Resumen

En esta prctica se tuvo como objetivo principal aislar cada fraccin de protenas del arroz tomando como fundamento principal la solubilidad de cada uno para luego determinar su concentracin de manera cuantitativa, para la cual, se hizo uso del mtodo de biuret realizando una curva de calibracin dando como resultado: 2.3636, 1.0550, 0.5966 y 28.6990 mg/ml para albuminas, globulinas, prolaminas y glutelinas respectivamente. Y su composicin de manera cualitativa, mediante distintas pruebas: Xantoproteica, Sakaguchi, Biuret y Acree-Rosemheim, resultando que ninguna de las fracciones posee de triptfano; todas las fracciones poseen cistena y/o metionina; la concentracin mas grande la tienen las glutelinas y poseen arginina las albuminas, glutelinas y en mayor proporcin las globulinas.

Introduccin:Las protenas son componentes fundamentales de la materia viva. Su diversidad de funciones va desde la regulacin de procesos de membrana hasta la catlisis de reacciones cinticamente desfavorables. Por esta razn conocer tcnicas apropiadas para su identificacin y cuantificacin toma importancia para cualquiera que trabaje en el campo de la bioqumica.

Existe un criterio que permite separar a las protenas segn su afinidad por determinados solventes. As, dependiendo del tipo de aminocidos que conforman su estructura se tendrn aquellas que simplemente son solubles en agua (albminas), en medio moderadamente salino (globulinas), ligeramente polar (prolinas) y en solucin cida o bsica (glutelinas).

En funcin de esta clasificacin, la presente prctica tuvo por objetivo aplicar un esquema de separacin que permiti el anlisis qumico de las fracciones proteicas en una muestra de arroz comercial.

Metodologa.

Se parti de una muestra de arroz comercial (Mary Esmeralda). Esta fue llevada hasta una consistencia de harina empleando una licuadora de cocina. Un aproximado de 2g de la muestra se disolvi en 10mL de agua destilada, se agit mecnicamente por 10min y se centrifug por 3min, a 2550rpm. Despus de separar el sedimento y el sobrenadante el proceso se repite.

Despus de extraer la fraccin acuosa el sedimento fue tratado dos veces con cloruro de sodio al 1%, etanol al 75% (60C) e hidrxido de sodio 0,1N. Finalmente cada fraccin se llev a un volumen de 25mL.

Posteriormente se tomaron medidas de absorcin a 540nm en diferentes soluciones de albmina srica bovina (ABS), mezclada con 3 ml del reactivo de Biuret y partiendo de una concentracin inicial de 3,014. (Ver tabla 3).

Finalmente, se midi la absorbancia de cada fraccin tratada con el reactivo de Biuret (ver tabla 4). Adems de eso se realizaron pruebas cualitativas para el reconocimiento de ciertos aminocidos en cada fraccin, cuyos resultados se muestran en la tabla 5.TABLAS DE DATOSTabla 1. Tipo de muestra y su masa. MuestraMasa (m0,0001)g

HARINA DE ARROZ(MARY Esmeralda)

2,0280

Tabla 2. Volmenes de cada fraccin proteica extrada. FraccionSolventeVolumen sobrenadante(v 1 ) mlVtotal

(v 0,04 ) ml

AlbuminasH2O16

25

GlobulinasNaCl (0,1 %)20

ProlaminasEtanol (70 %)20

GlutelinasNaOH 0,1 N12

Tabla 3. Datos para la determinacin cuantitativa de protenas por el mtodo de biuretTuboVolumen de disolucin estndar de BSA(v 0,01 ) mlVolumen de agua destilada(v 0,01 )mlVolumen de biuret aadido(v 0,03 )mlAbs(545nm)

B02

30,000

10,31,70,034

20,41,60,069

30,61,40,118

40,81,20,134

51,20,80,199

6200,303

Concentracin BSA: 3,014 mg/ml

Tabla 4. Absorbancias de cada fraccin proteica extrada. FraccionVolumen fraccion(v 0,01) mlVolumen de biuret aadido(v 0,03 )mlAbs (545nm)

Albuminas

2

30,261

Globulinas0,114

Prolaminas0,066

Glutelinas0,304

Tabla 5. Reacciones de reconocimiento de aminocidos.

REACCIONAlbuminasGlobulinasProlaminasGlutelinas

SakaguchiLevemente coloracin roja

(+)Fuertemente roja

(+)Sin coloracin

(-)RosadoFuerte

(+)

BiuretColoracin Azul tenue

Coloracin Azul tenue

Coloracin Azul tenue

Coloracin morado intenso

XantoproteicaSin cambios

(-)Sin cambios

(-)Sin cambios

(-)Sin cambios

(-)

SulfidacionPrecipitado gris/negro

(+)Precipitado gris/negro

(+)Precipitado gris/negro

(+)Precipitado gris/negro

(+)

Acree-rosenheimSin cambios

(-)Sin cambios

(-)Sin cambios

(-)Sin cambios

(-)

RESULTADOSTabla 6. Datos para la curva patrn de BSA.Tubo

Concentracin (mg/ml)Absorbancia

B00

10,45210,034

20,60280,069

30,90420,118

41,20560,134

51,80840,199

63,01400,307

Figura 1. Curva patrn BSA.

Ecuacin de la Recta

Tabla 7. Valores o btenidos de concentracin para cada fraccin extraida. Fraccin

Concentracin (mg/ml)(C 0,1377 )mg/ml

Albuminas2,3636

Globulinas1,0550

Prolaminas0,5966

Glutelinas28,6990