CAMPUS CIENCIAS DE LA SALUD

EDUARDO HERNANDEZ BERNAL

TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA OBSERVARLAS AL

MICROSCOPIO.

Al observar una estructura al microscopio óptico o al electrónico, la luz o los electrones atraviesan la muestra, dando lugar a la formación de imágenes que son ampliadas por las lentes del microscopio.

En el caso de la microscopía óptica las muestras deben tener un grosor de 5-8 μm

aproximadamente, y para microscopía electrónica, valores entre 20 y 40 nm. Es necesario, por tanto, cortar el material que ha de ser estudiado en "lascas" muy finas.

La preparación del material biológico muerto, para su estudio al microscopio óptico o al electrónico, consta de cuatro pasos fundamentales.

-1ro. La fijación. -2do. La inclusión. -3ro. El corte. -4to. La coloración.

Se detiene el proceso de autolisis

FIJACION QUIMICA: Se utilizan sustancias como el formol que actúan sobre los componentes celulares con el fin de mantener las estructuras a estudiar lo mas naturales posibles.

FIJACIÓN

FIJACION FISICA:Por calor: aplicamos calor de manera que se produce la coagulación de las proteínas. No es buena ya que las células se destruyen.

Por frío: se congela el tejido con dióxido de carbono o N liquido. Es mejor que la anterior pero se pueden formar cristales.

Para que el material tenga la suficiente fuerza al cortarse se sustituye el agua que contiene por una sustancia que le de rigidez y que evite que se deforme. Estas sustancias son la parafina para la microscopia óptica y las resinas sinteticas para la microscopia electrónica.

INCLUSIÓN

INCLUSION EN PARAFINA

1.- se deshidrata el tejido con la ayuda de alcoholes.

2.- Aclaramiento: se sustituye el alcohol por un liquido intermediario (hidrocarburo bencenico “silol)

3.-Impregnación: el tejido se coloca en parafina liquida(a 60 º C)

4.-Inclusión: se saca el tejido de la parafina y lo ponemos en el fondo de un molde metálico y lo rellenamos de parafina liquida colocándolo a temperatura ambiente de manera que la parafina se solidifica quedando el bloque realizado y preparado para el corte.

el corte se realiza equipos especiales, los cuales presentan una cuchilla que corta "lascas" del material.

Para microscopía óptica se utilizancuchillas de acero y el equipo recibe el nombre de micrótomo

CORTE

En microscopía electrónica se utilizan los ultramicrótomos, que emplean cuchillas de vidrio o diamante.

1.-microscopio estereoscópico2.-aparato de iluminación3.-muestra4.-centro de comando5.-portaobjetos6.-manivela

Los colorantes que corrientemente se emplean para la observación de láminas histológicas, son sales neutras que presentan radicales ácidos o básicos, es decir, colorantes ácidos y básicos.

COLORACIÓN

Una coloración de uso corriente en histología es la hematoxilina y eosina (H/E) que emplea

ambos tipos de colorantes. Con esta coloración se observa que el núcleo se tiñe con el

colorante básico (azul), y el citoplasma se colorea con el colorante ácido (rosado).

fibra colágena de tejido conjuntivo

Impregnación argénica

En el microscopio electrónicoNo se utilizan colorantes, no se observan colores solo blancos, grises y negros. Se utilizan sales de metales pesados para contrastar el tejido.

Fotografía tomada con microscopio electrónico  de los tubos de un macrofito.