第三章 血型与输血（第三章 血型与输血（ 22 ））

魏彦刚魏彦刚

菏泽医学专科学校菏泽医学专科学校

第三节 白细胞血型系统第三节 白细胞血型系统1. 包括红细胞血型抗原2. 白细胞本身所特有的血型抗原3. 人类白细胞抗原（ HLA ）

一、一、 HLAHLA 系统基因、抗原结构系统基因、抗原结构HLAHLA 基因型基因型 : : 位于位于 66 号染色体短臂号染色体短臂 66pp21.321.3 区域。区域。HLAHLA 抗原抗原 １１ . HLA-I. HLA-I 类分子　类分子　

２２ .HLA-II.HLA-II 类分子类分子

HLAHLA 分子分布分子分布

经典经典 HLA-ⅠHLA-Ⅰ 类分子 有核细胞表面类分子 有核细胞表面

HLA-ⅡHLA-Ⅱ 类抗原分子 抗原递呈细胞 类抗原分子 抗原递呈细胞 （（ antigen presenting cell antigen presenting cell ，， APCAPC ））

二、二、 HLAHLA 系统抗原的检测方法系统抗原的检测方法

１ . 淋巴细胞毒试验 分型血清中含有的抗特定 HLA 抗原的细胞毒抗体与待检淋巴细胞膜表面的 HLA 抗原结合后，在补体的参与下损伤细胞膜，观察细胞是否被染色剂染色，了解细胞损伤、死亡的情况。

HLAHLA 系统抗原的检测方法系统抗原的检测方法2.2. 混合淋巴细胞培养试验混合淋巴细胞培养试验

DNADNA 合成量和淋巴细胞转化率增加与组织相合成量和淋巴细胞转化率增加与组织相容性抗原的差异大小成正比关系容性抗原的差异大小成正比关系

3.HLA3.HLA 的分子生物学的分子生物学检测：检测：

PCR-SSPPCR-SSP （ （ PCRPCR序列特异性引物）序列特异性引物）

PCR-RFLPPCR-RFLP（（ PCRPCR限制性片段长度多态限制性片段长度多态性）性）

PCR-SBTPCR-SBT（（ PCR-PCR-直接测序分型直接测序分型 ））

HLAHLA 检测的临床意检测的临床意义义

器官移植 器官移植 HLA-AHLA-A HLA-B HLA-DR﹑ ﹑HLA-B HLA-DR﹑ ﹑ 完全相同者移植效果好完全相同者移植效果好输血输血HLAHLA 同型输注会提高输血疗效同型输注会提高输血疗效亲子鉴定亲子鉴定 因其高度多态性而成为最能代表个体特异性并伴随个体终身因其高度多态性而成为最能代表个体特异性并伴随个体终身

的稳定的遗传标志，因其单倍型遗传特征的稳定的遗传标志，因其单倍型遗传特征，，使子代保持父代的遗使子代保持父代的遗传特征，在无关个体之间传特征，在无关个体之间 HLAHLA 型别完全相同的几率及低。型别完全相同的几率及低。

疾病的诊断疾病的诊断

强直性脊柱炎与强直性脊柱炎与 HLA-B27HLA-B27 有关；银屑病有关；银屑病 (( 牛皮癣牛皮癣 )) 患者携带患者携带 HLA-HLA-B13B13或或 HLA-B17HLA-B17

HLAHLA 在器官移植中的作用在器官移植中的作用移植器官有二大类主要抗原：移植器官有二大类主要抗原： ABOABO 血型和血型和人类白细胞抗原人类白细胞抗原(HLA)(HLA) ，它们决定了同种移植，它们决定了同种移植的排斥反应。的排斥反应。 ABOABO 血型只有血型只有 44种种(O(O、、 AA、、 BB、、 AB)AB) ，寻找，寻找 ABOABO 血型相同的血型相同的供受者并不难；但是供受者并不难；但是 HLAHLA 异常复杂，现已查异常复杂，现已查明有明有 77 个位点，即个位点，即 HLA──AHLA──A、、 BB、、 CC、、 DD、、DRDR、、 DQDQ、、 DPDP ，共，共 148148 个抗原，其组合可个抗原，其组合可超过超过 200200 万种。除非同卵双生子，事实上不万种。除非同卵双生子，事实上不可能找到可能找到 HLAHLA 完全相同的供受者。完全相同的供受者。

