PENGARUH INJEKSI INTRAMATRIKSIAL EKSTRAK DNA DARAH TALI

PUSAT MANUSIA TERHADAP PERTUMBUHAN KUKU

PADA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus norvegicus) GALUR Sprague dawley

( Skripsi )

Oleh

Kuntum Sureda

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDARLAMPUNG

2020

PENGARUH INJEKSI INTRAMATRIKSIAL EKSTRAK DNA DARAH TALI

PUSAT MANUSIA TERHADAP PERTUMBUHAN KUKU

PADA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus norvegicus) GALUR Sprague dawley

Oleh

Kuntum Sureda

Skripsi

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Lulus Sarjana Kedokteran

Pada

Fakultas Kedokteran

Universitas Lampung

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDARLAMPUNG

2020

ABSTRACT

THE INFLUENCE OF INTRAMATRICIAL INJECTION EXTRACT DNA

OF HUMAN UMBILICAL CORD BLOOD ON NAIL GROWTH IN

Sparague dawley strain WHITE MALE RATS (Rattus norvegicus)

By

KUNTUM SUREDA

Background: Nails are additional skin tools that have physiological functions to

protect the fingertips and aesthetic functions to support appearance. At this time

many events can cause lesions on the nails and require a long time to heal the nail

completely. Extract DNA of human umbilical cord blood has the ability to assist

the process of nail growth. This study aims to determine the effect of intramatricial

injection extract DNA of human umbilical cord blood on nail growth including the

length and time of nail growth.

Method: This research was an experimental laboratory study using 18 white rats

that were nailed and divided into control groups (K1), treatment groups (P1) and

treatment groups (P2). Observations were made on the length of nail growth using

calipers and nail growth time which was carried out for 14 days. Data were analyzed

using One Way ANOVA and Kruskal Wallis statistical tests with α: 5% values.

Result: The length of the nail growth showed the results of the data analysis test of

p

ABSTRAK

PENGARUH INJEKSI INTRAMATRIKSIAL EKSTRAK DNA DARAH

TALI PUSAT MANUSIA TERHADAP PERTUMBUHAN KUKU PADA

TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus norvegicus)

GALUR Sprague dawley

Oleh

KUNTUM SUREDA

Latar Belakang: Kuku merupakan alat tambahan kulit yang mempunyai fungsi

fisiologis untuk melindungi ujung jari dan fungsi estetis untuk menunjang

penampilan. Pada saat ini banyak kejadian yang dapat menyebabkan lesi pada kuku

dan membutuhkan waktu yang cukup lama untuk menyembuhkan kuku secara utuh.

Ekstrak DNA darah tali pusat manusia memiliki kemampuan dalam membantu

proses pertumbuhan kuku. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh

injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia terhadap pertumbuhan

kuku yang meliputi panjang dan waktu pertumbuhan kuku.

Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dengan

menggunakan 18 ekor tikus putih yang diavulsi kukunya dan dibagi menjadi

kelompok kontrol (K1), kelompok perlakuan (P1) dan kelompok perlakuan (P2).

Pengamatan dilakukan terhadap panjang pertumbuhan kuku menggunakan jangka

sorong dan waktu pertumbuhan kuku yang dilakukan selama 14 hari. Data

dianalisis menggunakan uji statistik One way ANOVA dan Kruskal wallis dengan

nilai α : 5%.

Hasil: Panjang pertumbuhan kuku menunjukkan hasil uji analisis data sebesar

p

RIWAYAT HIDUP

Penulis dillahirkan di Jakarta pada tanggal 1 Januari 1999. Penulis merupakan putri

kedua dari tiga bersaudara dari pasangan Bapak Zulmahdi dan Ibu Karmita.

Penulis menempuh pendidikan Sekolah Dasar (SD) di SD Negeri 01 Manggarai

Selatan pada tahun 2004-2010, Sekolah Menengah Pertama (SMP) di SMP Negeri

3 Jakarta pada tahun 2010-2013, Sekolah Menengah Atas (SMA) di SMA Negeri

55 Jakarta pada tahun 2013-2016. Pada tahun 2016, penulis diterima sebagai

mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Lampung.

Selama menjadi mahasiswa penulis pernah aktif pada organisasi FSI Ibnu Sina pada

tahun 2017 sebagai anggota divisi Media dan Syi’ar (MEDIS) dan pada organisasi

Perhimpunan Mahasiswa Pecinta Alam dan Tanggap Darurat (PMPATD) Pakis

Rescue Team sebagai anggota divisi Organisasi.

Bissmillahirrahmanirrahim

Segala puji hanya milik Allah SWT atas

rahmat, nikmat dan kasihNya yang tak

pernah berhenti diberikan kepadaku selama

ini. Sholawat serta salam selalu tercurah

kepada junjungan kita Nabi Muhammad

SAW.

Ku persembahkan karya ini untuk kedua

orang tuaku tercinta, abak dan amak yang

telah membesarkan dan mendidikku dengan

kasih sayangnya. Selalu memberi dukungan,

nasihat, harapan pada diriku dan do’a yang

tak pernah hentinya menyertaiku menuju

kesuksesan.

DO THE BEST AND LET ALLAH DO THE

REST.

SANWACANA

Segala puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang telah

memberikan begitu banyak nikmat sehingga penulis dapat menyelesaikan

penelitian ini, serta shalawat dan salam penulis junjungkan kepada Nabi

Muhammad SAW, keberadaannya membuat hati tenang meskipun belum pernah

bertemu.

Atas kehendak dan karunia Allah, Alhamdulillah penulis dapat menyelesaikan

skripsi ini yang berjudul “PENGARUH INJEKSI INTRAMATRIKSIAL

EKSTRAK DNA DARAH TALI PUSAT MANUSIA TERHADAP

PERTUMBUHAN KUKU PADA TIKUS PUTIH JANTAN (Rattus norvegicus)

GALUR Sprague dawley” sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana

Kedokteran di Universitas Lampung.

Dalam kesempatan ini penulis ucapkan sebesar-besarnya kepada :

1. Prof. Dr. Karomani,M.Si., selaku Rektor Universitas Lampung;

2. Dr. Dyah Wulan SRW,S.K.M., M.Kes. selaku Dekan Fakultas Kedokteran

Universitas Lampung;

3. Dr. dr. Evi Kurniawaty, S.Ked., M.Sc selaku Pembimbing Satu yang telah

bersedia meluangkan waktu, memberikan bimbingan, kritik, saran dan nasihat

yang bermanfaat dalam penelitian skripsi ini;

4. Dr. dr. Ety Apriliana, S.Ked., M.Biomed selaku Pembimbing Dua yang telah

bersedia meluangkan waktu, memberikan bimbingan, kritik, saran dan nasihat

yang bermanfaat dalam penelitian skripsi ini;

5. dr. Rasmi Zakiah Oktarlina, S.Ked., M.Farm selaku Pembahas skripsi yang

bersedia meluangkan waktu dan kesediannya untuk memberikan kritik, saran

dan nasihat yang bermanfaat dalam proses penyelesaian skripsi ini;

6. Ayah dan ibu tercinta, Bapak Zulmahdi dan Ibu Karmita yang paling spesial

dalam persembahan ini atas segala doa dan dukungan yang tidak pernah putus.

Terima kasih selalu menjadi pengingat dan penguat dalam setiap langkah

kehidupan yang kujalani. Semoga hasil penelitian ini menjadi ilmu yang

berbuah pahala bagi mereka berdua;

7. Kakak dan adik saya, Riwa Orapakel dan Topaz Orapakel yang selalu

memberikan dukungan baik moril maupun materil;

8. Seluruh keluarga besar yang turut memberikan dukungan kepadaku untuk

menyelesaikan pendidikan, terkhusus pada Mak Tuo dan Pak Tuo serta sepupu

saya Uni Putri;

9. dr. Agustyas Tjiptaningrum, S.Ked., Sp.PK selaku Pembimbing Akademik atas

waktu dan bimbingannya;

10. Seluruh staf pengajar dan karyawan Fakultas Kedokteran Universitas Lampung

atas segala ilmu dan bimbingan yang kelak akan digunakan sebagai bekal

dalam menjalankan tugas sebagai dokter;

11. Ny. N, yang telah bersedia memberikan tali pusatnya untuk digunakan dalam

penelitian ini;

12. Sahabat yang selalu mendukung, membantu dan menemani saya sejak

dibangku SMP hingga sekarang Pepy Fajriah Nataayu terima kasih atas

hiburannya dikala saya sedang susah;

13. Teman yang selalu membantu dalam kehidupan sehari-hari maupun

perkuliahan: Desti Dwi Rahmah, Nursilri Meidania, Fauziah Dwi Apriani dan

Aulia Salma Azmi terimakasih atas segala bantuan yang sudah diberikan;

14. Teman seperjuangan dalam hal bertahan hidup di Fakultas Kedokteran ini

Rahma terimakasih atas kerja samanya;

15. Teman yang tergabung dalam penelitian sel punca; Yasmin, Komden, Restu,

Carla, Ihsan, Asyraf dan Kak Anggun, terimakasih atas segala bantuannya

hingga skripsi ini dapat diselesaikan;

16. Ibu Nuriah dan Mba Yani, atas segala bantuannya untuk proses ekstraksi sel

punca;

17. Temanku yang selalu siap membantu Mira Apriyani, Hanin Shafira, Felia

Yustika;

18. Teman-teman angkatan 2016 (TR16EMINUS) yang tidak bisa disebutkan satu

persatu;

Penulis menyadari sripsi ini masih memiliki banyak kekurangan dan jauh dari

sempurna, namun penulis berharap skripsi ini dapat memberikan manfaat dan

pengetahuan baru kepada setiap orang yang membacanya

Bandar Lampung, Januari 2020

Penulis

Kuntum Sureda

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR ISI ...........................................................................................................i

DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................ii

DAFTAR TABEL ..................................................................................................iii

BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang .................................................................................. 1

1.2 Rumusan Masalah ............................................................................. 5

1.3 Tujuan Penelitian .............................................................................. 5

1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................ 5

1.4.1 Manfaat bagi Penulis ................................................................ 5

1.4.2 Manfaat bagi Peneliti Lain ........................................................ 6

1.4.3 Manfaat bagi Fakultas Kedokteran Universitas Lampung ....... 6

1.4.4 Manfaat bagi Masyarakat .......................................................... 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................. 7

2.1 Kuku .................................................................................................. 7

2.1.1 Anatomi Kuku ........................................................................... 7

2.1.2 Embriologi Kuku ...................................................................... 9

2.1.3.Pertumbuhan Kuku ................................................................. 11

2.2 Sel Punca .......................................................................................... 13

2.2.1 Klasifikasi Sel Punca .............................................................. 14

2.2.2 Sel Punca Mesenkimal ............................................................ 20

2.3 Gambaran Umum Hewan Coba ....................................................... 23

2.4 Kerangka Penelitian ......................................................................... 26

2.4.1 Kerangka Teori ....................................................................... 26

2.4.2 Kerangka Konsep .................................................................... 27

2.5 Hipotesis ............................................................................................. 27

Jenis Penelitian ................................................................................ 28

Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 28

Subjek Penelitian ............................................................................. 28

3.3.1 Populasi Penelitian ............................................................... 28

3.3.2 Sampel Penelitian ................................................................. 29

Rancangan Penelitian ...................................................................... 31

Identifikasi Variabel Penelitian ....................................................... 31

3.5.1 Variabel Bebas ........................................................................ 31

3.5.2 Variabel Terikat ...................................................................... 32

Definisi Operasional Variabel Penelitian ........................................ 32

Alat dan Bahan ................................................................................ 33

3.7.1 Alat Penelitian ......................................................................... 33

3.7.2 Bahan penelitian ..................................................................... 33

Cara Kerja ....................................................................................... 34

3.8.1 Tahap Persiapan ...................................................................... 34

3.8.2 Tahap Pengujian ..................................................................... 37

Alur Penelitian ................................................................................ 40

3.10.1 Pengolahan Data ................................................................... 41

3.10.2 Analisis Data ......................................................................... 42

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 45

4.1 Gambaran Umum Penelitian ............................................................... 45

4.2 Hasil Penelitian ................................................................................... 46

4.2.1 Panjang Pertumbuhan Kuku ...................................................... 46

4.2.2 Waktu Pertumbuhan Kuku ........................................................ 55

4.3 Pembahasan ......................................................................................... 59

3.1

3.2

3.3

3.4

3.5

3.6

3.7

3.8

3.9

3.10 Pengelolahan dan Analisis Data...................................................... 41

3.11 Etika Penelitian............................................................................... 43

3.12 Dummy Table.................................................................................. 44

BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 28

4.4 Keterbatasan Penelitian ....................................................................... 64

5.1 Simpulan ......................................................................................... 65

5.2 Saran ................................................................................................ 66

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 67

BAB V SIMPULAN DAN SARAN..................................................................... 65

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Anatomi Kuku (Berker et al.,2007). ..................................................... 9

Gambar 2. Embriogenesis dari kuku (Berker et al., 2007). .................................. 10

Gambar 3. Pengembangan bidang kuku (Berker et al., 2007). ............................. 11

Gambar 4. Sifat sel punca (Jusuf,2008). ............................................................... 14

Gambar 5. Sel Punca Totipoten dan Pluripoten (Jusuf, 2008). ............................. 18

Gambar 6. Sel Punca Multipotent dan Unipotent pada sumsum tulang (Jusuf,

2008). .................................................................................................................... 19

Gambar 7. Macam-macam Sel Punca Mesenkimal (Phuc Van Pham, 2016) ....... 21

Gambar 8. Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley

(Koolhas, 2010). .................................................................................................... 24

Gambar 9. Kerangka Teori (Junqueira dan Corneiro, 2007). ............................... 26

Gambar 10. Kerangka Konsep .............................................................................. 27

Gambar 11. Alur Penelitian................................................................................... 40

file:///C:/Users/Acer-pc/Documents/DAFTAR%20ISI.docx%23_Toc23108623

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan kuku (Haneke, 2015). .......... 12

Tabel 2. Definisi Operasional Variabel Penelitian ................................................ 32

Tabel 3. Konversi Perhitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan dan Manusia

(Harmita dan Radji, 2008). ..................................................................... 39

Tabel 4. Hasil Pengamatan Panjang Pertumbuhan Kuku Kelompok Kontrol

Negatif (K) .............................................................................................. 46

Tabel 5. Hasil Pengamatan Panjang Pertumbuhan Kuku Kelompok (P1) ............ 47

Tabel 6. Hasil Pengamatan Panjang Pertumbuhan Kuku Kelompok (P2) ............ 48

Tabel 7. Hasil Uji Normalitas Panjang Pertumbuhan Kuku ................................. 49

Tabel 8. Hasil Analisis Univariat pada Sebaran Data Normal .............................. 51

Tabel 9. Hasil Analisis Univariat pada Sebaran Data Tidak Normal ................... 52

Tabel 10. Hasil Uji Homogenitas Levene's test Panjang Pertumbuhan Kuku ...... 52

Tabel 11. Hasil Uji One Way ANOVA post hoc Bonferroni Panjang Pertumbuhan

Kuku ..................................................................................................... 53

Tabel 12. Hasil Uji Kruskal Wallisi Perbedaan Panjang Pertumuhan Kuku ........ 54

Tabel 13. Waktu Pertumbuhan Kuku Pada Hewan Coba ..................................... 56

Tabel 14. Hasil Uji Homogenitas Levene's test Waktu Pertumbuhan Kuku......... 57

Tabel 15. Hasil Uji One Way ANOVA Waktu Pertumbuhan Kuku ..................... 58

Tabel 16. Hasil Analisis Post Hoc Bonferroni Waktu Pertumbuhan Kuku .......... 58

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Lembar Informed Consent

Lampiran 2. Surat Persetujuan Etik

Lampiran 3. Hasil Uji Statistik

Lampiran 4. Pembuatan Sel Punca

Lampiran 5. Pemotongan Kuku

Lampiran 6. Pengukuran Kuku

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Manusia yang normal dan sehat pada umumnya memiliki jari dan kuku yang

mempunyai banyak kegunaan misalnya sebagai alat untuk mempercantik diri.

Pada saat ini banyak kejadian di dalam kehidupan sehari-hari yang dapat

menyebabkan lesi pada anggota tubuh kita terutama kuku. Hal ini bisa terjadi

karena kecelakaan yang terjadi di sekitar kita misalnya pada saat tersandung

kaki meja, terjepit pintu dan kejadian tak terduga lainnya. Kuku merupakan alat

tambahan kulit yang mempunyai fungsi fisiologis untuk melindungi ujung jari

dan fungsi estetis untuk menunjang penampilan yang menunjukkan perbedaan

nyata dengan epidermis karakteristik permeabilitas yang sangat berbeda

(Haneke, 2015).

Tingkat pertumbuhan kuku pada setiap individu sangat bervariasi, dengan nilai

rata-rata 3 mm per bulan untuk kuku tangan dan 1 mm per bulan untuk kuku

kaki. Pada umumnya kuku tangan normal tumbuh dalam waktu sekitar 6 bulan,

sedangkan kuku kaki membutuhkan waktu sekitar 10 s.d. 12 bulan (Anonim,

2009). Pertumbuhan kuku tergantung pada beberapa faktor antara lain seperti

jenis kelamin, usia, dan kebiasaan yang dilakukan (Amador et al., 2016).

Pertumbuhan kuku juga dipengaruhi oleh kadar protein dan sulfur, sedangkan

2

pada orang tua kadar protein dan sulfur cenderung lebih sedikit sehingga

pertumbuhan kuku pada orang tua lebih lambat (Haneke, 2015).

Akhir-akhir ini perkembangan dalam biologi sel dan molekul memang tidak

hanya berkontribusi pada pemahaman mengenai dasar molekuler penyakit

namun juga menyediakan teknologi potensial untuk mengobati penyakit-

penyakit pada manusia. Dengan pengetahuan bahwa penyakit-penyakit pada

manusia disebabkan oleh abnormalitas sel pada tubuh kita, banyak terapi yang

berkembang dengan harapan bahwa sel-sel fungsional yang disisipkan ke dalam

sel yang rusak dapat memperbaiki fungsi sel dan menghasilkan sel yang

diperlukan, lalu mengkompensasi kelainan sel dan menyembuhkan penyakit.

Terapi yang banyak memberikan manfaat dan cukup menjanjikan adalah terapi

dengan sel punca.

Sel punca merupakan sel yang belum berdiferensiasi dan mempunyai potensi

yang sangat tinggi untuk berkembang menjadi banyak jenis sel yang berbeda di

dalam tubuh. Sel punca juga berfungsi sebagai sistem perbaikan untuk

mengganti sel-sel tubuh yang telah rusak demi kelangsungan hidup organisme.

Ketika sel punca terbelah, sel yang baru mempunyai potensi untuk tetap

menjadi sel punca atau menjadi sel dari jenis lain dengan fungsi yang lebih

khusus, misalnya sel otot, sel darah merah atau sel otak (Danny, 2010).

Sel punca memiliki kemampuan berdifirensiasi menjadi sel tubuh yang berbeda

jenisnya. Kemampuannya untuk berdiferensiasi itu berbeda-beda pada tiap jenis

sel. Ada tiga macam kemampuan sel untuk berdiferensiasi. Ketiga kemampuan

itu adalah totipotensi, pluripotensi, dan multipotensi. Kemampuan

3

berdiferensiasi pada jenis totipotensi ini adalah yang paling luas. Totipotensi

adalah sifat untuk berdiferensiasi memjadi satu mahluk hidup utuh. Sifat ini

dimiliki oleh zigot pada tahap morula (Li et al, 2017). Sifat diferensiasi yang

lebih terbatas adalah pluripotensi. Sifat ini dimiliki sel punca embrio pada tahap

blastula. Sel punca jenis ini dapat berdiferensiasi menjadi endoderm,

mesoderm, dan ektoderm (Li et al., 2017). Sifat diferensiasi ketiga, yaitu

multipotensi bersifat lebih terbatas dari kedua kemampuan diferensiasi lainnya.

