Embed Size (px)
Citation preview
Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
Ho Chi Minh City Journal of Medicine HỘI NGHỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT
KHOA DƯỢC – ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP. HỒ CHÍ MINH
LẦN THỨ 36 NGÀY 05 THÁNG 04 NĂM 2019
Chuyên Đề Dược
NGHIÊN CỨU Y HỌC
1 Hai C-glycosid flavonoid phân lập từ lá cây Xuyên
tiêu (Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC. Rutaceae)
*Lê Thị Ngọc Hiệp, Chung Khánh Linh, Lê Văn Huấn
6 Phân lập flavonoid từ phân đoạn có tính chống oxy
hóa của cây Viễn chí lá nhỏ (Polygala paniculata L.)
*Lê Văn Huấn, Nguyễn Thùy Dung, Bùi Thế Vinh,
Trần Công Luận
12 Xây dưng quy trinh đinh lương các flavonoid va
acid clorogenic trong Nư lang (Valeriana hardwickii)
băng UHPLC-MS
*Huynh Lơi, Nguyễn Thùy Vi, Trần Hùng
24 Tạo dòng kháng nguyên fliC của Edwardsiella ictaluri
khảm trong tiêm mao của Bacillus subtilis
*Huynh Xuân Yến, Nguyễn Anh Minh, Trần Cát Đông,
Vũ Thanh Thảo
32 Xác đinh epitop tiềm năng trên protein fliC và
OmpN3 của Edwardsiella ictaluri in silico để hướng
đến ứng dụng lam vaccin phòng bệnh gan thận mủ
*Nguyễn Thị Linh Giang, Nguyễn Anh Minh,
Huynh Xuân Yến, Trần Cát Đông, Vũ Thanh Thảo
40 Bao tử Bacillus subtilis cải thiện hậu quả sốc nhiệt
băng cách giảm tổn thương oxy hoá
*Dương Nguyễn Ánh Ngọc, Nguyễn Thị Linh Giang,
Trần Dương Thảo, Vũ Thanh Thảo, Trần Cát Đông
47 Khảo sát đặc điểm hinh thái, thanh phần hoá học và
hoạt tính kháng vi sinh vật của Đia y Dirinaria
applanata (Feé) D. D. Awasthi
*Phan Cảnh Trình, Võ Lê Công Tráng,
Dương Nguyễn Phi Long, Nguyễn Đinh Nga
55 Khảo sát mức độ nhạy cảm của nấm da phân lập tại
bệnh viện Da Liễu Thanh phố Hồ Chí Minh với
ketoconazol và terbinafin
*Nguyễn Thị Ngọc Yến, Phan Cảnh Trình,
Tôn Hoàng Diệu, Nguyễn Lê Phương Uyên
61 Khảo sát tác động kháng khuẩn của nhũ dich chứa
tinh dầu Tram tra úc va Hương nhu trắng trên vi
khuẩn Enterococcus faecalis gây viêm ống tuỷ răng
*Hà Đan Phương, Lê Tuấn Anh
70 Tổng hơp va xác đinh độ tinh khiết tạp B của
carvedilol
*Nguyễn Hữu Tiến, Trần Thị Ngọc Uyên,
Chương Ngọc Nãi, Trần Việt Hùng, Trần Hữu Dũng,
Nguyễn Đức Tuấn, Trương Ngọc Tuyền
(Xem tiếp trang 756)
Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP. HỒ CHÍ MINH
ISSN 1859-1779
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Tổng biên tập
NGUYỄN SÀO TRUNG
Phó Tổng biên tập
TRẦN DIỆP TUẤN
Ban biên tập
NGUYỄN PHƯƠNG DUNG
ĐỖ VĂN DŨNG
HỨA THỊ NGỌC HÀ
PHAN QUAN CHÍ HIẾU
TRẦN HÙNG
HOÀNG TỬ HÙNG
TRƯƠNG ĐÌNH KIỆT
NGÔ THỊ QUỲNH LAN
TRẦN THỤY KHÁNH LINH
THÁI KHẮC MINH
LÊ QUAN NGHIỆM
NGUYỄN DUY PHONG
VŨ MINH PHÚC
ĐẶNG VẠN PHƯỚC
VÕ TẤN SƠN
NGUYỄN DUY TÀI
TRỊNH THỊ DIỆU THƯỜNG
TRẦN THIỆN TRUNG
VÕ MINH TUẤN
Thư ký tòa soạn
BÙI QUANG VINH
Ban thư ký
LÊ ĐÌNH BẢO CHÂU
TRẦN THỊ THANH LOAN
HOÀNG THỊ PHƯƠNG
LÊ THANH TÂM
LÊ ĐÌNH BẢO VÂN
Ban trị sự
NGUYỄN THỊ HỒNG MINH
NGUYỄN THỊ THOAN
TRƯƠNG THỊ THÙY TRANG
Toà soạn và trị sự
217, Hồng Bàng, P. 11, Q5, TP. Hồ Chí Minh
ĐT: 08.38.558.411 Fax: 08.38.552.304 Email: [email protected]
Giấy phép hoạt động báo chí số 577/GP-BTTTT, do Bộ Thông Tin Và Truyền Thông cấp ngày 9/4/2012. In tại Xí Nghiệp In Nguyễn Minh Hoàng, địa chỉ: 510 Trường Chinh, Phường 13, Q. Tân Bình, TP. Hồ Chí Minh. In xong và nộp lưu chiểu tháng 04/2019
CONTENTS
* MEDICAL RESEARCHES
Two flavonoid c-glycosides from the leaves of Zanthoxylum
nitidum (Roxb.) DC., Rutaceae
* Le Thi Ngoc Hiep, Chung Khanh Linh, Le Van Huan .......... 1
Bio-guided isolation flavonoid from antioxidant extracts of
Polygala paniculata L.
