INFORME MICROBIOLOGIA DETERMINACION DE CLOSTRIDIUM.docx

INFORME MICROBIOLOGÍA

INFORME DETERMINACIÓN DE CLOSTRIDIUM PERFRINGERS

PRESENTADO POR: KELLY PUENTES

OMAR NOVAJHONNATAN CUCAITA

YENNYPEREZ

INSTRUCTORA: ALEXANDRA CUCAITA

FICHA: 433472

SENACENTRO NACIONAL DE HOTELERÍA, TURISMO Y ALIMENTOS

CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOSBOGOTÁ D.C 2013


1. INTRODUCCIÓN:El Clostridium perfringens es una bacteria anaeróbica, Gram-positiva, cuyos bacilos forman esporas. Esta bacteria se distribuye ampliamente en el ambiente y con frecuencia se encuentra en el tracto digestivo de los humanos y muchos animales domésticos y asilvestrados. Las esporas de estas bacterias pueden permanecer latentes y por largo tiempo en la tierra, los sedimentos y áreas sujetas a la contaminación por eses fecales humanas y animales. El término para describir las enfermedades provocadas por el consumo de alimentos contaminados es: intoxicación por C. perfringens, No obstante las cepas de tipo C de esta bacteria pueden causar una enfermedad rara pero más aguda y que es conocida como "enteritis necrótica" o gangrena gaseosa (pig-bel), Es una enfermedad aguda que produce una marcada destrucción de la mucosa intestinal.

2. MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN ESTE ANALISIS: SPS (AGAR SELECTIVO SULFITO POLIMIXINA SULFADIAZINA)

HISTORIA:Se trata de una modificación del medio de Wilson y Blair y del de Mossel. Es muy cómodo de emplear al haber inhibido el crecimiento de la flora secundaria y dado su carácter moderadamente selectivo.

FUNDAMENTO:La mayor parte de los clostridios reducen el sulfito a sulfuro, que se puede poner de manifiesto por el color negro producido con los iones de hierro, el sulfato de polimixina y la sulfadiazina inhiben el crecimiento de la flora acompañante y la peptona de caseina y el extracto de levadura representan el aporte de nutrientes.

FORMULA (POR LITRO)

Sodio Sulfito 0,5 gSulfato de polimixina B 0,01 mg

Sulfadazina 0,12 gPeptona de caseína 15,0 gExtracto de levadura 10,0 g

Hierro (II)Citrato 0,5 gAgar 13,0 gr


pH final 7,0. 0,2

PREPARACION: Suspender 40 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 118°C durante 15 minutos.

MODO DE EMPLEO: Generalmente se siembra por incorporación en gelosa, cuando se utilizan tubos estos se sellan con aceite de vaselina estéril. Incubar entre 35°C y 37°C durante 24 horas. El Clostridium perfringens forma colonias negras al igual que otras especies como C.botulinum y C sporogenes,Cuando se incuba a 46°C,se favorece el crecimiento de C.perfringens.sin embargo, deben realizarse pruebas complementarias para la identificación.

CONTROL DE CALIDAD:Aspecto: polvo finoColor: Beige Solubilidad: ligeramente opalescentePH: 7,0. 0,2

CONTROL MICROBIOLÓGICO:

MICROORGANISMOS DESAROLLOClostridium perfringens satisfactorio

Escherichia Coli InhibidoStaphylococcus Aureus Inhibido-moderadoClostridium Sporegenes Aceptable


3. OBJETIVOS

Adquirir destreza en el recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la

normatividad.

4. MATERIALES Y EQUIPOS

● 2 tubos de ensayo de 10 ml● Erlemeyer de 150 ml● Cajas de petri● Pipetas● Micropipeta● Puntas para micropipeta● Gradillas● Mechero● Jarra de anaerobiosis● Baño de maría● Cuchillo, tenedor y espátula● Balanza● Cintas de vaselina elástica


● Cloruro de sodio● Peptona● Agua destilada-des ionizada● Muestra ● Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS)

5. MÉTODO

Se pesaron 10 gramos de cada muestra colectada, las que, por separado, se añadieron a matraces conteniendo 90 mL de solución salina fisiológica peptonada (SSFP) estéril, obteniéndose de esta forma una dilución al 1/10. A partir de esta dilución, se hicieron diluciones al 1/100 y al 1/1000. A partir de cada una de las diluciones, con una pipeta estéril, se tomó 1mL y se depositó en tubos estériles y, a continuación, se agregó el medio de cultivo sulfito polimixina sulfadiazina (SPS). Se dejó solidificar, y luego se agregó 1mL del mismo medio de cultivo a fin de asegurar la anaerobiosis. Realizadas las siembras, se llevaron a incubar a 37 ºC por 24 horas. Transcurrido el tiempo de incubación se seleccionaron los tubos que contenían colonias negras, y se cuantificaron. Realizada la cuantificación, el medio de cultivo se llevó a una placa estéril y, se procedió a seleccionar cinco colonias negras, para luego sembrarlas en caldo tioglicolato y se incubó a 45 ºC por 24 horas. Transcurrido el tiempo de incubación, se procedió a la identificación, para lo cual se realizó la coloración Gram y se sembró en el medio nitrato movilidad y en el medio el medio de cultivo gelatina lactosa, a fin de verificar la reducción de nitratos a nitritos, movilidad, licuefacción de la Gelatina y degradación de la lactosa, respectivamente.