Sifat multipotensi dimiliki oleh stem sel dewasa. Sel punca dewasa berjumlah

sedikit di dalam jaringan yang sudah berdiferensiasi. Sel punca dewasa berperan

dalam pemeliharaan jaringan. Sel punca dewasa hanya membentuk sel yang

sejenis, misalnya sel yang ada dalam satu sistem organ tertentu (Li et al., 2017).

Sel punca dewasa (adult stem cells) memiliki dua karakteristik, yaitu sel-sel

tersebut dapat berproliferasi untuk periode yang panjang untuk memperbarui

diri, dan dapat berdiferensiasi untuk menghasilkan sel-sel khusus yang

mempunyai karakteristik morfologi dan fungsi yang spesial. Salah satu macam

sel punca dewasa adalah sel induk hematopoietik (hematopoietic stem cells),

yaitu sel induk pembentuk darah yang mampu membentuk sel darah merah, sel

darah putih, dan keping darah yang sehat. Sumber sel induk hematopoietik

adalah sumsum tulang, darah tepi, dan darah tali pusar. Mekanisme dari

perbaikan jaringan rusak menggunakan sel punca terdiri dari dua jenis, yaitu

diferensiasi sel punca dan produksi faktor pertumbuhan sel punca (Amin, 2013).

Tetapi beberapa penelitian mengatakan efek regenerasi tidak dimediasi oleh

kemampuan diferensiasi sel punca untuk memperbaiki jaringan yang rusak,

4

melainkan kemampuan sel punca untuk melakukan sekresi metabolit bioaktif.

Terdapat beberapa faktor yang disekresikan oleh sel punca antara lain sitokin,

exosome, growth factor, dan mikrovesikel yang ditemukan dalam media

tumbuh (Lane, 2014).

Terapi dengan menggunakan sel punca mesenkimal (MSCs) baru-baru ini telah

menjadi fokus penelitian, misalnya penelitian yang dilakukan oleh Se-Ra Park

et al (2018) di Gachon University, dalam penelitian in vitro ini menunjukkan

bahwa sel punca mesenkimal (MSCs) dapat mempercepat pertumbuhan kuku

pada kulit dengan mengaktifkan kaskade PI3K/Akt atau FAK/ERK1/2 dan

selanjutnya meningkatkan proliferasi dan kemampuan migrasi berbagai jenis

sel kulit, seperti fidroblas, keratinosit dan sel epitel vaskular yang pada

akhirnya dapat mempercepat kontraksi luka dan penelitian di China yang

dimana sel punca yang dipilih dari adiposa dan media yang terkondisi dari

adipose derived stem cells (ADSCs) dapat meningkatkan laju proliferasi sel

folikel manusia, melindungi sel papilla dermal dan meningkatkan

pemanjangan poros rambut pada kultur organ rambut manusia ex vivo. Hal ini

mungkin bisa menjadikan sel punca sebagai terapi klinis yang layak untuk

pertumbuhan kuku pada kulit dan kerontokan rambut.

Berdasarkan uraian di atas, penelitian lebih lanjut untuk mempelajari potensi

sel punca sebagai terapi adalah suatu hal yang menarik untuk dilakukan.

Namun dalam penelitian ini bertujuan untuk mengamati dan mempelajari

tentang pengaruh injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia

5

yang didalamnya terdapat sel punca terhadap pertumbuhan kuku pada tikus

putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas didapatkan rumusan masalah dari penelitian

ini yaitu:

1. Apakah terdapat perbedaan panjang pertumbuhan kuku antara kelompok

perlakuan yang diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia

dengan kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan pada tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley ?

2. Apakah terdapat perbedaan rerata waktu pertumbuhan kuku antara kelompok

perlakuan yang diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia

dengan kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan pada tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley ?

1.3 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:

1. Mengetahui panjang pertumbuhan kuku antara kelompok perlakuan yang

diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia dengan

kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan pada tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

2. Mengetahui rerata waktu pertumbuhan kuku antara kelompok perlakuan

yang diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia dengan

kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan pada tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

6

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat bagi Penulis

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah dan

menambah pengetahuan bagi penulis, khususnya tentang pengaruh

injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia terhadap

pertumbuhan kuku pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur

Sprague dawley.

1.4.2 Manfaat bagi Peneliti Lain

Penelitian ini diharapkan menjadi sumber informasi untuk dasar

penelitian lebih lanjut mengenai potensi penggunaan ekstrak DNA darah

tali pusat manusia terhadap pertumbuhan organ atau jaringan.

1.4.3 Manfaat bagi Fakultas Kedokteran Universitas Lampung

Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah

sebagai hal baru yang perlu dikembangkan.

1.4.4 Manfaat bagi Masyarakat

Hasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai acuan

masyarakat luas mengenai pengobatan kuku yang lepas menggunakan

injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kuku

2.1.1 Anatomi Kuku

Kuku adalah derivat keratin yang keras dan fleksibel yang menutupi

distal phalang dorsal jari tangan dan kaki yang dalam proses

pembentukannya serupa dengan proses yang terjadi di rambut dan

stratum korneum (Mescher, 2014; Rossi et al, 2002). Pada bagian

proksimal kuku terletak berdekatan dengan sendi interphalangeal

distal. Dari 19 jari yang dilakukan diseksi sireal menunjukkan bahwa

penanda permukaan batas-batas matriks terletak pada 75% jarak dari

kutikula ke lipatan dari sendi interphalangeal distal dan lateral ke

garis tengah sagital dari digiti (Berker et al., 2007).

Anatomi kuku terdiri atas beberapa komponen antara lain sebagai

berikut (Berker et al., 2007):

1. Nail plate merupakan struktur keratin yang tahan lama dan terus

berkembang sepanjang hidup.

2. Lateral nail folds merupakan suatu lipatan yang memberikan

batas lateral ke kuku. Mereka biasanya lebih menonjol di jari-

jari kaki daripada jari-jari tangan

8

3. Proximal nail folds merupakan suatu lipatan kuku yang

memberikan batas proksimal ke kuku. Ini melekat pada bagian

dorsal lempeng kuku dan menyembunyikan semua atau

sebagian dari matriks kuku, yang secara klinis bermanifestasi

menjadi lunula.

4. Cuticle (Eponychium) merupakan lapisan epidermis yang

membentang dari lipatan kuku proksimal dan melekat pada

bagian dorsal lempeng kuku. Manipulasi kronis, peradangan,

atau infeksi dapat menyebabkan hilangnya kutikula, yang

seringkali menjadi tanda-tanda paronikia kronis.

5. Nail matrix (nail root) merupakan struktur epitel di bawah kuku,

mulai dari jangkauan paling proksimal kuku dan berakhir di tepi

yang sesuai dengan tepi lunula.

6. Lanula merupakan margin cembung matriks yang terlihat di

kuku, biasanya sering terlihat di ibu jari tangan dan ibu jari kaki.

7. Nail bed merupakan vaskular dasar kuku di mana kuku terletak

memanjang dari lunula ke hyponychium. Ini merupakan area

utama yang terlihat melalui lempeng kuku.

8. Onychodermal band merupakan barier pertama untuk penetrasi

bahan ke bawah lempeng kuku. Kerusakan yang terjadi pada

barier ini oleh penyakit atau trauma dapat mempercepat

berbagai kejadian lebih lanjut yang dapat mempengaruhi dasar

kuku.

9

9. Hyponychium merupakan lapisan sel kulit yang tumbuh di atas

ujung jari biasanya melekat ke bagian bawah tepi bebas.

Gambar 1. Anatomi Kuku (Berker et al.,2007).

2.1.2 Embriologi Kuku

Pertumbuhan jari pada manusia dapat dilihat dari minggu ke delapan

kehamilan. Unsur embrional pertama dari unit kuku adalah anlage

kuku yang mulai muncul dari minggu ke sembilan sebagai epidermis

yang melapisi ujung dorsal dari jari. Pada minggu ke 13, dengan

matriks primordium yang mendasari lipatan kuku di proksimal

bidang kuku mulai didefinisikan dengan baik di jari. Pada minggu

ke 14, lempeng kuku mulai terlihat muncul dari bawah lipatan kuku

proksimal, dengan unsur-unsur yang timbul dari lunula serta matriks

10

proksimal. Pada minggu ke 17, lempeng kuku menutupi sebagian

besar dari dasar kuku. Mulai dari minggu ke 20, unit kuku dan jari

tumbuh secara bersama-sama, dengan lempengan kuku terletak di

dekat punggungan distal. Saat lahir, lempeng kuku memanjang ke

alur distal, yang menjadi semakin tidak menonjol. kuku mungkin

melengkung di atas permukaan volar jari. Hal itu mungkin juga

menunjukkan koilonychia. Kelainan bentuk ini normal pada fungsi

ketipisan lempeng kuku dan pada orang yang sangat muda (Berker

et al., 2007).

Gambar 2. Embriogenesis dari kuku (Berker et al., 2007).

11

Gambar 3. Pengembangan bidang kuku (Berker et al., 2007).

2.1.3. Pertumbuhan Kuku

Sebagian besar penelitian yang berhubungan dengan kuku jari

mengatakan tingkat pertumbuhan kuku dapat bervariasi antara 1,9

dan 4,4 mm/bulanan wajarnya adalah 3 mm/bulan atau 0,1 mm/hari.

Kuku jari kaki diperkirakan tumbuh sekitar 1 mm/bulan.

