Problemas de Diluciones Avanzado

Microbiología General: Problemas de dilución avanzado

1. En un laboratorio de fermentaciones se desea evaluar la bioprotección de bacterias lacticas en un forraje que se destina a alimentación de animales. Para ello se lleva 150 ml de cultivo inicial con 48 hs de incubación a un litro de suspensión, y se rocia a tres lotes consecutivos de forrajes de 5 kg, 200ml, 300 ml y 500 ml respectivamente. De la muestra 2 se realizo un homogenato de 10 g mas 40 de sc. fisiológica y luego cinco diluciones al decimo. se obtuvieron los siguientes recuentos: dil 10-5: 30- 45- 22dil 10-4: 200- 158- 95dil 10-3: 1200- 3500- 2500Indique la concentración del cultivo inicial y la concentración de los treslotes de forrajes.

2. Ud. debe realizar un aislamiento de E coli a partir de un caldo de enriquecimiento sembrado en una muestra de agua. No posee ansa de cultivo para realizar la siembra pero si espátula de drigalski, micro pipeta de 100 μL y tubos con solución salina (9,9 ml) para realizar diluciones. Ud sabe la concentración que puede alcanzar un caldo de cultivo a las 24 hs de incubación!! Como realizaría el aislamiento? Explique.

3. Ud. debe realizar un grafico de crecimiento de levaduras en un mosto de vino vs % v/v de alcohol. Para ello realizo 3 batchs de jugo de uva que se realizaron de la misma manera: se trituraron 2kg de uva en su punto de maduración, se inocularon 150 gr. De levadura en agua potable declorinada (el contenido de un sobre) y 0.3 gr. de sulfito de sodio. Se realiza el homogenato correspondiente y se incuba a 20°C en estufa.

Se saca una muestra del batch 1 cuando la temperatura de todos los batch llega a 20°C y se realiza un homogenato al décimo. Que diluciones realizaría para averiguar la concentración de levaduras en la masa 1, si un sobre de levadura liofilizada de 25g posee 1010 ufc/g? Resuelva con metodología oficial.

4. En un análisis de tierra se realiza un recuento de esporas bacterianas totales. Para ello, se realiza un homogenato de 20 g de muestra hasta 200 ml de suspendido. Luego se realizan diluciones al décimo y se obtienen los siguientes resultados:

Dil. 10-4: 220- 180- 168 (ufc) (Vol. Siembra: 0.1 ml)Dil. 10-5: 95- 115- 120 (ufc) (Vol. Siembra: 0.5 ml)Dil. 10-6: 18- 25- 22 (ufc) (Vol. Siembra: 1 ml)

Analice los resultados antes de comenzar aplicar la metodología oficial. Son lógicos?Resuelva e indique la concentración de esporas en la muestra de tierra.

5. Un cultivo bacteriano se diluye 1/4. A partir de esa dilución se realizan diluciones seriadas al décimo. Se siembra 0,1 ml de cada dilución en placas de agar nutritivo por triplicado obteniéndose los siguientes resultados:

Dilución Número de colonias

Placa 1 Placa 2 Placa 310-4 621 546 35610-5 64 56 6810-6 5 9 4

¿Qué dilución elegiría para calcular las UFC del cultivo original? Justifique su elección. Indique el resultado de su recuento.

6. Un cultivo bacteriano de 10 ml tiene un recuento de 250 UFC cuando se plaquea 0,1 ml de la dilución 10 -4.

Si 2 ml de ese cultivo se inoculan en 100 ml de medio fresco para realizar una curva de crecimiento: ¿Cuál es la concentración bacteriana inicial? ¿Qué diluciones realizaría del mismo para contar 100 colonias si sembrara 0,1 ml?

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7. Un fabricante de yogurt afirma que sus productos contienen 4 x 106 bacterias lácticas viables / ml.

