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DEDICATORIA

A DIOS POR DARME LA VIDA Y PERMITIRME CULMINAR UNO DE LOS GRANDES LOGROS DE MI VIDA.

A MIS PADRES JULIO Y HELENA POR TODO EL ESFURZO QUE REALIZARON A LO LARGO DE MÍ VIDA, CONSEJO Y GUIA PARA SEGUIR MÍ CAMINO Y LOGRAR DARME UNA HERENCIA INAPRESIABLE.

A MIS HERMANOS JULIO Y GUSTAVO POR EL CONSEJO, CONFIANZA Y APOYO QUE ME BRINDARON PARA ALCANZAR ESTA META.

A ADRIANA POR EL APOYO INCONDICIONAL EN LOS

MOMENTOS MÁS DIFICILES Y BRINDARME TU CARIÑO, AMOR Y DARME MUCHA FELICIDAD.

A MIS PROFESORES Y AMIGOS POR LA ENSEÑANZA Y CONOCIMIENTO A LO LARGO DEL CAMINO.

AGRADECIMIENTOS

A todos las personas de que de alguna manera fueron participes para la elaboración de este trabajo y ayuda a concluir una de mis

metas.

Al laboratorio Farmacéutico SELDER S.A. de C.V. por permitirme la elaboración de este proyecto, principalmente y con un gran

agradecimiento al Lic. Alejandro Martínez Villareal.

QFB. Jesús Alberto Gómez Arellanes, por las amistades y facilidades proporcionadas para lograr este proyecto.

A mis asesores QFB Idalia Leticia Flores Gómez y al QFB Francisco Javier Rodríguez Martínez, gracias por su amistad,

consejo, apoyo, e interés por este proyecto.

A mis Sinodales M. en C Ma. Gloria Velásquez Vaquero, Dra. Patricia Parra Cervantes y M. en C. Hernán Issac Córtes Andrade

por el tiempo, consejo y enriquecer mi trabajo.

MUACHAS GRACIAS.

INTRODUCCIÓN Página

I. FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA 1 A. Métodos analíticos 1

1. Definición 1 2. Clasificación 1

a. En función de su estado regulatorio 1 1) Farmacopeicos. 1 2) No farmacopeicos 1

b. En función de su aplicación 1 1) Producto a granel 1 2) Producto terminado 1 3) Materia prima 1 4) Indicativos de estabilidad 1

c. En función de la naturaleza de la respuesta analítica 1 1) Analitico 1 2) Bioanalitico 1

d. En función del propósito analítico 1 1) Cuantificación del analito. 1 2) Establecer la presencia del analito o un límite. 1 3) Identificación del analito. 1

e. En función de la naturaleza del sistema de medición. 1 1) Permite medir. 1 2) No permite medir. 1

B. Cromatografía de líquidos. 2 1. Historia. 2

a. Técnicas cromatograficas. 3 b. Cromatografía de capa fina. 3 c. Cromatografía en papel. 3 d. Cromatografía de fase sólida. 4

2. Conceptos de cromatografía. 5 a. Tiempo de retención. 5 b. Tiempo de retención del frente de disolución. 5 c. Tiempo muerto o tiempo de corrección corregido. 6 d. Números de platos teóricos. 6 e. Coeficiente distribución o reparto. 7 f. Factor de simetría. 7 g. Factor de capacidad. 8

3. Equipo 9 a. Fases Móviles. 9 b. Bombas. 10

1) Presión constante. 10 2) Flujo 10

a) Pistón reciproco. 10 b) Pistón dual. 10 c) Desplazamiento positivo. 10

Página c. Gradiente de elución. 11

1) Mezcla de alta presión. 11 2) Mezcla de baja presión. 11

d. Inyectores. 11 e. Columnas. 11 f. Tubos colectores. 11 g. Filtros. 11 h. Medidores de presión. 11 i. Termostatos de columna. 11 j. Detectores. 12

C. Optimización y Validación. 13 1. Optimización. 13

a. Concepto. 13 b. Optimización del Método. 13

2. Validación 14 a. Concepto 14

1) Precisión. 14 2) Adecuabilidad. 14 3) Especificidad. 14 4) Linealidad del Sistema. 14 5) Linealidad del Método. 14 6) Exactitud. 14 7) Repetibilidad. 14 8) Precisión Intermedia. 14 9) Estabilidad de la linealidad. 14

10) Robustez del método analítico. 14 D. Formas farmacéuticas. 15

1. Los sólidos de acuerdo a su tipo de liberación. 15 a. Convencional. 15 b. Modificada. 15

1) Prolongada. 15 2) Retardada. 15 3) Pulsátil. 15

E. Tabletas o comprimidos. 16 1. Tipos de comprimidos. 16

a. No recubiertos. 16 b. Recubiertos. 16

1) Recubrimiento de azúcar. 16 2) Recubrimiento de película fina. 16 3) Capas múltiples. 17 4) Liberación modificada. 17 5) Gastroresistentes. 17

2. Ventajas y desventajas. 17

Página 3. Principales componentes. 18

a. Diluentes. 18 b. Aglutinantes. 19 c. Desintegrantes. 19 d. Lubricantes. 20

F. Omeparzol 21 1. Nomenclatura 21 2. Propiedades fisicoquímicas. 21 3. Constante de disociación. 21 4. Constante de partición. 22 5. Espectros del omeprazol. 22

a. UV. 22 b. Infrarrojo. 22 c. Masas. 23

6. Farmacología 23 a. Indicaciones Terapéuticas. 23 b. Posología. 23

1) Ulcera péptica. 23 2) Síndrome de Zollinger-Ellison. 23 3) Insuficiencia hepática. 23 4) Insuficiencia renal. 24 5) Inyectables. 24 6) Dosis. 24

7. Toxicología. 24 8. Precauciones. 24 9. Interacciones con otros medicamentos. 24

a. Antifúngicos azólicos (itraconazol, ketoconazol). 24 b. Anticoagulantes orales (acenocumarol, warfarina). 24 c. Antiepilépticos (carbamazepina, fenitoína). 24 d. Atazanavir 24 e. Ciclosporina 24 f. Digoxina 24 g. Metotrexato 24 h. Voriconazol. 24

10. Cuadro Básico. 25 II. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. 26 III. Objetivos. 27

A. General. 27 B. Particulares. 27

IV. HIPOTESIS. 27 V. METODOLOGÍA. 28

A. Equipo. 28 B. Materiales. 28 C. Reactivos. 28 D. Diagrama general de Flujo. 29 E. Procedimiento. 31

Página VI. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS. 34

A. Revisión Bibliográfica. 34 B. Estandarización del principio activo. 35 C. Condiciones de las diferentes metodologías encontradas. 35 D. Optimizaciones. 36

1. Fase móvil. 36 2. Columna. 38 3. pH. 39 4. Velocidad de flujo. 39 5. Temperatura de la muestra. 40 6. Temperatura de la columna. 40 7. Preparación de la muestra. 41 8. Filtro. 42 9. Evaluación de la optimización. 44

E. Validación de métodos analíticos. 46 1. Sistema. 46

a. Precisión del sistema. 46 b. Adecuabilidad del sistema. 46 c. Linealidad del sistema. 46

2. Método. 47 a. Especificidad. 47 b. Exactitud y repetibilidad. 50 c. linealidad del método. 50 d. Precisión del método. 51 e. Estabilidad analítica de la muestra. 51 f. Tolerancia. 51 g. Limite de detección. 51 h. Limite de cuantificación. 51

3. Comparación. 52 VII. CONCLUSIONES. 55

VIII. SUGERENCIAS. 56 IX. REFERENCIAS. 57

ÍNDICE DE FIGURAS Página Tabla 1. Experimento de Tswett. 2 Tabla 2. Cromatografía en capa fina. 3 Tabla 3. Cromatografía en papel. 3 Tabla 4. Cromatografía de extracción de fase sólida. 4 Tabla 5. Columna CLAR. 4 Tabla 6. Tiempo de retención. 5 Tabla 7. Platos teóricos. 6 Tabla 8. Representación de asimetría en cromatografía. 7 Tabla 9. Bomba reciproca para CLAR. 10 Tabla 10. Molécula de omeprazol. 21 Tabla 11. Espectro UV. 22 Tabla 12. Espectro IR 22 Tabla 13. Espectro de masas. 23 Tabla 14. Diagrama de flujo general. 29 Tabla 15. Diagrama de Flujo (continuación). 30 Tabla 16. Cromatograma comparativo de los tiempos de retención

de la muestra. 41 Tabla 17. Preparación de la muestra y estándar homogenizados en

un solo tiempo de retención. 41 Tabla 18. Efecto del filtro. 43 Tabla 19. Grafica de linealidad del sistema. 46 Tabla 20. Cromatograma de especificidad que muestra BLANCO. 47 Tabla 21. Cromatograma de especificidad que muestra PLACEBO 47 Tabla 22. Cromatograma de especificidad que muestra ESTANDAR. 48 Tabla 23. Cromatograma de especificidad que muestra ESTANDAR Y

ESTANDAR CARGADO. 49 Tabla 24. Grafica de linealidad del método. 50

ÍNDICE DE TABLAS Página

Tabla 1. Tipos de fases móviles ocupadas en el ámbito Farmacéutico para CLAR. 9

Tabla 2. Requerimientos para una bomba CLAR. 10 Tabla 3. Detectores comúnmente ocupados para CLAR. 12 Tabla 4. Formas farmacéuticas catalogadas por su estado. 15 Tabla 5. Ventajas y desventajas de las formas

farmacéuticas tableta. 17 Tabla 6. Diluentes para fabricación de tabletas. 18 Tabla 7. Aglutinantes utilizados para la fabricación de tabletas. 19 Tabla 8. Desintegrantes que se ocupan en tabletas. 20 Tabla 9. Lubricantes ocupados para tabletas. 20 Tabla 10. Cuadro básico de Medicamentos en el

Distrito Federal 2012. 25 Tabla 11. Nivel de preparación del omeprazol 32 Tabla 12. Comparación de metodologías analíticas en

bibliografía contra metodología anterior. 36 Tabla 13. Optimización de la polaridad de las fases móviles

B y C. 37 Tabla 14. Comparación de la fase móvil B y C. 37 Tabla 15. Comparación de los fabricantes de columna. 38 Tabla 16. Comparación del pH con respecto a tiempo de

retención de la muestra. 39 Tabla 17. Optimización de la velocidad de flujo. 39 Tabla 18. Optimización de la temperatura de la muestra. 40 Tabla 19. Comparación de la temperatura de la columna. 40 Tabla 20. Efecto de filtro. 42 Tabla 21. Condiciones de la metodología optimizada. 44 Tabla 22. Comparación de las fases móviles establecidas

a lo largo del desarrollo y optimización de métodos. 45 Tabla 23. Comparación de desempeño entre dos métodos

analíticos. 52 Tabla 24. Resultados de los parámetros del sistema del

método optimizado. 53 Tabla 25. Resultados de los parámetros del método para la

metodología optimizada. 53 Tabla 26. Tabla comparativa de costos entre la metodología

anterior y la optimizada. 54

Abreviaturas: CLAR Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución T° Temperatura en grados centigrados mm milímetros cm centímetros THF Tetrahidrofurano mL mililitros min minutos PA Principio Activo ZE Zollinger Ellison Psi libra por pulgada cuadrada (Pounds per Square Inch) ppt Partes por Millon nm nanómetros AINES AntiInflamatorios No Esteroideos mg miligramos