* Le Van Huan, Nguyen Thuy Dung, Bui The Vinh,
Tran Cong Luan ......................................................................... 6
Quantitative analysis of flavonoids and chlorogenic acid
in Valeriana hardwickii by UHPLC-MS
* Huynh Loi, Nguyen Thuy Vi, Tran Hung ............................ 12
Cloning of mosaic fliC antigen of Edwardsiella ictaluri in
Bacillus subtilis flagella
* Huynh Xuan Yen, Nguyen Anh Minh, Tran Cat Dong,
Vu Thanh Thao ............................................................................ 24
Identification of potential epitopes on OmpN3 and fliC
protein from Edwardsiella ictaluri in silico to serve as vaccine
candidates against septicemia
* Nguyen Thi Linh Giang, Nguyen Anh Minh,
Huynh Xuan Yen, Tran Cat Dong, Vu Thanh Thao .............. 32
Bacillus subtilis spores improve outcomes of heat stroke by
reducing oxydative damage
* Duong Nguyen Anh Ngoc, Nguyen Thi Linh Giang,
Tran Duong Thao, Vu Thanh Thao, Tran Cat Dong ............... 40
Dirinaria applanata (Feé) D. D. Awasthi: morphology,
chemical composition and antimicrobial activity
* Phan Canh Trinh, Vo Le Cong Trang,
Duong Nguyen Phi Long, Nguyen Dinh Nga ......................... 47
In vitro susceptibility testing of dermatophytes isolated
from hospital of Dermatovenereology in Ho Chi Minh city
to ketoconazole and terbinafine
* Nguyen Thi Ngoc Yen, Phan Canh Trinh, Ton Hoang Dieu,
Nguyen Le Phuong Uyen .......................................................... 55
Study on the antibacterial activity of the emulsion
containing tea tree oil and ocimum gratissimum essential
oil on Enterococcus faecalis causing endodontic infection
* Ha Dan Phuong, Le Tuan Anh ............................................... 61
Synthesis and purity determinantion of carvedilol related
compound B
* Nguyen Huu Tien, Tran Thi Ngoc Uyen, Chuong Ngoc Nai,
Tran Viet Hung, Tran Huu Dung, Nguyen Duc Tuan,
Truong Ngoc Tuyen ................................................................... 70
(See page 756)
Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 22 * No 6 * 2018
Editorial Board
Prof. NGUYEN SAO TRUNG, MD, PhD.
A/Prof. TRAN DIEP TUAN, MD, PhD.
A/Prof. NGUYEN PHUONG DUNG, Pharm, PhD.
A/Prof. DO VAN DUNG, MD, PhD.
Prof. HUA THI NGOC HA, MD, PhD.
Prof. PHAN QUAN CHI HIEU, MD, PhD.
A/Prof. TRAN HUNG, Pharm, PhD.
Prof. HOANG TU HUNG, MD, PhD.
Prof. TRUONG DINH KIET, PhD.
A/Prof. NGO THI QUYNH LAN, MD, PhD.
TRAN THUY KHANH LINH, PhD.
A/Prof. THAI KHAC MINH, PhD.
Prof. LE QUAN NGHIEM, Pharm, PhD.
A/Prof. NGUYEN DUY PHONG, MD, PhD.
A/Prof. VU MINH PHUC, MD, PhD.
Prof. DANG VAN PHUOC, MD, PhD.
A/Prof. VO TAN SON, MD, PhD.
Prof. NGUYEN DUY TAI, MD, PhD.
A/Prof. TRINH THI DIEU THUONG, MD, PhD.
Prof. TRAN THIEN TRUNG, MD, PhD.
A/Prof. VO MINH TUAN, MD, PhD.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Chuyên Đề Dược 0
HAI C-GLYCOSID FLAVONOID PHÂN LẬP TỪ LÁ CÂY XUYÊN TIÊU (ZANTHOXYLUM NITIDUM
(ROXB.) DC. RUTACEAE) ............................................................................................................................................. 1 Lê Thị Ngọc Hiệp*, Chung Khánh Linh*, Lê Văn Huấn* ............................................................................................. 1 PHÂN LẬP FLAVONOID TỪ PHÂN ĐOẠN CÓ TÍNH CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY VIỄN CHÍ LÁ NHỎ
(POLYGALA PANICULATA L.) ..................................................................................................................................... 6 Lê Văn Huấn*, Nguyễn Thùy Dung**, Bùi Thế Vinh**, Trần Công Luận** ................................................................. 6 XÂY DƯNG QUY TRINH ĐINH LƯƠNG CAC FLAVONOID VA ACID CLOROGENIC TRONG NƯ LANG
(VALERIANA HARDWICKII) BĂNG UHPLC-MS .................................................................................................... 12 Huynh Lơi*, Nguyễn Thuy Vi*, Trần Hung** .............................................................................................................. 12 TẠO DÒNG KHÁNG NGUYÊN FLIC CỦA EDWARDSIELLA ICTALURI KHẢM TRONG TIÊM MAO CỦA
BACILLUS SUBTILIS ..................................................................................................................................................... 24 Huynh Xuân Yến*, Nguyễn Anh Minh*, Trần Cát Đông*, Vũ Thanh Thảo* ........................................................... 24 XÁC ĐINH EPITOP TIỀM NĂNG TRÊN PROTEIN FLIC VÀ OMPN3 CỦA EDWARDSIELLA ICTALURI IN
