Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College,

Available from http://ir.tdc.ac.jp/

Title

Mineral trioxide aggregate における骨芽細胞様細胞の

動態 : 形態学的観察およびⅠ型コラーゲン，骨関連タン

パクのmRNA 発現について

Author(s) 中山, 敦; 松坂, 賢一; 井上, 孝

Journal 歯科学報, 105(3): 212-219

URL http://hdl.handle.net/10130/171

Right

抄録：本研究の目的は，Mineral trioxide aggregate

（MTA）の培養ラット骨芽細胞様細胞（RBM）に対す

る細胞動態を調べることである。ラット大腿骨から

採取したRBMをMTA上で３日間培養を行った。

走査型電子顕微鏡観察において，MTA上の RBM

はその細胞質を伸展させて微小突起と核の膨化を示

さず静着していた。透過型電子顕微鏡観察では，対

照群と同様に基質に接着していたが，基質との間に

２μm以上のギャップ形成がしばしば見られた。ア

ルカリフォスファターゼ活性は対照群と類似してい

た。Ⅰ型コラーゲンのmRNA発現は有意に低下

し，反対にオステオポンチン（OPN）のmRNA発現

は有意に上昇していた。以上の結果より，MTAは

RBMの増殖を阻害しない毒性の低い材料ではある

が，RBMの分化を抑制すると考えられた。

緒 言

外科的根尖切除術は，切除後根尖部の治癒を促す

逆根管充填材で充填することによって側枝や分岐根

管から根尖周囲組織への漏洩を防ぎ，硬組織による

根尖の封鎖を期待するものである１，２）。

Gartner，Dron らは理想的な逆根管充填材とし

て操作性が良く，Ｘ線不透過性で，構造的に安定

で，非吸収性で毒性がなく生体親和性を有する材料

で，根尖切除面にセメント質，歯根膜，歯槽骨の関

係を再生させることで，根尖周囲組織の理想的な治

癒を可能にすると述べている３）。

これまで逆根管充填材としてアマルガム，コンポ

ジットレジン，酸化亜鉛ユージノールセメント，グ

ラスアイオノマーセメント，ポリカルボキシレート

セメント，ガッタパーチャなどが用いられてき

た４）。しかし，いずれも上記を満たす材料は存在し

ない。

MTAは１９９３年にToravinejad らによって紹介さ

れ，逆根管充填材だけでなく歯根穿孔部位の修復，

直接歯髄覆罩などにも応用されてきた５）。過去の組

織学的研究において歯周組織や人為的骨欠損に対し

て本材を応用した際に，材料に近接してセメント質

や骨の形成を認めたとの報告６～１３）や，in vitro の研

究においてヒト骨芽細胞様細胞MG６３，Saos-2 が

MTAに対して直接静着できる生体親和性の高い材

料であると報告されている１４～１８）。根尖切除後の創傷

治癒にはたらく主な細胞の１つとして歯根膜細胞が

あり１７），もし仮に歯根膜細胞がマトリックスタンパ

クと共にMTAに接着すると，セメント芽細胞に分

化し，切除面の象牙質とMTA上にセメント質を形

成する可能性がある。この過程は創傷治癒における

重要な要素で，細胞の増殖および分化に影響を及ぼ

キーワード：MTA・骨芽細胞様細胞・mRNA発現日本大学歯学部保存学教室歯内療法学講座１）（主任：伊藤公一教授），東京歯科大学口腔科学研究センター，臨床検査学研究室２）（主任：井上 孝教授）（２００５年２月１４日受付）（２００５年３月３０日受理）別刷請求先：〒１０１‐８３１０ 東京都千代田区神田駿河台１‐８‐１３