Pertumbuhan kuku setiap individu berbeda beda tergantung sejauh

mana kuku dicabut dan kuku mana yang dicabut. Faktor individu

seperti tinggi atau berat tidak membuat perbedaan yang signifikan.

Tetapi untuk jenis kelamin terdapat perbedaan kecil pada masa

dewasa awal, dengan laki-laki memiliki pertumbuhan kuku linier

lebih cepat (P

12

Menurut Junqueira dan Carneiro (2007) proses pertumbuhan kuku

dimulai dari epitel lempeng kuku yang timbul dari matriks kuku.

Ujung proksimal matriks akan meluas ke dalam akar kuku.

Sedangkan sel-sel matriks akan membelah, bergeser ke distal, dan

pada akhirnya mengalami kornifikasi yang membentuk bagian

proksimal dari lempeng kuku. Kemudian lempeng kuku akan

bergeser ke depan di atas dasar kuku. Dimana ujung distal lempeng

menjadi bebas dari dasar kuku.

Tabel 1. Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan kuku (Haneke, 2015).

Lebih cepat Lebih Lambat

Siang hari

Kehamilan

Minor trauma

Tangan kanan / dominan

Usia muda

Jari tangan

Musim panas

Jari tengah

Pria

Psoriasis

Pitting

Kuku yang normal

Onycholysis pitryriasis rubra

Pilaris

Etretinate

Oncholysis idiopatik perempuan

Hipertiroidisme

AV shunt

Kalsium/ vitamin D

Benoxaprofen

Malam hari

Hari pertama kehidupan

Tangan kiri/ non-dominan

Usia tua

Jari kaki

Musim dingin

Ibu jari

Perempuan

Finger imobilisasi

Demam

Beau’s lines

Methotrexate, azathiopirine

Etretinate

Kurang gizi

Denervasi

Sindrom kuku kuning

Polychondritis berulang

13

2.2 Sel Punca

Sudah sejak lama manusia tertarik dengan kemampuan regenerasi sel

tubuh dari makhluk hidup seperti cacing pipih Planaria sp maupun Hydra.

Kedua makhluk tersebut memiliki kemampuan regenerasi yang sangat

cepat dan akurat. Kemampuan itu tidak dimiliki oleh sebagian besar

vertebrata dengan kelas yang lebih tinggi. Berdasarkan hal ini, manusia

mulai memikirkan pengembangan kemampuan regenerasi sebagai bagian

terapi berbagai macam penyakit. Pada tahun 1950-an, stem cell mulai

menarik minat peneliti di seluruh dunia, yaitu sejak ditemukannya sel yang

menyusun sumsum tulang yang dapat membentuk semua jenis sel darah

pada manusia yang selanjutnya disebut stem cell hematopoietic. Stem cell

itulah yang berperan sebagai awal mula pertumbuhan sel dalam menyusun

tubuh manusia. Stem cell dalam bahasa Indonesia diterjemahkan menjadi

sel punca yang berarti awal mula. Definisi dari Sel Punca atau stem cell

sendiri adalah sel yang tidak atau belum berdiferensisasi dan mempunyai

kemampuan/potensi untuk berkembang menjadi berbagai jenis sel-sel

yang spesifik yang membentuk berbagai jaringan tubuh (Du et al., 2009).

Sel Punca mempunyai dua sifat yang khas yaitu:

1. Differentiate yaitu kemampuan untuk berubah menjadi sel lain. Sel

Punca mampu berkembang menjadi berbagai jenis sel yang khas

(spesifik) misalnya sel saraf, sel otot jantung, sel otot rangka, sel

pankreas dan lain-lain

14

2. Self regenerate/self renew yaitu kemampuan untuk memperbaharui

atau meregenerasi dirinya sendiri. Stem cells mampu membuat salinan

sel yang persis sama dengan dirinya melalui pembelahan sel (Jusuf,

2008).

Gambar 4. Sifat sel punca (Jusuf,2008).

2.2.1 Klasifikasi Sel Punca

Sel Punca dapat diklasifikasikan munurut terminologinya sebagai berikut.

(Yuliana & Suryani, 2012).

2.2.1.1 Berdasarkan asalnya

Berdasarkan asalnya sel punca dapat diklasifikasikan sebagai berikut.

15

1. Sel Punca Embrionik (Embrionic Stem cells)

Sel punca embrionik adalah sel yang berasal dari masa sel dalam

(inner cell mass) yaitu suatu kumpulan sel yang terdapat dalam

embrio pada tahap blastokista (5-7 hari setelah pembuahan)

berjumlah 100 sel. Sel punca embrionik dapat berdiferensiasi

menjadi semua jenis sel dalam tubuh kecuali sel pada jaringan

ekstraembrional yaitu plasenta dan tali pusat (Yuliani & Suryani,

2012). Sel induk embrionik dapat di deferensiasikan menjadi

berbagai jenis sel seperti sel-sel otot, sel jantung, sel kulit,

hepatosit, neuron dan sebagainya (Djauhari, 2010).

2. Sel Germinal/Benih Embrionik (Embrionic Germ Cells)

Sel germinal atau benih (sperma atau ovum) embrionik

induk/primordial (primordial germ cells) dan prekursor sel

germinal diploid ada sesaat pada embrio sebelum mereka

terasosiasi dengan sel somatik gond dan kemudian menjadi sel

germinal. Sel germinal embrionik manusia/human embryonic germ

cells (hEGCs) termasuk sel punca yang berasal dari sel germinal

primordial dari janin berumur 5-9 minggu. Sel germinal/benih

embrionik ini memiliki sifat pluripotensi (Djauhari, 2010).

3. Sel Punca Ekstraembrional

Sel punca ekstraembrional berasal dari plasenta dan tali pusat

(diambil dari warthon’s jelly atau jaringan gelatinosa pada tali

pusat) dan darah tali pusat bayi segera setelah lahir. Sel punca yang

berasal dari darah tali pusat mengandung sel punca hematopoetik

16

yang memiliki kemampuan berdiferensiasi lebih baik dari pada sel

punca dewasa sumsum tulang. Sel punca ekstra embrional pada

beberapa studi dianggap sebagai sel punca dewasa. Selain itu,

dalam isolasinya sel punca tali pusat tidak melakukan prosedur

yang invasif karena jenis jaringan sel punca ini merupakan jaringan

buangan. Adapun untuk proses transplantasinya tidak memerlukan

100% ketepatan human leukocytes antigen dikarenakan sel punca

tali pusat memiliki imunogenisitas rendah (Yuliana & Suryani,

2012; Kurniawaty, 2017).

4. Sel Punca Dewasa

Sel punca dewasa adalah sel yang belum mengalami diferensiasi

namun diambil dari berbagai organ dan jaringan dewasa seperti

otak, sumsum tulang, darah tepi, otot rangka, kulit, pulp gigi,

jantung, hati, saluran cerna, epitel ovarium, tetis, dan jaringan

lemak dan sebagainya. sel punca dewasa bersifat multipoten yaitu

memiliki kemampuan berdiferensiasi menjadi berbagai jenis sel.

Peran sel punca dewasa adalah memperbaiki dan memelihara

jaringan tempat asal sel punca tersebut di ambil atau ditemukan

(Yuliana & Suryani, 2012).

5. Sel Punca Fetal

Sel punca fetal berasal adalah sel primitif yang dapat ditemukan

dari berbagai organ dan jaringan fetus seperti otak, sumsum tulang

dan pankreas. Otak yang ditemukan pada fetal menghasilkan sel

punca neural. Sel punca neural yang ada pada fetal menunjukkan

17

kemampuan berdiferensiasi menjadi sel neuron dan sel glial (sel-

sel pendukung pada sistem saraf pusat) (Djauhari, 2010). Sumsum

tulang menghasilkan sel punca hematopoetik dan juga pankreas

yang menghasilkan pregenitor sel beta pulau langerhans. Biasanya

sel punca fetal di peroleh dari klinik aborsi (Yuliana & Suryani,

2012; Kurniawaty, 2017).

2.2.1.2 Berdasarkan kemampuan berdiferensiasi

Berdasarkan pada kemampuan berdiferensiasi sel punca

dikelompokkan menjadi sebagai berikut (Jusuf, 2008).

1. Totipoten

Sel punca yang dapat berdiferensiasi menjadi semua jenis sel.

Salah satu contoh yang termasuk dalam sel punca totipoten adalah

zigot dan morula. Sel-sel ini merupakan sel embrionik awal yang

mempunyai kemampuan untuk membentuk berbagai jenis sel

termasuk sel-sel yang menyusun plasenta dan tali pusat. Oleh

karena itu sel punca kelompok ini mempunyai kemampuan untuk

membentuk satu individu yang utuh.

18

Gambar 5. Sel Punca Totipoten dan Pluripoten (Jusuf, 2008).

2. Pluripoten

Sel punca yang dapat berdifferensiasi menjadi 3 lapisan germinal

(ektoderm, mesoderm, dan endoderm) tetapi tidak dapat menjadi

jaringan ekstraembrionik seperti plasenta dan tali pusat. Yang

termasuk sel punca pluripoten adalah sel punca embrionik

(embryonic stem cells).

3. Multipoten

Sel punca yang dapat berdifferensiasi menjadi berbagai jenis sel

misalnya sel punca hemopoetik (hemopoetic stem cells) yang

terdapat pada sumsum tulang yang mempunyai kemampuan untuk

berdifferensiasi menjadi berbagai jenis sel yang terdapat di dalam

darah seperti eritrosit, lekosit dan trombosit. Contoh lainnya adalah

sel punca saraf (neural stem cells) yang mempunyai kemampuan

berdifferensiasi menjadi sel saraf dan sel glia.

19

4. Unipotent

Sel punca yang hanya dapat berdifferensiasi menjadi 1 jenis sel.

Berbeda dengan non sel punca, sel punca mempunyai sifat masih

dapat memperbaharui atau meregenerasi diri (self-regenerate/self

renew) Contohnya erythroid progenitor cells hanya mampu

berdifferensiasi menjadi sel darah merah (Jusuf, 2008).

