Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre

Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre

Stina Bengtsson

Klinisk mikrobiologi Växjö

NordicAST workshop 2012

Syfte

Utvärdera automatiserad MIC-bestämning och lappdiffusion mot ISO referensmetoden broth microdilution (buljongspädning).

MIC-värden och zondiametrar har tolkats mot EUCAST brytpunktstabeller v1.3 (2011) och 2.0 (2012)

Material

479 bakterieisolat - 234 gramnegativa

- 245 grampositiva

Olika resistenstyper MRSA, VRE, ESBL

Referensstammar - E. faecalis ATCC 29212 S. pneumoniae ATCC 49619 S. aureus ATCC 29213 E. coli ATCC 25922 P. aeruginosa ATCC 27853 K. pneumoniae ATCC 700603

Organism Antal isolat

Escherichia coli 60

…med ESBL 26

Klebsiella pneumonia 40

…med ESBL 8

Klebsiella oxytoca 12

Morganella morganii 10

Proteus mirabilis 22

Enterobacter aerogenes 9

Enterobacter cloace 13

Pseudomonas aeruginosa 34

Gramnegativa organismer

Grampositiva organismer

Organism Antal isolat

Staphylococcus aureus 64

…mecA positiv 30

Koagulas-negativa staphylococci 25

Staphylococcus lugdunensis 9

Enterococcus faecalis 12

… med Hög gradig aminoglycosid resistens 8

…med VRE 2

Enterococcus faecium 8

… med VRE 10

Streptococcus pneumoniae 35

Streptococcus pyogenes (ej Vitek) 42

Antibiotikalappar (µg) Enterobacteriaceae Pseudomonas

Aztreonam (30) 0.5-16 0.5-16

Cefepime (30) 0.5-16

Cefotaxime (5) 0.5-16

Ceftazidime (10) 0.5-16 0.5-16

Cefuroxime (30) 1-161

Ciprofloxacin (5) 0.03-2 0.03-2

Gentamicin (10) 0.25-8 0.25-8

Imipenem (10) 0.25-162 0.25-16

Meropenem (10) 0.25-16 0.25-16

Piperacillin/

Tazobactam (30-6) 0.5-32 0.5-32

Tigecycline (15) 0.12-43

Tobramycin (10) 0.25-8 0.25-8

Trimethoprim (5) 1-4

Trim/Sulfa (1.25-23.75) 2-8

1. Brytpunkt endast för E. coli, P. mirabilis och Klebsiella spp. 2. Ej utvärderade för P. mirablis och M. morganii 3. Zonbrytpunkt endast för E.coli. MIC endast i VITEK

Antibiotikalappar (µg) Staphylococci Streptococci Enterococci

Ampicillin (2) 2-8

Cefoxitin (30) 2-8

Ciprofloxacin (5) 0.5-2

Clindamycin (2) 0.06-1 0.06-1

Erythromycin (15) 0.06-4 0.06-4

Fusidic acid (10) 0.5-16

Gentamicin (10) 0.5-4

Gentamicin (30) 128-256 3

Imipenem (10) 1-8

Linezolid (10) 1-4 0.5-4

Moxifloxacin (5) 0.12-1

Nitrofurantoin (100) 16-256 4

Benzylpenicillin (1 unit) 0.06-2 0.06-22

Teicoplanin (30) 0.5-8

Tetracycline (30) 0.5-8 0.5-8

Trim/Sulfa (1.25-23.75) 0.06-4

Vancomycin 1-41 0.5-8

1. Endast MIC-brytpunkt 2. Brytpunkt endast för S. pyogenes

3 . Ej utvärderad i Phoenix 4. Ej utvärderad i Vitek

Resistensbestämning

• Phoenix (Becton Dickinson)

• Vitek (bioMérieux)

• EUCAST lappdiffusionsmetod

• Broth microdilution (Sensititre)

Phoenix Automatiserad resistensbestämning • Panelen innehåller 85 brunnar med antibiotika i

olika koncentrationer • Avläsning sker var 20 min

-turbiditet (bakteriers tillväxt ) -redoxindikator (bakteriers metabolism) Verkligt MIC-värde För att får SIR-tolkning av MIC måste det finnas en art identifiering.

Paneler - Gramnegativa - NMIC/ID-73 - Grampositiva - PMIC/ID-66 (Stafylokocker och Enterokocker) - Streptokocker - SMIC/ID-9

Vitek Automatiserad resistensbestämning

• Korten innehåller 64 brunnar med antibiotika i olika koncentrationer samt en kontrollbrunn med odlingsmedium

• Avläsning av bakterietillväxt var 15 min och utvärderar tillväxtmönster i brunnarna i förhållande till växten i kontrollbrunnen

• Algoritmer som beräknar MIC-resultat och tolkning

För att får SIR-tolkning av MIC måste det finnas en art identifiering.

