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EspectrofotometriaEspectrofotometria
Prof. Rodrigo Alves do CarmoProf. Rodrigo Alves do Carmo
• A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho.
• A chamada radiação luminosa corresponde a uma gama de comprimentos de onda que vai desde o ultravioleta ao infravermelho no espectro da radiação eletromagnética.
Espectro da luz visível
UV 400 500 600 700 Infra- vermelho
Redução do Conteúdo Energético
• O espectro do visível está contido essencialmente na zona entre 400 e 800 nm.
As substâncias absorvem fotons.
Esta absorção é feita de várias maneiras e se verifica somente em certos
http://web.umr.edu/~gbert/color/spec/Aspec.html
Objeto sólido opaco(reflete a luz)
Objeto líquido translúcido(deixa passar a luz)
Um objeto vermelho, por exemplo, aparenta ter esta coloração por absorver fotons de alta energia (menor , refletindo ou deixando passar fotons de menor energia
(maior ,
Os fotons de entre 400 nm e 700 nm sensibilizam as células da retina....
• Um espectrofotômetro é um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromática através de uma solução e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa solução.
• Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda.
• Pode-se assim fazer passar através da amostra um feixe de luz monocromática (de um único comprimento de onda).
• O espectrofotômetro permite-nos saber que quantidade de luz é absorvida a cada comprimento de onda.
Transmitância é a percentagem de luz emitida, enquanto que absorbância é a
quantidade de luz absorvida
http://web.umr.edu/~gbert/color/spec/Aspec.html
Botão zero (0% T)
Porta-tubos
Botão 100 (100% T)
Seletor de filtros
Lâmpada
Interruptor
Medidor
Esquema de um Espectrofotômetro
Princípios de absorção da luz
• 1. A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada.
• 2. A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras.
Lei de Lambert-BeerLei de Lambert-Beer• A absorvância da luz a cada
comprimento de onda é diretamente proporcional à concentração da solução.
• Esta linearidade deixa de ocorrer a concentrações muito elevadas da substância. Nesses casos deve-se diluir previamente a amostra.
A intensidade de cor é proporcional à concentração da substância que se quer medir
solução com concentração
conhecida
Solução comconcentração desconhecida
?????
Substância a ser medida
Reativo de cor Composto corado
+ =
Compara-se a cor dos dois tubos através da medida quantitativa da absorção de luz pelas
soluções
MétodoMétodo
O tubo “branco”contém todos os reativos menos a substância a ser dosada (concentração zero).
Ele é fundamental para o ajuste do fotocolorímetro em A = zero e T = 100%, ou seja, ele elimina a
interferência indesejável de outros componentes da solução.
Este ajuste deve ser feito antes de qualquer medida.
Preparação do Tubo Branco
Botão zero (0% T)
Botão 100 (100% T)
Construção da Curva de CalibraçãoUtiliza-se a curva padrão para evitar o inconveniente
do erro de aferição
2. Medem-se as respectivas absorbâncias.
3.
1. Prepara-se uma série de tubos com concentrações crescentes da substância que se quer medir na amostra x
Abs.Os dados sãocolocados em um gráfico.
Conc.