Gambar 6. Sel Punca Multipotent dan Unipotent pada sumsum tulang

(Jusuf, 2008).

20

2.2.2 Sel Punca Mesenkimal

Studi mengenai sel punca mesenkimal ini pertama kali dilaporkan di

Jerman tahun 2001 pada seorang laki-laki yang mengalami infark

miokard. Hasilnya, daerah infark pada jantung laki-laki tersebut

mengecil dengan indeks kardiak dan cardiac output naik sebesar 20-

30%. Pada kasus lainnya juga ditemukan peningkatan signifikan dari

fungsi jantung setelah dilakukan terapi (Schuleri, 2002). Penelitian

lainnya juga dilakukan dimana dilaporkan bahwa terapi transplantasi sel

punca mesenkimal tali pusat manusia mampu memberikan hasil yang

baik pada pasien sirosis bilier primer. Hal ini menunjukkan adanya

perbaikan gejala dan terapi ini dapat ditoleransi dengan baik oleh pasien

tanpa menimbulkan efek samping (Wang et al., 2012). Banyaknya

publikasi ini menguntungkan untuk membuka wawasan bagi peneliti

lainnya dan membuat terapi menggunakan sel punca lebih dikenal lagi.

Sel punca mesenkimal dapat ditemukan diseluruh organ tubuh khususnya

pada daerah perivaskuler. Sumber terbanyak sel punca mesenkimal

adalah jaringan adiposa, darah tali pusat dan sumsum tulang (Kern,

2006). Jumlah stem cell mesenkimal jaringan adiposa lebih banyak

dibandingkan stem cell mesenkimal dari kedua sumber lainnya. Literatur

ilmiah menyebutkan bahwa persentase isolasi stem cell mesenkimal dari

jaringan adiposa menyamai sumsum tulang yaitu 100% sementara jika

melalui darah tali pusat, isolasi stem cell sulit untuk dilakukan. Meskipun

demikian, stem cell mesenkimal yang didapat dari darah tali pusat

21

memiliki potensi proliferasi yang jauh lebih tinggi, terutama bila

dibandingkan stem cell mesenkimal dari sumsum tulang. Hingga saat ini

karakteristik absolut stem cell mesenkimal masih banyak dipertanyakan,

terutama yang menyangkut model protein permukaan yang terdapat

padanya. Sebagai contoh dari ketidaksesuaian ini adalah keberadaan

CD29, CD44, dan CD166 yang sebenarnya juga banyak dimiliki stem

cell mesenkimal. Selain itu stem cell yang diisolasi dari jaringan adiposa

juga menunjukkan ekspresi CD34 dan CD54 pada permukaannya. Dalam

hal potensi diferensiasi, sejumlah peneliti juga melaporkan bahwa stem

cell mesenkimal yang didapat dari darah tali pusat hanya mampu

membentuk dua jalur diferensiasi, yaitu kondrogenik (menjadi tulang

rawan/kondrosit) dan osteogenik(menjadi tulang/osteosit) (Halim, 2010).

Gambar 7. Macam-macam Sel Punca Mesenkimal (Phuc Van Pham, 2016)

22

Sel punca mesenkimal memiliki empat kemampuan biologis yang dapat

memberikan efek terapeutik yaitu kemampuan untuk bermigrasi menuju

jaringan yang mengalami luka untuk berdiferensiasi menjadi berbagai

jenis sel, mensekresi berbagai molekul bioaktif yang dapat membantu

proses perbaikan komponen jaringan yang rusak, mempercepat proses

regenerasi pada sel dan mencegah inflamasi, serta memodulasi sistem

imun dengan efek imunogenisitas yang rendah (Wang et al., 2012).

Sel punca mensekresikan sejumlah protein (secretome) termasuk faktor

pertumbuhan (growth factor), kemokin, sitokin, metabolit dan lipid

bioaktif yang mengatur secara autokrin atau parakrin sambil merekayasa

interaksi dengan lingkungan mikro sekitarnya (Drago et al., 2013).

Sel punca mesenkimal akan mensekresikan berbagai molekul bioaktif

berupa growth factors, sitokin, dan kemokin yang berperan penting

dalam proses pertumbuhan kuku. Molekul-molekul ini melalui sinyal

parakrin akan berperan dalam meregulasi integritas sel, proliferasi sel,

dan migrasi dari sel-sel yang berperan penting dalam proses

pertumbuhan kuku seperti sel epitel, endotel, keratinosit, dan fibroblast

(Padeta et al., 2017). Beberapa molekul bioaktif yang disekresikan oleh

sel punca mesenkimal adalah prostaglandinE-2 (PGE2) yang berperan

sebagai mediator vasokonstriksi dan anti inflamasi, interleukin-10 (IL-

10) sebagai mediator anti-inflamasi, LL-37 peptida yang berperan

sebagai anti inflamasi dan anti mikroba, angiopoietin-1 yang akan

23

memperbaiki permeabilitas protein epitel, MMP3 MMP9 sebagai

mediator neovaskularisasi, basic fibroblast growth factor (bFGF) dan

endothelial growth factor (VEGF) protein yang akan memberikan sinyal

pembentukan pembuluh darah, serta monocyte chemoattractant protein-

1 (MCP-1) yang akan memicu proliferasi sel endotel dan otot polos.

Molekul-molekul akan mencegah apoptosis dan menstimulasi regenerasi

sel yang membantu proses pertumbuhan kuku (Wang et al., 2004).

2.3 Gambaran Umum Hewan Coba

Hewan percobaan atau hewan laboratorium adalah hewan yang sengaja di

kembang biakkan dan dipelihara untuk digunakan sebagai hewan model

dalam pengamatan laboratoris untuk pembelajaran dan pengembangan

berbagai penelitian dalam berbagai bidang ilmu pengetahuan (Widiartini et

al., 2013). Penggunaan hewan coba dalam penelitian eksperimental bertujuan

untuk memperkirakan efek yang mungkin timbul dalam percobaan pada

manusia sehingga dapat bermanfaat untuk kepentingan diagnostik maupun

terapeutik dalam dunia kedokteran (Koolhas, 2010).

Tikus putih (Rattus norvegicus) terdiri atas tiga galur atau varietas yaitu

Sprague dawley, Wistar, dan Long Evans. Sprague dawley diciptakan oleh

ilmuan kimia R.W Dawley pada tahun 1925, yang merupakan salah satu

varietas tikus albino hasil persilangan dari induk jantan yang tidak diketahui

asalnya dan induk betina galur Wistar (Sharp & Villano, 2012). Rattus

norvegicus atau tikus albino memiliki berat badan sekitar 150-600 gram

dengan hidung tumpul dan panjang badan 18-25cm, kepala dan badan yang

24

lebih pendek dibandingkan ekor dan telinga kecil berukuran 20-23 mm

(Koolhas, 2010).

Berdasarkan taksonominya, klasifikasi tikus putih yang digunakan dalam

penilitian ini adalah sebagai berikut (Besselsen, 2004):

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Subfilum : Vertebrata

Kelas : Mamalial

Subkelas : Theria

Ordo : Rodensia

Subordo : Sciurognathi

Famili : Muridae

Subfamili : Murinae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus norvegicus

Gambar 8. Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley

(Koolhas, 2010).

25

Tikus galur Sprague Dawley lebih jinak dan mudah ditangani dibandingkan

tikus galur lainnya (Janvier, 2017). Siklus hidup tikus Sprague dawley

memiliki siklus hidup yang lebih singkat dibandingkan dengan galur tikus

lainnya, yaitu hanya sekitar 2 tahun. Selain itu tikus galur ini memiliki

pertumbuhan yang cepat, tempramen yang baik dan kemampuan laktasi yang

tinggi (Carere dan Maestripieri, 2013).

Pada saat penelitian, keadaan tikus ini juga harus dijaga sedemikian rupa agar

kondisi optimal dapat tercapai selama masa penelitian sebagai hewan coba.

Banyak hal yang bisa mempengaruhi kondisi tikus ini seperti ketersediaan

pangan, tempat tinggal (kandang), temperatur dan lingkungan sekitar.Tikus

dapat mengalami dehidrasi dan penurunan berat badan dengan mudah. Oleh

sabab itu, diperlukan waktu selama 7 hari untuk beradaptasi dengan

lingkungan kandangnya. Imobilisasi tikus harus diperhatikan karena tikus

mudah sekali stres jika tinggal dikandang yang sempit dan populasi yang

terlalu padat. Tikus sebaiknya ditempatkan di kandang dengan luas sekitar

1500-1800 m² dan tinggi sekitar 22 cm. Kebutuhan pangan tikus rata-rata

adalah 12-30 mg/hari, membutuhkan cairan sekitar 140 ml/KgBB perhari,

disediakan secara ad libitum yaitu dimana makan dan cairan didesediakan di

tempat makan namun juga harus ditaburkan di lantai kandang tikus, suhu

lingkungan harus baik yaitu 20-25˚C dan tingkat kebisingan

26

2.4 Kerangka Penelitian

2.4.1 Kerangka Teori

Keterangan :

= Variabel bebas

= Mempercepat proses

Gambar 9. Kerangka Teori (Junqueira dan Corneiro, 2007).

Pertumbuhan kuku

1. Panjang Pertumbuhan Kuku

2. Waktu Pertumbuhan Kuku

Kornifikasi bagian proksimal

Terbentuk lempeng kuku dibagian

proksimal

Nail matriks bergeser ke distal

Mitosis nail matrix

Pertumbuhan kuku dari bagian proksimal

Pergeseran lempeng kuku ke distal

= Variabel terikat

Ekstraksi DNA darah tali

pusat manusia

Sekresi growth

factor (FGF,

EGF, VEGF dan

lainnya

27

2.4.2 Kerangka Konsep

2.5 Hipotesis

Berdasarkan tinjauan pustaka diatas, hipotesis pada penelitian ini sebagai

berikut.