日本大学歯学部保存学教室歯内療法学講座 中山 敦

本論文は，International Endodontic Journal，３８，２０３～２１０，２００５．に掲載された論文を和文により二次出版したものである。

二次出版

Mineral trioxide aggregate における骨芽細胞様細胞の動態―形態学的観察およびⅠ型コラーゲン，

骨関連タンパクのmRNA発現について―

中山 敦１） 松坂賢一２） 井上 孝２）

２１２

― 46 ―

す１８）。しかし，MTA周囲の細胞動態については未

だ報告が少ない。

本研究の目的は，MTA上の RBMにおける細胞

動態を形態学的，ALP活性およびⅠ型コラーゲン

と骨関連タンパクのmRNA発現を検索することで

ある。

材料および方法

１．MTAの溶出イオン測定

一定の混水比に従ってMTA（Pro RootTM MTA

Root Canal Repair Material, Dentsply Tulsa Den-

tal）を混和し，６０mm培養皿（Corning）上の中心に

直径約１０mmの円になるように塗布，硬化させた。

混和約２４時間経過後，培養皿に pH７．２に調整した

９ml の滅菌蒸留水を入れ，５％CO２，３７℃の条件

下にて静置した。１，２および３日後，培養皿から

蒸留水を回収し，その溶液中に溶出したカルシウ

ム，リン，アルミニウム，ケイ素およびビスマスの

イオンを ICP 発光分光分析装置（Vista-MPX，セイ

コーインスツルメント）にて測定した。

２．細胞培養および培養液の pH測定

全ての実験は東京歯科大学動物実験指針に基づい

て行った。RBMはManiatopoulos ら１９）の 方 法に

準じて約１００ｇのWistar ST 系雄性ラット（三協

ラボ）大腿骨より採取した。細胞は１０％ fetal calf se-

rum（Sigma），５０mg/ml ascorbic acid（WAKO），１０

mM Na β-glycerophosphate（Sigma），１０－８ M dex-

amethasone（WAKO），１０mg/ml gentamicin（Sigma）

添加 α-minimal essential medium（α-MEM，Gibco）

にて５％CO２，３７℃条件下で７日間初代培養した。

MTAおよび IRM（Dentsply Caulk）を各々混和

し，３５mm培養皿（Corning）上の中心に直径約１０mm

の円になるように塗布，硬化させた。混和約２４時間

経過後，エチレンオキサイドガス滅菌を行い，１週

間室温で放置した。その後，それらの培養皿にRBM

（１．０×１０５個）を播種し，上記の培養液を用いて３日

間培養を行った。なお，便宜的に，これらの細胞を

MTA塗布群または IRM塗布群と呼び，非塗布で

培養した細胞をコントロールとした。

培養１，２および３日後に各々の実験群の培養液

を回収し，twin pH メータ（堀場）を用いて pHを測

定した。

３．培養細胞の形態学的観察

材料周囲のRBMは培養３日間とも位相差顕微鏡

で観察した。また，材料上のRBMは走査型電子顕

微鏡（日本電子，以下 SEM）にて観察するため，２％

グルタールアルデヒドを用いて４℃の条件下で１時

間固定し，エタノールで脱水，テトラメチルシラン

（Merck KGaA）で乾燥させた。その後，sputter-

coater（Bio-rad）にて金および亜鉛蒸着を行い，観察

した。

また，RBMの材料に対する静着状態を透過型電

子顕微鏡（Hitachi，以下TEM）にて観察するため，

RBMを２％グルタールアルデヒドにて固定後２％

オスミウムで約１時間後固定した。その後，エタ

ノールで脱水し，Epon８１２に包埋した。試料はウル

トラミクロトーム（Leica）に培養皿に対して垂直に

取り付け，ダイヤモンドナイフ（DiATONE）を用い

て超薄切片を作製し，グリッド上に回収し，ウラン

鉛染色を行い，観察した。

４．細胞増殖の測定

培養１，２および３日後，各々のRBMを PBS

（Gibco）で洗浄し，pH７．２に調整した０．１％ trypsin

添加 EDTA溶液にて培養皿より剥がし，細胞数を

Coulter Counter（Beckman Coulter）で測定した。

有意差の検定は一元分散分析を行った後に，コン

トロール，IRM塗布群との比較を Scheffe’s test を

用いて行い，有位水準はいずれも p＜０．０５とした。

５．アルカリフォスファターゼ（ALP）活性の測定

培養１，２および３日後，各々のRBMを剥が

し，１０分間超音波処理した後，２４００×ｇで１０分間遠

沈させた。９６穴プレート（NUNC）に分注した細胞溶

解液１００µl に対して，５mM p -nitrophenol phos-