所以，器官同种移植后必然发生排斥反应，必须用所以，器官同种移植后必然发生排斥反应，必须用强有力的免疫抑制措施予以逆转。到强有力的免疫抑制措施予以逆转。到 19601960 年代才年代才陆续发现有临床实效的免疫抑制药物：陆续发现有临床实效的免疫抑制药物：硫唑嘌呤硫唑嘌呤(1961)(1961) 、、泼尼松泼尼松(1963)(1963) 、、抗淋巴细胞球蛋白抗淋巴细胞球蛋白(ALG(ALG，，1966) 1966) 、环磷酰胺、环磷酰胺 (1971)(1971) ，这以后才能使移植的器，这以后才能使移植的器官长期存活。官长期存活。 19621962 年美国年美国 J.E.J.E. 默里（默里（ 19901990 年年诺贝尔生理学或医学奖诺贝尔生理学或医学奖获得者）第一次进行人体肾获得者）第一次进行人体肾移植获得长期存活，器官移植作为医疗手段，才成移植获得长期存活，器官移植作为医疗手段，才成为现实。 为现实。

第四节 血小板血型第四节 血小板血型

血小板同种抗体血小板同种抗体

　　同种血小板抗体一般由输血、妊娠或骨髓移植等免疫刺激而产生。最常见的抗体是HRA-lb和 5b 抗体。这和相应 HPA 抗原在群体中的分布频率有关。

三、血小板血型抗原和抗体的临床意义三、血小板血型抗原和抗体的临床意义　　

1.1. 新生儿同新生儿同种免疫性血种免疫性血小板减少性小板减少性紫癜 紫癜

2.2. 输血后紫输血后紫癜 癜

3.3. 血小板输血小板输注无效注无效

四、血小板输注的适应证及禁忌证四、血小板输注的适应证及禁忌证　　

11 ．预防性血小板输注．预防性血小板输注 ::

(1)(1) 各种慢性血小板生成不良性疾病。各种慢性血小板生成不良性疾病。 (2)(2) 血小板低下并伴有导致血小板破坏血小板低下并伴有导致血小板破坏

或消耗增加的因素存在。或消耗增加的因素存在。

飞来横祸 少女急救输错血飞来横祸 少女急救输错血　　　　 19971997年年 55月月 3030 日中午，当时正读初中三年级的谢晓荣放学后外出日中午，当时正读初中三年级的谢晓荣放学后外出买午餐时，被一辆冲上便道的小轿车撞倒，导致多发性骨折，情况非常买午餐时，被一辆冲上便道的小轿车撞倒，导致多发性骨折，情况非常危急，当天危急，当天 1414 时被送至天津医院救治。经过检验，医院确认谢晓荣的时被送至天津医院救治。经过检验，医院确认谢晓荣的血型为血型为 ABAB 型型，当天，当天 1818 时，时， 800800 毫升血被紧急输入她体内，同时为她毫升血被紧急输入她体内，同时为她进行了第一次手术。进行了第一次手术。

　　　　 19971997年年 66月月 44 日，天津医院为谢晓荣做第二次手术，进行骨折部日，天津医院为谢晓荣做第二次手术，进行骨折部位切开复位钢板固定手术。因为在第一次手术时，谢晓荣曾输入位切开复位钢板固定手术。因为在第一次手术时，谢晓荣曾输入 ABAB型型RhRh 阳性血，按照有输血史的患者再次输血时必须做阳性血，按照有输血史的患者再次输血时必须做 RhRh 血型检测的规定，血型检测的规定，天津医院在这次手术前为谢晓荣进行了天津医院在这次手术前为谢晓荣进行了 RhRh 血型检测，结果她的血型为血型检测，结果她的血型为ABAB型型 RhRh 阳性阳性。手术中，谢晓荣又被输入了。手术中，谢晓荣又被输入了 20002000 毫升毫升 RhRh 阳性血。阳性血。

