基底細胞癌と有練絹胞癌におけるFibronectin,...

日皮会誌:95 (14), 1547-1552, 1985 (昭60）

基底細胞癌と有練絹胞癌におけるFibronectin, Lamininの

　　組織分布および血漿中Fibronectin濃度について

乃木田俊辰＊　野上　玲子

　　　　　　　　　　要　　旨

　基底細胞癌（ＢＣＣ）8例，有無細胞癌（ＳＣＣ）5例

についてfibronectin (FN)とlaminin (LM)の分布

を螢光抗体法で観察，さらに血漿中のＦＮ濃度を測定

した.

　ＦＮは, BCC, secともに腫瘍実質をとり囲む部位

に，巾広く分布した．間質の炎症反応の強弱との相関

は，とくに明瞭には認められなかった．ＬＭは, BCC,

ＳＣＣともに，腫瘍実質との境界部に一致して線状に認

められ，間質のその他の部分には，認められなかった

が, BCCの１例にのみ腫瘍実質内の腫瘍細胞問にLM

の陽性所見を得た．

　血漿中のＦＮ濃度は正常人血漿に比し, sec, BCC

共に明らかに高値を呈した．

　　　　　　　　　　緒　　言

　結合織組織の基質を構成する主な糖蛋白には，

fibronectinC以下ＦＮと略)とlamininC以下ＬＭと略)

が知られており，ＦＮには肝,血管内皮細胞で産生され

る血漿ＦＮ(ｐＦＮ)と主に線維芽細胞で産生される細胞

ＦＮ(ｃＦＮ)の２種類があり，免疫学的には両者は区別

不能とされるが，生理活性には若干の差が存在する．

そのうち癌細胞を配向させる活性をみると, cFNは

ｐＦＮより約50倍,赤血球凝集能に関しては150～200倍

その活性が高いことが報告され1)，また癌細胞の進展，

転移に関することが示唆され, Yamadaら2)は培養線

組芽細胞のoncogenic virusやcarcinogenによる悪

性変化とともに細胞周囲のＦＮが消失し，無秩序な発

　熊本大学医学部皮膚科教室（主任　荒尾龍喜教授）

＊現所属：東京大学医学部皮膚科教室（主任　石橋康

　　正教授）

Toshitatsu Nogita, Reiko Nogami and Yoshihiro

　Maekawa :　Distribution　of　Fibronectin　and

　Laminin in Basal Cell Carcinoma and Squamous

　Cell Carcinoma

昭和60年７月２日受付，昭和60年７月15日掲載決定

別刷請求先:（〒113)東京都文京区本郷７－３－１

　東京大学医学部皮膚科教室　乃木田俊辰

前川　嘉洋

育が出現すると述べ，さらにYamadaら3)はＦＮが

transformed ｃｅｎに対してdetransforming effectを

有すると述べている．

　一方ＬＭは，ヘパラソ硫酸と共に基底膜に存在し，

IV型コラーゲンと上皮細胞とを接着させるとされ,癌

組織においては，肺瘍巣の周辺にのみ存在するという

報告4)がある．

　今回著者らは皮膚癌のうち，基底細胞癌(以下BCC

と略)８例，有無細胞癌(以下ＳＣＣと略)５例につい

て，真皮および基底膜に存在するＦＮおよびＬＭの分

布状態を螢光抗体法を用い，正常皮膚と比較検討し，

さらに同患者血漿中のＦＮ濃度をimmuno　tur-

bidimetric assay法により測定し，若干の知見を得た

ので報告する．

　　　　　　　　　　材料と方法

　1.材料：手術時あるいは生検時得られたBCC,

ＳＣＣの腫瘍部分および正常組織を２分割し，一方を

10％ホルマリン固定，他方をｎ,ヘキサンにより急速凍

結し，使用時まで－80℃のdeep freezer内に保存し

た．

　患者血漿は，クェソ酸ナトリウムを含む採血管に約

4.5ml採血し,混和後血漿を遠心分離し,－20℃に保存

し測定直前に室温で解凍し実験に供した.

　2.免疫組織学的方法：凍結標本をクリオスタット

で4μｍの切片を作製し，無固定にて風乾した.