Kort - Gramnegativa - AST-N103 - AST-EXN8 (användes till ESBL test för E. coli och K. peumoniae) - Grampositiva - AST-P592 (Stafylokocker och enterokocker) - AST-GP68 (Streptokocker)

Lappdiffusion

EUCASTs lappdiffusionsmetod

• Oxoid lappar

• MH-agar (Oxiod och BBL)

Plattor - MH : Gramnegativa Grampositiva (stafylokocker och enterokocker) - MH-F: Streptokocker

Broth microdilution (Sensititre)

Referensmetod för MIC bestämning enligt ISO (The International Standards Organization)

Microtiterplattor med koncentrationsgradient

Inkubering 18-24 h

Manuell avläsning av plattorna med Vizion

Plattor - Gramnegativa - SENMF - Grampositiva - SEPMF (stafylokocker och enterokocker) - STP6F (streptokocker)

Categorical agreement (CA)

SIR-tolkning av MIC-värden och zondiametrar enligt

EUCAST brytpunktstabell v 1.3 och v 2.0

Kategoriseringen av SIR-resultaten

Minor error

(mE)

Major error

(ME)

Very major

error

(VME)

Broth microdilution S I I R S R

PHOENIX/VITEK/Lappdiffusion I S R I R S

Resultat

Gramnegativ Grampositiv

Vitek 96,3 % 98,7 %

Phoenix 97,6 % 98,7 %

Lappdiffusion 96,3 % 98,1 %

Categorical agreement för gramnegativa resp grampositiva enligt brytpunktstabell v 1.3

M. morganii (n=10)

Vitek Phoenix Lappdiffusion

Antibiotika mE ME VME mE ME VME mE ME VME

Aztreonam 1

Cefepime

Cefotaxime 2 1 1

Ceftazidime 2 2 1

Ciprofloxacin

Gentamicin

Meropenem

Piperacillin/Tazobactam 1

Tobramycin

Trimethoprim 1 1 1 6

Trimethoprim/Sulfamethoxazole 1 1 1

Totalt 6 2 0 4 1 1 9 0 0

P. aeruginosa (n=34)



Aztreonam 5 8

Ceftazidime 1 1

Ciprofloxacin 3 2 1 2

Gentamicin

Imipenem 1 1 1 1 2 1

Meropenem 5 3 7

Piperacillin/Tazobactam 3 2 1 1

Tobramycin

Totalt 14 5 3 7 1 1 19 2 0

E. faecium (n=18)



Ampicillin 1 1 2

Gentamicin-HLAR 1 - - -

Imipenem 3 2 3

Linezolid

Nitrofuratoin - - - 7 1 10

Teicoplanin 1

Vancomycin

Totalt 4 0 2 2 7 1 4 12 0

Fördelning av mE, ME och VME


mE ME VME mE ME VME mE ME VME

Grampositiva 13 4 7 11 11 4 11 23 4

Gramnegativa 76 24 8 56 4 5 93 14 0

Totalt 89 28 15 67 15 9 104 37 4

VME Antibiotika >1 VME

- Benzylpencillin :

S. aureus (3 st Vitek, 3 st Phoenix 2 st lappdiffusion)

- Gentamicin :

S. aureus (1 st Vitek)

E. faecium (1 st Vitek)

- Piperacillin/Tazobactam:

P. aeruginosa (2 st Vitek, 1 st Phoenix)

- Cefuroxime :

E. coli (1 st Phoenix)

K. pneumoniae (1 st Vitek, 1 st Phoenix)

- Trimethoprim/Sulfamethoxazole:

P. mirablis (2 st Vitek)

Brytpunktstabell v 2.0

• MIC-brytpunker:

Nitrofuratoin: ME för E. faecium försvinner då brytpunkten ändrats och endast gäller för E. faecalis

• Zonbrytpunkter:

Cefotaxime : 1 mE för E. coli

Tobramycin: 1 mE för K. pneumonaie och E. aerogenes

Nitrofuratoin: ME för E. faecium försvinner då brytpunkten

ändrats och endast gäller för E. faecalis

15/15

64/64

E. faecium (n=18)



Ampicillin 1 1 2

Gentamicin-HLAR 1 - - -

Imipenem 3 2 3

Linezolid

Nitrofuratoin - - -

Teicoplanin 1

Vancomycin

Totalt 4 0 2 2 0 0 4 2 0

CA 94,7 % 98,1 % 95,2%

Slutsats

• Grampositiva har något högre CA än gramnegativa för alla tre metoder

• Phoenix har högst CA för både gramnegativa och grampositiva

• Ofta samma organismer/antibiotika som är problematiska

• Vitek har flest VME (15 st) och lappdiffusion har flest mE (144st) och ME (37 st)

• Förbättringar med v 2.0 för vissa organismer t.ex. E. faecium

Tack!

• BD, bioMérieux, och TREK (Thermo Fisher Scientific) för finansiell bidrag och lån av utrustning

• Robert Smyth och Charlotte Bjelkenbrant för hjälp med projektet

Documents

Phoenix/Vitek/Lappdiffusion vs Sensititre