SILICO ĐỂ HƯỚNG ĐẾN ỨNG DỤNG LÀM VACCIN PHÒNG BỆNH GAN THẬN MỦ ............................. 32 Nguyễn Thị Linh Giang*, Nguyễn Anh Minh*, Huynh Xuân Yến*, Trần Cát Đông*, Vũ Thanh Thảo* .............. 32 BAO TỬ BACILLUS SUBTILIS CẢI THIỆN HẬU QUẢ SỐC NHIỆT BĂNG CÁCH GIẢM TỔN THƯƠNG
OXY HOÁ ....................................................................................................................................................................... 40 Dương Nguyễn Ánh Ngọc*, Nguyễn Thị Linh Giang*, Trần Dương Thảo*, Vũ Thanh Thảo*, Trần Cát Đông* 40 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT
CỦA ĐIA Y DIRINARIA APPLANATA (FEÉ) D. D. AWASTHI............................................................................ 47 Phan Cảnh Trình*, Võ Lê Công Tráng*, Dương Nguyễn Phi Long*, Nguyễn Đinh Nga* ..................................... 47 KHẢO SÁT MỨC ĐỘ NHẠY CẢM CỦA NẤM DA PHÂN LẬP TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU THÀNH PHỐ
HỒ CHÍ MINH VỚI KETOCONAZOL VÀ TERBINAFIN ..................................................................................... 55 Nguyễn Thị Ngọc Yến*, Phan Cảnh Trình**, Tôn Hoàng Diệu*, Nguyễn Lê Phương Uyên* ................................ 55 KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG KHÁNG KHUẨN CỦA NHŨ DICH CHỨA TINH DẦU TRÀM TRÀ ÚC VÀ
HƯƠNG NHU TRẮNG TRÊN VI KHUẨN ENTEROCOCCUS FAECALIS GÂY VIÊM ỐNG TUỶ RĂNG .... 61 Hà Đan Phương*, Lê Tuấn Anh*................................................................................................................................... 61 TỔNG HƠP VÀ XÁC ĐINH ĐỘ TINH KHIẾT TẠP B CỦA CARVEDILOL....................................................... 70 Nguyễn Hữu Tiến*,**, Trần Thị Ngọc Uyên*, Chương Ngọc Nãi***, Trần Việt Hùng***, Trần Hữu Dũng**,
Nguyễn Đức Tuấn*, Trương Ngọc Tuyền*.................................................................................................................. 70
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Chuyên Đề Dược 70
TỔNG HỢP VÀ XÁC ĐINH ĐỘ TINH KHIẾT TẠP B CỦA CARVEDILOL
Nguyễn Hữu Tiến*,**, Trần Thị Ngọc Uyên*, Chương Ngọc Nãi***, Trần Việt Hùng***,
Trần Hữu Dũng**, Nguyễn Đức Tuấn*, Trương Ngọc Tuyền*
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Carvedilol được sử dụng khá rộng rãi trong điều trị bệnh lý tim mạch như điều trị tăng
huyết áp, thiếu máu cục bộ hoặc suy tim. Dược điển Mỹ 41 qui định phải kiểm tra 9 tạp trong nguyên liệu
carvedilol. Trong khi đó, tạp B (3,3’-(2-(2-methoxyphenoxy)ethylazandiyl) bis(1-(9H-carbazol-4-
yloxy)propan-2-ol)) nói riêng và các tạp khác nói chung của carvedilol đều chưa có trong ngân hàng chất
chuẩn quốc gia. Do đó việc thiết lập chất đối chiếu tạp B của carvedilol nhằm góp phần chủ động trong việc
kiểm tra tạp của carvedilol trong nguyên liệu và thành phẩm là điều cần thiết.
Mục tiêu: Xây dựng quy trình tổng hợp tạp B của carvedilol (3,3’-(2-(2-methoxyphenoxy)
ethylazandiyl)bis(1-(9H-carbazol-4-yloxy)propan-2-ol)) định hướng thiết lập chất đối chiếu.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Tạp B của carvedilol được tổng hợp từ phản ứng mở vòng
oxiran của 4-(oxiran-2-ylmethyl)-9H-carbazol bằng tác nhân amin bậc 1 (2-(2-
methoxyphenoxy)ethanamin) hoặc amin bậc 2 (carvedilol). Sản phẩm tổng hợp được tinh chế bằng sắc ký
cột, xác định cấu trúc bằng các phương pháp phổ nghiệm (UV-Vis, IR, MS, 1H-NMR và 13C-NMR), xác
định độ tinh khiết trên HPLC-PDA.
Kết quả: Sản phẩm tổng hợp được khẳng định cấu trúc là tạp B, hiệu suất tổng hợp và tinh chế cao
(51,1% và 61,2% theo hai con đương khác nhau), độ tinh khiết 99,04%.
Kết luận: Đã tổng hợp thành công tạp B của carvedilol quy mô phòng thí nghiệm. Sản phẩm có độ tinh
khiết cao đạt tiêu chuẩn thiết lập chất đối chiếu.
Từ khóa: Tạp B carvedilol, tổng hợp, chất đối chiếu
ABSTRACT
SYNTHESIS AND PURITY DETERMINANTION OF CARVEDILOL RELATED COMPOUND B
Nguyen Huu Tien, Tran Thi Ngoc Uyen, Chuong Ngoc Nai, Tran Viet Hung,
Tran Huu Dung, Nguyen Duc Tuan, Truong Ngoc Tuyen
* Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 70 – 76
Backgroud: Carvedilol is widely used in the treatment of cardiovascular disease such as treatment of
hypertension, ischemia or heart failure. US Pharmacopoeia 41 regulates nine related compounds of carvedilol
in raw materials. Meanwhile, the carvedilol related compounds are not in the national standard bank.