 

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 0 de67 

 

INTRODUCCIÓN El Omeprazol, (5-metoxi-2-[(4-metoxi-3,5-dimetil-piridin-2-il)metilsulfinil]-3H-bencimidazol), es usado en el tratamiento de la dispepsia, úlcera péptica, enfermedades de reflujo gastroesofágico y el síndrome de Zollinger-Ellison. El Omeprazol fue el primer fármaco disponible para uso clínico, usado para inhibir la bomba de protones reduciendo la secreción de ácido gástrico, siendo el primer fármaco de su clase como inhibidor de la bomba de protones, introducido en el mercado en 1989, a partir de este siguieron cuatro fármacos más de su clase, (1) este fármaco se concentra en la célula productora de ácido (parietal) y se activa en medio ácido del canal secretor. Actúa a partir de su metabolito activo que es un inhibidor irreversible de la bomba de protones por lo que produce una potente y prolongada inhibición de la secreción ácida ante cualquier estimulo. (1)

La cuantificación del Omeprazol es necesaria para obtener un producto, que se administra para obtener un tratamiento eficiente, y reducir molestias en el paciente con este tratamiento. Existen métodos analíticos ya desarrollados para la cuantificación del Omeprazol, pero debido al costo y recursos utilizados en el método es necesario realizar optimizaciones para reducirlos. En este estudio se realizó la optimización del método analítico por HPLC para la cuantificación de Omeprazol en tabletas, modificando diferentes condiciones cromatografías y utilizando recursos accesibles para la optimización de estos. Posteriormente se desarrollo un método optimizado y validado del método, siguiendo los parámetros requeridos por la NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas (2) y la Guía del Colegio de Químicos Farmacéuticos Biólogos para la cuantificación de ingredientes activos en productos farmacéuticos terminados. (3)

Siendo los parámetros requeridos: Adecuabilidad del sistema, especificidad, linealidad del método, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia, estabilidad de la Solución analítica y robustez del método analítico.  

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 1 de67 

 

I. FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA A. Métodos Analíticos

1. Definición:

La química analítica (del griego ἀναλύω, disolver, descomponer) es la parte de la química que tiene como finalidad el estudio de la composición química de un material o muestra, mediante diferentes métodos. Se divide en química analítica cuantitativa y química analítica cualitativa. (4)

2. Clasificación

a. En función de su estado regulatorio: 1) Farmacopeicos: Todos los métodos que aparecen en cualquier farmacopea

(FEUM, USP, BP, Europea, etc.). 2) No Farmacopeicos: Aquellos métodos no compendiados en una farmacopea.

b. En función de su aplicación (NOM-059-SSA1-1993, Buenas prácticas de fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la fabricación de medicamentos (5) y NOM-073-SSA1-2005, Estabilidad de fármacos y medicamentos (modifica a la NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos, publicada el 3 de agosto de 1996) (2)).

1) Producto a granel. 2) Producto terminado. 3) Materia prima. 4) Indicativos de estabilidad

c. En función de la naturaleza de la respuesta analítica: 1) Analítico: Cuando la respuesta es de carácter físico (absorción de luz, emisión

de luz, voltaje, etc.) o químico (consumo de iones –OH, consumo de un acomplejante, etc.)

2) Bioanalitico: Cuando la respuesta es de carácter biológico (crecimiento de un microrganismo, protección, muerte, etc.).

d. En función de su propósito analítico: 1) Cuantificación del analito (contenido o potencia). 2) Establecer la presencia del analito a un límite (Impurezas presentes). 3) Identificación el analito.

e. En función de la naturaleza del sistema de medición: 1) Cuando el instrumento de medición de la respuesta analítica, permite medir una

señal de ruido (cromatógrafo de líquidos, cromatógrafo de gases, espectrofotómetros, etc.).

2) Cuando el instrumento de medición no permite medir una señal de ruido (bureta, medidor de halos, potenciómetros, etc.).(6)

 

B. C

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| FUN

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Página 

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2 de67 

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| FUN

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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Página 

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4 de67 

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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Página 

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5 de67 

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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Página 

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7 de67 

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| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 8 de67 

 

g. Factor de Capacidad. (k´) Es el tiempo que se retiene cada componente en la columna. La fase estacionaria retarda el soluto en un tiempo t, mientras tm representa el tiempo que permanece en la fase móvil; por lo tanto el cociente entre ambos nos dará el valor de k’. (4) Este factor depende de la naturaleza química y temperatura de las fases líquidas que conforman el sistema. El valor de k’ generalmente están entre uno y diez; k’ mayores implican tiempos excesivos para completar la separación, se calcula de la siguiente manera:

Ec 7 Dónde: k’= Factor de Capacidad TR= Tiempo de Retención tm =tiempo muerto

La CLAR es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, materiales poliméricos, productos naturales termolábiles y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. La separación cromatográfica es el resultado de interacciones específicas entre las moléculas de la muestra con ambas fases, móvil y estacionaria.(4)

Es una técnica cromatográfica usada para separar componentes usando una variedad de interacciones químicas entre el analito y la columna cromatográfica, básicamente es un sistema compuesto de un reservorio de fase móvil, bomba, inyector, columna de separación, detector y horno. (4)

El analito pasa a través de una fase estacionaria o columna, por medio del bombeo de una fase móvil liquida que a su vez genera altas presiones a su paso a través de la columna. La muestra se introduce en pequeños volúmenes a la corriente de la fase móvil y allí se retarda por medio de interacciones químicas con la fase estacionaria mientras atraviesa la columna. (4)

El retardo se conoce como tiempo de retención único para el analito, depende de la naturaleza del analito, fase estacionaria y de la composición de la fase móvil. (8)

Las combinaciones más usadas en la fase móvil son agua purificada con líquidos orgánicos, los más comunes son Metanol y Acetonitrilo, también suelen usarse sales y buffer para contribuir a la separación de los componentes. También se usa el Ácido Trifluoroacetico para actuar como formador de pares iónicos. Estas combinaciones introducen el concepto de gradiente de elución que consiste en la variación de la composición de la fase móvil, para adaptarse a los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. El gradiente separa los componentes de la muestra en función de la afinidad de la fase móvil con el analito. Cada analito tiene un gradiente de elución óptimo para obtener la máxima separación de picos en el detector. (7, 8, 9)

K᾿= -1

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 9 de67 

 

3. Equipo a. Fases Móviles

Tipo de Cromatografía

Fase Normal Fase Inversa o

Reversa Cromatografía de

ión exclusión Cromatografía de

exclusión molecular

Fase móvil(10, 11) Heptano Isopropanol

Agua Buffer de

fosfatos Acetonitrilo Metanol,

principalmente

Buffer de fosfatos

Agua

Tetrahidrofurano (THF)

Solventes Orgánicos

Columna(10 12)

Aminopropilsilano, sílice, grupos nitrilos unidos a la cadena de sílice, otros.

Cadena de sílice unida con cadenas de 8 carbonos, 18 carbonos, fenil, otros.

Acrilatos, sílice

Poliacrimida Dextrano Agarosa Poliestireno con poros de diferentes tamaños.

Usos(13) Biomoléculas y moléculas orgánicas polares.

Polímeros, iones, biomoléculas y moléculas orgánicas.

Purifica y concentra proteínas, carbohidratos y polisacárido aminas cuaternarias, ácido sulfonico.

Polímeros, estructuras terciarias y cuaternarias de proteínas.

Observaciones (12,14)

No se utilizó después de 1970 por falta de reproducibilidad en el tiempo de retención.

Es la más utilizada para CLAR.

Es muy utilizado pero se limita el uso de esté tipo de cromatografía a moléculas orgánicas y biomoléculas.

No es muy utilizado ya que no tiene buena resolución y es un tanto compleja.

Tabla 1. Tipos de Fases Móviles ocupadas en el ámbito

Farmacéutico para CLAR (8)

 

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| FUN

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| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 11 de67 

 

c. Gradiente de elución.

Para crear un gradiente en la fase móvil, es necesaria una mezcla de los componentes. La capacidad de mezcla es vital para obtener el eluyente óptimo. (7)

Existen dos métodos: 1) Mezcla de alta presión: se usan bombas de alta presión individuales para cada

líquido. Las salidas se conectan en una cámara de mezcla, se usa un controlador electrónico para asegurar que la mezcla es óptima.

2) Mezcla de baja presión: ocurre antes de pasar por la bomba, el controlador electrónico regula la cantidad de líquido que pasa por los tubos.

d. Inyectores.

Deben introducir muestras liquidas en un rango de volumen desde 0,1 mL a 100 mL con una alta precisión. Normalmente se usan inyectores Rheodyne® que poseen válvulas de 6 puertos con un bucle que permite no solo la inyección de muestra sino también la purga del sistema y la eliminación de burbujas. (7)

e. Columna.

Normalmente compuesta de acero inoxidable del tipo 316, con diámetros internos desde 2,6 a 10 mm, normalmente con filtros de acero poroso las cuales están hechas usualmente con sílice fundida con diferentes grupos funcionales, 1 a 10 μm de partícula y de longitud de 10 a 30 cm. (7)

f. Tubos Colectores.

Son todos aquellos tubos que transportan las sustancias de pre columna a columna, de columna a detector o de detector a desechos. No deben superar los 0,634 mm de diámetro interno o causaran picos en las mediciones. (7)

g. Filtros.

Situados entre la bomba y el inyector de muestras, para evitar la entrada de ciertas sustancias y evitar el colapso de la columna. Normalmente estos filtros estas compuestos de acero poroso. (14)

h. Medidores de Presión.

Son indicadores de fallos en el sistema, nos indica cuando un flujo continuo falla por motivos de presión y si existe alguna fuga en la infraestructura del sistema. (7)

i. Termostatos de Columna.