¿Qué método de recuento utilizaría para corroborar ese número? Describa el protocolo, condiciones y materiales que utilizaría para realizar dicha determinación.

8. Un cervecero artesanal elabora dos lotes de cerveza con el mismo procedimiento y las mismas materias primas salvo el cultivo iniciador. Al cabo de tres días observo que uno de los lotes había finalizado la fermentación y el otro todavía estaba fermentando. Realizo un muestreo de cada lote tomando 50 ml de muestra y agregando solución fisiológica hasta 250 en cada caso. Realizo diluciones seriadas al décimo y obtuvo los siguientes resultados:

Muestra 1/

Dilución

Número de colonias (volumen de siembra 0.1 ml)


Muestra 2/Dilución

Número de colonias (volumen de siembra 0.5 ml)


Indique la concentración de levaduras en cada cerveza. Analice si las diferencias son sustanciales. Es lógica la situación de las fermentaciones?

9. Para un cultivo exponencial de Escherichia coli se realiza una curva de calibración de recuento en placa vs. turbidez (D.O. leída a 600 nm). A partir de la misma se establece una relación UFC/ml por unidad de D.O. de 4. 107

Qué ventajas tiene realizar una curva de calibración de recuento vs. turbidez?Que diluciones debería realizar para contar 100 colonias en una placa de agar nutritivo sembrada con 0,1 ml de un nuevo cultivo de E. coli con una D.O. de 0.5.

10. Los tenores microbiológicos de los caldos deshidratados que se liberen al comercio deberán ajustarse a los siguientes valores:

Microorganismos mesófilos aerobios, Máx: 100.000/g Colisímiles, Máx: 1.000/g E. coli, Máx: 10/g S. aureus (coagulasa positiva), Máx: 100/g Esporas de Cl. perfringens, Máx: 10/g Salmonellas: Ausentes en 25 g

¿Cómo realizaría el homogenato, con que dilución? Que diluciones posteriores realizaría y que volúmenes de siembra emplearía para cada determinación? Tenga en cuenta la optimización de tiempos y materiales

11. En la elaboración de jamones cocidos, Se utiliza una bacteria láctica para bioconservar los jamones inyectados con salmuera durante el masajeo previo a la cocción de los mismos. Se estima que el bio protector debe estar 103 veces más concentrado que la flora normal total del producto en ese paso del proceso de elaboración. Con el fin de realizar la experiencia, para las posteriores producciones, en una elaboración se toma una muestra de 500 g y se destina a al laboratorio de análisis para el recuento total.

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Se toman 10 g de alimento y se realiza un homogenato a ¼. Luego se realizan diluciones al décimo y se obtienen los siguientes recuentos luego de sembrar 0.2 ml por placa en todos los casos.

Dil. 10-2: 3000- 2500- 1800 (ufc) Dil. 10-3: 250-280-180 (ufc)Dil. 10-4: 22-34-85 (ufc)

Los bioprotectores vienen en sobre por 50 g, liofilizados, por 1014 ufc/g. Cuanto debo dosificar de bioprotector si tengo un batch de 1500 kilos de jamón masajeando?

RESULTADOS:

1) C0= 106 o 109 ufc/ml; dil: 10-6 , vol siembra= 100 μL2) Clev = 1012 ufc/g; Cmasa = 5x1010 ufc/g; dil: 10-6 , vol siembra= 0.1 ml3) ≡ 2x108 ufc/g4) ≡ 2.4x108 ufc/ml5) Cinicial= 2.5x107 ufc/ml; C2= 5x105 ; dil: 1:2,5 , dil: 10-2 vol siembra= 0.1 ml6) dil: 10-4 , vol siembra= 0.1 ml7) Facil8) M1≡ 2x108 , M2≡ 1.45x108 Si es lógico9) Se toma la relación de la DO como lineal, 1DO= 4x107 →0.5 DO= ¿?; dilución 2x10-5

10) Muy fácil11) 1,5 sobres

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