Objectives: The aim of this study is synthesis of carvedilol related compound B (3,3’-(2-(2-
methoxyphenoxy)ethylazandiyl)bis(1-(9H-carbazol-4-yloxy)propan-2-ol)) for establishment reference material.
Method: Carvedilol related compound B was synthesised from opening of oxirane ring of 4-(oxiran-2-
ylmethyl)-9H-carbazole by (2-(2-methoxyphenoxy)ethanamine) or carvedilol. The product was purified by
column chromatography and its structure was determined by UV-Vis, IR, MS, 1H-NMR and 13C-NMR
spectroscopy. The purity of product was determined by HPLC-PDA.
*Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh **Khoa Dược, Trương Đại học Y Dược Huế ***Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh
Tác giả liên lạc: PGS. TS. Trương Ngọc Tuyền ĐT: 0903330604 Email: [email protected]
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược 71
Results: Carvedilol related compound B was obtained with a high purity 99.04%. The synthesis yield
was 51.1% (from 2-(2-methoxyphenoxy)ethanamine) and 61.2% (from carvedilol).
Conclusion: Successfully synthesized carvedilol related compound B with high purity and met
requirements for establishment reference material.
Key words: Carvedilol related compound B, synthesis, reference material
ĐẶT VẤN ĐỀ
Hiện nay trong công tác kiểm tra, đánh
giá chất lượng nguyên liệu làm thuốc và chế
phẩm thuốc, việc quy định về giới hạn hàm
lượng tạp liên quan ngày càng được quan
tâm vì những tác hại do các tạp trong
nguyên liệu và thuốc thành phẩm mang lại.
Trong khi đó, số lượng chất đối chiếu là tạp
liên quan chưa có nhiều trong ngân hàng
chất chuẩn quốc gia.
Carvedilol là một hỗn hợp racemic có tác
dụng chẹn không chọn lọc thụ thể beta -
adrenergic nhưng có tác dụng chẹn chọn lọc
thụ thể α1 - adrenergic. Carvedilol được sử
dụng khá rộng rãi trong điều trị bệnh lý tim
mạch như điều trị tăng huyết áp, thiếu máu
cục bộ hoặc suy tim. Hiện nay ở nước ta có
ít nhất 7 đơn vị sản xuất các dạng bào chế
khác nhau chứa carvedilol. Việc sản xuất
thuốc chứa carvedilol trong nước vẫn còn
phụ thuộc nhiều vào nguồn nguyên liệu
carvedilol được nhập từ các công ty nước
ngoài. Do đó, việc kiểm tra chất lượng
nguyên liệu đầu vào cũng như thành phẩm
là hết sức quan trọng nhằm đảm bảo chất
lượng của các chế phẩm trong nước. Đối với
dược chất carvedilol, Dược điển Mỹ 41 qui
định phải kiểm tra 9 tạp, trong đó 6 tạp yêu
cầu có chất chuẩn đối chiếu (tạp A, B, C, D,
E, F)(5) . Trong đó, tạp B (3,3’-(2-(2-
methoxyphenoxy)ethylazandiyl)bis(1-(9H-
carbazol-4-yloxy)propan-2-ol)) là sản phẩm
mở vòng oxiran hai lần của amin bậc 1 trong
quá trình tổng hợp carvedilol (1) từ 2-(2-
methoxyphenoxy)ethylamin (3) và 4-
(oxiran-2-ylmethoxy)-9H-carbazol (2). Dược
điển Mỹ 41 và dược điển Châu Âu 8.0 đều
quy định giới hạn cho phép của tạp B trong
nguyên liệu là 0,1%(1,5).
Năm 2010, Somisetti Narender Rao và
cộng sự đã nghiên cứu tổng hợp tạp B theo
con đương phát sinh tạp này (Sơ đồ 1). Hiệu
suất của quy trình là 38,5%. Độ tinh khiết của
tạp không được đề cập(4).
Sơ đồ 1: Nguồn gốc phát sinh tạp B
Với mong muốn góp phần chủ động trong
việc kiểm tra tạp của carvedilol trong nguyên
liệu và thành phẩm, làm giàu thêm ngân hàng
chất chuẩn trong nước cũng như giảm giá thành
sản phẩm, chúng tôi giới thiệu một quy trình
tổng hợp tạp B của carvedilol đơn giản, hiệu suất
cao, để định hướng thiết lập chất đối chiếu.
ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Tạp B của carvedilol (3,3’-(2-(2-
methoxyphenoxy)ethylazandiyl)bis(1-(9H-
carbazol-4-yloxy) propan-2-ol))
Hóa chất
4-(Oxiran-2-ylmethyl)-9H-carbazol (98%),
2-(2-methoxyphenoxy)ethanamin (98%)
(Energy chemical, Trung Quốc), nguyên liệu
carvedilol (số lô LC-056/15, hạn dùng 03/2019,
hàm lượng 99,70%, độ ẩm 0,03% của Oceanic
Pharmachem PVT. Ltd, Ấn Độ); các dung môi
monoglyme (Guangdong Guanghua, Trung
Quốc), ethanol (EtOH) (J.T. Baker, Mỹ), ethyl
acetat (EtOAc), cyclohexan (Xilong, Trung
quốc), acetonitril (HPLC grade), acid
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Chuyên Đề Dược 72
phosphoric (PA), kali dihydrophosphat (PA)
(Merck, Đức), bản mỏng silica gel 60 F254
(Merck, Đức), Silica gel 60 dùng cho sắc ký cột.
