Upload
goktan-kuspinar
View
115
Download
3
Embed Size (px)
Citation preview
Hücre içi Veziküler Taşınım &
Golgi Kompleksi ve Endozom
Arş. Gör. Göktan KUŞPINAR( Yüksek Lisans Öğrencisi )
Doç. Dr. Berrin AVCI( Moderatör )
Seminer Akışı
Golgi Kompleksi Morfolojisi – Hücre içi yerleşimi - Fonksiyonu
Endozom Morfolojisi – Hücre içi yerleşimi – Fonksiyonu
Hücre içi veziküler taşınım Vezikül oluşum moleküler mekanizmaları
Vezikül hedeflenmesi ve hedefe füzyonu
Klinik korelasyonlar
Golgi Kompleksi
Camillo Golgi ( 1898 )
İlk kez nöronlarda tespit edildi
“ internal reticular apparatus “
Nobel Prize in Physiology or Medicine 1906
Nükleus çevresinde yer alır
Hem ekzositoz ile protein salgılayan hücrelerde hem de membran ve membranla ilişkili protein sentezleyen hücrelerde iyi gelişmiş (sinir hücresi)
Golgi Kompleksi
Golgi kompleksi polarite gösterir
Cis yüzü ( giriş veya oluşum yüzü ) cis-Golgi
Trans yüzü ( çıkış veya olgunlaşma yüzü ) trans-Golgi
İki yüz arasında medial-Golgi
Golgi Kompleksi
Hücrenin sentezlediği ürünlerin;
Post-translasyonel modifikasyonlar
(glikozlama, sülfatlama, fosforlama,
hidroksilleme)
Protein seçilimi Paketlenmesi Kargo hedeflenmesi
Golgi’den Protein Sekresyonunu
Apikal Plazma Membranı Çok sayıda ekstrasellüler protein ve membran proteini Kaplı olmayan veziküller
Bazolateral Membran TGN’de eklenmiş spesifik sıralayıcı sinyal taşıyan proteinlerEpitel-spesifik adaptör protein ile ilişkili henüz tanımlanmamış bir protein ile kaplı veziküller
Endozom ve lizozom
Apikal sitoplazma
ENDOZOMLAR
Erken endozom, hücre membranına yakın sitoplazma bölümünde
Geç endozom, sitoplazmanın daha derin kısmında lokalize, erken endozomdan köken alan veziküllerin birleştiği yapı
Geç endozom lizozoma olgunlaşır.
Erken Endozom Geç Endozom
Erken endozom
Plazma membranına yakın yerleşimli
Tubulovesiküler yapı: Lümen membran invajinasyonları ile sisternalara bölünmüş
Tubuler bölüm; membran için ayrılan integral membran proteinlerinin çok büyük kısmını
Veziküler bölüm ise; salgı kargo proteinlerini içerir.
Hafif asitik ortam. (pH 6.2 - 6.5)
Geç endozom
Sitoplazmanın derin kısımlarında yerleşik - Soğan-benzeri iç membranlar
Daha asitik ortam (ortalama pH 5.5)
Multiveziküler cisimler ( MVBs) Erken ve geç endozomlar arasında işlev gören selektif transport vezikülleri
Geç endozomlar lizozoma olgunlaştığı için prelizozom olarak ta adlandırılırlar.
Geç endozomlar, birbirleri ve matür lizozomlar ile birleşebilirler.
1. Sabit (stable) kompartman modeli
Endozomlar, veziküler transport aracılığıyla hücre dışı ile Golgi kompleksi arasındaki ilişkiyi sağlayan sabit hücresel organallerdir.
Plazma membranında oluşan kaplı veziküller eksprese edilen yüzey reseptörleri nedeniyle sadece erken endozom ile birleşir.
Endozom oluşum mekanizmaları
2. Maturasyon modeli
Erken endozomlar plazma membranından köken alan endostatik veziküllerden yeniden oluşurlar.
Erken endozomun membran kompozisyonu derece derece değişir.
Bu olgunlaşma süreci geç endozom ve daha sonra lizozom oluşumuyla sonuçlanır.
Endozom oluşum mekanizmaları
Endositoz alınan proteinlerin seçilimi
Erken endozomdan ortaya çıkan veziküllerin ve tubüllerin şekli ve geometrisi, sıralama mekanizmasının temeli, lokalize pH değişikliklerinin bulunduğu bir ortam
Bu mekanizmada; - Ligant reseptöründen ayrılır. - Dar tubüller ve veziküller, büyük moleküllerin sıralanmasına, bu moleküllerin spesifik seçilim bölümüne girmesini mekanik olarak engelleyerek yardımcı olabilir.
- Seçilimden sonra proteinlerin pek çoğu hızla yeniden dönüştürülür ve fazla membran plazma membranına geri döner.