Mantiene la columna a una temperatura óptima, sobretodo en análisis cualitativo, puesto que las variaciones de temperatura pueden cambian la viscosidad del eluyente e influir en el volumen retenido. (4, 6, 7)

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 12 de67 

 

j. Detectores. (15)

Detector Limite de

detección (mg) Permite gradiente Detección Observaciones

Detector de Espectrómetro de

masas 0.1-1 SI

Todos los compuestos

Tiene problemas para separar el

disolvente por lo cual es mejor para cromatografía de

gases

Detector de arreglo de diodos (UV-VIS)

0.1-1 SI

Todos los compuestos con

enlaces dobles en UV o tengan coloración

Lámpara de Deuterio, Xenón o

Wolframio Longitud de onda 190nm a 900 nm

Detector de Fluorescencia

0.001 -0.01 SI

Analitos fluorescentes o

derivados fluorescentes

Son de alta sensibilidad

Detector de índice de refracción

100-1000 NO Responde a todos

los solutos con baja sensibilidad

Son muy sensibles a la variación de

temperatura

Detector de dispersión de la luz tras evaporación(13)

0.1-1 NO

Se ocupa para tamaños de

moléculas de polímeros y

péptidos

Es más sensible que los detectores

de índice de refracción para

solutos no volátiles

Conductividad 0.5-1 NO

Para cromatografía de intercambio

iónico y trabaja por diferencias

Baja sensibilidad y sensibles a impurezas

Tabla 3: Detectores comúnmente ocupados para CLAR. (15)

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 13 de67 

 

C. Optimización y Validación.

1. Optimización.

a. Concepto. En general, la optimización se emplea para que, una tarea se realice más rápidamente, haciendo los cambios pertinentes para que esta se ejecute y funcione más rápido o exista una mejora en uno o más recursos del proceso a realizar. Al optimizar se pretende mejorar el procedimiento de elaboración, para aportar ventajas y mejoras en los diferentes procesos, como cambios en la fabricación sin alterar sus especificaciones fundamentales, en el caso de productos existentes o nuevos se busca una mayor eficacia y rentabilidad del proceso. Así optimizar, será obtener una eficacia máxima del proceso manteniendo el estándar de calidad, “Siempre debería considerarse la posibilidad de que haya una forma distinta de hacerlo mejor” es una idea muy efectiva a tener en cuenta en los trabajos de validación, que debería aplicarse esta metodología de optimización en las revalidaciones periódicas o revalidaciones por cambios. Por otra parte no debe perderse la idea de que “un proceso óptimo es aquel que permite obtener un producto con la calidad establecida al mínimo costo”; con lo cual no es solo interesante desde el punto de vista farmacéutico sino que la optimización es imprescindible para cualquier proyecto. La idea es “fabricar al mínimo costo con el nivel de calidad exigido” (16)

b. Optimización de Métodos Analíticos.

Siempre es necesario aportar algunas ventajas a los métodos analíticos sin alterar sus especificaciones fundamentales y utilizando los recursos disponibles teniendo como objetivo una mayor eficacia y rentabilidad del método, para obtener una eficacia máxima del método manteniendo el estado de calidad del método. Al validar se debe optimizar el proceso para obtener un producto con calidad establecida al mínimo costo, mejorar el rendimiento del proceso y reducir el tiempo; por lo que esto implica no solo un enfoque a nivel farmacéutico, si no también a nivel financiero. La calidad del método debe ser establecida tan pronto como sea posible ya que los cambios en una validación provocan trámites, costos directos o es necesario esperar a la revalidación, pero la optimización debe ser plasmada en una metodología analítica para poder ser validado.

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 14 de67 

 

2. Validación. a. Conceptos de Validación de Método Analítico.

1) Precisión: Se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad del

método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada. (2, 3, 17)

2) Adecuabilidad del Sistema: Verifica que el sistema (instrumento, analista, equipo, sustancia de referencia, entre otros) opera en base a criterios establecidos, que permiten asegurar la confiabilidad de los resultados de un método analítico. (2, 3, 17)

3) Especificidad: Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la muestra. (2, 3, 17)

4) Linealidad del Sistema: Conjunto de operaciones que determinan, bajo condiciones especificadas, o la relación entre los valores representados por una medición material y los valores conocidos correspondientes a un patrón de referencia. (2, 3, 17)

5) Linealidad del Método: Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por medio de una transformación matemática definida, son proporcionales a la concentración del analito, dentro de un intervalo determinado. (2, 3, 17)

6) Exactitud: Relación entre un valor obtenido empleando en el método y el valor de referencia. (2, 3, 17)

7) Repetibilidad: Precisión de un método analítico, expresada como la proporción obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando los mismos instrumentos y método. (2, 3, 17)

8) Precisión Intermedia: Precisión de un método analítico, expresada como la correlación relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días. (2, 3, 17)

9) Estabilidad de la solución analítica: Propiedad de una muestra preparada para la cuantificación de la conservación de su integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse durante un tiempo determinado bajo condiciones específicas. (2, 3, 17)

10) Robustez del Método analítico: Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación del método. (2, 3, 17)

 

D

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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Página 

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15 de67 

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| FUN

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ÓN DEL TEMA

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16 de67 

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| FUN

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17 de67 

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| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 18 de67 

 

3. Principales Componentes.

a. Diluentes. Los diluentes son sustancias con función de relleno como se muestra en la tabla 6, sin actividad farmacológica, utilizadas para alcanzar el tamaño deseado de las tabletas. Se seleccionan en función de las propiedades de compresión, solubilidad, capacidad absorbente, la alcalinidad y acidez, etc. (20)

DILUENTES PROPIEDADES INCOMPATIBILIDAD MARCAS COMENTARIOS

Fosfato Dibásico de Calcio

Buenas propiedad de flujo y puede

ocuparse como lubricante.

No puede ser usado en formulaciones con tetraciclinas.

Se reporta

incompatibilidad con aspirina,

indometacina aspartame, ampicilina

cefalexina y eritromicina.

Cyfos, Calstar, Calipharm,

Emcompress

Insoluble en agua y alcohol, muy soluble en

ácido clorhídrico 3N.

Buenas

propiedades de flujo.

Disponible en forma anhidra

Lactosa Monohidratada

Diluente comúnmente

utilizado y económico

Aminoácidos, aminas primarias y

anfetaminas.

Lactochemmilled Granulac

200, Granulac 230, Sorbolac

400, Granulac® 140 Prismalac 40, Capsulac 60, Sachelac 80,

Cuando se encuentra con

aminas primarias en ambientes

alcalinos puede producir una reacción de

condensación de Maillard

Celulosa Microcristalina

Adsorbente, agente de

suspensión, diluente o

desintegrante en comprimidos

y cápsulas.

Es incompatible con agentes oxidantes

fuertes y es higroscópica.

Flocel, Microcel, Avicel,

Emcocel, Compactrol

Ligeramente soluble en soluciones alcalinas,

insoluble en agua y ácidos diluidos y la mayoría de

ácidos orgánicosTabla 6. Diluentes para la fabricación de tabletas. (21)

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b. Aglutinantes.

Estas sustancias unen las partículas entre sí cuando la sola presión no basta para mantenerlas agrupadas en gránulos. Además aumentan la resistencia a la ruptura de las tabletas, pero reducen su velocidad de disolución, ver tabla 7. Aunque pueden utilizarse en seco, en general se agregan a la formulación en solución o dispersión para garantizar una distribución más homogénea. (21)

AGLUTINANTES CONCENTRACIÓN (P/V) MARCAS

Carbomero 5-10 Carbopol

Carboximetilcelulosa de Calcio 5-15 Nymcel

Carboximetilcelulosa de Sodio 5-15 Nymcel y Gelcel

Hidroxipropilmetilcelulosa 2-5 Methocel y Pharmacoat

Silicato de Aluminio y Magnesio 2-10 Pharmasorb y Veegum

Maltodextrina 2-10 Glucidex, Lycatab y Maltrin

Metilcelulosa 1-5 Celacol y Methocel

Oxido de Polietileno 5 Poliox

Plividona 0.5-5 Plasdone y kollidon

Tabla 7. Aglutinantes utilizados en la formulación de tabletas. (21)

c. Desintegrantes. Los desintegrantes se utilizan para acelerar la disgregación del principio activo en el agua y en los jugos gástricos, facilitando así su disolución y absorción. Esta función la pueden ejercer en virtud de la solubilidad, que es mayor que la del principio activo; por ejemplo, cuando este es poco hidrosoluble, ejemplos de estos en tabla 8. También actúan por hinchamiento, favoreciendo la penetración de los líquidos en el comprimido y la separación de los gránulos. Por último, cuando los comprimidos son efervescentes, el mecanismo de acción consiste en fomentar la liberación de los gases previamente incorporados al contacto del comprimido con el agua, lo que conduce a su disgregación. (21)

   

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 20 de67 

 

DESINTEGRANTES CONCENTRACIÓN (%) CARACTERISTICAS

Celulosa Microcristalina Hasta 10 AVICEL (MR) es directamente

comprensible y tiene propiedades lubricantes

Almidón 2 – 10 Los de maíz y de papa son los

más utilizados

Almidón Glicolato Sódico 1 – 10 PRIMOJEL (MR) EXPLOTAB (MR)

PVP Cross Linked 2 POLIPLASDONE XL (MR)

Dodecil Sulfato de Sodio 0.5 - 5 Humectante coadyuvante de

desintegración

Tabla 8. Desintegrantes que se utilizan en tabletas. (21)

d. Lubricantes. Cumplen varias funciones en el proceso de elaboración de los comprimidos. Previenen la adhesión a la superficie de matrices y punzones, reducen la fricción entre las partículas, facilitan la eyección en la cavidad de la matriz y mejoran la velocidad de flujo de la granulación del comprimido. Una selección deficiente o cantidad excesiva pueden originar la impermeabilización de los comprimidos, cuyo resultado es una escasa desintegración o una disolución retardada ver tabla 9. (21)

LUBRICANTE CONCENTRACIÓN

(%)

PROP. DESLIZANTE (GLIDANTE)

CARACTERÍSTICAS PROPIEDAD PRINCIPAL

Estearatos metálicos

< 1 Escasa Buena Excelente Lubricante

Talco 1-5 Buena Insoluble en agua Escasa

Lubricante y Deslizante

Cera de alto P.F. 3-5 Ninguna Escasa Excelente Lubricante

Almidón de maíz 5-10 Excelente Excelente Escaso

Lubricante Estearato de Mg,

Ca, o Ácido esteárico

0.2-1 Ninguna Insoluble en agua, Fuerza de tableta y

velocidad de disolución.

Buen Lubricante

PEG 4000 y 6000 2-5 Buena Soluble en agua, moderadamente

efectivo Lubricante

Tabla 9: Lubricantes ocupados para las tabletas. (21)

 

F. O Es unasecreciespecíf Desde compuuna esembargbenzoim El fármposibiliparecemetoxi,significdisocia

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2. Polvo bC17H19Nmuy sosoluble

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Omeprazol.

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| FUN

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Fatura.

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3,5-dimetil-p

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ación.

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uada en Log

ÓN DEL TEMA

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nada con ló el compula figura 10

eal en relacexpertos. Ls grupos merísticas melectrones

Molécula d

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A 

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ción con su La modifica

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olecular de 3rilo con un etanol, me

o soluble en

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tanol, diclon agua. (18, 2

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Página 

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(22)

esivamenteprazol. Estoanillo piridíeprazol, con

estabilidad mica más idínico y dean con una de la con

midazol

l/L la cual sfusión de 1

orometano 24, 23)

21 de67 

reduce la Inhibidor

, diversos os poseen ínico). Sin n un anillo

química y mportante un grupo reducción stante de

se forma po154˚ (23). Es(25, 26); poco

or s o

 

5.

El cuamáximo

Exhibe

 

. Espectros

a. UV

l se determos de 277,

b. IR.

máximos d

| FUN

s de Omepr

mina en u303 nm; en

de longitud

DAMENTACIÓ

razol.

un medio an un medio

Figura

de onda en

Figur

ÓN DEL TEMA

acuoso acibásico exh

a 11. Espec

n 1628, 120

ra 12. Espe

A 

do (0.2 Mhibe máxim

ctro UV (25)

05, 1015 cm

ectro IR (25)

H2SO4) emos en 276 y

m-1 (K Br d

Página 

en este mey en 305 nm

disk) (25)

22 de67 

edio exhibem. (25)

e

 

Princip

6.

