PRÁCTICA 01

Equipos, instrumentos e insumos del Laboratorio de Microbiología Ambiental

I. OBJETIVOS

Identificar y demostrar los equipos principales correctamente.

Conocer los la utilidad de los principales equipos del laboratorio para

su buen uso.

Conocer los estándares técnicos y de seguridad propios de un

laboratorio.

Conocer las medidas y volúmenes de cada material.

Conocer las temperaturas establecidas de los equipos de laboratorio

para su mejor control.

II. INTRODUCCIÓN

Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y

estudiar microorganismos, que se encuentran en muestras de agua, suelo,

aire y alimentos además de muestras clínicas; para su buen uso es

necesario conocer el fundamento y manera correcta de uso de los

principales equipos del laboratorio así como de los instrumentos, insumos y

demás; para comprender así mejor los distintos análisis microbiológicos.

III. Equipos, instrumentos e insumos (ver anexo 1)

Microscopio binocular Lámina portaobjetos

LAMINILLAS CUBREOBJETOS CAMARA DE NEUBAUER

ACEITE DE INMERSION CENTRIFUGA

MEDIDOR DE PH BALANZA

AUTOCLAVE ESTUFA

BAÑO MARIA MEDIOS DE CULTIVO

BOTELLA CON TAPA PLACA PETRI

ASA DE SIEMBRA ESPATULA DRIGLASKY

TUBOS DE ENSAYO AUXILIAR DE PIPETEADO

PROBETA DESINFECTANTE

INDICADOR DE ESTERLIZACION –CALOR HUMEDO

INDICADOR DE ESTERLIZACION-CALOR SECO

IV. PROCEDIMIENTO

Observar con cuidado en el microscopio evitando

manipular con los dedos los lentes de los objetivos y del

ocular.

Colocar los tubos de ensayo en la

centrifugadora diametralmente opuesto uno al otro para un mejor equilibrio y no abrir hasta

que termine sus respectivas

La balanza analítica te da una mayor precisión de masa, antes de medir la

cantidad de masa de cualquier material cerrar la

puerta herméticamente.

En la balanza de precisión se tiene que

evitar colocar algún objeto y/o sustancia cerca que

altere la cantidad de masa que se va a medir.

La autoclave utilizada para esterilizar a calor

húmedo debe ser herméticamente cerrada

luego de colocar el material a esterilizar y al

finalizar el tiempo se debe esperar a que la presión esté en 1 para abrirlo.

V. ACTIVIDADES

La estufa u horno se utiliza como esterilizador

Baño maría o termostático utilizado

para desarrollar microorganismos en un

cultivo.

Placa Petri, material en la cual se colocan los medios de cultivos.

Los tubos de ensayo, materiales de vidrio en los

cuales se colocan sustancias determinada que pueden ser medios de cultivos líquidos. En caso se requiera calentar se puede utilizar el sujetador

de bureta.

a. Realice un mapa conceptual considerando los equipos de laboratorio

explicados en clase, indicar el principio y su importancia en el desarrollo

de las actividades prácticas.

b. Indicar los cuidados que se deben tener al manipular el microscopio.

c. ¿Qué equipos y/o instrumentos son necesarios para la cuantificación de

microorganismos?

EQUIPOS DE LABORATORIO

b. Indicar los cuidados que se deben tener al manipular el microscopio.

MICROSCOPIO

ÓPTICO

CENTRÍFUGA

MEDIDOR DE PH

BALANZA

AUTOCLAVE

ESTUFA

BAÑO MARÍA

PRINCIPIO: El objetivo de estas lentes es el de reducir la aberración cromática y la aberración esférica.

IMPORTANCIA: Se utiliza Para observar objetos muy pequeños y no captables a la vista humana.

PRINCIPIO: El centrifugado es una sedimentación acelerada, ya que la aceleración de la gravedad se sustituye por la aceleración centrífuga.

IMPORTANCIA: aplicación típica consiste en acelerar el proceso de sedimentación, dividiendo el plasma sanguíneo y el suero sanguíneo en un proceso de análisis de sangre.

PRINCIPIO: Cuando este electrodo se pone en contacto con una sustancia, esta acción genera una corriente eléctrica suave.

IMPORTANCIA: dispositivo para medir un rango potencial de "comportamientos" de una sustancia.