　①直接螢光抗体法：上記の切片上にFITC

一labeled一goat―anti一human FN 抗体(Cappel)を

室温45分間反応させ，冷phosphate―buffered saline

(ＰＢＳ)で10分間３回洗浄後,90％ＰＢＳグリセリソで封

入し, Carl Zeiss社製落射型螢光顕微鏡下にＦＮの分

布を観察した.

　②間接螢光抗体法：ト記の切片上にrabbit　anti

―mouse LM 抗体(ＢＲＬ)を，室温にて45分間反応さ

せ，冷ＰＢＳで10分間３回洗浄後，２次抗体として

FITC-labeled-goat一anti―rabbit　ｌｇＧ抗体

(Cappel)と反応させ,冷ＰＢＳに充分洗浄し, 90%PBS

グリセリソで封入し, Carl Zeiss社製落射型螢光顕微

1548

Fig.

　　る

１

乃本田俊辰ほか

基佐細胞癌．腫瘍栄一を闘か様にＦＮが存在す

鏡卜にＬＭの分布を観察した.

　3.螢光抗体法に供した連続切片の１部をＨＥ染色

し，同部の病理組識学的変化を観察した.

　4.血獄中のＦＮ濃度測定：ＦＮに対する特異抗体

と打原抗体複合物形成の結果，その両度を測定する

immuno turbidimetric assay法によるＦＮ測定キッ

ト(Boeringer Mannheim)を用いた．-定量のクェ

ン酸ナトリウム処理血漿と，ＦＮに対する特異抗体溶

液を，光路長１ｃｍのセミマイクロキュペットに加え，

混和した．正確に１分後に最初の吸光度（E1）を測定

し，引き続き∧王確に10分後に討「1」目の吸光度（.E2）

を測定した．吸玉度は34()nmの波長を川ト，測定温度

は15℃～30℃の‥一定温度トに行った．一一定時間におけ

る両度の差，すなわち△Ｅ＝E2一一EIを求め，あらかじ

めキット申のＦＮ標準液から作製した検定曲線から，

その検定のＦＮ濃度を求めた．

　　　　　　　　　　結　　果

　I. FNの分布について：正常な表皮真皮境界部お

よび真皮では，付属器および，毛紅血管の基底膜部に

のみＦＮを認め，真皮は膠原縁組に沿って少量のFN

を認めるにすぎない.

　ＢＣＣでは全例とも腫瘍巣をとり囲む間質に呵広く，

ほぼ‥･様に連続的に陽性所見を認めた(Fig. 1九sec

においても挫傷巣をとり囲む間算にびまん性のFN

の陽性所見を認めた(Fig. 2).

　II. LMの分布についてト正常な表皮真皮境界部な

らびに真皮では,ＬＭは付属器および,毛細血管の基底

膜部に線状をなして明瞭に認められた. BCCでは，

ＬＭは腫瘍実質と間質との境界部にのみ線状に，かつ

連続性に陽性所見が認められたが(Fig. 3), FNと異

Fig. 2　有牲細胞癌．腫瘍間にびまん性にＦＮを認め

　る．

なり間質には認められなかった. BCCの１例におい

て，腫瘍棄内に穎粒状あるいはそれらが集合して塊状

を皇する陽性所見を認めた(Fig. 4九ＳＣＣでは基底膜

部に･致して線状の陽性所見が認められた拡連続切

片のＰＡＳ染色では同部はほとんど陰性でめった．周

囲の間質にはＬＭは認められなかった(Fig. 5).

　III.間質反応とＦＮについて:

　1）ＢＣＣ:閣質のＦＮの分布と，間質における炎症

細胞浸潤，線紅芽細胞の分布との関係を検討した八

明瞭な相関関係は認められなかった．ただ炎症性細胞

浸潤が著明な部位にＦＮの分布が顕著にみられる傾

向が窺がわれた.

　2) sec:関質のＦＮの分布と間質の反応との相互

関係は明らかには認められなかった．

　ＩＶ．血漿ＦＮ濃度について：抗原抗体反応を用い

てBCC, sec患者血漿中のＦＮを測定したところ，

Table 2に示す通り，正常人では264±28μｇ/m1（ｎ＝

∩，ＢＣＣでは492±184μｇ/ml（ｎ＝4），ＳＣＣでは

692±220μｇ/m1（ｎ＝7）となり, BCC, secともに正

常人より有意の高い値が得られた．

　　　　　　　　　　考　　按

　ＦＮは種々の動物組織に広く分布し，ヒトについて

は，血液，リンパ，血管，呼吸器，消化器，泌尿器，

筋肉，腺，肝，腎，皮膚など現在まで倹素されたすべ

ての組織での存在が報告されている5）.