Terdapat pengaruh injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat

manusia terhadap peningkatan kecepatan pertumbuhan kuku pada tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

Variabel Terikat Variabel Bebas

Gambar 10. Kerangka Konsep

Injeksi Intramatriksial

Ekstrak DNA Darah

Tali Pusat Manusia

Pertumbuhan Kuku Pada Tikus Putih

Jantan (Rattus norvegicus) Galur

Sprague dawley

-Panjang pertumbuhan kuku

- Waktu pertumbuhan kuku

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik yang

bertujuan untuk mengetahui pertumbuhan kuku secara makroskopis pada

tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley yang diberi

injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia dengan yang

tidak diberikan.

3.2 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan September-Desember 2019

dan dilakukan di Universitas Lampung. Pemeliharaan tikus, pemberian

intervensi dan pengamatan mengenai pertumbuhan kuku akan dilakukan di

Animal House Fakultas Kedokteran Universitas Lampung. Pembuatan

bahan injeksi ekstrak DNA darah tali pusat manusia dilakukan di

Laboratorium Biokimia dan Biologi Molekuler Fakultas Kedokteran

Universitas Lampung.

3.3 Subjek Penelitian

3.3.1 Populasi Penelitian

Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih

jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley. Sampel yang

29

digunakan adalah tikus yang memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi

sebagai berikut.

3.3.1.1 Kriteria Inklusi

Adapun kriteria inklusi yang digunakan dalam pemilihan

sampel tikus putih jantan (Rattus norwegicus) galur Sprague

dawley pada penelitian ini adalah :

a. Berat badan normal pada kisaran 250-300 gram.

b. Usia sekitar 8−10 minggu sebelum diadaptasi

c. Secara visual tikus ampak sehat, bergerak aktif dengan

rambut tidak kusam, rontok, atau botak dan tidak

terdapat kelainan anatomis.

3.3.1.2 Kriteria Eksklusi

Adapun kriteria eklusi yang digunakan dalam pemilihan

sampel Tikus putih jantan (Rattus norwegicus) galur

Sprarague dawley pada penelitian ini adalah :

a. Tikus yang memliki kelainan pada kuku.

b. Terdapat penurunan berat badan secara drastis lebih dari

10% setelah masa adaptasi di laboratorium.

c. Mati selama masa perlakuan.

3.3.2 Sampel Penelitian

3.3.2.1 Besar Sampel

Pada penelitian ini besar sampel dihitung menggunakan

rumus Federer untuk data homogen, yaitu (t-1) (n-1) ≥ 15

30

dengan t merupakan banyaknya kelompok perlakuan dan n

merupakan jumlah sampel tiap kelompok (Sastroasmoro,

2004). Penelitian ini menggunakan 3 kelompok perlakuan,

dimana kelompok 1 (satu) adalah control groups (K) yang

tidak diberi perlakuan, kelompok 2 (dua) adalah

experimental groups (P1) yang diberi perlakuan injeksi

intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia

sebanyak 1x, kelompok 3 (tiga) adalah experimental groups

(P2) yang diberi perlakuan injeksi intramatriksial ekstrak

DNA darah tali pusat manusia sebanyak 2x sehingga

perhitungan sampel menjadi:

t (n-1) ≥15

3(n−1) ≥15

3n- 3 ≥15

3n ≥15+3

3n ≥18

n ≥18/3

n = 6

Berdasarkan rumus tersebut, jumlah minimal sampel yang

dibutuhkan untuk masing-masing kelompok perlakuan pada

penelitian ini adalah 6 ekor tikus sehingga jumlah sampel

minimal yang dibutuhkan untuk 3 kelompok perlakuan

adalah 18 ekor tikus. Kemudian untuk mengantisipasi adanya

drop out saat penelitian dilakukan maka ditambahkan 10%

31

ke dalam jumlah minimal sampel sehingga setiap kelompok

perlakuan terdiri atas 7 ekor tikus.

3.3.2.2 Teknik Sampling

Pada penelitian ini pengambilan sampel dari populasi

dilakukan dengan teknik simple random sampling dimana

pengambilan sampel dilakukan secara acak sederhana karena

anggota populasi tikus putih jantan disediakan dengan cara

yang sama dan memiliki karakteristik yang homogen.

3.4 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian ekperimental laboratorium dengan

menggunakan hewan coba tikus putih jantan (Rattus norwegicus) galur

Sprague dawley sebagai objek penelitian. Penelitian dilakukan dengan

rancangan penelitian randomize post-test only control group. Pada objek

diamati pertumbuhan kuku antara yang tidak diberi perlakuan dan yang

diberi perlakuan injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat

manusia.

3.5 Identifikasi Variabel Penelitian

3.5.1 Variabel Bebas

Variabel bebas pada penelitian ini adalah sediaan injeksi

intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat manusia.

32

3.5.2 Variabel Terikat

Variabel terikat pada penelitian ini adalah panjang pertumbuhan

kuku dan waktu pertumbuhan kuku pada tikus putih jantan (Rattus

norwegicus) galur Sprague dawley.

3.6 Definisi Operasional Variabel Penelitian

Tabel 1. Definisi Operasional Variabel Penelitian.

Variabel Definisi

Operasional

Alat ukur Cara

Ukur

Hasil

Ukur

Skala

Ukur

Variabel

Bebas

Injeksi

intramatriksia

l ekstrak

DNA darah

tali pusat

manusia

Ekstrak DNA

darah tali pusat

manusia yang

dibuat di

Laboratorium

Biologi Molekuler

FK Unila diinjeksi

secara

intramatriksial

sebanyak 50 µl

sekali suntik

Spuit 1 cc

Injeksi

intramatri

ksial

ekstrak

DNA

darah tali

pusat

manusia

dengan

mengguna

kan spuit

1 cc

µL

Nominal

Variabel

Terikat

Panjang

Pertumbuhan

kuku

Waktu

Pertumbuhan

Kuku

Panjangnya

pertumbuhan kuku

yang diukur dari

tepi proksimal

kuku dan

dinyatakan dalam

mm pada hari ke-

14

Waktu yang

dibutuhkan untuk

mencapai panjang

kuku normal

Jangka

sorong

Lembar

observasi

Hasil

pengamat

an dicatat

dalam

lembar

observasi

Hasil

pengamat

an dicatat

dalam

lembar

observasi

mm

Hari

Numerik

Numerik

33

3.7 Alat dan Bahan

3.7.1 Alat Penelitian

a. Kandang hewan coba.

b. Timbangan.

c. Pisau cukur.

d. Pisau skalpel steril.

e. Gelas beker.

f. Mikropipet dan tipnya.

g. Inkubator.

h. Quick-dna Universal Kit (Zymo-Spin IIC-XL Column).

i. Tabung mikrosentrifugasi.

j. Kasa Steril.

k. Spuit dan jarum.

l. Handschoen.

m. Jangka Sorong.

n. Biological safety cabinet.

3.7.2 Bahan penelitian

a. Pakan dan minum tikus.

b. Alkohol 70%.

c. NaCl fisiologis.

d. Tali pusat manusia.

e. Larutan buffer garam fosfat.

34

f. Quick-DNA Universal Kit (Solid Tissue Buffer, Proteinase

K,Genomic Binding Buffer, DNA-Pre Wash Buffer, g-DNA

Wash Buffer, dan DNA Elution Buffer).

g. Lidocain 0.5 %.

3.8 Cara Kerja

3.8.1 Tahap Persiapan

3.8.1.1 Aklimatisasi Hewan Uji

Aklimatisasi adalah suatu proses penyesuaian diri dengan

iklim, lingkungan, kondisi, atau suasana baru. Sebelum

diberi perlakuan pada tikus percobaan, dilakukan

pengadaptasian pada semua tikus di Animal House Fakultas

Kedokteran Universitas Lampung selama satu minggu.

Tikus diadaptasikan dengan tempat tinggal baru,

lingkungan baru, serta makanan dan minuman yang sesuai

dengan standar kebutuhannya.

3.8.1.2 Randomisasi Hewan Uji

Randomisasi hewan uji bertujuan untuk mengelompokkan

hewan uji sesuai kelompok perlakuan. Selanjutnya pada

bagian punggung dari masing-masing hewan uji akan diberi

nomor yang berbeda. Hal ini bertujuan untuk menghindari

kesalahan pengukuran pada setiap hewan uji.

35

3.8.1.3 Pembuatan Ekstrak DNA Darah Tali Pusat Manusia

Penelitian dilakukan setelah mendapat persetujuan ethical

clearance dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas

Kedokteran Universitas Lampung. Tali pusat didapat dari

donor sukarela berjumlah satu orang yang akan

menandatangani lembar informed consent.

Tali pusat yang akan digunakan harus memiliki kriteria

sebagai berikut.

1. Tidak berasal dari ibu yang melahirkan janin mati

2. Ibu tidak mengalami pre-eclamsia

3. Tidak memiliki riwayat hepatitis B, hepatitis C, HIV,

infek CMV, INFEKSI Treponema pallidum, serta riwayat

infeksi lainnya yang dapat ditularkan melalui darah, sawar

plasenta dan genital (Puranik et al., 2012; Chen et al.,

2015).

Setelah proses kelahiran bayi, tali pusat akan dipotong sekitar

5-7 cm menggunakan pisau steril dan disimpan dalam wadah

berisi larutan salin normal 0.9% pada suhu 4oC sampai proses

pengolahan dilakukan. Tali pusat akan diproses selama 12-24

jam pasca melahirkan. Tali pusat ditangani secara aseptik dan

di proses dalam biological safety cabinet. Permukaan tali pusat

dibilas dengan larutan buffer garam fosfat untuk

membersihkannya dari darah yang menempel di permukaan

setelah itu rendam tali pusat dalam larutan ethanol 70% selama

36

30 detik lalu dicuci kembali menggunakan larutan buffer

garam fosfat untuk diproses ke tahap selanjtnya (Puranik et al.,

2012).