Hemor(27)

Adultos

c. Masas.

ales iones

. Farmacolo

a. Indicac

ragia diges

b. Posolo

s, parentera1) Úlce

gastreco

2) Sínd60 mdosis

3) Insuhora

| FUN

.

son m/z: 15

ogía.

ciones Tera

stiva alta, g

gía

al: (27) era pépticatroesofágicoomienda una

drome de Zmg/24horass más altas

ficiencia heas, debido a

DAMENTACIÓ

51, 136, 12

Figura 13

péuticas.

gastropatía

a, úlcera o: Para paca dosis de

Zollinger-Ells. La dosiss.

epática: Sual aumento

ÓN DEL TEMA

21, 120, 180

3. Espectro

aguda, úlc

péptica ascientes que40 mg/24 h

lison: La dos deberá a

uele ser sude la biodis

A 

0, 297, 77.

o de Masas

cera péptic

sociada a e la adminhoras en inf

osis intraveajustarse in

uficiente la sponibilidad

(25)

(25)

ca, síndrom

AINEs, istración ofusión intra

enosa iniciandividualme

administrad y de la vid

Página 

me de Zollin

esofagitis ral es inap

avenosa.

al recomenente, pudie

ación de 10da media p

23 de67 

nger-Ellison

por reflujopropiada, se

dada es deendo indica

0-20 mg/24plasmática.

n.

o e

e ar

4

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 24 de67 

 

4) Insuficiencia renal: No suele ser necesaria la realización de un reajuste posológico.

5) Inyectables: El liofilizado reconstituido y diluido se administrará en infusión intravenosa lenta, en un período de 20-30 minutos.

6) Dosis: Las dosis superiores a 60 mg/24 horas por vía parenteral, deberán fraccionarse y administrarse cada 12 horas.

7. Toxicología.

La toxicidad aguda del omeprazol luego de la administración oral en roedores es baja. La dosis letal 50 es superior a los 4g/kg. Bien tolerado en estudios a largo plazo con dosis de hasta 400 µmol/kg/día orales, en perros y de 1 200 µmol/kg/día orales en ratas. No se observó efecto teratogénico ni toxicidad fetal ni se registró efecto mutagénico en estudios in vitro e in vivo. (27) La inhibición de la secreción ácida se acompaña de hipergastrinemia. Los estudios en perros y ratas demostraron que la administración prolongada se acompañaba de hipertrofia de la mucosa oxíntica por efecto trófico de la gastrina. Esta hormona también regula la función y proliferación de las células enterocromafines. Los estudios a dos años, en ratas, demostraron el desarrollo de carcinoides de estas células en algunos de los animales tratados. Sin embargo, estos tumores ocurren independientemente del mecanismo inhibidor de la secreción ácida. (23) Los experimentos en perros y ratas indicaron, también, que la hipergastrinemia revierte rápidamente una vez que se interrumpe el tratamiento. La hiperplasia de las células enterocromafines en ratas es, totalmente reversible. (27) Los tratamientos cortos no se asociaron con aumento significativo de estas últimas células ni con cambios en la mucosa oxíntica. En pacientes tratados entre 1 y 4 año no se registró ninguna alteración anatomopatológica. En sujetos con síndrome de ZE tratados hasta 4 años, no se observó aumento de las células enterocromafines. Esto indicaría, que la hipergastrinemia moderada, asociada con dosis antiulcerosas durante períodos cortos, no presenta riesgo. (27)

8. Precauciones.

Los pacientes en tratamiento con fenitoína o acenocumarol, se recomienda monitorizar las concentraciones plasmáticas de ambos cuando se inicie y cuando se interrumpa un tratamiento con omeprazol. (27)

9. Interacciones con otros medicamentos. (27)

a. Antifúngicos azólicos (itraconazol, ketoconazol). b. Anticoagulantes orales (acenocumarol, warfarina). c. Antiepilépticos (carbamazepina, fenitoína). d. Atazanavir. e. Ciclosporina. f. Digoxina. g. Metotrexato. h. Voriconazol.

10. Cuadro Básico.

| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 25 de67 

 

El omeprazol se encuentra en el cuadro básico de medicamentos en el Distrito Federal en el grupo 8 de Gastroenterología

GRUPO N° 8 GASTROENTEROLOGÍA CATÁLOGO

Clave Nombre

Genérico Descripción Cantidad Presentación

5181 Octreotida Solución

Inyectable 1 mg / 5 mL

Frasco ámpula con 5 mL

5187 Omeprazol o antoprazol

Solución Inyectable

Omeprazol 40 mg ó

Pantoprazol 40 mg

Frasco ámpula y ampolleta con 10 mL de diluyente

5186 Pantoprazol o Rabepreazol u

Omeprazol

Tableta o gragea o cápsula

Pantoprazol 40 mg o

Rabepreazol 20 mg u

Omeprazol 20 mg

7,14 ó 28 tabletas o grageas o

cápsulas

1234 Ranitidina Solución

Inyectable 50 mg

5 ampolletas con 2 ó 5 mL

2149 Misoprostol Tabletas 200 µg Envase con 28

tabletas

Tabla 10. Cuadro básico de Medicamentos en el Distrito Federal 2012.(28)

| PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA.  Página 26 de67 

 

II. PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA.

Actualmente las necesidades de los laboratorios farmacéuticos, son realizar estudios cada vez más pertinentes, que aseguren la calidad del producto tanto para su desarrollo, evaluación de proveedores, fabricación y comercialización, además que todo proceso de análisis, desde la materia prima, producto intermedio hasta un producto terminado implica un gasto de recursos e influye directamente los proveedores en cuanto a la calidad de sus productos y costos que implican. Por lo cual es necesario determinar la calidad y utilidad del método analítico así como saber que los datos obtenidos al aplicar la metodología analítica son confiables y para garantizar la eficacia del método es necesario validar. La validación de los métodos analíticos es un proceso por el cual se determina la conveniencia de una metodología dada para proporcionar un dato analítico útil. En este proceso se toma una decisión sobre la utilidad de un método después de que sus características han sido evaluadas con respecto a los requerimientos analíticos, cumpliendo con la normatividad que establece que se validen todos los procesos y metodologías (NOM-059 y NOM-177), e incluirlos en un protocolo de validación del producto.

Esto implica realizar optimizaciones a los métodos analíticos desarrollados los cuales deben de ser de calidad y evitar los problemas que se presentan con la metodología desarrollada, ya que presentaba problemas con la saturación de la columna y llegaba al punto de taparse y debido al uso y la concentración de fosfatos en la fase móvil; por lo tanto no era posible utilizarla nuevamente, aumentando los costos de análisis, por esto es necesario hacer un método más eficiente, además que se debe procurar optimizar las condiciones y proveedores, para reducir costos y tiempo que se obtienen siguiendo metodologías antes establecidas, sin olvidar cumplir con la normatividad por lo cual deben ser validado.

| OBJETIVOS.  Página 27 de67 

 

III. OBJETIVOS.

A. General. Optimizar y validar un método analítico para la cuantificación de Omeprazol Base de 20

mg en tableta forma farmacéutica.

B. Particulares. Desarrollar una metodología que evite los problemas encontrados en la metodología

propuesta.

Validar el método analítico optimizado.

Reducir costos y recursos en comparación con la técnica establecida.

IV. HIPÓTESIS.

Al realizar la Optimización del método analítico, ya implementado, para Omeprazol se lograra un método más eficiente además que se obtendrá una reducción significativa en recursos económicos.

| METODOLOGÍA.  Página 28 de67 

 

V. METODOLOGÍA.

A. Equipo. Cromatógrafo de líquidos de lata resolución (CLAR) Waters con detector de arreglo de

diodos. Con calibración vigente. HPLC 1 M03296403M Waters Inyector : Automático Balanza Semimicro Analítica Marca Mettler Toledo, modelo XS205DU, no. serie

1126113510, Calibración vigente. Balanza Granataria Digital Marca Sartorius, modelo TE6101, no. serie 9250282,

Calibración vigente.

B. Materiales. Columna cromatográfica: Fase reversa, ZorbaxEclipse Plus C18 (Agillent Tecnologies) de

4.6 mm DI x 150 mm de largo, tamaño de partícula 5 m. Matraces volumétricos ámbar de 25, 50, 100 y 200 mL, Brand, clase A Probeta de poliproprileno graduada con capacidad de 1000 mL. Pipetas volumetricas con capacidad para 1, 2, 2.5, 3 y 5 mL, Brand Clase A. Filtros Millex HV PVDF 0.45 µm. Espátulas de acero inoxidable Viales para cromatografía de 2 mL color ámbar

C. Reactivos.

Estándar de referencia Secundaria de Omeprazol Base vigente. Lote: OME/010/09/07

HELM DE MEXICO JUN/12. Producto de Agrucid, Lote Piloto Prueba 0906-80. Cloruro de Sodio grado reactivo Lote: C39C51 J. T. BAKER. Ácido Clorhídrico grado reactivo Lote: C67B34 J. T. BAKER. Fosfato Dibásico de Sodio grado reactivo Lote: H49C00, H07C10, H34C14 J. T. BAKER. Hidróxido de Sodio grado reactivo Lote: G26C52 J. T. BAKER. Fosfato Monobásico de Sodio grado reactivo C30C02 J. T. BAKER. Acetonitrilo grado HPLC J15C70 J. T. BAKER. Alcohol Etilico grado reactivo Lote: F67K34 J. T. BAKER. Agua purificada grado farmacéutico tipo 1.

|   Página 29 de67 

 

D. Diagrama de flujo general. REVISIÓN TEÓRICA DESARROLLO EXPERIMENTAL DOCUMENTACIÓN

Figura 14. Diagrama de flujo general

Revisión Bibliográfica 

Caracterización del Principio 

Activo según FEUM 9ᵃ edición. 

Seleccionar 

Metodología 

Analítica 

Caracterización y Análisis de la 

Materia Prima para Estandarización.

Estandarización de la Referencia 

Secundaria.

NO 

Reproducibilidad de la metodología 

reportada en FEUM 9ª Edición, 

metodología a Optimizar (Fase A) y 

metodologías propuestas (Fase B y C). 

Cromatogramas de reproducibilidad 

de metodologías. 

SI 

Propuestas de Optimización Optimización de los siguientes puntos en el método: 

a) Fase Móvil Fase B: Acetonitrilo‐Buffer de Fosfatos 1M Fase C: Metanol‐ Agua + Trietilamina al 1% 

b) Columna Water XbridgeC18, Varian Fortis Plus C18 150 x 

4.6 mm y 5 μm c) pH: 7, 7.5 y 8.5 d) Velocidad de Flujo. 0.8,1 y 1.2 mL/min e) Temperatura de Muestra. 10, 15, 25, 35 °C f) Temperatura de columna. 21, 30, 39 °C g) Preparación de muestra y efecto del filtro. 