Thiết bị
Máy cô quay chân không Buchi R210S, cân
điện tử phân tích HR-250AZ (Hàn Quốc), tủ
sấy chân không Jeiotech OV-12, máy quang
phổ hồng ngoại IRAFFINITY-1S (Shimadzu,
Nhật), hệ thống phổ cộng hưởng từ hạt nhân
NMR Bruker Avance III 500 MHz, hệ thống
phổ khối LCMS IT-TOF (Shimadzu, Nhật), hệ
thống sắc kí lỏng hiệu năng cao HPLC-PDA
LC 20A (Shimadzu, Nhật), các dụng cụ thủy
tinh khác.
Phương pháp nghiên cứu
Tổng hợp tạp B
Tạp B được tổng hợp theo hai quy trình:
Quy trình 1 (Sơ đồ 2)
Tạp B được tổng hợp trong dung môi
monoglyme (theo TLTK(4)) hoặc EtOH như
sau: Hòa tan (2,3-epoxypropoxy)carbazol (2)
(4,2 mmol; 1,03 g) vào 20 ml dung môi trong
bình cầu 2 cổ 100 ml, đun nóng dung dịch đến
65 oC cho tan hoàn toàn, hòa tan 2-(2-
methoxyphenoxy) ethanamin (3) (2 mmol; 0,34
g) trong 10 ml dung môi, cho vào bình nhỏ
giọt. Cho từ từ dung dịch (3) vào dung dịch (2)
ở 65 oC. Đun hồi lưu hỗn hợp phản ứng ở 65 oC trong 8h. Sau đó hỗn hợp phản ứng được
làm nguội và cô quay dưới áp suất giảm. Cắn
được tinh chế bằng sắc ký cột.
Sơ đồ 2: Quy trình tổng hợp tạp B từ 2-(2-
methoxyphenoxy)ethanamin
Quy trình 2 (Sơ đồ 3)
Do tạp B là tạp dimer, phản ứng theo sơ
đồ 2 tạo thành tạp B theo 2 giai đoạn: Giai
đoạn 1 tạo carvedilol (1); giai đoạn 2
carvedilol tiếp tục phản ứng với hợp chất (2)
tạo tạp B. Do đó, nghiên cứu đã khảo sát
quy trình 2 như sau: Hòa tan carvedilol (1)
(2 mmol; 0,82 g) vào 30 ml EtOH, đun nóng
cho carvedilol tan hoàn toàn. Thêm 4-(2,3-
epoxypropoxy)carbazol (2) (2,1 mmol; 0,51
g) vào dung dịch carvedilol trong EtOH.
Đun hồi lưu hỗn hợp phản ứng ở 65 oC trong
8 giơ. Hỗn hợp phản ứng sau đó được làm
nguội, cô bay hơi tới cắn dưới áp suất giảm.
Cắn được tinh chế bằng sắc ký cột.
Sơ đồ 3: Quy trình tổng hợp tạp B từ carvedilol
Tinh chế
Sản phẩm được tinh chế bằng phương
pháp sắc kí cột với pha tĩnh là silica gel 60, và
hệ dung môi cyclohexan - EtOAc (1:1).
Thử tinh khiết sơ bộ
Kiểm tra độ tinh khiết sơ bộ trên sắc ký lớp
mỏng với bản mỏng silica gel GF254 với 3 hệ
dung môi có độ phân cực khác nhau: CHCl3 –
EtOAc (7 : 1), cyclohexan – EtOAc (1 : 1),
cyclohexan – MeOH (5 : 5 : 1)
Xác định cấu trúc
Sản phẩm được xác định cấu trúc bằng các
phương pháp phổ nghiệm UV-Vis, IR, MS, 1H-
NMR và 13C-NMR.
Xác định độ tinh khiết bằng HPLC-PDA
Xác định độ tinh khiết theo điều kiện sắc
ký kiểm nghiệm tạp chất liên quan của
carvedilol theo dược điển Mỹ 41(5).
Cột sắc kí: Zorbax Eclipse XDB-C8 (150 x
4,6 mm; 5 µm).
Pha động: Acetonitril – dung dịch đệm
(31:69), trong đó dung dịch đệm là dung dịch
KH2PO4 2,72 g/l được điều chỉnh về pH 2,0
bằng H3PO4.
Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược 73
Nhiệt độ cột: 55 oC.
Thể tích tiêm mẫu: 10 µl.
Đầu dò PDA, sử dụng chế độ Max plot
giúp phát hiện các pic tạp chất trên toàn thang
sóng 190 – 800 nm, sử dụng chức năng kiểm
tra độ tinh khiết pic.
Dung môi pha mẫu: Acetonitril – nước (4 : 1)
Chuẩn bị mẫu thử: Cân chính xác khoảng
25,0 mg tạp B vào bình định mức 10 ml, thêm
7 ml pha động, siêu âm trong 15 phút, sau đó
định mức lên tới vạch bằng dung môi pha
mẫu. Lấy chính xác 1 ml dung dịch này pha
loãng bằng dung môi pha mẫu thành 10 ml.
Dung dịch được lọc qua màng 0,45 µm trước
khi tiêm vào hệ thống sắc ký.
Mẫu trắng: dung môi pha mẫu.
Độ tinh khiết tạp B được tính theo công thức:
.
XB (%): Độ tinh khiết tạp B của carvedilol.
Sa: Diện tích pic chính trong mẫu thử.
: Tổng diện tích của các pic phụ trong mẫu thử
(ngoại trừ các pic phụ trong mẫu thử có thơi gian lưu
tương ứng các pic trong mẫu trắng và pha động).