phate（Sigma）１００µl を３７℃，１時間作用させた後，

０．３M NaOH １００µl で反応を停止させ，その吸光度

を波長４０５nmにてマイクロプレートリーダー（Bio-

Rad）で測定した。なお，buffer は，alkaline buffer so-

lution（pH１０．５，Sigma）を用いた。

総タンパク量の測定はBCA protein assay キット

（Pierce）を用いた。９６穴プレートに分注した細胞溶

解液１００µl に対して，BCA working regent１００µl を

３７℃，３０分間作用させた後，同様に吸光度を波長５９５

nmにて測定した。

各々のALP活性の値は下記に示す式にて計算し

歯科学報 Vol．１０５，No．３（２００５） ２１３

― 47 ―

た。

ALP活性＝ ALP濃度（µmol｜ml）総タンパク量（µg｜ml）×

１反応時間（ｓ）

６．定量RT-PCR 法によるmRNA発現の検索

培養１，２および３日後，各々のRBMをTRIZOL

（Invitrogen）を用いて剥がし，クロロホルムを加え

１６，０００×ｇで２０分間遠沈させた。さらにその上清を

回収し，イソプロピルアルコールを混合させ，－８０℃

で一昼夜保存した。その後サンプルを１６，０００×ｇで

２０分間遠沈し，沈殿したRNAを７５％アルコールに

て洗浄し，DEPC水に溶解させ，使用するまで－８０℃

で保存した。RNAを紫外可視分光光度計（島津製作

所）にて測定し，cDNAを合成するため，RNAを

調整し，RT-PCR キット（タカラバイオ）を用いて

RT反応をさせた。定量 PCRはⅠ型コラーゲン，

アルカリフォスファターゼ（ALP），オステオポン

チン（OCN），オステオカルシン（OCN）とハウス

キ ー ピ ン グ 遺 伝 子 と し て glyceraldehyde-3-

phosphate dehydrogenase（GAPDH）を対象とし，

各々に対する特異的プライマーを用い，LightCy-

cler�と SYBER Green Ⅰ（Roche Diagnostics）に

よって行った。プライマーの配列と PCRの条件は

Table１に示した。なお，計測は３個の培養皿につ

いて行い，各々の遺伝子発現レベル（gene expres-

sion levels）は GAPDHで補正し，平均値と標準偏

差を算出した。

有位差の検定は一元分散分析を行った後に，コン

トロールとの比較を Scheffe’s test を用いて行い，

有意水準ｐ＜０．０５とした。

結 果

１．MTAの溶出イオン測定

硬化したMTAから３日間でカルシウムが１３０

ppm，ケイ素が８０ppm，微量のリン（０．１ppm），ア

ルミニウム（０．３ppm），ビスマス（０．３ppm）の溶出が

認められた（Fig.１）。

２．培養液の pH測定

MTA塗布群の培養液の pHは培養３日間を通し

て，約７．５と安定しており，実験前の pH７．２と比較

すると，大きな変化は認められなかった。

３．形態学的観察

１）位相差顕微鏡所見

コントロールでは，線維芽細胞様の紡錘形を呈し

たRBMが認められた。MTA塗布群では，コント

ロールと同様に線維芽細胞様の紡錘形を呈した

RBMが認められた（Fig.２）。一方，IRM塗布群で

は，ほとんどのRBMは球状形態を呈し，培養液中

に浮遊した状態であった。

Table１ PCR Primers used for LightCycler�-assisted PCR analysis

Targer cDNA Primer Sequence（５’to３’） PCR Condition Product size

type Ⅰ collagen Forward：CAA GAC AGT CAT CGA ATA CA ４５cycles，９５℃１０s，６６℃１０s，７２℃１０s ２５２bpReverse：AGT CCA TGT GAA ATT GTC TC

alkaline phosphatase Forward：GGC TCT CTC CAA GAC GTA CAA C ４５cycles，９５℃１０s，６６℃１０s，７２℃１０s ２３０bpReverse：GCG TGG TTC ACC CGA GTG GT

osteopontin Forward：CTC GGA GGA GAA GGC GCA TTA ４５cycles，９５℃１０s，６０℃１０s，７２℃１２s ２０７bpReverse：CCA TCG TCA TCG TCG TCG TCA

osteocalcin Forward：GGT GCA AAG CCC AGC GAC TCT ４５cycles，９５℃１０s，６０℃１０s，７２℃１２s １９９bpReverse：GGA AGC CAA TGT GGT CCG CTA