PRINCIPIO: Todo el conjunto dispone de un sistema de aseguramiento o bloqueo que permite a la palanca principal reposar de forma estable cuando no es utilizada.

IMPORTANCIA: Permite pesar las masas de manera más exacta, ya que esta posee 4 decimales. De esta manera es más exacta.

PRINCIPIO: Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida.

IMPORTANCIA: usada para esterilizar material de laboratorio.

PRINCIPIO: estufas de secado constan, por lo general, de dos cámaras: una interna y una externa.

IMPORTANCIA: La estufa de secado se emplea para esterilizar o secar el material de vidrio y metal.

PRINCIPIO: El baño de María o baño serológico para laboratorio es un equipo que se utiliza en laboratorios de química.

IMPORTANCIA: utiliza para el calentamiento indirecto, por convección térmica del medio y de sustancia.

Al ser el microscopio un aparato de precisión y, por lo tanto, delicado, es

muy conveniente asegurar un buen funcionamiento atendiendo siempre a las

siguientes normas:

1. Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos,

sujetándolo por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la

otra.

2. Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que

finalice la práctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe

mover él y no el microscopio.

3. Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.

4. Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si se

ensucian dichas lentes se limpiarán con un paño suave de algodón, sin

utilizar ningún disolvente.

5. No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser

sustituidos, en cuyo caso la operación debe realizarse lo más

rápidamente posible, para evitar la entrada de polvo.

6. Asegurarse de que el portaobjetos está bien seco cuando va a ser

colocado sobre la platina.

7. Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que

evitar que el extremo del objetivo choque con la preparación. Para ello

acercaremos el objetivo a la preparación mirando lateralmente y luego,

mirando ya a través del ocular, enfocamos alejando el objetivo.

c. ¿Qué equipos y/o instrumentos son necesarios para la cuantificación de microorganismos?

Pinzas de pato

Manguera para vacío

Membrana Millipore estéril de 5 cm de diámetro y 0.45 µm de poro

Placa Petri de ENDO

Vaso de precipitado de 250 mL

Pinzas Millipore

Equipo Millipore para filtración (matraz, filtro, embudo) estéril

Mecheros

Gradillas

Etanol (96°) para flamear pinzas

Microscopio electrónico

Balanza analítica

Autoclave

Estufa

Cámara de neubauer

Aceite de inmersión

Láminas porta objetos

Láminas cubreobjetos

Baño maría

Centrífuga

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

a. Grainger, J., J. Hurts y D. Burdass. 2001. Basic Practical Microbiology: A

Manual. The Society gor General Microbiology. United Kingdom.

b. Aquiahuatl, M., M. Pérez. 2004. Manual de Prácticas del Laboratorio de

Microbiología General. Primera edición. Universidad Metropolitana,

Unidad Iztapalapa. México.

c. Bautista W. 2002. Manual de prácticas: Métodos Instrumentales de

Análisis. Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal.

Universidad Nacional de Trujillo.

d. Instituto Nacional de Salud. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS DE

ENSAYO, BIOMÉDICOS Y CLÍNICOS. Perú. Comité de Bioseguridad.

2005.

ANEXOSNOMBRE ASPECTOS DE IMPOPRTANCIA

FUNDAMENT USOS PRECAUCIONES TIPOS

O

MICROSCOPIO OPTICO

Observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista

Sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto

Nunca hay que tocar las lentes con las manos.

No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio

Compuesto de campó claro

Campo oscuro Microscopio

de fluorescencias

LAMINAS PORTAOBJETOS

Aparato donde se ponen muestras para ser analizadas

Para realizar las observaciones al microscopio.

Evitar tocar con los dedos la lámina portaobjetos

LAMINILLAS CUBREOBJETOS

Es una fina hoja transparente que se coloca sobre el porta objeto para una muestra

Para realizar las observaciones al microscopio.

Evitar tocar con los dedos la laminilla

CAMARA DE NEUBAUER

Es un instrumento utilizado para el conteo de células

realizar el recuento de esporas y células en un medio liquido

ACEITE DE INMERSION

Sirve para enfocar los rayos a la lámina

Observación de objetos muy, como las bacterias individuales y aplicaciones de alta resolución, como el Tirf y las aplicaciones de fluorescencia confocal.