KẾT QUẢ
Khảo sát phản ứng tổng hợp tạp B
Tổng hợp theo quy trình 1 (Sơ đồ 2)
Với dung môi phản ứng là monoglyme,
hỗn hợp phản ứng sau khi cô dưới áp suất
giảm không thu được chất rắn mà thu được
một hỗn hợp lỏng, sệt, dính khó hòa tan trong
các dung môi hữu cơ gây khó khăn rất nhiều
cho bước tinh chế tiếp theo.
Với dung môi phản ứng là EtOH, hỗn hợp
phản ứng sau cô dưới áp suất giảm ở thể rắn,
được tách trên sắc ký lỏng – rắn dễ dàng. Phân
đoạn sắc kí có chứa tạp B được cô quay dưới
áp suất giảm tới cắn khô. Cắn khô được sấy
trong tủ sấy chân không ở 40 oC trong 2 giơ.
Hiệu suất sau tinh chế là 51,1%.
Tổng hợp theo quy trình 2 (Sơ đồ 3)
Tương tự quy trình 1 với dung môi
EtOH, cắn thu được sau khi cô hỗn hợp
phản ứng dưới áp suất giảm được tinh chế
bằng sắc ký lỏng- rắn. Phân đoạn sắc kí có
chứa tạp B được cô quay dưới áp suất giảm
tới cắn khô. Cắn khô được sấy trong tủ sấy
chân không ở 40 oC trong 2 giơ. Hiệu suất
sau tinh chế là 61,2%.
Thư tinh khiết sơ bộ
Trên SKLM, tạp B sau tinh chế chỉ cho một
vết duy nhất ở 3 hệ dung môi khác nhau và
khác với nguyên liệu. Như vậy tạp B tinh
khiết trên SKLM.
Bảng 1: Giá trị Rf của tạp B khảo sát qua ba hệ
dung môi khác nhau
Hê dung môi Rf
CHCl3 - EtOAc (7 : 1) 0,26
Cyclohexan - EtOAc (1 : 1) 0,48
Cyclohexan - MeOH (5 : 5 : 1) 0,69
Xác định cấu trúc
Phổ UV-Vis của tap B
Trên phổ UV-Vis cho các đỉnh hấp thụ cực
đại đặc trưng trình bày ở bảng 2
Bảng 2: Dữ liệu phổ UV-Vis của tạp B
VT pic Cực đại hấp thụ
(λ, nm) Tương quan cương đô
1 331,2 0,14
3 319,0 0,12
5 285,2 0,32
7 242,6 1,00
9 224,4 0,75
Phổ IR
Phổ IR cùa tạp B tổng hợp được (Bảng 3)
xuất hiện các đỉnh đặc trưng phù hợp với phổ
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Chuyên Đề Dược 74
IR của tạp A theo LGC Standards(2) và công
trình nghiên cứu của Somisetti Narender Rao(4).
Bảng 3: Dữ liệu phổ IR của tạp B
San phẩm tổng hợp TLTK(2) TLTK(4)
Sô sóng (cm-1)
Hình dạng, cường độ
Nhóm chức
Sô sóng (cm-1)
Sô sóng (cm-1)
3401 Nhọn, yếu νN-H 3403
3528, 3456
Rộng, yếu νO-H 3530 3530, 3461
1605, 1587, 1504
Nhọn, yếu νC=C
(nhân thơm)
1590, 1505
1604, 1589, 1506
1252 Nhọn, mạnh νC-N 1251 1252
1098, 1123
Nhọn, mạnh νC-O 1104 1104, 1124
Phổ MS
CTPT dự kiến: C39H39N3O6, PTL dự kiến:
645,2839
[M-H]+ dự kiến: 646,2917; [M-H]+ tìm thấy:
646,2684
[M-H]- dự kiến: 644,2761; [M-H]- tìm thấy:
644,2608
Phổ NMR
Phổ 1H-NMR (DMSO-d6, 500MHz) và phổ 13C-NMR (DMSO-d6, 125MHz) cho các tín hiệu
phù hợp công thức cấu tạo tạp B (Hình 1) và
nghiên cứu của Sajan(3) (Bảng 4).
Bảng 4: Dữ liệu phổ NMR của tạp B
STT VT 13C-NMR (DMSO-d6,
125 MHz) 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz)
TLTK(3) 1H-NMR (DMSO- d6, 400 MHz)
1 13, 33 155,0
2 24 148,9
3 23 147,9
4 8, 38 141,1
5 4, 40 138,9
6 11, 35 126,4 7,27-7,31 (m, 2H) 7,21 (m, 2H, ArH)
7 2, 43 124,4 7,17 (t, 2H, 8 Hz) 7,28 (m, 2H, ArH)
8 6, 45 122,5 8,26 (d, 2H, 8,5 Hz) 8,24 (d, 2H, ArH)
9 5, 41 121,8
10 27 120,7 6,78-6,82 (m, 1H) 6,85 (m, 1H, ArH)
11 26 120,5 6,84-6,87 (m, 1H) 6,85 (m, 1H, ArH)
12 1, 44 118,5 7,06-7,10 (m, 2H) 7,06 (m, 2H, ArH)
13 28 112,8 6,61-6,67 (m, 1H) 6,57 (m, 1H, ArH)
14 25 112,1 6,57 (d, 1H, 8 Hz) 6,57 (m, 1H, ArH)
15 9, 37 111,5
16 3, 42 110,2 7,43 (d, 2H, 8 Hz) 7,41 (d, 2H, ArH)
17 10, 36 103,7 7,04 (d, 2H, 8 Hz) 7,06 (m, 2H, ArH)
18 12, 34 100,3 6,53 (d, 2H, 8 Hz) 6,57 (m, 2H, ArH)
19 15, 47 70,2 4,16-4,24 (m, 4H) 3,9-4,2 (m, 4H)
20 16, 31 67,9 4,16-4,24 (m, 2H) 3,9-4,2 (m, 2H)
21 21 66,7 3,93-4,05 (m, 2H) 3,9-4,2 (m, 2H)
22 18, 30 59,0 2,98-3,07 (m, 4H) 2,8-3,06 (m, 4H)
23 29 55,3 3,61 (s, 3H) 3,59 (d, 3H)
24 20 54,3 2,84-2,91 (m, 2H) 2,8-3,06 (m, 2H)
25 NH 11,19 (s, 2H) -
26 OH 5,02 (d, 2H, 4 Hz) -
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược 75
Hình 1: Công thức cấu tạo tạp B
Xác định độ tinh khiết tạp B bằng HPLC-PDA
Tính phù hợp hệ thống
Tính phù hợp hệ thống được xác định bằng
cách tiến hành tiêm lặp lại 6 lần dung dịch tạp B
250 µg/ml. Kết quả trình bày ở bảng 5.