GAPDH Forward：TGA ACG GGA AGC TCA CTG G ４０cycles，９５℃１０s，６０℃１０s，７２℃１２s ３０７bpReverse：TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA

Fig.1 Measurement of ions released from MTA

硬化したMTAから３日間でカルシウムが約１３０ppm，ケイ素が約８０ppmの溶出が認められた。

中山，他：MTAの培養ラット骨髄細胞における影響２１４

― 48 ―

２）走査型電子顕微鏡所見

コントロールのRBMは細胞質を伸展させ，多く

の微小突起を四方に伸ばしている像が観察された

（Fig.３）。MTAの表面形状は凹凸で不整形な隆起

状形態を呈しており，MTA上の RBMは細胞質を

伸展させて静着していたが，微小突起や核の膨隆は

認められなかった（Fig.４）。一方，IRM塗布群で

は，材料上に静着したRBMは認められなかった。

３）透過型電子顕微鏡所見

コントロールのRBMは，培養皿に対して focal

contact，focal adhesion および extracellular matrix

（ECM）を介して接着していた（Fig.５）。MTA上の

RBMの細胞質内にはよく発達した小胞体，ミトコ

ンドリアおよびリボゾームが観察された。また

RBMは，粗造な表面形状を呈するMTAでは，そ

の凸の部分において focal adhesion で接着し，凹の

部分では接着していなかった（Fig.６）。

４．細胞数の測定

コントロールにおいて，培養期間中の細胞数は経

日的に増加した。MTA塗布群においても，増加傾

向を示したが，コントロールと比較すると，その増

加率は有位に低かった。一方，IRM塗布群では，

細胞は激減しており，有意な生細胞は認められな

かった（Fig.７）。

５．ALP活性の測定

MTA塗布群におけるALP活性値は，コント

ロールとほぼ同様に経日的に上昇していた。一方，

IRM塗布群では，実験期間を通して全くその活性

は認められなかった（Fig.８）。

６．定量RT-PCR 法によるmRNA発現の検索

MTA塗布群では，Ⅰ型コラーゲンのmRNA発

現は有意に低かった（Fig.９）が，ALPのmRNA発

現はコントロールとほぼ同様であった（Fig.１０）。

OPNのmRNA発現は有意に高かった（Fig.１１）が，

OCNのmRNA発現は検出感度以下であった。一

方，IRM塗布群では，有意な生細胞が認められな

かったことから，実験に必要なRNA量を採取でき

なかった。Fig.2 Phase contrast micrograph of RBM around MTA（×４０）

MTA塗布群の位相差顕微鏡像において，３５mm培養皿の底面に紡錘形を呈したRBMが密集して静着し，MTAの辺縁にも付着した細胞が観察された。

Fig.3 SEM observations in the control groups Fig.4 SEM observations in the MTA groups

培養３日目のコントロールの SEM像において，RBMは細胞質を伸展させ静着し，核の膨隆や多くの微小突起を四方に伸ばしているのが観察された。

培養３日目のMTA塗布群の SEM像において，RBMは細胞質を伸展させ静着していたが，核の膨隆や微小突起は認められなかった。

歯科学報 Vol．１０５，No．３（２００５） ２１５

― 49 ―

Fig.5 TEM observations in the control groups（the barindicates １µm）

Fig.6 TEM observations in the MTA groups（the bar in-dicates １µm）

コントロールのTEM像において，培養皿に対して fo-cal contact（�），focal adhesion（�）およびECMを介して接着していた。

MTA塗布群のTEM像において，矢印の部位では fo-cal adhesion で接着していた。

Fig.7 Cell proliferation Fig.8 ALP activity

コントロールにおいて，培養期間中の細胞数は経日的に増加した。MTA塗布群においても，増加傾向を示したが，コントロールと比較すると，その増加率は有意に低かった。一方，IRM塗布群では，細胞は激減しており，有意な生細胞は認められなかった。