Evaluar cada 

una de las 

condiciones y 

establecer el 

método 

A

SI 

NO

|   Página 30 de67 

 

REVISIÓN TEÓRICA DESARROLLO EXPERIMENTAL DOCUMENTACIÓN

Figura 15. Diagrama de flujo (Continuación)

A 

Validación del método analítico 

de acuerdo a los siguientes 

lineamientos 

SISTEMA 

MÉTODO 

Precisión 

Adecuabilidad 

Linealidad 

Realizar los 

cálculos 

pertinentes y 

comprobar que 

cumpla con los 

criterios de 

NO

Especificidad 

Exactitud y repetibilidad 

PrecisiónLinealidad 

Límite de Cuantificación 

Estabilidad Analitica de la Muestra 

Límite de detección 

Tolerancia

NO

Reporte de Validación 

|   Página 31 de67 

 

E. Procedimiento

1. Se revisaron de farmacopeas, libros, artículos correspondientes a características de principio activo y metodologías para su cuantificación por CLAR.

2. Se caracterizó el principio activo Omeprazol base según la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos vigente; se estandarizó la materia prima con respecto a su estándar USP.

3. Se reprodujeron los métodos que se encuentran reportados en farmacopeas, bibliografía y la metodología que se tiene establecida en el laboratorio.

4. Se realizaron optimizaciones en los siguientes puntos. a. Fase Móvil: A partir de la revisión se realizaron metodologías analíticas y se

propusieron dos fases móviles que cumplíeran con las características necesarias para ser evaluadas, con reactivos que se encuentren en el laboratorio de bajo costo, con posibilidades de mejora y con un tiempo de retención menor.

b. Columna: Se evaluaron dos columnas con las mismas propiedades, C18 150 mm x 4.6 mm y 5μm, pero de diferentes marcas.

c. pH: Se evaluaron tres diferentes pH de la fase móvil que fueron 7, 7.5 y 8.5. d. Velocidad de Flujo: Se presentaron tres velocidades de flujo diferentes las

cuales fueron de 0.8 mL/min, 1 mL/min y 1.2 mL/min. e. Temperatura de la Muestra: Se decidió probar con temperatura de la muestra a

10, 15, 25 y 35 °C. f. Temperatura de Columna: Se evaluaron diferentes temperaturas en la columna

los cuales fueron 21, 30 y 39 °C. g. Preparación de la Muestra: Se optimizó la preparación de la muestra con

respecto al diluente. Por problemas que se encontraron durante la validación, ya que el estándar y la muestra se tenían el mismo tiempo de retención, indicando una desigualdad en la preparación de la muestra.

h. Filtro: Se evaluó el efecto del filtro con respecto a la muestra. i. Evaluó la optimización, una vez ajustados los cambios pertinentes de

optimización evaluados en el punto 4, evaluar el método. Existió problemas con el filtro inicialmente utilizado, por lo cual se evaluaron diferentes filtros, nylon, nylon + fibra de vidrio y PVDF.

j. Validación del Método Analítico, evaluaron los siguientes puntos. 1) Sistema.

a) Precisión del Sistema. Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, adicionar 20 mL de alcohol absoluto y 30 mL de medio de disolución para curva de calibración, disolver por sonicación por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con el medio de disolución para curva de calibración. Tomar una alícuota de 2.5 mL de la solución anterior y tranferir a un matraz volumétrico actínico de 25 mL, llevar a volumen con medio de disolución para curva de calibración, mezclar perfectamente. Filtra a través de un filtro millex HN PVDF 0.45 μm, descartar los primeros mL del filtrado y tranferir a viales para HPLC actínicos.

b) Adecuabilidad del Sistema Misma preparación que se utiliza para precisión intermedia.

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c) Linealidad del Sistema Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, adicionar 20 mL de alcohol absoluto y 30 mL de medio de disolución para curva de calibración, disolver por sonicación por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con el medio de disolución para curva de calibración según la tabla 11.

Nivel (%) 

Volumen en mL de la alícuota de la solución stock 

Volumen de aforo con diluente 

Concentración (mg/mL) 

Omeprazol Base 

10  1  100  0.00185 

40  2  50  0.00741 

70  7  100  0.01296 

100  5  50  0.01852 

120  6  50  0.02222 

Tabla 11. Niveles de preparación del omeprazol.

2) Método. Preparación de la Solución de Referencia de Omeprazol Base (Preparar por duplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, disolver con 2.5 mL de etanol, disolver por sonicación durante 5 minutos y llevar a volumen con medio de disolución para curva de calibración. Tomar una alícuota de 5mL de la solución anterior y transferir a un matraz volumétrico actínico de 50mL, llevar a volumen de aforo con a medio de disolución para la curva, mezclar perfectamente. Filtrar a través de un filtro millex HN PVDF 0.45 µm, descartar los primeros mL del filtrado y transferir a viales para CLAR.

a) Especificidad. Preparación de la solución placebo de Omeprazol Base (Preparar por duplicado): Pesar aproximadamente 2315mg de Placebo y depositarlo en un matraz actínico volumétrico de 100mL, adicionar aproximadamente 50mL de medio de disolución y sonicar por 10 minutos, dejar enfriar y volver a sonicar por 10 minutos. Dejar enfriar y llevar a volumen con medio de disolución, tomar una alícuota de 5mL de muestra y añadir 1mL de hidróxido de sodio 0.5M, mezclar perfectamente. Filtrar a través de un filtro millex HN PVDF 0.45 µm, descartar los primeros mL del filtrado y transferir a viales para HPLC. Preparación del blanco: Tomar una alícuota de 5 mL de medio de disolución y añadir 1 mL de hidróxido de sodio 0.5M, agitar, filtrar a través de filtro de HN 0.45 µ al momento de pasar a viales cromatograficos. Preparación de la muestra: Colocar 20 tabletas y pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y tranferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, adiconar 20 ml de etanol absoluto y 30 mL de medio de disolución, disolver por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con medio de disolución. Tomar una alícuota de 2.5 mL, llevar a volumen, mezclar perfectamente. Filtrar a través de un filtro de HN PVDF 0.45 µ al momento de pasar a viales cromatograficos.

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b) Exactitud y Repetibilidad del Método.

Solución muestra de Omeprazol Base (preparación por Sextuplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL).

c) Linealidad del Método.

Solución muestra de Omeprazol Base al 10% (Preparación por Sextuplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y la cantidad de polvo equivalente a 18.52 mg de Omeprazol Base del producto terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.001852 mg/mL ). Solución muestra de Omeprazol Base al 100% (Preparación por Sextuplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL). Solución muestra de Omeprazol Base al 120% (Preparación por Sextuplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 222.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y la cantidad de polvo equivalente a 222.20 mg del producto terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.02222 mg/mL).

d) Precisión del Método.

Solución muestra de Omeprazol Base al 100% (Preparación por Sextuplicado): Pesar con exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 34 de67 

 

Base y la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL).

e) Estabilidad Analítica de la Muestra.

Se toman tres muestras de las utilizadas para exactitud a los tiempos necesarios. f) Límite de Detección.

Tomar como solución stock y preparar soluciones a 0.463, 0.74, 0.929 y 1.11 μg/mL. g) Límite de Cuantificación.

De las soluciones preparadas para límite de detección se determina el límite de cuantificación.

h) Tolerancia. Preparar el estándar y dos muestras como se muestra en la precisión del método. Inyectar en dos equipos cromatograficos con las mismas condiciones, muestras y fase móvil.

k. Reporte de Validación. VI. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.

A. Revisión bibliográfica.

Se realizó una revisión obteniendo información útil en 3 farmacopeas (española (19), mexicana (18) y americana (24)) y 10 artículos.

Análisis: al realizar la revisión bibliográfica no se encontró información en primeras fuentes con respecto a las metodologías analíticas, ya que la forma farmacéutica en las farmacopeas es de capsula de gelatina dura, con gránulos recubiertos y no existe una metodología especifica de tabletas, sin embargo, se encontró bastante información en artículos, con la limitante que se refieren a bioquivalencia, plasma y no a métodos analíticos para producto.

B. Estandarización del principio activo Omeprazol base según FEUM.

Se analizaron las características químicas. Solubilidad: Soluble en diclorometano y soluciones alcalinas, moderadamente soluble en

metanol y alcohol, poco soluble en acetona y alcohol isopropilico e insoluble en agua. (18) Valoración (98% a 102%): se obtiene un resultado de 100.24%.(18) Humedad: 0.8638%. (18)

Análisis: los resultados obtenidos fueron satisfactorios, ya que muestran que la materia prima del principio activo, que se estandarizó, puede ocuparse para los estudios correspondientes cumpliendo con las especificaciones.    

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 35 de67 

 

 

C. Condiciones de las diferentes metodologías encontradas.

Mediante características, recursos con que se cuentan en el laboratorio y sin los problemas del método anterior, se eligieron dos opciones de metodologías, se compararon con el método anterior y se determino una fase móvil de mejores características. Las tres metodologías se reprodujeron tal como se encuentran descritas en la bibliografía, utilizando condiciones constantes para las tres: columna (Xbridge C18), equipo (Waters, Alliace ), y el detector (arreglo de diodos). La Fase móvil A tenía problemas de saturación de sales, por lo que fue necesario realizar un lavado exhaustivo, la vida útil de la columna es de aproximadamente dos meses con trabajo continuo (aproximadamente 1000 inyecciones).

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 36 de67 

 

PROPIEDADES FASE A

(método anterior) FASE B FASE C

Fase Móvil

Acetonitrilo : Buffer de Fosfatos 1M con Fosfato

Dibásico de Sodio y Fosfato monobásico de sodio (66:34)

Metanol : Agua+1% de Trietilamina (60:40)

Acetonitrilo : Buffer de fosfatos 0.05 con Fosfato

Monobásico (65:35)

pH 7.6 7.4 8.5

Columna Watters Xbridge C18 150 x 4.6

mm, 5μm Bondapack C18 300 x 3.9

mm, 5μm Watters Symmetry C18

150 x 4.6 mm, 5μm

Flujo (mL/min.) 1 2 1

Tiempo de Retención

obtenido (min.) 3.5 8.5 2.71

Tabla 12. Comparación de metodologías analíticas en bibliografía contra metodología anterior (29)

Análisis: Al presentar problemas con saturación de las sales fue necesario buscar metodologías que eviten saturación en Fase A considerando que deben ocuparse recursos de fácil acceso para el laboratorio, se decidió probar dos fases móviles la B y la C como se muestra en la Tabla 12, B es una fase móvil con recursos de fácil acceso y sin contenido de sales evitando el problema de la fase A, por otro lado la Fase móvil C es accesible y con una concentración menor de fosfatos para evitar la saturación de la columna

D. Optimizaciones:

Se realizaron optimizaciones en los siguientes puntos.