Bảng 5: Khảo sát tính phù hợp hệ thống sắc ký
(n=6)
tR (phút) S (mAU.s) N Rs k’
Trung bình 51,87 10731056 4256 29,18 35,64
RSD (%) 0,46 1,16
RSD của các thông số thơi gian lưu, diện
tích pic đều nhỏ hơn 2 %, số đĩa lý thuyết
(N>2000), hệ số phân giải Rs > 1,5 cho thấy hệ
thống sắc ký chọn lựa là tương thích cho việc
phân tích tạp B.
Độ tinh khiết của tap
Tiến hành sắc ký các mẫu trắng và dung
dịch thử (tạp B 250 μg/ml) cho thấy trên sắc
ký đồ mẫu trắng không xuất hiện pic trùng
với thơi gian lưu của pic tạp B (Hình 2),
đồng thơi độ tinh khiết pic tạp B (Peak
purity index) xấp xỉ 1, cho thấy pic tạp B
không lẫn các chất khác.
a) b)
Hình 2: Sắc kí đồ của mẫu trắng (a) và dung dịch tạp B 100 μg/ml (b)
Nhận xét: Độ tinh khiết pic tạp B (Peak
purity index) xấp xỉ 1, cho thấy pic tạp B
không lẫn các chất khác.
Độ tinh khiết tạp B được xác định là
99,04% (n=6), đủ tiêu chuẩn để thiết lập chất
đối chiếu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019
Chuyên Đề Dược 76
BÀN LUẬN
Như vậy, từ nguyên liệu carvedilol và các
hóa chất tổng hợp carvedilol trong công nghiệp
như 4-(oxiran-2-ylmethyl)-9H-carbazol (2), 2-(2-
methoxy -phenoxy)ethanamin (3), nghiên cứu đã
xây dựng được quy trình tổng hợp và tinh chế
đơn giản, dễ thực hiện tại các phòng thí nghiệm.
Hiệu suất tổng hợp tương đối cao và độ tinh
khiết của tạp tổng hợp đạt yêu cầu để thiết lập
tạp chuẩn đối chiếu (≥ 98,0%).
Từ hai quy trình tổng hợp tạp B có thể
thấy rằng: Tổng hợp theo quy trình 2 hạn chế
được việc tạo một số tạp so với quy trình 1.
Nguyên liệu phản ứng ở quy trình 2 chính là
sản phẩm trung gian trong quy trình 1 cho nên
phản ứng se nhanh hơn và ưu tiên tạo tạp B
hơn. Hơn nữa, hiệu suất tổng hợp và tinh chế
theo quy trình 2 cao hơn quy trình 1. Do đó,
tác giả đề nghị lựa chọn quy trình 2 để tổng
hợp tạp B cho những nghiên cứu tiếp theo.
Bên cạnh đó, hiệu suất tổng hợp tạp B so
với các công bố trước đã được cải thiện rõ rệt:
Công trình nghiên cứu của Somisetti
Narender Rao và cộng sự cho hiệu suất tổng
hợp tạp B chỉ có 38,5%; còn trong nghiên cứu
nếu tổng hợp tạp B theo quy trình 2 thì hiệu
suất phản ứng là 61,2%, tăng gần gấp đôi so
với công trình của S. N. Rao(4). Mặt khác, độ
tinh khiết của tạp B tổng hợp đã được xác định
và phù hợp để thiết lập tạp chuẩn đối chiếu
trong khi công trình của S. N. Rao không đề
cập đến độ tinh khiết của tạp B.
Hơn nữa, trong nghiên cứu, tạp B được
tổng hợp từ chính dược chất carvedilol. Đây là
hướng tổng hợp mới chưa từng được đề cập
trong các công trình nghiên cứu trước đây.
Về khẳng định cấu trúc tạp, các thông tin trên
phổ hồng ngoại (IR), khối phổ (MS), phổ cộng
hưởng từ hạt nhân (NMR) đều cho phép
khẳng định cấu trúc chất tổng hợp được là tạp
B của carvedilol.
Quy trình HPLC xác định độ tinh khiết tạp
B được xây dựng từ quy trình xác định tạp
chất trong nguyên liệu carvedilol theo USP 41
và đã được thẩm định tính phù hợp hệ thống.
Kết quả xác định độ tinh khiết tạp B cho thấy
tạp tổng hợp được đủ điều kiện để đưa vào
thiết lập chất đối chiếu.