MTA塗布群におけるALP活性値は，コントロールとほぼ同様に経日的に上昇していた。一方，IRM塗布群では，実験期間を通して全くその活性は認められなかった。

Fig.9 Expression of type Ⅰ collagen mRNA Fig.10 Expression of ALP mRNA

MTA塗布群の I型コラーゲンのmRNA発現では，コントロールと比較しては有意に低かった。

MTA塗布群のALPのmRNA発現は，コントロールとほぼ同様であった。

中山，他：MTAの培養ラット骨髄細胞における影響２１６

― 50 ―

考 察

MTAの粉末は，3CaO-SiO２（tricalcium silicate），

3CaO-Al２O３（tricalcium aluminate），Bi２O３（bismuth

oxide），CaSO４-2H２O２（calcium sulfate dehydrate）

などを主に含有する親水性の粒子である。それに加

え，化学的，物理学的目的のため，他の無機酸化物

が少量含まれている２０）。

本研究の結果では，硬化したMTAからカルシウ

ムが約１３０ppm（３．２５mM），ケイ素が約８０ppm，微

量のリン，アルミニウムおよびビスマスの溶出が認

められた。電子線マイクロアナライザーを用いた

MTAの微量成分の分析実験結果では，粉末状の

MTA成分からカルシウム，ビスマス，ケイ素など

が多く検出されたと報告しており２１），混和後硬化さ

せたMTAにおいても同様の成分溶出が起こってい

る可能性があるものと考えられた。

MTAは硬化開始時に pHが約１０．２，完全硬化約

３時間後には pH約１２．５まで上昇し，さらにそれを

維持するとされている２０）。本研究結果において，

MTAに対する培養液の pHは実験期間を通して約

７．２～７．５の範囲で安定し，ほとんど変化を示さな

かったことから，MTAおよび溶出するカルシウム

などの微量成分が培養液の pH変化に影響を与えな

いものと推測された。

織井は，ウサギ脛骨由来の培養骨芽細胞様細胞の

細胞増殖，ALP活性，およびⅠ型コラーゲンの

mRNA発現に対するカルシウム濃度の影響を検討

した結果，カルシウム１．８～２．５mMでは有位な変

化が認められなかったが，カルシウム１０～１５mM

では細胞増殖は抑制されたと報告している２２）。本研

究では，MTA塗布群の培養液中へのカルシウムの

溶出量は３．２５mMであったにもかかわらず，細胞

数の経日的な増加はコントロールと比較して顕著に

抑制されていたことから，カルシウム以外の成分が

細胞増殖に影響を与えていると思われた。

MTAから溶出されたアルミニウムおよびケイ素

については，アルミニウムの細胞増殖に関する毒性

は報告されていない２３）。非金属であるケイ素は通常

イオン化されないことから，SiO２としてMTAから

溶出されたものと推測され，両成分ともに細胞増殖

に大きな影響を与えるものではないと考えられた。

一方，根管用シーラーの造影成分として一般的に配

合されているビスマスは，培養マウス骨芽細胞様株

細胞MC3TC-E1 や線維芽細胞様株細胞 L９２９に対し

て細胞毒性を示すと報告されている２３）。このことか

ら，MTAから微量に溶出したビスマスの影響によ

りRBMの細胞増殖が抑制されたと考えられた。

SEM所見では，MTAの表面は多孔性で凹凸な

形態をしており，RBMは静着しているものの，そ

の細胞質に微小突起や核の膨隆は認められなかっ

た。対照的に，コントロールのRBMは，紡錘形で

多くの微小突起を有し，明確な核の膨隆が観察され

た。骨表面における活性化した骨芽細胞は，一般的

に立方形で球状の形態を呈するが，未分化な細胞ま

たは休止状態の骨芽細胞は紡錘形で平坦な形態をと

ることが知られている。MTA上に静着したRBM

は，同様に紡錘形を呈したことから，未分化な細胞

または休止状態の骨芽細胞である可能性が示唆され

た。

Brunette は，形態学的に線維芽細胞と基質の接

着の様式には，細胞膜と基質の間隙が１０nm以下の

focal contact，３０～５０nmの focal adhesion および

１００nm以上の間隙を有するECMを介する接着様式

の存在を指摘している２４）。TEM所見で，MTA塗

布群とコントロールにおいては，これら３つの細胞

接着の存在が認められた。RBMは，粗造な表面形

状を呈するMTAでは，その凸の部分において focal

adhesion で接着し，凹の部分では接着していな

かった。以上の所見から，RBMのMTAに対する

接着は，コントロールに比較して脆弱であると考え

られた。

Fig.11 Expression of OPN mRNA