　ＦＮはｐＦＮとＣＦＮとがあり, pFNは主に肝臓で合

成･分泌され，ヒト血漿中に約300μg/ml,血清では約

200μg/mlの濃度で存在する6）.ｐＦＮは，トロソビソ，

活性型血液凝固第ＸＨＩ因子の基質として,血液凝固の

終末梢に関与して破綻血管とその近傍で止血，血栓の

BCC, secのFibronectin, Laminin分布

Fig. 3　幕底細胞癌．腫瘍巣と間質との境界部に線状

　にＬＭを認める．

Fig. 5　有棟細胞癌．腫瘍の基底膜部に一致してLM

　を認､める．

形成に寄ｹ士，損傷組織の修復機転を開始さぜ，さら

に網内系細胞の機能に関りすると考えられてトる7).

　ｃＦＮはかつてfibroblast surface antigen (ＳＦＡ)8)，

galacto proterin ａ,9)1aｒｇｅexternal transformation-

sensitive protein (ＬＥＴＳ)1o)などと呼ばれ，動物細胞

の表面に存在するが，主に線維芽細胞で産生され，そ

の他内皮細胞，筋原細胞，アストロクリア細胞，シュ

ワソ細胞，表皮細胞，マクロファージで乱低Ｃａイオ

ソ濃度などの条件で産生されるU)

　細胞の癌化に伴ってｃＦＮは顕著に減少し，細胞表

面の主要な糖蛋白と報告されているが，ＦＮは多機能

ドノイソ構造を有し，それらが細胞表面，コラーゲソ，

グリコサミノグリカソ，フィブリソと結合し，

extracellular matrixを調節すると考えられている．

　ｐＦＮとｃＦＮの免疫学的鑑別は困難とされるが，両

者の生理活性の強さを比べると, cFNの癌細胞を配向

させる活性は, pFNに比し約50倍，赤血球凝集能に関

1549

Fig. 4　基底細胞癌．腫瘍巣内に塊状にＬＭを認め

　る．

しては問約150～200倍高いとの報告がある1）.

　ＦＮの生理活性は,1）細胞の接着の促進,2）癌細胞

の正常細胞への復元，3）細胞の移動と走化性の促進，

4）食作用とオプソニソ活性の促進，5）細胞分化の調

節，6）組織の修復，7）癌転移の抑制（？）など多様

な生物学的活性を持つといわれる12)

　多くのtransformed cell では, pericellular FN が消

失し，そのため結合織基質との相互作用が減少し，悪

性変化した細胞が浸潤性発育する過程を促進する可能

性が示唆されている. in vivo における観察では，ほと

んどの上皮細胞の基底膜部にＦＮが存在するが，上皮

細胞が癌化すると，その基底膜部からＦＮが消失また

は減少するとの報告がある13)また,ほとんどの悪性腫

瘍の間質にはＦＮを認めるが，個々の悪性腫瘍細胞の

周囲にはＦＮは認められていない13)

　前田ら14）は胃癌の間質に多くのＦＮを認め，高橋

ら1,）は子宮癌,卵巣癌の間質に同様な所見を認めたが，

Ｌａｂａt－Ｒｏｂｅｒtら16）は，乳癌の組織において早期の病

変ではＦＮが認められなかった例を報告している.