Erken Endozomların Fonksiyonları
Erken Endozomlarda ligand-reseptör kompleksi
Hücreler :
Besin kaynaklarına erişim
Mikroçevre oluşturma
İletişim
Çevresel etkilere yanıt
Hücre içi Veziküler Taşınım
Hücresel Taşınım Mekanizmaları
II. Hücre iç komponentleri arasında
I. Hücre – Ekstrasellüler alan arasında
Pasif (basit) difüzyon
Kolaylaştırılmış difüzyon
Aktif transport
Endositoza. Fagositozb. Pinositozc. Reseptör–aracılı endositoz
Ekzositoz
Hücre Membranı( Sitomembran )
Hücre içi Membran Sistemleri
Membran kaplı taşıyıcı Vezikül
Transport iki membran arasındaKargo vezikülü
Hücre içi kompartmanlaşma
Yapı, işlev ve içerik farklılaşmaları
İki kompartman arasında taşınım
Mikroçevre ile madde alışverisi
Tek bir çatı altında : Sayısız farklı ürün Hatasız düzen
Veziküler Taşınım :
Endoplazmik Retikulm (ER) - Golgi kompleksi veziküler taşınımı Golgi kompleksinden hedeflenmiş veziküler taşınımı
ER-Golgi Veziküler Taşınım
Vesikül tipi
Örtücü proteinler
GTPaz Yön
COPIISec23/24 &
sec13/31kompleksler, Sec12
Sar1
ER’den cis-Golgi’ye
AnterogrageTransport
COPI 7 farklı subunit ARF
cis-Golgi’den ER’a kadarRetrograde transport
ER - Golgi vezikül oluşumun moleküler mekanizması
SEC23 mutasyonları kollojen salınımı defektleri *
*Boyadjiev, S. A. et al. Cranio-lenticulo-sutural dysplasia is caused by a SEC23A mutation leading to abnormal endoplasmic-reticulum-to‑Golgi trafficking. Nature Genet. 38, 1192–1197 (2006).
SEC31 monoubitinleştirilmesi fare embriyonik kök hücrelerinde prokollojenlerin ER salınımında gerekli *
*Jin, L. et al. Ubiquitin-dependent regulation of COPII coat size and function. Nature 482, 495–500 (2012).
SAR1 mutasyonları büyük lipopretinlerin entorositlerden salınım defektleri sonucu lipit malabsorbsiyonu *
*Jones, B. et al. Mutations in a Sar1 GTPase of COPII vesicles are associated with lipid absorption disorders. Nature Genet. 34, 29–31 (2003).
*Silvain, M. et al. Anderson’s disease (chylomicron retention disease): a new mutation in the SARA2 gene associated with muscular and cardiac abnormalities.Clin. Genet. 74, 546–552 (2008)
ERES ERGİC Cis - Golgi
ERES deki TANGO1– cTAGE5 transmembran protein kompleksi kargo seçilimindeki önemi *SEC23 - SEC24 ile etkileşimi ve prokollojen salınımındaki rolleri *
*Saito, K. et al. cTAGE5 mediates collagen secretion through interaction with TANGO1 at endoplasmicreticulum exit sites. Mol. Biol. Cell 22, 2301–2308 (2011).
Golgi - ER vezikül oluşumun moleküler mekanizması
Golgi kompleksinden hedeflenmiş veziküler taşınımı
Vesikül tipi Örtücü proteinler
GTPaz
klatrin ve adaptor
proteinler
klatrin & AP1 kompleksler
ARF
Klatrin ve Adaptin Kaplı veziküller
İlk olarak tanımlanan vezikül kılıf proteini
3 ağır + 3 hafif Zincir = “ Triskelien “ yapısı
Golgi kompleksinden tomurcuklanan veziküllerin hedefleri
Endozom & Lizozom
Sekresyon
Endozom & Lizozom
GER ‘da sentezlenen lizozomal enzimler (hidrolazlar) enzimatik olarak inaktiftir. ( Prohidrolaz)
Cis – Golgi de glikozillenmiş prohidrolazlar yüzeylerinde açıkta kalacak “signal patch” oluşması için özel bir şekilde katlanırlar.
Signal patch, Trans Golgi ’de M-6-P eklenerek modifiye edilir.
Erken ve geç endozomların M-6-P reseptörleri prohidrolazın yüzeyindeki M-6-P bağlarlar.
Geç endozomun asitik pH’sı M-6-P’ın reseptörden ayrılmasını sağlar.
Her kaplı vezikül kafes şeklinde olmayabilir !
Endozom Golgi
Asit Hidrolaz Reseptörü
Mannoz 6-P Reseptörü
Retromer Vezikül
SekresyonTemel ( constitutive ) salgı : Salgılama
devamlıdır. Proteinler, sentezlenir
sentezlenmez hücreyi terk eder,
depolanmaz.