1. Fase Móvil. Se realizaron modificaciones para optimizar las condiciones de la fase móvil B y C en la tabla 12, ya que se encontró que no se tenían problemas para utilizarse. Para reproducir estas modificaciones se ocupó la mismas columna (Watters Xbridge C18 150 x 4.6 mm, 5μm), y Cromatógrafo de líquidos de alta resolución (CLAR) Waters con detector de arreglo de diodos. Con calibración vigente. HPLC 1 M03296403M Waters, Inyector: Automático  

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 37 de67 

 

Condiciones cromatográficas

Fase Móvil B Fase Móvil C

Proporción 50-50 60-40 75-25 65-35 62.5-37.5 55-45

Tiempo de retención (tR) 4.7 3.08 1.7 3.47 3.12 2.54

Factor de simetría (t) 1.09 1.15 1.2 1.31 1.30 1.37

Área (μV*S) 352146 338945 318812 553,873 511,030 501,639

Platos teóricos (N) 6132.13 6085.7 5475.58 8,277.05 8,423.03 6,447.48

Factor de Capacidad (K´) 3.7 2.02 0.7 2.47 2.12 1.54

Presión (Psi) 2837 2837 2910 1130 1195 1700

Tabla 13. Optimización de la polaridad de las fases móviles B y C La optimización de las polaridades de la fase móvil B y C se determino por medio de sus respuestas analíticas que se muestran en la Tabla 13, con estos valores se determino la proporción ideal de cada fase móvil.

Condiciones Cromatográficas

Fase Móvil C 62.5:37.5

Fase Móvil B 50:50

Muestra Estándar Placebo Cargado

Estándar Placebo Cargado

Tiempo de retención (tR)

2.43 2.5 5.56 5.63

Factor de simetría (t) 1.06 1.31 1.09 1.1

Área (μV*S) 1922406 410566 2022530 399206

Platos teóricos (N) 7411.23 7277.12 3436.4 6781.04

Factor de Capacidad (K´)

1.43 1.5 4.56 4.63

Presión (Psi) 1540 1447 2380 2240

Tabla 14. Comparación de la fase móvil B y C con respecto a su respuesta del estándar y placebo cargado.

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 38 de67 

 

Análisis: Al realizarse modificaciones en la polaridad de las fases móviles en la bibliografía se encontró una proporción en cada fase móvil, tabla 14 evaluándose la respuesta del estándar y del placebo cargado; encontrándose que la fase móvil C con la proporción 62.5:37.5 tiene mejor respuestas analíticas evaluadas con respecto a la fase móvil B.

2. Columna. Condiciones

cromatográficas Columna

Waters Varian

Flujo (mL/min) 1.0 1.0

Tiempo de retención (tR, min.)

2.58 2.73

Factor de simetría (t) 1.29 1.13

Área (μV*S) 408448 392662

Platos teóricos (N) 9143.85 9685.12

Factor de Capacidad (K´)

1.58 1.73

Presión (Psi) 1590 1100

Tabla 15. Comparación de fabricantes de columna.

Se evaluaron dos columnas C18 que tienen las mismas especificaciones, longitud de 4.6 x 150 mm y tamaño de partícula de 5 μm, solo que los proveedores son diferentes, una de ellas es Waters marca Xbridge C18 y la otra es Agilllent Thecnologies de Varian, marca Eclipse Plus C18.

Análisis: En la Tabla 15 se muestran los resultados de cada una de las columnas observándose una mejor respuesta analítica en la columna Varian en presión, factor de capacidad, platos teóricos, factor de simetría, además de ser de menor costo, mientras que con Water solo muestra una mejor respuesta en el tiempo de retención.  

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 39 de67 

 

3. pH.

Se evaluaron tres diferentes pH de la fase móvil que fueron 7, 7.5 y 8.5, que se determinaron a partir de la información bibliográfica la cual menciona un pH óptimo de 8.5, para evitar el desgaste de los grupos sinalones de la columna en pH alcalinos se redujo el pH a dos más neutros.

pH 7.0 7.5 8.5

Tiempo de Retención TR 4.9 4.2 2.73

Tabla 16. Comparación del pH con respecto al tiempo de retención de la muestra.

Análisis: Los resultados de la Tabla 16 muestran que el pH optimo es de 8.5, para mantener un tiempo de retención menor, no lográndose evitar un desgaste menor a la columna.

4. Velocidad de Flujo. Se propusieron tres velocidades de flujo diferentes a las cuales fueron de 0.8 mL/min, 1 mL/min y 1.2 mL/min.

Condiciones

cromatográficas Flujo (mL/min)

0.8 1.0 1.2

Tiempo de retención (tR) 3.4 2.73 2.28

Factor de simetría (t) 1.12 1.13 1.13

Área (μV*S) 469,844 392,662 318,869

Platos teóricos (N) 10723.15 9685.12 8918.95

Factor de Capacidad (K´) 2.4 1.73 1.28

Presión (Psi) 860 1100 1500

Tabla 17. Optimización de la velocidad de flujo.

Análisis: En los resultados de la Tabla 17 se observa que la velocidad de flujo más optima es la del flujo de 1 mL/ min, a pesar que las condiciones de flujo de 0.8 mL/min presentan mejores resultados el tiempo de retención no es favorable por lo que se establece que el mejor tiempo a utilizar es el de 1 mL/min.

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 40 de67 

 

5. Temperatura de la Muestra.

Las temperaturas de la muestra evaluadas fueron 10, 15, 25 y 35 °C.

Condiciones cromatograficas

Temperatura (°C)

10 15 25 35

Tiempo de retención (tR) 2.54 2.44 2.47 2.42

Factor de simetría (t) 1.29 1.40 1.50 1.60

Área (μV*S) 391036 378,364.00 370,465.00 385,596.00

Platos teóricos (N) 4971 5911.9 6392.19 5894.47

Factor de Capacidad (K´) 1.54 1.44 1.47 1.42

Tabla 18. Optimización de la temperatura de muestra. Análisis: Como se muestra en la Tabla 18 las temperaturas recomendadas a utilizar son cercanas a temperaturas de refrigeración para evitar la descomposición como establece el estándar USP, solo que reduce la cantidad de platos teóricos, pero la temperatura ideal para mantener la muestra es de 10 °C, tienen mejores propiedades en comparación con las otras temperaturas, y además la otras temperaturas presentan inestabilidad en solución a las 8 horas.

6. Temperatura de Columna. Se evaluaron diferentes temperaturas en la columna con 21, 30 y 39 °C.

Condiciones cromatográficas

temperatura (°C)

21 30 39

Tiempo de retención (tR) 2.57 2.54 2.41

Factor de simetría (t) 1.3 1.29 1.32

Área (μV*S) 397,606 391,036 399,608

Platos teóricos (N) 4824 4971 4925

Factor de Capacidad (K´) 1.57 1.54 1.41

Presión (Psi) 1100 1100 1100

Tabla 19. Comparación de temperaturas de columna.

 

AnálisistemperTabla degraddemora

7. Se optcondiciya que que noNaOH

Figurderec

Fig

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daciones, ea en el cale

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| RESULTAD

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DOS Y ANALIS

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IS DE RESULT

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Página 

1, 30 y 39 como se muóricos, peratura ambia 30°C.

te. Al deteparación demuestra, demodificó la cempo de re

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41 de67 

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8.

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20. Efecto

| RESULTAD

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DOS Y ANALIS

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IS DE RESULT

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TADOS. 

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Página 

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42 de67 

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Posterimismo fenóme Análisisanalíticactivo ymetodo

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| RESULTAD

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DOS Y ANALIS

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IS DE RESULT

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TADOS. 

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a problematro que no s. Obtenién.45 μm).

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e nylon + vi0.45 μm)

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Página 

n dos difereNylon de 0.

drio, enconno se enc

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43 de67 

ntes viales 45 μm

ntrándose econtró este

del método el principioal para esta

el e

o o a

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 44 de67 

 

9. Evaluación de la optimización.

CONDICIONES RESULTADOS

Fase Móvil Acetonitrilo: Buffer de Fosfatos 0.05 M con Fosfato

Monobásico de Sodio (37.5:62.5)

pH 8.5

Columna Varian Agillent Eclipse Plus C18 150 x 4.6 mm, 5μm

VIALES Ámbar

FILTROS PVDF 0.45 μm

Flujo 1.0 mL/min

Tiempo de Retención 2.56

Temperatura de Columna 30 °C

Temperatura de Muestra 10 °C

Tabla 21. Condiciones de la metodología Optimizada

Análisis: Establecidas las condiciones de la metodología analítica se probaron para ver la confiabilidad del método para análisis del producto, además que se observaron las optimizaciones dadas en comparación con el método, obteniendo una metodología optimizada y candidata a validarse.

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 45 de67 

 

Método Columna Fase Móvil pH Velocidad de Flujo (mL/min)

Temperatura de muestra

(°C)

Temperatura de columna

(°C)

Volumen de

Inyección (μL)

Tiempo de Retención

(min)

Fase Móvil A (Método Anterior)

Xbridge C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca

Waters de 5µm Part. No.186003116

34:66 (Acetonitrilo : Fosfato

Monobásico de Sodio 0.1 M)

7.6 1.0 10 30 20 3.5

Fase Móvil B

Xbridge C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca

Waters de 5µm Part. No.186003116

60:40 (Metanol : Agua

+Trietilamina) 7.4 1.0 10 30 20 8.5

Fase Móvil C

Xbridge C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca

Waters de 5µm Part. No.186003116

35:65 (Acetonitrilo : Fosfato

Monobásico de Sodio 0.05 M)

8.5 1.0 10 30 20 2.71

Fase Móvil D (Fase B Optimizada)

Xbridge C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca

Waters de 5µm Part. No.186003116

50:50 (Metanol : Agua

+Trietilamina) 7.5 1.0 10 30 20 4.7

Fase Móvil E (Fase C Optimizada)

Xbridge C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca

Waters de 5µm Part. No.186003116

37.5:62.5 (Acetonitrilo :

Fosfato Monobásico de Sodio 0.05M)

8.5 1.0 10 30 20 3.12

Fase Móvil F (Fase Completamente

Optimizada

Agillent Eclipse Plus C18 150 mm x 4.6 mm SM Marca Varian de

5µm Part. No.959993-902

37.5:62.5 (Acetonitrilo :

Fosfato Monobásico de Sodio 0.05M)

8.5 1.0 10 30 20 2.56

Tabla 22 Comparación de las fases móviles establecidas a lo largo del desarrollo y optimizaciones hechas.

 

 

E. V

1.

 

0

100000

200000

300000

400000

500000

600000

Área

alidación d. Sistema.

a. Precisió CV= 0.792∴ El siLos cálcu

b. Adecua CV = 0.79K᾿=2.7667R = 2.565T = 1.5 ∴ El siLos cálcu

c. Linealid

∴ El siEn la figurLos cálcu

0

0

0

0

0

0

0

0

| RESULTAD

del Método

ón del Siste

23 stema tienelos se mue

abilidad del

923 7 5

stema tienelos se mue

dad del Sist

Fi

stema es lira 19 se oblos se mue

0.005

DOS Y ANALIS

o Analítico

ema:

e precisión.stran en el

Sistema.

e Adecuabistran en el

tema

gura 19 Gra

neal. bserva el grstran en el

0.01Conc

LINE

IS DE RESULT

o, evaluand

. ANEXO 1

lidad. ANEXO 1

afica de Line

rafico que sANEXO 2

y =

0centración (mg

EALIDAD

TADOS. 

do los sigu

ealidad del S

señala que

= 23815450.93R² = 0.999

0.015g/mL)

 DEL SIS

uientes pun

Sistema

el Sistema

3x + 1401.725893299

0.02

STEMA

Página 

ntos.

es Lineal

0.025

46 de67 

5

 

2.. Métodos. a. Especif

Figur

Figura

| RESULTAD

ficidad.

ra 20 Crom

a 21 Croma

DOS Y ANALIS

matograma d

atograma d

IS DE RESULT

de especific

e especific

TADOS. 

cidad que m

cidad que m

muestra el B

muestra el P

Página 

BLANCO.