Las reacciones y reactivos usados y los caducados deben de eliminarse como desechos especiales

Tipo A: baja viscosidad

Tipo B: alta viscosidad

CENTRIFUGA

Muestra para acelerar la

decantación o sedimentación

permite la separación de distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión

Analíticas Preparativas:

de mesa, de alta capacidad, de alta velocidad, ultracentrifugadoras

MEDIDOR DE PH

Mide el ph de una disolución

Mide un rango potencial de comportamientos de sustancias

el electrodo debe mantenerse húmedo siempre para evitar daños al mismo

De contenido de alcohol.

De grados Brix. De polarimetria De peso. Densidad. viscosidad color brillantez dureza

BALANZAdetermina densidades o pesos específicos

mide la masa de un cuerpo o sustancia química ,utilizando como medio de comparación la fuerza de la gravedad que actúa sobre el cuerpo

Balanzas mecánicas

Balanzas electrónicas

AUTOCLAVE

esteriliza medios de cultivo

Sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura.

El tipo olla de presión.

El de desplazamiento por la gravedad.

ESTUFAEsterilizar o secar el material

Se utiliza para secar y esterilizar recipientes de vidrio y metal en el laboratorio

No usar en la estufa materiales o sustancias que sean inflamables o explosivas. Evitar derrames interiores de soluciones acidas o que formen vapores corrosivos

Las que operan mediante convección natural

Las que operan mediante convección forzada

BAÑO MARIA

Da temperatura para el desarrollo de microorganismos.

se utiliza para el calentamiento indirecto, por convección térmica del medio y de sustancia

Al calentar solventes inflamables en pequeña cantidad, utilice un baño maría con el mechero apagado.

Baja temperatura

Alta temperatura

isotérmicos

NOMBREASPECTOS DE IMPORTANCIA

FUNDAMENTO USOS PRECAUCION

ES TIPOSMEDIOS DE CULTIVO

Crecimientos de bacterias

Permite seleccionar el crecimiento de un microorganismo

Esterilizar los materiales con los que se va a trabajar para realizar medios de

sólidos líquidos

cultivo

PLACA PETRI

recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos

Utilizado para poder observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas como químicas.Para el cultivo de bacterias y otras especies relacionadas

Utilizar implemento de protección antes de trabajar con organismos biológicos.

De cristal o de plástico desechables

ASA DE SIEMBRA

Para tomar una porción del cultivo y llevarlo a una placa petri

Se emplea para transportar o arrastrar o transvasar inóculos.realización de frotis

Asa de siembra estéril

Asa de siembra por radiación

Asa de siembra metálica

ESPATULA DRIGLASKY

Para la distribución uniforme en suspensiones bacteriológicas

Se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.

Espátula de Drigalski, cabezal recto

Espátula de Drigalski, cabezal curvo

TUBOS DE ENSAYO

permite preparación de soluciones

se utiliza para contener pequeñas muestras liquidas ,y prepara soluciones.

Tubos de vidrio borosilicatado (Pyrex)

Tubos de ensayo de material plástico,

AUXILIAR DE PIPETEADO

succionar un liquido

Succionar sustancias en pequeñas cantidades

las que son de goma blanda en toda su composición

las que son de plástico más duro

PROBETAInstrumento volumétrico de vidrio

instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes superiores y más rápidamente que las pipetas ,aunque con menos precisión

Probeta clase A :  se usan mucho en validación de métodos analíticos

Probeta clase B:   mediciones en las que no se requiere tanta

precisión. Mayormente son de plástico, su precio es bajo respecto a las probetas clase A.

INDICADOR DE ESTERLIZACION-CALOR SECO

Es un sistema apto para material termoressistente de acción germicida

Esteriliza metales y vidrios

Durante el ciclo esterilización no debería de abrirse la puerta de la estufa

INDICADOR DE ESTERLIZACION –CALOR HUMEDO

Sirve para esterilizar vidrio.acero y plásticos

Retirar el recipiente esterilizado cuando la presión sea uno

DESINFECTANTE

Se usa para destruir a los microrganismos ya que estos tienen propiedades toxicas

nunca debe llenarse un envase semivacío a partir de otro deben almacenarse en áreas secas,ventiladas y protegidas de la luz