Ekstrak DNA darah tali pusat manusia dibuat menggunakan

Quick-DNA Universal Kit yang diproduksi oleh Zymo

Research. Sampel disiapkan dengan mengambil darah dari tali

pusat manusia yang telah disiapkan. Ukur sampel darah tali

pusat manusia hingga 200µL dan kemudian dimasukkan ke

dalam tabung mikrosentrifugasi kemudian di tambah dengan

200µL BioFluid & Cell Buffer dan 20 µL Proteinase K lalu

putar menggunakan vortex selama 10-15 detik. Setelah itu,

inkubasi tabung tersebut selama 10 menit atau sampai jaringan

larut pada suhu 55℃ (Zymo, 2017).

Setelah inkubasi selesai, tambahkan Genomic Binding Buffer

sebanyak volume pada tabung mikrosentrifugasi yang berisi

sampel tersebut (contoh: tambahkan 420 µL Genomic Binding

Buffer untuk 420 µL sampel yang ada pada tabung

mikrosentrifugasi), vortex selama 10-15 detik. Pindahkan

campuran tersebut ke tabung Zymo-Spin IIC-XL dalam

tabung pengumpul lalu sentrifugasi dengan kecepatan 12.000

xg selama 1 menit, kemudian buang supernatan hasil

sentrifugasi (Zymo, 2017).

37

Setelah itu, tambahkan 400 µL DNA Pre-Wash Buffer lalu

sentrifugasi dengan kecepatan 12.000 xg selama 1 menit, lalu

kosongkan tabung pengumpul. Kemudian tambahkan 700 µL

g-DNA Wash Buffer lalu sentrifugasi kembali dengan

kecepatan 12.000 xg selama 1 menit, lalu kosongkan tabung

pengumpul. Setelah itu, tambahkan kembali 200 µL g-DNA

Wash Buffer lalu sentrifugasi dengan kecepatan dan waktu

yang sama dengan proses sebelumnya, lalu kosongkan tabung

pengumpul. Terakhir, pindahkan tabung Zymo-Spin yang

telah ditambahkan 50 µL DNA Elution ke dalam tabung

pengumpul baru, lalu inkubasi pada suhu ruangan selama 5

menit, dan kemudian di sentrifugasi dengan kecepatan

maksimum selama 1 menit. Terbentuklah ekstrak ekstrak

DNA darah tali pusat manusia. Simpan pada suhu ruangan

≤ -20℃ sampai ekstrak akan digunakan (Zymo, 2017).

3.8.2 Tahap Pengujian

3.8.2.1 Pembuatan Kuku Lepas

Sebelum pembuatan kuku yang lepas pada tikus dilakukan,

daerah yang akan dibuat perlukaan dibebaskan terlebih

dahulu dari bulu menggunakan pisau cukur. Setelah itu,

lakukan anestesi dengan menggunakan Lidokaine 0,5%

dengan dosis 7 mg/kgBB subkutan untuk mengurangi rasa

sakit pada tikus dan menghindari gerakan tikus yang

berlebihan (IACUC, 2017). Setelah itu lakukan prosedur

38

antiseptik dengan mengoleskan polyvinylpyrolidone iodine

1% pada area yang akan dibuat perlukaan yaitu bagian

proksimal dari kuku. Luka dibuat dengan menggunakan

skalpel steril.

3.8.2.2 Penanganan Kuku Lepas

Setelah luka selesai dibuat pada kuku tikus kemudian tunggu

hingga 24 jam dan selanjutnya perawatan kuku lepas

disesuaikan dengan kelompok perlakuan yang sudah

ditentukan. Kuku lepas pada control groups (K) tidak

diberikan perlakuan apapun, sedangkan pada experimental

groups diberikan injeksi intramatriksial ekstrak DNA darah

tali pusat manusia sebanyak 1 kali suntik pada saat 24 jam

setelah dicabut kukunya untuk experimental groups (P1) dan

2 kali suntik pada saat 24 jam setelah dicabut kukunya dan

pada hari ke-8 untuk experimental groups (P2). Injeksi

intramatriksial dilakukan sekitar 2 mm dibawah lateral dan

proximal nail fold sebanyak 50 µL (Grover, 2005). Adapun

dosis letal injeksi ekstrak DNA darah tali pusat manusia

terhadap tikus adalah ≥ 252 ⅹ 106 sel/kgBB atau setara

dengan 1.875 µL (Rengasamy, et al., 2015). Kondisi umum

tikus diamati sampai 24 jam setelah injeksi untuk melihat

efek samping.

39

Tabel 2. Konversi Perhitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan dan Manusia

(Harmita dan Radji, 2008).

3.8.2.3 Penilaian Pertumbuhan Kuku Lepas

Penilaian pertumbuhan kuku pada tikus putih jantan (Rattus

norvegicus) galur Sprague dawley akan dilakukan selama 14

hari dengan mengukur panjang pertumbuhan kuku. Setelah

pengukuran selesai akan dilakukan perbandingan rata-rata

pertumbuhan kuku pada masing-masing kelompok penelitian

menggunakan software stastistik pengolah data.

40

3.9 Alur Penelitian

Gambar 9. Alur Penelitian

Gambar 1. Alur Penelitian.

Pemilihan Hewan Uji Menurut Kriteria Inklusi

Aklimatisasi Hewan Uji Selama Satu Minggu

Pemberian anestesi Lidokaine 0,5% (7 mg/KgBB)

Prosedur Aseptik dan Pembuatan Luka Kuku Lepas

Pengelolahan data dan hasil pengamatan

P2

Pembuatan laporan hasil penelitian

Pengukuran pertumbuhan kuku selama 14 hari

K

Pemberian injeksi

intramatriksial ekstrak DNA

darah tali pusat manusia

sebanyak 1 kali

P1

Pemberian injeksi

intramatriksial ekstrak DNA

darah tali pusat manusia

sebanyak 2 kali

41

3.10 Pengelolahan dan Analisis Data

3.10.1 Pengolahan Data

Data yang didapatkan dari proses pengumpulan data akan diubah

ke dalam bentuk tabel untuk kemudian diolah menggunakan

program pengolahan data statistik. Proses pengolahan data

menggunakan komputer ini terdiri dari beberapa langkah :

1. Editing

Pada tahap ini, penulis mengkaji dan meneliti kembali data

yang diperoleh kemudian memastikan apakah terdapat

kekeliruan atau tidak dalam pengisian lembar observasi.

2. Coding

Proses konversi data dari kode berupa angka-angka yang

dikumpulkan selama penelitian ke dalam simbol yang sesuai

untuk keperluan analisis.

3. Data entry

Proses memasukkan data ke dalam program komputer untuk

danalisis.

4. Cleaning

Pengecekan ulang data dari setiap sumber data atau

responden untuk melihat kemungkinan adanya kesalahan

kode, ketidaklengkapan, dan kemudian dilakukan koreksi.

5. Output computer.

42

3.10.2 Analisis Data

Pada penelitian ini akan dilakukan dua kali uji statistik yaitu

analisis univariat untuk mengetahui karakteristik tiap variabel dan

analisis bivariat untuk mengetahui hubungan antarvariabel

penelitian.

a. Analisis Univariat

Analisis univariat merupakan analisis yang digunakan untuk

mendeskripsikan karakteristik suatu variabel penelitian. Pada

analisis univariat terdapat dua macam ukuran data yaitu

ukuran pemusatan dan ukuran penyebaran. Untuk data

numerik apabila data terdistribusi secara normal maka

ukuran pemusatan yang digunakan adalah mean dan ukuran

penyebarannya adalah standar deviasi. Apabil data tidak

terdistribusi normal makan ukuran pemusatan yang

digunakan adalah modus dan ukuran penyebarannya adalah

persentil (Dahlan, 2014).

b. Analisis Bivariat

Setelah dilakukan analisis univariat kemudian dilanjutkan

degan analisis bivariat untuk mencari hubungan antar

variabel penelitian. Analisis ini juga bertujuan untuk analisis

uji hipotsis komparatif numerik lebih dari dua kelompok

tidak berpasangan untuk mengetahui hubungan antarvariabel

numerik dan kategorik. Kemudian data di analisis

menggunakan software statistik. Jenis statistik yang

43

digunakan adalah uji one way ANOVA dengan beberapa hal

yang harus diperhatikansebagai berikut (Dahlan, 2014):

a. Uji one way ANOVA dengan post hoc Bonferroni atau

LSD, bila sebaran normal dengan varian yang sama;

b. Uji Kruskal-Wallis dengan post hoc Mann-Whitney, bila

sebaran tidak normal

3.11 Etika Penelitian

Penelitian ini telah diajukan ke Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas

Kedokteran Universitas Lampung setelah proposal penelitian disetujui oleh

tim skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Lampung. Penelitian ini

menerapkan prinsip 3R yaitu replacement, reduction, dan refinement.

Prinsip 3R secara luas telah digunakan di seluruh dunia dan banyak negara

yang telah menggunakan prinsip 3R dalam penetapan peraturan perundang-

undangannya, termasuk di Indonesia. Replacement adalah keperluan

memanfaatkan hewan percobaan sudah diperhitungkan secara seksama,

baik dari pengalaman terdahulu maupun literatur untuk menjawab

pertanyaan penelitian dan tidak dapat digantikan oleh makhluk hidup lain

seperti sel atau biakan jaringan. Reduction diartikan sebagai pemanfaatan

hewan dalam penelitian sesedikit mungkin, tetapi tetap mendapatkan hasil

yang optimal. Sedangkan refinement adalah memperlakukan hewan

percobaan secara manusiawi, memelihara hewan dengan baik, tidak

menyakiti hewan, serta meminimalisasi perlakuan yang menyakitkan

sehingga menjamin kesejahteraan hewan coba sampai akhir penelitian

(Depkes RI, 2006). Penelitian ini telah lolos uji kaji etik oleh Komisi Etik

44

Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Lampung dengan nomor

persetujuan etik 3864/UN26.18/PP.05.02.00/2019.