PLACEBO.

47 de67 

 

 

 

 

Figura

| RESULTAD

a 22 Croma

DOS Y ANALIS

tograma de

IS DE RESULT

e especificid

TADOS. 

dad que muuestra el ES

Página 

STANDAR

48 de67 

 

R.

 

Figura 23 Cr

∴ El mes el o

| RESULTAD

romatogram

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DOS Y ANALIS

ma de espe

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IS DE RESULT

cificidad qu

cidad ya q

o se muestr

TADOS. 

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el ESTAN

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Página 

DAR CARG

a es la del 21, 22 y 23.

49 de67 

 

GADO.

analito que..

e

 

 

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

Can

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g)b. Exactitu

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c. Linealid

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∴ El mLos cálcu

0

20

40

60

80

00

20

40

60

80

00

0 20

| RESULTAD

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ervalo de colculos se m

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Figmétodo es lin

los se mue

0 40

DOS Y ANALIS

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todo.

cobro

e observa eada contra C

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60 80Canti

LINE

IS DE RESULT

Método:

e 98.5312% el ANEXOd y Repetib

el grafico quCantidad R

afica de Line

ANEXO 4

y

0 100idad Adicionad

EALIDAD

TADOS. 

%<100%<10O 3 bilidad.

ue señala qRecuperada

ealidad del

y = 1.00030034R² = 0.99

120 140da (mg)

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00.1092%

que el métoa

Método

42x ‐ 0.095440899834248

0 160

ÉTODO

Página 

odo es Linea

89

180 200

50 de67 

al.

0

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 51 de67 

 

d. Precisión del Método. 99.6517% CV = 1.1040% ∴ El método tiene Precisión Intermedia. Los cálculos se muestran en el ANEXO 5

e. Estabilidad Analítica de la Muestra.

|di| = 1.6084% ∴ La Estabilidad Analítica de la Muestra es de 36 horas. Los cálculos se muestran en el ANEXO 6

f. Tolerancia.

CV = 1.2727% ∴ Existe tolerancia entre equipos (1 y 2) Los cálculos se muestran en el ANEXO 7

g. Límite de Detección.

LD=0.463 ppm ∴ Demuestra que con 0.463 genera una respuesta con respecto al blanco. Los cálculos se muestran en el ANEXO 8

h. Límite de Cuantificación. LC=0.74 ppm ∴ Demuestra que la mínima cantidad que se puede cuantificar con este método es 0.74 ppm teniendo valores confiables. Los cálculos se muestran en el ANEXO 9

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 52 de67 

 

3. Comparación de métodos.

PARAMETROS ESPECIFICACIÓN MÉTODO

ANTERIOR MÉTODO OPTIMIZADO

ESPECIFICIDAD

La respuesta del método debe ser únicamente debida al analito.

CUMPLE CUMPLE

EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO

98% -102% CV < 2%

99.0472% CV = 1.9308%

99.3202% CV = 1.5589%

LINEALIDAD DEL MÉTODO

CA vs CR r2 ≥ 0.99 CVY/X ≤ 2% Porcentaje de Recobro 98% -102% CV < 2%

CA vs CR r2 = 0.9939 CVY/X = 1.5109% Porcentaje de Recobro 100.9360% CV = 1.4567%

CA vs CR r2 = 0.9998 CVY/X = 1.4071% Porcentaje de Recobro 99.6411% CV = 1.0701%

PRECISIÓN DEL MÉTODO

98% -102% CV < 2%

99.0472% CV = 1.8934%

99.6517% CV = 1.1040%

Tabla 23 Comparación de desempeño entre dos métodos analíticos.

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 53 de67 

 

4. Reporte de Validación.

PARAMETROS ESPECIFICACIÓN RESULTADOS S

IST

EM

A

PRECISIÓN DEL SISTEMA

CV ≤ 1.5% CV= 0.7923

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

CV ≤ 2% K᾿ > 2 R > 2 T < 2

CV = 0.7923 K᾿=2.7667 R = 2.565 T = 1.5

LINEALIDAD DEL SISTEMA 2.5 mg a 30 mg

r2 ≥ 0.98

r2 = 0.9998

Tabla 24 Resultados de los parámetros del Sistema del método optimizado. PARAMETROS ESPECIFICACIÓN RESULTADOS

ME

TO

DO

ESPECIFICIDAD

(Ver figuras de la 23 a la 26)

La respuesta del método debe ser únicamente debida al analito.

CUMPLE

EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO

98% -102% CV < 2%

99.3202% CV = 1.5589%

LINEALIDAD DEL MÉTODO

CA vs CR r2 ≥ 0.99 CVY/X ≤ 2% Porcentaje de Recobro 98% -102% CV < 2%

CA vs CR r2 = 0.9998 CVY/X = 1.4071% Porcentaje de Recobro 99.6411% CV = 1.0701%

PRECISIÓN DEL MÉTODO

98% -102% CV < 2%

99.6517% CV = 1.1040%

ESTABILIDAD ANALITICA DE LA MUESTRA

|di| ≤ 2% |di| = 1.6084%

TOLERANCIA CV < 2% CV = 1.2727% LIMITE DE DETECCIÓN LD debe ser menor a la

prueba de impureza límite LD 0.463 ppm

LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

LC debe ser menor a la especificación de contenido

LC 0.74 ppm

Tabla 25 Resultados de parámetros del método para la metodología optimizada.

| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 54 de67 

 

5. Optimización en costos y consumibles (Tabla comparativa de métodos analítico).

MÉTODO ANALITICO ANTERIOR MÉTODO ANALITICO OPTIMIZADO CONDICIONES COSTO

($ dólares) COSTO

($ dólares) Fase Móvil** Acetonitrilo :

Buffer de Fosfatos 1M con Fosfato Dibasico

de Sodio y Fosfato

monobásico de sodio

(34:66)

Acetonitrilo: 60/galón

Fosfato de Dibasico de

Sodio: 38/500g

Hidróxido de Sodio

40/500g Costo total:

16.01/L*

Acetonitrilo: Buffer de

Fosfatos 0.05 M con Fosfato

Monobásico de Sodio (37.5:62.5)

Acetonitrilo: 60/galón

Fosfato

Monobásico de Sodio:

34/500g Hidróxido de

Sodio 40/500g

Costo total: 6.4294/L*

Columna Watters Xbridge C18 150 x 4.6

mm, 5μm

2,000 Varian Agilent Eclipse Plus C18 150 x 4.6 mm,

5μm

558

Viales Ámbar** Water 0.8 pza. 4000

Total Analytical 0.62 pza. 2100

Filtros** Nylon 0.45 μm 1.34 por pza. 6700

PVDF 0.45 μm 1.48 por pza. 7400

Flujo 1.0 mL/min 0.0160 1.0 mL/min 0.0064

Tiempo de Retención

3.5 0.056 (respecto al costo

de un litro de fase móvil y el

gasto con respecto al

tiempo )

2.56 (respecto al costo

de un litro de fase móvil y el

gasto con respecto al

tiempo )

0.0164

Tiempos por inyección**

6 min. 30L/anual

0.96 483

min. 25L/anual

0.032 160.735

Jeringas** ---- 0.37 1850/anual

---- 0.37 1850/anual

Mano de obra Becario

Auxiliar de

Laboratorio**

Preparación de la muestra y equipo

Lavado de

material

3555/anual

28444/anual

Total: 31999.416

Preparación de la muestra y equipo

Lavado de

material

3555/anual

28444/hora

Total: 31999.416

Costo total anual (5000

inyecciones).

Análisis/anual Total: 47,032 Pesos Mx: 634,932

Análisis/anual Total: 44,068 Pesos Mx: 594,914

*Sin considerar el costo de la cantidad de agua utilizada. ** Considerando que es anual y cada consumible es por inyección. Tabla 26 Tabla comparativa de costos entre la metodología anterior y la optimizada.

| CONCLUSIONES  Página 55 de67 

 

VII. CONCLUSIONES

Se optimizó el método al reducir el volumen de fase móvil que se ocupa, se cambió el fabricante de columna de Waters a Agilent Technologic, por medio de la optimización se redujo los costos del análisis, como se muestra en la tabla 25 en donde se muestra el costo total del análisis hechos en un año. El método esta validad en un rango útil de 1.5 mg hasta 30 mg.

Se optimizó la metodología reduciéndose la concentración de sales de 1M a 0.05M de

la fase móvil, solucionándose el problema de saturación de la columna.

 

El método optimizado quedo validado en un 99.3202 % (98.5312 %-100.1092 %) en

un rango de 90.0 % a 110.0 % con un coeficiente de variación de 1.5589.

 

Se redujeron los costos por medio de una comparación del gasto total anual, ya que

con el método anterior haciende a $634,932.00 y con el método optimizado es de $594,914.00, ahorrándose con el nuevo método $40,018.00 con el cambio de fabricantes de columna y reducción de la cantidad de sales de 1M a 0.05 M de la fase móvil acortando 0.94 mL/min los tiempos de retención y aumentando la vida media de la columna.

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VIII. SUGERENCIAS

A. Se sugiere ocupar este método para disolución, siempre y cuando se valide para

disolución, ya que maneja concentraciones bastante amplias para ser utilizado para la disolución.

 

 

B. Se sugiere probar con el omeprazol del enantiomero más activo

terapéuticamente, para evaluar si este método es útil para este omeprazol, siempre y cuando se valide, ya que el omeprazol ocupado es una mezcla de los enantiomeros del omeprazol.

 

 

 

 

C. Es útil este método como indicativo de estabilidad, siendo validado, ya que se

muestra una buena concentración detectada y cuantificable para ser usado y las degradaciones no muestran traslape entre el activo y entre ellas. Por lo cual seria ensayar con las impurezas del omeprazol antes de validar.

| REFERENCIAS  Página 57 de67 

 

IX. REFERENCIAS 1) Goodman, A. Gilman, The Pharmacologigical Basic Therapeutics. 6ª. Mc Millan

Publishing Co. Inc. New York. USA 2005 pp 605- 614 2) NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y

procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas

3) García MA, Soberón E, Cortés M, Rodríguez R, et al. Guía de Validación: Métodos Analíticos,

4) CONNORS Kenneth “Curso de Analisis Farmaceutico”2da Edición Ed. Reverte 1981 España.

5) NOM-059-SSA1-1993, Buenas prácticas de fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la fabricación de medicamentos

6) WATERS: The Science of wath´s possible. Estados Unidos de América. [Internet] 2010. [Consultado el 15 de Abril del 2010] Disponible en: http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10048919 Consultado el 20 de Julio del 2011

7) Skoog, Douglas A. y Leary, James J. Análisis Instrumental, Madrid: McGraw-Hill; 2010.