MTA塗布群のOPNのmRNA発現は，コントロールと比較して有意に高かった。

歯科学報 Vol．１０５，No．３（２００５） ２１７

― 51 ―

OPNは骨の添加と吸収に関与する細胞外基質の

１つで，近年，宿主防衛や組織傷害への関与が明ら

かとなった２５）。Tanabe らは，培養ラットROS骨芽

細胞様株細胞に対する IL-1a 添加の影響を調べ，

OPNの遺伝子発現の増加を報告している２６）。Koh

らは，ヒト骨肉腫由来骨芽細胞様株細胞MG-63 を

MTA存在下で培養し，IL-1a，IL-1β，IL-6，M-CSF

などのサイトカインの産生増加を報告している１４）。

サイトカインの産生は炎症のメディエーターである

マクロファージによって分泌されたプロスタグラン

ジンによって調節されている。本研究においてOPN

のmRNA発現の有位な増加は，MTAから溶出し

たビスマスの細胞毒性によってRBMがサイトカイ

ンを産生した結果による可能性も考えられるが，む

しろ，Ⅰ型コラーゲンのmRNA発現も抑制されて

いたことから，細胞分化の抑制現象が起きていると

思われた。

OCNは骨芽細胞によって分泌され，石灰化を調

節しているタンパクである２７）。Maniatopoulos ら

は，RBMが培養２０日目に石灰化物を形成し，同時

にOCNを発現すると報告しているが１９），本研究に

おいてはOCNのmRNA発現は検出感度以下で

あったことから，細胞の分化が抑制されていると考

えられた。

本研究の結果より，MTAは IRMと比較すると，

生体親和性の高い材料と考えられるが，RBMを骨

形成細胞に分化させる能力は低いことが示唆され

た。

なお，本論文の要旨は，第２７８回東京歯科大学学会総会（２００４

年１０月１６日，千葉）において発表した。

参 考 文 献１）Witherspoon DE, Gutmann JL : Hemostasis in peri-radicular surgery. Int Endod J,２９：１３５～１４９，１９９６．２）Yagiela J : Vasconstrictor agents for local anesthesia.Anesth Progr,４２：１１６，１９９５．３）Gartner AH, Dron SO : Advances in endodontic sur-gery. Dent Clin of North Am,３６：３５７～３７９，１９９２．４）Friedman S : Retrograde approaches in endodontictherapy. Endod Dent Traumatol, ７：９７～１０７，１９９１．５）Torabinejad M, Watson TF, Pitt Ford TR : Sealingability of a mineral trioxide aggregate when used as aroot end filling material. J Endod,１９：５９１～５９５，１９９３．６）Torabinejad M, Hong CU, Lee SJ, Monsef M, Pitt FordTR : Investigation of mineral trioxide aggregate for root-end filling in dogs. J Endod,２１：６０３～６０８，１９９５．

７）Torabinejad M, Pitt Ford TR, McKendry DJ, AbediHR, Miller DA, Kariyawasam SP : Histologic assessmentof mineral trioxide aggregate as a root-end filling in mon-keys. J Endod,２３：２２５～２２８，１９９７．８）Torabinejad M, Pitt Ford TR, Abedi HR, KariyawasamSP, Tang HM : Tissue reaction to implanted root-end fill-ing materials in the tibia and mandible of guinea pigs. JEndod,２４，４６８～４７１，１９９８．９）Shabahang S, Torabinejad M, Boyne PP, Abedi H,McMillan P : Acomparative study of root-end inductionusing osteogenic protein-1, calcium hydroxide, and min-eral trioxide aggregate in dogs. J Endod,２５：１～５，１９９９．