65

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

Dari hasil penelitian perbedaan pertumbuhan kuku antara kelompok perlakuan

yang diinjeksi intramtriksial ekstrak DNA darah darah tali pusat manusia

dengan yang tidak pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague

dawley, didapatkan simpulan sebagai berikut :

1. Terdapat perbedaan panjang pertumbuhan kuku antara kelompok

perlakuan yang diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat

manusia dengan kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan

pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

Perbedaan yang signifikan terjadi pada antara kelompok kontrol negatif

(K) dan kelompok perlakuan (P2) dan antara kelompok perlakuan (P1)

dan kelompok perlakuan (P2).

2. Terdapat perbedaan rerata waktu pertumbuhan kuku antara kelompok

perlakuan yang diinjeksi intramatriksial ekstrak DNA darah tali pusat

manusia dengan kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan

pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley.

5.1 Simpulan

66

Adapun saran yang dapat diberikan peneliti dari hasil penelitian ini antara lain:

1. Diharapkan penelitian selanjutnya dapat melanjutkan penelitian

menggunakan hewan coba yang berbeda seperti kelinci atau hewan

lainnya yang sesuai dengan kaidah penelitian.

2. Diharapkan hasil penelitian ini dapat menjadi dasar bagi penelitian

selanjutnya mengenai ekstrak DNA darah tali pusat manusia terhadap

kondisi lainnya yang membutuhkan terapi yang dapat mempercepat

proses regenerasi jaringan.

3. Diharapkan penelitian selanjutnya dapat melakukan proses ekstrak DNA

darah tali pusat manusia yang kemudian proses kultur lebih lanjut.

4. Bagi Universitas Lampung, diharapkan dapat meningkatkan dan

mengembangkan prasarana untuk penelitian mengenai ekstrak DNA

darah tali pusat manusia sebagai terapi regeneratif.

5.2 Saran

DAFTAR PUSTAKA

Amador EV, Perez SC, Cuellar WT. 2016. Recommendations on treatment of nail

and fingertip injuries in children. Cases series and literature review.

Rev.Fac.Med. 64(3): 499-504

Amin HZ. 2013. Terapi stem cell untuk infark miokard akut. eJournal Kedokteran

Indonesia.1(2). 157-64.

Anonim. 2009. Skin and Nail: Barrier Function, Structure, and Anatomy

Considerations for Drug Delivery. Particle Sciences. 3.

Berker D, Brauer E, Baran R. Cosmetics: The care and andornment of nail in: Baran

R, Dawber RPR et al. 2007. Diseases of the nail and their management, 3rd

ed. Oxford (UK): Blackwell

Besselsen D.G. 2004. Biology of laboratory rodent. diakses tanggal 20 Agustus

2019 dari http://www.ahsc.arizona.edu/.

Braid LR, Catherine A, Wood, Danielle M, Wiese, Barry NF. 2018. Intramuscular

administration potentiates extended dwell time of mesenchymal stromal

cells compared to other routes. Journal Cytotherapy.20: 232–244

Carere C dan Maestripieri D. 2013. Animal Personalities: Behavior, Physiology,

and Evolution. Chicago (USA): University of Chicago Pr.

Chen G, Yue A, Ruan Z, Yin Y, Wang R, Ren Y et al. 2015. Comparison of

biological characteristics of mesenchymal stem cells derived from maternal-

origin placenta and wharton’s Jelly. stemcellres. 6(1):1-7.

Dahlan, MS. 2014. Statistik untuk kedokteran dan kesehatan. Jakarta: Epidemiologi

Indonesia.

Danny et al. 2010. Stem cell Dasar Teori & Aplikasinya. Jakarta: Penerbit Erlangga

Djauhari T. 2010. Sel Punca. Jurnal Saintika Medika. 6(13); 91–96.

Drago D, Cossetti C, Iraci N, Gaude E, Musco G, Bachi A, Pluchino S. 2013. The

stem cell secretome and it’s role in brain repair. Biochimie, no. 95, hlm.

2271-2285.

http://www.ahsc.arizona.edu/

Du, H., Taylor H.S. 2009. Stem cells and female reproduction. Reprod Sci, 16 (2),

126-139

Halim D, Murti H, Sandra F, Boediono A, Djuwantono T, Setiawan B. 2010. Stem

cell-dasar teori & aplikasi klinis. Jakarta: Penerbit Erlangga

Haneke E. 2015. Anatomy of the nail unit and the nail biopsy. Seminars in

Cutaneous Medicine and Surgery. 34: 95-100.

IACUC. 2017. Anasthesia and analgesia in laboratory animals at ucsf. University

of California San Fransisco [Online Journal] [Diunduh tanggal 12 Desember

2018]. Tersedia dari: http://www.iacuc.ucsf.edu/Proc/awRatFrm.asp

Janvier. 2017. Sprague dawley rat. Janvier. Tersedia di : https://www.janvier-

labs.com/rodent-research-models-services/research-models/per-

species/outbred-rats/product/sprague-dawley.html. (Diakses pada: 22

Agustusl 2019).

Junqueira L.C., J.Carneiro, R.O. Kelley. 2007. Histologi Dasar. Edisi 5. Jakarta;

EGC.

Jusuf A.A. 2008. Aspek Dasar Sel Punca Embrionik (Embrionic Stem Cells) Dan

Potensi Pengembangannya. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia

Kementan RI, 2008. Petunjuk teknis rodensia. Kementan RI. hlm 25-42.

Kern S, Eichler H, Stoeve J, Kluter H, Bieback K. 2006. Comparative analysis of

mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or

adipose tissue. Stem Cells.;24:1294-301.

Koolhas JM. 2010. The laboratory rat. The UFAW Handbook on the Care and

Management of Laboratory and Other Research Animals. University of

Gronigen. hlm 311-15.

Kurniawaty, Evy. 2017. Buku ajar terapi gen miracle of placenta. BandarLampung.

CV. Anugrah Utama Raharja

Lane SW, Williams DA, Watt FM. 2014. Modulating the stem cell niche for tissue

regeneration. Journal Nature Biotechnology. 32:1-9

Lehoczky AJ, Tabin CJ. 2015. Lgr6 marks nail stem cells and is required for digit

tip regeneration. Journal Proceedings of the National Academy of Sciences

of The United States of America 112(43): 13249-13254

Li, M, Cascino, P., Ummarino, S., Di Ruscio, A. 2017. Application of Induced

Pluripotent Stem Cell Technology to the Study of Hematological Diseases.

Cells, 6(1).

http://www.iacuc.ucsf.edu/Proc/awRatFrm.asp

Mescher AL. 2014. Kulit . Dalam: Teks dan Atlas Histologi Dasar Junquiera. hlm

309-24.

Padeta I, Nugroho WS, Kusindarta DW, Fibrianto YH, Budipitojo T. 2017.

Research article mesenchymal stem cell-conditioned medium promote the

recovery of skin burn wound. Asian J.Anim. 12(3):132–41

Phuc Van Pham. 2016. Mesenchymal stem cells ini clinical application in Stem cell

processing p 37-69. Springer.

Puranik SB, Nagesh A, Guttedar RS. 2012. Isolation of mesenchymal-like cells

from wharton’s jelly of umbilical cord. Ijpcbs. 2(3):218–24

Rengasamy M, Pawan KG, Udaykumar K, Gurbind S, Sudha B, Swathi SR, et al.

2015. Preclinical safety & toxicity evaluation of pooled, allogeneic human

bone marrow-derived mesenchymal stromal cells. Indian Journal Med Res

144. hlm. 852-864.

Rossi, Raton, FL, A. Barbieri, L. Pistola, G. Bonaccorsi, P. Calvieri, S. 2002. Hair

and nail structure and function. J.APPL.Cosmetol (21).

Sastroasmoro S. 2014. Dasar-dasar metodelogi penelitian. Edisi ke- 5. Jakarta:

Sagung Seto.

Schuleri KH, Amado LC, Boyle AJ. 2008. Early improvement in cardiac tissue

perfusion due to mesenchymal stem cells. Am J Physiol Heart Circ Physiol.

Se-ra Park, Jae-Wan Kim, Hee-Sook Jun, Joo Young Roh, Hwa Yong Lee, In-Sun

Hong. 2018. Stem Cell Secretome and Its Effect on Cellular Mechanisms

Relevant to Wound Healing. The American Society of Gene and Cell

Therapy. 26(2): 606 and it’s role in brain repair. Biochimie, no. 95, hlm.

2271-2285.

Sharp. P.E & Villano.J., 2012. The Laboratory Rat 2nd. ed. CRC press. Boca

Therapy in Myocardial Infarction. Bioteknologi, 11(2), hal.176–190.

Wang HS, Hung SC, Peng ST, Huang CC, Wei HM, Guo YJ et al. 2004.

Mesenchymal stem cells in the wharton's jelly of the human umbilical cord.

Stemcells. 22(7): 1330–1337.

Wang HS, Xu C, Zhao RC. 2012. Clinical applications of mesenchymal stem cells.

Jhoonline. 5(19): 1-9.

Widiartini W, Siswati E, Setiyawati A, Rohmah IM, Prastyo E. 2013.

Pengembangan usaha produksi tikus putih (Rattus Norvegicus) dalam upaya

memenuhi kebutuhan dan mengembangkan berbagai macam bidang ilmu

dalam skala penelitian atau pengamatan laboratoris. Kemenristekdikti

Yuliana, I. & Suryani, D. 2012. Terapi Sel Punca pada Infark Miokard Stem Cell

Zymo Research. 2017. Quick -DNA TM Universal kit manual instruction.

[Diunduh tanggal 29 Agustusi 2019]. Tersedia dari:

http://www.zymoresearch.com/dna.

http://www.zymoresearch.com/dna