　Ｎｅｌsｏｎｙ）は, BCCにおいてFN, LMともに腫瘍

巣周囲に分布する八ＦＮは間質にびまん性に,ＬＭは

腫瘍巣の周囲に明瞭に線状に存在し，一部の症例にお

いては腫瘍巣内に乱ＦＮ,ＬＭが認められたと報告し

ている．さらに,ＦＮが腫瘍実質周囲に強陽性の所見を

呈するのは，間質性炎症反応の完進によると推察した

が，著者らの結果(Table 1）では，ＦＮ陽性所見の程

1550　　　　　乃木田俊辰ほか

Table１　BCC, secの間質反応とFN

　casenumber Histology

StromareactionFibronectin

Inflammatory　　　cells Vessels Fibroblasts

１

２

３

４

５

６

７

８

BCC

BCC

BCC

BCC

BCC

BCC

BCC

BCC

　☆☆

☆☆☆

　☆

☆☆☆

　☆

☆☆☆

　☆☆

　☆

　☆☆

　☆

　☆

☆☆☆

　☆

　☆

　☆

　☆☆

☆☆☆

☆☆☆

　☆☆

☆☆☆

　☆

　☆

☆☆

　☆

　☆☆

☆☆☆

☆☆☆

　☆☆

　☆☆

☆☆☆

☆☆

☆☆

9

10

11

12

13

　　　　　　sec

　　　　　　sec

Pseudoglandular sec

Pseudoglandular sec

　Skin metastasisof　　　Lung Cancer

☆☆☆

☆☆☆

　☆

　☆☆

　－

☆

☆

☆☆

　☆

☆☆

☆☆

☆☆

☆☆

☆☆

☆

☆☆

☆☆

☆☆

☆

☆

　　　(反応の強さを☆～☆☆☆で示した)

Table ２　BCC, ＳＣＣ患者血漿ＦＮ濃度

　　　　　血漿ＦＮ濃度(μg/mi)

BCCsec

Normal

(ｎ＝4)

(ｎ＝7)

(ｎ＝7)

492±184

642±220

264±28

μg/ml

μg/ml

μg/ml

度と間質の炎症反応との間に明らかな相関は認められ

なかった．これらの間質におけるＦＮの存在につい

て, Grimwoodら1')はＢＣＣにおけるＦＮは,血漿由来

のものと線維芽細胞により産生される両者から成り，

腫瘍実質内に認められるＦＮは抗VIII因子抗体，抗

フィブリノーゲン抗体を用いた結果から血漿由来のも

のでなく，腫瘍細胞が産生したものによると想定した．

　ｐＦＮでは各種病態，性差，加齢による変動が知られ

ており，播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ冲)，感染症19)

敗血症20)21)外傷22)手術後，炎症特に減少し，妊娠，

膠原病23)糖尿病24)胆汁うっ滞時に増加するとされて

いる．一方，担癌患者のｐＦＮの変動について，

Mosher & Williamsら19)は乳癌患者おいて, Blumen-

stockら25)は肺癌患者においてｐＦＮ増加を報告，

Zardiら26)は乳癌から得られたEhrlick腹水癌を移植

したマウスのｐＦＮが，移植３日～５日後に上昇する

と報告した. Saba & Antikatzidesら27)は，担癌患者

におけるＦＮのオプソニソ効果が増加するのは，

monocyte一macrophage系の抗腫瘍反応によるもの

と想定してし,る．

　一方, Bruhn & Heimburgerら28)は，慢性リンパ球

性白血病や骨髄性線維症患者ではｐＦＮは減少し，慢

性骨髄性白血病や他の悪性疾患ではほぽ正常と報告し

た. Choate & Mosherら29)は詳細な検討を加え，担癌

患者のｐＦＮは強力な治療中でなく，敗血症などの合

併症がない状態では，正常あるいは高値を示すものと

考えている．さきに述べた通り著者らが行ったpFN

の測定結果では,正常人血漿に比し患者血漿中のpFN

濃度は明らかに高値を示し，これまでの報告とほぼ同

様の結果を得た．

　以上FN, LMの動態から悪性腫瘍と間質との相互

関係について述べてきたが，未だ不明な点が多い.

FN, LMは間質や基底膜部の主要な糖蛋白であり，ま

たそれら機能を考慮すると，腫瘍細胞の浸潤転移機構

と密接に関連することは否定できない所と考えられ

る．

　著者らがここで報告したＢＣＣ,ＳＣＣは未だ少数例

に過ぎず，これら皮膚悪性腫瘍には種々な型，悪性度，

浸潤･転移がみられ，これらとFN, LMとの関連を検

索することは腫瘍の浸潤・転移機構の検討に極めて有

意義であり，今後の検討に待つ所が多い．

　本論文の要旨は第35回西部支部総会(昭和58年11月)に報

告された．

　稿を終えるにあたり,御指導,御校閲を賜った荒尾龍喜教

授，並びに御助言を頂いた石橋康正教授に深く謝意を表し

ます．

BCC, secのFibronectin, Laminin分布

　　　　　　　　文　　献

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