１０）Holland R, de Souza V, Nery MJ, Otoboni Filho JA,Bernabe PF, Dezan Junior E : Reaction of dogs’teeth toroot canal filling with mineral trioxide aggregate or aglass ionomer sealer. J Endod,２５：７２８～７３０，１９９９．

１１）Moretton TR, Brown CE Jr, Legan JJ, Kafrawy AH :Tissue reactions after subcutaneous and intraosseous im-plantation of mineral trioxide aggregate and ethoxyben-zoic acid cement. J Biomed Mater Res,５２：５２８～５３３，２０００．

１２）Regan JD, Gutmann JL, Witherspoon DE : Comparisonof Diaket and MTA when used as root-end filling materi-als to support regeneration of the periradicular tissues.Int Endod J,３５：８４０～８４７，２００２．

１３）Economides N, Pantelidou O, Kokkas A, Tziafas D :Short-term periradicular tissue response to mineral triox-ide aggregate（MTA）as root-end filling material. Int En-dod J,３６：４４～４８，２００３．

１４）Koh ET, Torabinejad M, Pitt Ford TR, Brady K,McDonald F : Mineral trioxide aggregate stimulates abiological response in human osteoblasts. J Biomed MaterRes,３７：４３２～４３９，１９９７．

１５）Koh ET, McDonald F, Pitt Ford TR, Torabinejad M :Cellular response to Mineral Trioxide Aggregate. J En-dod,２４：５４３～５４７，１９９８．

１６）Mitchell PJ, Pitt Ford TR, Torabinejad M, McDonaldF : Osteoblast biocompatibility of mineral trioxide aggre-gate. Biomaterials,２０：１６７～１７３，１９９９．

１７）Zhu Q, Haglund R, Safavi KE, Spangberg LS Adhesionof human osteoblasts on root-end filling materials. J En-dod,２６：４０４～４０６，２０００．´１８）Perez AL, Spears R, Gutmann JL, Opperman LAOs-

teoblasts and MG-63 osteosarcoma cells behave differ-ently when in contact with ProRoot MTA and WhiteMTA. Int Endod J,３６：５６４～５７０，２００３．

１９）Maniatopoulos C, Sodek J, Melcher AH : Bone forma-tion in vitro by stromal cells obtained from bone marrowof young adult rats. Cell Tissue Research. ２５４：３１７～３３０，１９８８．

２０）Torabinejad M, Hong CU, McDonald F, Pitt Ford TRPhysical and chemical properties of a new root-end fillingmaterial. J Endod.２１：３４９～３５３，１９９５．

２１）大久保厚司，辻本恭久，三島弘幸，小澤幸重：電子線マイクロアナライザーによる石灰化促進の可能性としてのMTAの微量成分の検討．日歯内療誌，２５：１２９～１３６，２００４．

２２）織井弘道：骨芽細胞様細胞の細胞増殖，石灰化物形成および細胞外マトリックス成分の発現におよぼすカルシウムイオンの影響．日大歯学，Nihon Univ. Dent. J.７３：５５８～５６６，１９９９．

中山，他：MTAの培養ラット骨髄細胞における影響２１８

― 52 ―

２３）Yamamoto A, Honma R, Sumita M Cytotoxicity evalu-tion of 43 metal salts using murine fibroblasts and os-teoblastic cells. J Biomed Mater Res. ３９：３３１～３４０，１９９８．

２４）Brunette DM. The effects of implant surface topogra-phy on the behavior of cells. Int J Oral Maxillofac Im-plants. ３：２３１～２４６，１９８８．

２５）Sodek J, Ganss B, McKee MD Osteopontin. Crit RevOral Biol Med.１１：２７９～３０３，２０００．

２６）Tanabe N, Ito-Kato E, Suzuki N, Nakayama A, Ogiso B,Maeno M, ItoK. IL-1alpha affects mineralized nodule for-mation by rat osteoblasts. Life Sci. ７５：２３１７～２３２７，２００４．

２７）Robey PG, Bianco P, Termine JD. The cellular biologyand molecular biochemistry of bone formation. In : CoeFL, Facus MJ, Disorders of Bone and Mineral Metabo-lism. New York : Raven Press.１９７２：２４１～２６４

歯科学報 Vol．１０５，No．３（２００５） ２１９

― 53 ―