KẾT LUẬN
Từ các hóa chất công nghiệp đã tổng hợp
thành công tạp B của carvedilol (3,3’-(2-(2-
methoxy- phenoxy)ethylazandiyl)bis(1-(9H-
carbazol-4-yloxy)propan-2-ol)). Sản phẩm được
chứng minh cấu trúc bằng các phương pháp phổ
UV-Vis, IR, MS và NMR. Độ tinh khiết của tạp
tổng hợp được là 99,04%, đủ đều kiện để thiết
lập chất đối chiếu trong kiểm nghiệm.
TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. European pharmacopoeia 8: Carvedilol (2014), pp. 1781-1782.
2. LGC Standards (2011), "Certificate of Analysis Reference
Substance: Carvedilol Biscarbazole (1,1'-[[2-(2-
Methoxyphenoxy)ethyl]nitrilo]-bis[3-(9H-carbazol-4-yloxy)
propan-2-ol])", pp. 1-5.
3. Sajan PG, Rohith T, Santosh P, et al. (2014), "Rapid, highly
efficient and stability indicating RP-UPLC method for the
quantitative determination of potential impurities of
carvedilol active pharmaceutical ingredient", International
Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 6 (10), pp.
214-220.
4. Somisetti NR, Devarasetty S, Kema S, et al. (2010), "Synthesis
and characterization of potential impurities of carvedilol, an
antihypertensive drug", Synthetic Communications: An
International Journal for Rapid Communication of Synthetic
Organic Chemistry. 41 (1), pp. 85-93.
5. The United States Pharmacopeia 41 (2018), Carvedilol,
Carvedilol tablets, pp. 729-733.
Ngày nhận bài báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 01/11/2018
Ngày bài báo được đăng: 15/03/2019
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược 77
TWO FLAVONOID C-GLYCOSIDES FROM THE LEAVES OF ZANTHOXYLUM NITIDUM (ROXB.) DC.,
RUTACEAE ....................................................................................................................................................................... 1 Le Thi Ngoc Hiep, Chung Khanh Linh, Le Van Huan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 -
No 2- 2019: 01 – 05 ............................................................................................................................................................. 1 BIO-GUIDED ISOLATION FLAVONOID FROM ANTIOXIDANT EXTRACTS OF POLYGALA PANICULATA L.
............................................................................................................................................................................................ 6 Le Van Huan, Nguyen Thuy Dung, Bui The Vinh, Tran Cong Luan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement
of Vol. 23 - No 2- 2019: 06 – 11 ........................................................................................................................................... 6 QUANTITATIVE ANALYSIS OF FLAVONOIDS AND CHLOROGENIC ACID IN VALERIANA HARDWICKII
BY UHPLC-MS ............................................................................................................................................................... 13 Huynh Loi, Nguyen Thuy Vi, Tran Hung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 12
– 23 ................................................................................................................................................................................... 13 CLONING OF MOSAIC FLIC ANTIGEN OF EDWARDSIELLA ICTALURI IN BACILLUS SUBTILIS FLAGELLA
.......................................................................................................................................................................................... 24 Huynh Xuan Yen, Nguyen Anh Minh, Tran Cat Dong, Vu Thanh Thao * Ho Chi Minh City Journal of Medicine *
Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 24 – 31 ...................................................................................................................... 24 IDENTIFICATION OF POTENTIAL EPITOPES ON OMPN3 AND FLIC PROTEIN FROM EDWARDSIELLA
ICTALURI IN SILICO TO SERVE AS VACCINE CANDIDATES AGAINST SEPTICEMIA .................................. 32 Nguyen Thi Linh Giang, Nguyen Anh Minh, Huynh Xuan Yen, Tran Cat Dong, Vu Thanh Thao * Ho Chi Minh City
Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 32 – 39 ..................................................................................... 32 BACILLUS SUBTILIS SPORES IMPROVE OUTCOMES OF HEAT STROKE BY REDUCING OXYDATIVE
DAMAGE ......................................................................................................................................................................... 40 Duong Nguyen Anh Ngoc, Nguyen Thi Linh Giang, Tran Duong Thao, Vu Thanh Thao, Tran Cat Dong * Ho Chi Minh
City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 40 – 46 ............................................................................. 40 DIRINARIA APPLANATA (FEÉ) D. D. AWASTHI: MORPHOLOGY, CHEMICAL COMPOSITION AND
ANTIMICROBIAL ACTIVITY ...................................................................................................................................... 47 Phan Canh Trinh, Vo Le Cong Trang, Duong Nguyen Phi Long, Nguyen Dinh Nga * Ho Chi Minh City Journal of
Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 47 – 54 ..................................................................................................... 47 IN VITRO SUSCEPTIBILITY TESTING OF DERMATOPHYTES ISOLATED FROM HOSPITAL OF
DERMATOVENEREOLOGY IN HO CHI MINH CITY TO KETOCONAZOLE AND TERBINAFINE ................... 55 Nguyen Thi Ngoc Yen, Phan Canh Trinh, Ton Hoang Dieu, Nguyen Le Phuong Uyen * Ho Chi Minh City Journal of
Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 55 – 60 ..................................................................................................... 55 STUDY ON THE ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF THE EMULSION CONTAINING TEA TREE OIL AND
OCIMUM GRATISSIMUM ESSENTIAL OIL ON ENTEROCOCCUS FAECALIS CAUSING ENDODONTIC
INFECTION ..................................................................................................................................................................... 62 Ha Dan Phuong, Le Tuan Anh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 61 – 69 ..... 62 SYNTHESIS AND PURITY DETERMINANTION OF CARVEDILOL RELATED COMPOUND B ........................ 70 Nguyen Huu Tien, Tran Thi Ngoc Uyen, Chuong Ngoc Nai, Tran Viet Hung, Tran Huu Dung, Nguyen Duc Tuan,
Truong Ngoc Tuyen * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 70 – 76..................... 70