Örn; fibroblastlardan tropokollagen sentezi
Düzenli salgı : Proteinler, konsantre edilir ve geçici bir süre sekretuvar granüllerde depolanır. Sekresyon için uyarı (hormonal veya nöral stimulus) gereklidir. Örn; gastrik mukozadaki esas hücrelerden veya pankreasın asiner hücrelerinden zimogen granüllerin salınması
• Temel salgı yolağı
• Düzenli salgı yolağı
Temel (constitutive) salgılama yolağı
Veziküller ile Golgi’den ayrılma
Hücre yüzeyine bırakılma
Buradan endositoz ile alınma
Erken endozom
Geç endozom
Lizozom
Golgiden kaplı vezikül salgılama yolağı
Klatrin kaplı veziküller ile Golgi’den çıkış
Geç endozom ile füzyon
Lizozomal membran proteinlerinin hedeflerine ulaşması:
Fosfoinositol
Kaplı vezikül – GTPaz’ları
Dynamin
Vezikül Oluşum Kontrol Mekanizmaları
I. Fosfoinositol
Farklı organeller için farklı
fosfoinositol fosfoinostiol kinaz fosfoinostol fosfataz
II.Kaplı vezikül – GTPaz’ları
Vesikül tipi GTPaz
COPII Sar1
COPI ARF
klatrin ARF
III.Dynamin
Vesikül Tomurcuklanması
Vezikül Hedeflenmesi ve Membran Füzyonu
Membran Hedeflenmesi RAB – GTP protein ailesi
Membran FüzyonuSNARE protein ailesiNSF protein ailesi
Homofilik Füzyon
SNARE – SNF araçılı geri dönüşümü
Füzyon
Veziküler Taşınım Klinik Yaklaşımlar
Pelizaeus-Merzbacher (Hipomiyelinazsyon)
PLP1 mutasyonu
Mutant PLP1 ( proteolipid protein 1 )
retrograde taşınım bloklanması
Golgi frangmantasyonu
Veziküler Taşınım Klinik Yaklaşımlar
Dyschromatosis universalis hereditaria
ABCB6 gen mutasyonu ( missence )
Asemptomatik hiper – veya hipo pigmentasyon
Proksimal spinal muscular atrofi
SMN1 yetersiz ekspresyonu
Trans-golgi granül salınım bloklanır
Golgi Kompleksi Klinik Yaklaşımlar
Parkinson
Pre - sinaptik protein a-synuclein birikimi ER – Golgi transport bloklanması
RAB1-RAB2 -SNARE ailesinden syntaxin-5 (STX5) yokluğu ve RAB8 overekspresyonu
Golgi fragmantasyonu
Smith-McCort dysplasia
RAB33B mutasyonu Golgi şismesi (swelling) - fragmantasyonu
Golgi Kompleksi Klinik Yaklaşımlar
MACS Sendromu (macrocephaly, alopecia, cutis laxa ve scoliosis)
RIN2 sendromu
RAB5 – RIN2 birikimi
Angeleman Sendromu
UBE3A – ubikitin ligaz ekpresyon artışı Golgi PH artışı – Golgi sisterna ozmotik şişme Protein silasyonun da defektler
Golgi Kompleksi Klinik Yaklaşımlar
Duchenne muscular dystrophy
Hatalı Golgi kompleksi organizasyonu
Dystrophin proteini yokluğu
GV oositlerde hücre merkezinde, perifere göre yoğun dağınık yerleşimli düzenli – düz yüzlü sisternalı membran sistemleri
GVBD sırasında fragmante,noktasal yapılar olarak hücre merkezinde
Golgi Kompleksi
FPB atılım aşamasında yeniden gözlemlenebilir ve kortital granüller salınımından sorumludur.
Brefeldin – A ( membran trafik inhibitörü ) GV oositlere
Fare GV oositlerinde MI mayotik ağ oluşumunu blok – GVBD arrest
Bovine GV oositlerinde 8- blastomer aşamasına kadar gelişim
İşlevsel golgi kompeksi GVBD ve 8 – blastomerli gelişim aşamasından sonrası için gerekli
GM130 ( cis-Golgi protein ) Mikotubül organizasyonu – mayotik ağ ( spindle ) organizasyonu, göç ve asimetrik bölünme
İnsan GV oositi - gelişen kortikal granüller (transmission electron microscopy, 35,700x)
SMAP2 Arf GTPaz aktive edici protein, klatrin kaplı vezikül oluşumu
SMAP2 mutasyonları – sağlıklı erkek fareler Infertil ve globozospermi
Spermiyogenezin ilk basamağı – Golgi evresinde defektler – akrozom formasyonu defektleri
Kaynaklar
Histoloji Konu Anlatım ve Atlas – Micheal H. Ross, Wojciech Pawlina
Organization of the ER–Golgi İnterface for membrane traffic control*
Nature - JUNE 2013 | VOLUME 14 Federica Brandizzi1 and Charles Barlowe
Prof. Dr. F. Zehra MİNBAY – Uludağ Tıp Fakültesi Ders Notları
Prof. Dr. A. Sahin SIRMALI – Uludağ Tıp Fakültesi Ders Notları
Moleculer Biology of the the Cell – Bruce Alberts, Alexande Jrohnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, Pete Wr alter
Histoloji ve Hücre Biyolojisine Giriş – Abraham L. Kierszenbaum