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临床 PCR 检验标本的采集、处理、保存及核酸提取方法. 江西省肿瘤医院 陈文学. 检验误差的发生率. 1997 年,一位意大利著名检验专家对急诊检验误差发生的种类和发生率进行了统计。结果显示,约有 68.2% 的检验误差发生在检验前期,而来自检验中期和检验后期的误差率分别为 13.3% 和 18.5% 。 2007 年,这位专家又进行了类似的统计,结果显示,检验前期的误差发生率仍高达 61.9%. 正确采集、运送、保存临床标本 的重要性. 质量保证关键性环节 解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一. 核酸提取的重要性. 核酸提取是临床 PCR 检验最为关键的部分 - PowerPoint PPT Presentation
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PCR
199768.2%13.3%18.5%200761.9%
PCR
PCR
PCR
,,
,RNAGITC()DNAEDTA,
DNARNAEDTA(PCR)6(2)12-20-70
,,EDTA-Na2,DNA,4,RNARNA
,,,,-70.
,DNA,,1 mol/L NaOHPCR ,-70
1Universal sample processing, USP 4-6 mol/LGuHCl 50 mmol/L Tris-HCl, pH7.5 25 mmol/L EDTA 0.5%Sarkosyl 0.1~0.2 mol/L -20.05%Tween 80310%Chelex-100( 0.03% Triton X-1000.3% Tween 20)
1:0.1 mol/L NaOH50gK0.05% Triton X-100
GuSCNDNAPCR-alpha-casein
PCR,,,,510,,,DNA,-70.
,(),DNA,23,DNA,,,,,,DNA;,-70
,,,,,
HBV DNAHCV RNAPCR
DNA 50 mmol/L Tris-HCl10 mmol/L EDTA, 2% Triton X-100, 4 mol/L GITC, 0.3 mol/L 425-600um
,,K50%,,1cm,,,50%.,46,,KDNA
DNARNA PCR
PCR : :UV
MLVTAQ DNADNARNA
g0.1U,100%
I 1~3 U/g(5 mM Tris pH7.5, 1 mM CaCl2, 40 U RNase 25 2)
PCR,1PCRDNAHeminPCR21%(V/V)Taq
IgG IgGDNADNADNA
PCR,IgGPCR
NaOHTaq DNADNANaOHDNA
0.6% (wt/vol)BSATaq DNA2%vol/vol0.2%BSATaq DNA1020DNAT432gp32BSA
,, (Triton-100)(K)
DNA-
RNA,RNARNaseRNase,
RNaseRNaseRNA,RNA
RNA,RNase,RNA. RNase,1808,0.1%(DEPC)RNA,DEPCRNaseDEPC3721001515DEPC,DEPCRNA
RNA RNA,RNA,,RNase,0.1%DEPC3712,1001515
,DEPC,Tris,,TrisRNase
RNARNase RNase RNA,RNA, RNA
RNA
K-
-
-
SPIN COLUMN Se NaI Immobilon-P
SPIN COLUMN123
Se
NaI
m2000 DNA/RNAPCR 96
SPRI-TE1-10 Vidiera NsP:96
QIAGEN BioRobot MDx Workstation96
MagNA Pure LC 2.0 System
A260A260/A280/
1
1 2 PCR
PCR2-3cm2cm
34 RNAase
5 EDTAPCR
2 3 RNAchao tropic4mol/L(Guanidinium isothiocyanae,GITC),
5mol/LGITCRNase4mol/LRNaseRNAGITC7RNARNAEDTA70
DNA10mmol/LTris,lmmol/LEDTA(pH7.5~8.0)4RNA8020
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