalam perjanjian dengan data

ini, yang berlebih dari DLL1 di SNU601 menegaskan bahwa DLL1 aktivasi kontrol

Notch1.

Menurut klasifikasi histologis Lauren, GC dibagi menjadi jenis usus dan menyebar,

terkait dengan perbedaan etiologi, epidemiologi, perubahan genetik, perilaku klinis danrespon terhadap terapi [24-26]. Kanker lambung dari jenis usus berlangsung sebagai

proses tahapan yang diinisiasi oleh peradangan, terutama karena infeksi H. pylori, diikuti

dengan atrofi, metaplasia usus, displasia dan kanker [27-28]. Sebaliknya, jenis kankermenyebar tidak memiliki fase prakanker dan perubahan genetik yang mendasari inisiasi

dan perkembangan masih tetap tidak jelas, meskipun promotor hypermethylation dari

beberapa gen telah digambarkan sebagai fitur sering di histotype difus [25, 29-30].

Dalam penelitian ini, analisis dari kaskade Notch1 diperpanjang untuk sampel klinis,

mengevaluasi ekspresi DLL1, HES1 dan HATH1 mRNA. Kami menemukan bahwa

korelasi positif antara DLL1 dan HES1 tingkat ekspresi secara signifikan lebih kuatdalam jenis usus atau campuran, dan juga, kecenderungan korelasi yang negatif antara

HES1 dan HATH1 ditemukan dalam jenis difus dan campuran. Menariknya, ketika

pencocokan HATH1 ekspresi dengan karakterisasi histologis, kami menemukanhubungan antara tingkat yang lebih tinggi HATH1 dan histotype campuran atau difus.

Meskipun HATH1 tidak dinyatakan dalam perut yang normal [11], sebuah ekspresi yang

lebih tinggi HATH1 pada kanker lambung dibandingkan dengan mukosa normal telah

dilaporkan [31]. Temuan ini mengkonfirmasi laporan sebelumnya menunjukkan tingkat


10/11

yang lebih tinggi HATH1 ekspresi dalam mucinous dan cincin meterai sampel kanker

kolorektal [32]. Selanjutnya, data kami menunjukkan bahwa perbedaan DLL1 ekspresi

setidaknya sebagian dikendalikan oleh perubahan epigenetik dalam promotor DLL1.DLL1 hypermethylation ditemukan sebagai fitur tertentu dari kanker lambung tipe difus

dan ditandai hampir 50% dari histotype ini. Menariknya, meskipun HATH1 dikaitkan

dengan tipe difus karsinogenesis, data kami menunjukkan hypermethylation dari DLL1promotor hanya dalam setengah dari kasus. Data kami tidak mengecualikan bahwa jalur

molekuler lain dapat berkontribusi pada HATH1 peraturan dan diferensiasi histologis

dalam kasus-kasus yang tersisa. Bahkan, di perut, ada jaringan kompleks lintas peraturaninteraksi antara Notch dan jalur lain, termasuk Wnt, BMP dan Sonic Hedgehog [33-34].

Telah menunjukkan bahwa HATH1 dapat mengalami degradasi oleh pensinyalan Wnt

[35-36] dan HES1 ekspresi dapat dikontrol oleh Sonic Hedgehog [37]. Atas dasar ini, kita

juga bisa berhipotesis bahwa interaksi antara jalur ini dapat berkontribusi untuk HATH1peraturan dan untuk meredakan diferensiasi jenis independen dari DLL1 ekspresi.

Konfirmasi lebih lanjut bahwa sumbu DLL1-Notch1 mempengaruhi diferensiasi

histologis di GC muncul dari analisis ekstensif DLL1 metilasi promotor dan ekspresimRNA dalam H. pylori terinfeksi INS-GAS tikus diperlakukan pada interval yang

ditentukan dengan terapi eradikasi antibiotik. Memang, diketahui bahwa H. pyloriterinfeksi INS-GAS tikus adalah model dari jenis usus lambung karsinogenesis [38].

Dalam model ini kita menentukan bahwa promotor DLL1 ini unmethylated dan DLL1

yang diungkapkan dalam semua tikus dianalisis. Menariknya, infeksi H. pylorimenyebabkan up-peraturan dan DLL1 Menurut hitungan terapi pemberantasan antibiotik

menyebabkan penurunan DLL1 tingkat mRNA. Hal ini konsisten dengan temuan yang

dipublikasikan yang DLL1 kontrol Notch 1 kegiatan dalam jaringan usus tikus [15] dan 1

Notch aktivasi pada pasien dengan usus-jenis kanker lambung [39].

Di antara histotypes GC, bentuk menyebar dikaitkan dengan frekuensi yang lebih tinggi

penyebaran peritoneal, metastasis dan kematian [25, 40]. Dalam penelitian ini kamimenunjukkan bahwa subset dari GC tipe difus tidak memiliki sistem Notch fungsional,

konsisten dengan hasil terakhir dilaporkan oleh orang lain [39]. Observasi ini

menunjukkan bahwa pada jenis tertentu agen penghambatan kanker Notch, sepertigamma-secretase inhibitor, mungkin berguna. Data ini berpendapat bahwa dengan

melakukan karakterisasi molekuler akurat, kelompok pasien dan / atau subtipe kanker

yang bisa mendapatkan keuntungan dari penghambatan Notch dapat diidentifikasi secara

akurat [41-43].

Sebagai kesimpulan, kami menunjukkan bahwa DLL1 ini epigenetically diatur dalam

baris sel GC dan DLL1 ekspresi sinyal mengaktifkan Notch1. Sebaliknya, dalam jenisdifus GC, DLL1 membungkam epigenetik merepresi aktivasi Notch dan berhubungan

dengan tingkat tinggi HATH1, yang merupakan fitur spesifik difus jenis campuran dari

kanker lambung. Hasil kami menyediakan bukti bahwa Notch1 aktivasi di GCdikendalikan oleh pembungkaman epigenetik dari DLL1 ligan, dan bahwa penghambatan

Notch1 dikaitkan dengan tipe difus kanker lambung.

Pengakuan


11/11

Kami berterima kasih kepada Dr Paola Paterini untuk bantuan teknis. Karya ini didukung

oleh Asosiasi Italia for Cancer Research (AIRC): IG-10.216 (untuk LR).

Documents

Epigenetik Regulasi Delta Dalam Kanker Lambung (Terjemahan PDF)