8) Mc Master, Marvin. HPLC: A Practical User's Guide. Wiley-VCH; 1994. 9) Hamilton, RJ, Sewell PA, Introduction to high performance an liquid

chromatography, J. Willey & Sons Ind USA; 1997 10) Agilent HPLC: Column Selection Guide Agillent Tecnologies 11) Sadek, P the HPLC solvent guide, 2a Ed. John Wiley & Sons, EUA, 2002 12) Amersham Pharmacia Biotech. Catalogo 1998 Cromatograhy columns and

media. 13) Horvath. In High Performance Liquid Cromatography. Vol. 1 & 2. Academic

Press.: New York. 1980. 14) Schoenmakers. PJ. Optimization of Cromatographic Selectivity. Elsevier.

Science Publishing. 1986. 15) Scott PW . Cromatographic detectors. Marcel Dekker Inc: EUA 1996 16) Encarnación García Montoya, Tesis Doctoral: Optimización, validación y

modelización de un proceso de fabricación de comprimidos. Universidad de Barcelona, Facultad de Farmacia , Junio del 2001 http://tdx.cat/bitstream/handle/10803/1608/TOL82A.pdf?sequence=1 Consultado el 10 de Febrero del 2011

17) FDA. Estados Unidos de América [Internet] 2010 [Consultado 15 de Octubre del 2010] Disponible en: http://www.fda.gov/downloads/RegulatoryInformation/Guidances/UCM128048.pdf

18) Secretaria de salud. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. 9ª Ed. México; 2010 y 10ᵃ; 2012.

| REFERENCIAS  Página 58 de67 

 

19) Real Farmacopea Española Ministro de Sanidad y Consumo de Madrid (2005)

Formas Farmaceuticas, 3era Edicion Vol. 1, Madrid

20) Remintong, Farmacia, 20a. edición, Panamericana, Buenos Aires, Argentina 2003.

21) Rowe Raymond, Handbook of pharmaceutical excipients, 4ª ed. Great Britain

2003.

22) Martindale. The Extra Pharamacopeia. 20 th The Pharmaceuticals Press London, 103.2004

23) Mayoldel J, Heckelman PE. The Merck Index. 40 ª Ed New Jersey, EUA: Merck Research Laboratories; 2006.

24) Convención de la Farmacopea de los Estados Unidos. 32ª Ed. Rockville, EUA: USP 32 NF25; 2009.

25) Meffot M, Ossel D, Widdop B. Clarke´s Analisys of Drug and Poisons in Pharmaceutical. 3 ª. Ed Chicago, EUA: Pharmaceutical Press; 2004.

26) Farmacopea Argentina Monografías y Preparados Farmacéuticos [Internet]. Argentina: Farmacopea Argentina, vol. 1 7 ª Ed.2010 [consulta el 20 de Julio del 2010] [Fecha de Actualización 20 de Julio del 2010]. Disponible en: http://www.salutia.com.ar/Sitio/Sp/Servicios/Vademecum/Farmacopea_Argentina/Especif/sp_Vademecum_Farmacopea_Drogas_Omeprazol.htm Consultado el 10 de Agosto del 2011

27) Katsung, Bertram, Masters, Susan; Thevor, Anthony.Farmacologia basica y Clinica. Editorial Mac Graw Hill, México, 2010.

28) Cuadro Basico de Medicamentos 2012 [Consultado el 01 de _mayo del 2012] Disponible en : http://www.df.gob.mx/index.php/cuadro-basico-de-medicamentos

29) Lunn G. HPLC methods for pharmaceutical analysis. Vol 1 John Willey &Sons.EUA 2000.

| ANEXO 1  Página 59 de67 

 

ANEXO 1 PRECISIÓN DEL SISTEMA Y ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Respuesta del Analito TIEMPO DE RETENCIÓN FACTOR DE COLEO

AREA TIEMPO DE RETENCIÓN FACTOR DE COLEO PLATOS TEÓRICOS Criterio de Aceptación R>2 T<2

463248 2.56 1.5 5826 2.56 1.5

463684 2.57 1.5 5799 2.57 1.5

460746 2.57 1.5 5860 2.57 1.5

460657 2.56 1.5 5858 2.56 1.5

458160 2.56 1.5 5907 2.56 1.5

462511 2.57 1.5 5771 2.57 1.5

ẏ 461501

n 6

Σy2 1.27792E+12

Σy 2769006

DESVIACIÓN ESTANDAR 3656.778058

COEFICIENTE DE VARIACIÓN 0.792366226

ADECUABILIDAD Y PRESICIÓN DEL SISTEMA PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

 

ANEXOLINEA

O 2 LIDAD DELL SISTEMA

| ANEXO

A

O 2  Página 60 de67 

| ANEXO 3  Página 61 de67 

 

ANEXO 3 EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO

n NIVEL (%) CANTIDAD ADICIONADA (mg) CANTIDAD RECUPERADA (mg) % RECOBRO (y) y2

1 100 18.84 18.72 99.36305732 99.2430573 9873.01716

2 100 18.84 18.71 99.30997877 99.1799788 9862.47188

3 100 18.53 18.49 99.78413384 99.7441338 9956.87337

4 100 18.53 18.46 99.62223421 99.5522342 9924.58955

5 100 18.76 18.35 97.81449893 97.4044989 9567.6762

6 100 18.76 18.27 97.3880597 96.8980597 9484.43417

7 100 18.67 18.65 99.89287627 99.8728763 9978.58673

8 100 18.67 18.67 100 100 10000

9 100 18.77 18.8 100.1598295 100.18983 10031.9914

10 100 18.77 18.78 100.0532765 100.063277 10010.6581

11 100 18.76 18.59 99.09381663 98.9238166 9819.58449

12 100 18.76 18.64 99.36034115 99.2403412 9872.47739

ẏ 99.32017524

n 12

Σy2 118382.3605

Σy 1191.842103

DESVIACIÓN ESTANDAR 1.548330979

COEFICIENTE DE VARIACIÓN 1.558928964

MEDIA ARITMETICA 99.32017524

t cal0.975,n‐1 2.201

INTERVALO DE CONFIENZA 98.5312 <100< 100.1092

LIMITE INFERIOR PARA EL INTERVALO DE CONFIENZA DEL PORCENTAJE DE RECOBRO 98.53117974

LIMITE SUPERIOR PARA EL INTERVALO DE CONFIENZA DEL PORCENTAJE DE RECOBRO 100.1091707

CONTRASTE DE HIPOTESIS

Ho: LA MEDIA ES IGUAL A 100%

Hi: LA MEDIA ES DIFERENTE A 100%

REGIÓN DE ACEPTACIÓN

SI t (tab;n‐1;0.025) < tcal <  t (tab;n‐1;0.0975)

0 < 0.25196 < 0 POR LO TANTO  CUMPLE

SI % DE RECOBRO < %RECOBRO PROMEDIO < % DE RECOBRO MAXIMO

98% < 98.53117974 < 100.1091707 POR LO TANTO  CUMPLE

EXACTITUD Y REPRODUCIBILIDAD DEL MÉTODO PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

 

ANEXOLINEA

O 4 LIDAD DELL MÉTODO

| ANEXO

O

O 4  Página 62 de67 

| ANEXO 5  Página 63 de67 

 

ANEXO 5 PRECISIÓN DEL MÉTODO

n Σy Σy2

12 1195.82 119178.771

y 99.6516667

s 1.10022174

CV 1.10406758

Por lo tanto el mátodo es reproducible por diferentes químicos en diferentes dias.

99.64

100.12

EXACTITUD Y REPRODUCIBILIDAD DEL MÉTODO PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

99.52

101.31

100.27

DIA

ANALISTA

1 2

1

2

100.9

99.68

100.65

98.79

99.21

97.68

98.05

| ANEXO 6  Página 64 de67 

 

ANEXO 6 ESTABILIDAD DE LA MUESTRA

% Recobro de Omeprazol Base

INICIAL

0 HORAS (y0) 12 HORAS (y

1) 18 HORAS (y

2) 24 HORAS (y

3) 32 HORAS (y

4)

1 99.3 98.04 99.52 97.89 98.8

2 99.25 98.38 99.52 97.45 97.56

3 99.75 97.97 99.34 98.85 96.47

4 99.6 99.26 99.06 99.06 97.3

5 99.86 97.52 100.33 97.73 99.39

6 99.94 100.24 99.16 97.73 98.53

SUMATORIA 597.7 591.41 596.93 588.71 588.05

MEDIA ARITMETICA: 99.6166667 98.56833333 99.48833333 98.11833333 98.00833333

NUMERO DE MUESTRAS DE ANALISIS: 6El valor no debe 

exeder al 2 %

ӯ0= 99.6166667 │d1│= 1.048333333 CUMPLE

ӯ1= 98.5683333 │d2│= 0.128333333 CUMPLE

ӯ2= 99.4883333 │d3│= 1.498333333 CUMPLE

ӯ3= 98.1183333 │d4│= 1.608333333 CUMPLE

ӯ4= 98.0083333

LA MUESTRA ANALITICA ES ESTABLE A LAS 18 HORAS

LA MUESTRA ANALITICA ES ESTABLE A LAS 24 HORAS

LA MUESTRA ANALITICA ES ESTABLE A LAS 36 HORAS

ESTABILIDAD DE LA SOLUCIÓN ANALITICA PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

TIEMPO DE ALMACENAMIENTO EN EL INYECTOR EN 

CONDICIONES DE 10 ° C y PROTEGIDO DE LA LUZ

Número de 

Muestras

POR LO TANTO:

LA MUESTRA ANALITICA ES ESTABLE A LAS 12 HORAS

| ANEXO 7  Página 65 de67 

 

ANEXO 7 TOLERANCIA

MUESTRA HPLC 1 HPLC 2 y2

1 100.4 98.665 10080.16

2 102.075 100.3 10419.30563

3 102.037 101.125 10411.54937

304.512 300.09 9734.782225

10060.09

Σy= 604.602 10226.26563

Σy2= 60932.15284

n= 6

MEDIAARITMETICA 100.767

DESVIACIÓN ESTANDAR 1.282428166

COEFICIENTE DE VARIACIÓN 1.272666811  EL VALOR NO ES MAYOR DE 2%

ESTABILIDAD DE LA SOLUCIÓN ANALITICA PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

| ANEXO 8  Página 66 de67 

 

ANEXO 8 LIMITE DE DETECCIÓN

Area

1345

4035

10530

17073

22129

25955

0.74

0.926

1.11

Por lo tanto el LD se estima en 0.463 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior a 3 veces de ruido.

LIMITE DE DETECCIÓN PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

Muestra

Placebo Analitico (Blanco o Ruido)

3*Ruido

Analito (ppm)

0.463

| ANEXO 9  Página 67 de67 

 

ANEXO 9 LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

Area

1345

13450

10530

17073

22129

25955

0.74

0.926

1.11

Por lo tanto el LC se estima en 0.74 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior a 10 veces de ruido.

LIMITE DE CUANTIFICACIÓN PARA LA OPTIMIZACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO DE OMEPRAZOL DE 20 mg TABLETA

Muestra

Placebo Analitico (Blanco o Ruido)

10*Ruido

Analito (ppm)

0.463