6 .CÁLCULOS:AGAR SULFITO POLIMIXINA Sulfadiazina (SPS)

39,4 gr ________ 1000mlx ____________ 120 ml = 4,728 gr

AGUA PEPTONADA:

1P ________ 1000mlx _________ 110ml = 0.11 gr

CLORURO DE SODIO (NaCl):

8.5 Gr ________ 1000mlx ____________ 110ml = 0.935 gr

7. ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Autoclavado:8:30 Am


RESULTADOS

ANÁLISIS MEDIO DE CULTIVO

DILUCION DESAROLLO CARACTERÍSTICAMACROSCÓPICA

S

IMÁGENES

Determinación de bacterias anaerobias del genero Clostridium Perfringens

(SPS)Agar

Sulfito Polimixina Sulfadiazi

na

Dilución 10-1Caja N 1Desarrollo de Staphylococcus Aureus y Clostridium perfringens

Caja N 2:Desarrollo de Staphylococcus Aureus y Clostridium perfringens



UFC: 41colonias

UFC:53colonias

UFC: 38 colonias

UFC:50 colonias

Staphylococcus Aureus:*Forma: Irregular*Borde: Ondulado*Elevación: Elevada*Superficie: Mate*Color: Beige

Clostridium perfringens:*Forma: circular*Borde: entero*Elevación. convexa*Superficie: Brillante*Color: Negro


Clostridium perfringens:*Forma: circular




UFC:24colonias

UFC:30 colonias

*Borde: entero*Elevación. convexa*Superficie: Brillante*Color: Negro


Clostridium perfringens:*Forma: circular*Borde: entero*Elevación. convexa*Superficie: Brillante*Color: Negro

Alimento a Analizar: Salchichón taller de cárnicos elaborado por la ficha 433472 Rango: Selección de cajas que presentan recuento entre 15-150 UFCCálculo:


______________________

C:es la suma de la colonas de C.perfringers.N1:Es el numero de cajas guardadas en la primera diluciónN2:E s el numero de cajas retenidas en la segunda diluciónD:es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución retenida

8. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

Una de las posibles deducciones que podemos aportar, acerca del porque esta bacteria se encuentra tan presente en nuestro producto es porque Clostridium perfringens está ampliamente distribuido en la naturaleza y se halla en la tierra, en las aguas, en los alimentos, en el polvo, en las especias y en el tracto intestinal de las personas y de los animales; en el taller de cárnicos realizamos estos productos de una manera artesanal por eso se encuentra tan expuesto a que contraiga una serie de bacterias que afecten su estado.

C. perfringens llega a las carnes directamente desde los animales que se sacrifican en el matadero, o por contaminación de la misma carne de los animales sacrificados otra conclusión que le damos es que el modo de conservación y manipulación desde la distribución del matadero hasta el economato del Sena no se encuentra en muy buenas condiciones.

Además, se conoce que la carne constituye un medio ideal para el crecimiento de Microorganismos debido a sus características de pH, humedad y nutrientes. Esto explica que se debe ser muy preciso en el taller de elaboración, ya que si no contamos con las mejores medidas en cuanto a higiene, manipulación, cuidado y percepción no vamos a poder erradicar en un % mucho menor a esta bacteria.

Otra posible deducción del porque obtuvimos UFC del tipo C. perfringens es debido a la operación de escaldado y conservación por falta de atención detallada y su manejo inadecuado.


CONCLUSIONES

El número de Clostridium perfringens en nuestro producto cárnico elaborado en el taller del Sena, está dentro de los parámetros permitidos para este producto.

Como controladores de calidad debemos prestar atención a cada detalle que se encuentra en la línea de proceso para minimizar el número de crecimiento microbiano.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.slideshare.net/sangel06/manual-de-medio-de-cultivos file:///C:/Users/Familia/Downloads/170-321-1-PB.pdf http://www.bvsops.org.uy/pdf/clostridium.pdf

http://www.bvsops.org.uy/pdf/clostridium.pdf

http://www.slideshare.net/sangel06/manual-de-medio-de-cultivos

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