　　　　 19981998年年 1111月月 33 日，谢晓荣因“左股骨干及左锁骨骨折内固定术后，日，谢晓荣因“左股骨干及左锁骨骨折内固定术后，左膝髋关节僵直”再次住进天津医院接受手术治疗。然而，这次左膝髋关节僵直”再次住进天津医院接受手术治疗。然而，这次 RhRh 血血型检测却发现，谢晓荣的血型为型检测却发现，谢晓荣的血型为 ABAB型型 RhRh 阴性阴性。因为血液中心没有。因为血液中心没有 RhRh阴性血供应，医院用阴性血供应，医院用自体血回收自体血回收的办法为谢晓荣完成了手术。的办法为谢晓荣完成了手术。

谢晓荣血型为谢晓荣血型为 ABAB型型 RhRh阴性阴性 ,, 在医院急救时被在医院急救时被输入了输入了 ABAB型型 RhRh阳性血阳性血。虽然身体已经基本恢复，。虽然身体已经基本恢复，但她永远地背负了另一个恶果但她永远地背负了另一个恶果——————她的体内已经她的体内已经产生了产生了免疫性抗体免疫性抗体，如果她将来的丈夫属于，如果她将来的丈夫属于 RhRh阳阳性血，她怀的胎儿也是性血，她怀的胎儿也是 RhRh阳性血，就可能出现流阳性血，就可能出现流产或新生儿溶血。然而，按照医疗规范，医院的行产或新生儿溶血。然而，按照医疗规范，医院的行为没有过失。谢晓荣却永远不能像其他人一样正常为没有过失。谢晓荣却永远不能像其他人一样正常地恋爱和结婚了。地恋爱和结婚了。

　　　　

第四节 血型鉴定与交叉配血第四节 血型鉴定与交叉配血一、标本的采集、送检与保存一、标本的采集、送检与保存

二、二、 ABOABO 血型鉴定血型鉴定

三、三、 RhRh 血型鉴定血型鉴定

四、红细胞血型系统交叉配血四、红细胞血型系统交叉配血

一、标本的采集、送检与保存一、标本的采集、送检与保存

（一）、标本的采集（一）、标本的采集 1.1.红细胞悬液标本红细胞悬液标本采集采集 EDTA-KEDTA-K22 抗凝的静脉血抗凝的静脉血离心，取红细胞用生理盐水洗涤离心，取红细胞用生理盐水洗涤配制红细胞悬液：配制红细胞悬液： 22％红细胞悬液用于抗体效价的测定；％红细胞悬液用于抗体效价的测定；

5 5 ％红细胞悬液用于血型鉴定、交叉配血试验， ％红细胞悬液用于血型鉴定、交叉配血试验， 10 10 ％红％红细胞悬液用于测定抗体的亲和力。细胞悬液用于测定抗体的亲和力。

2.2. 血浆或血清标本血浆或血清标本

（二）标本送检（二）标本送检采集后立即送检，采集后立即送检， 22 小时内完成检测小时内完成检测

检验工作人员注意核对标本检验工作人员注意核对标本

（三）标本的保存（三）标本的保存用盐水配置的红细胞悬液只能用盐水配置的红细胞悬液只能当天使用当天使用

交叉配血标本要放在交叉配血标本要放在 4℃4℃ 冰箱中保存一周，冰箱中保存一周，在出现输血反应时备查在出现输血反应时备查

二、二、 ABOABO 血型鉴定方法血型鉴定方法血型鉴定血型鉴定

抗原抗原 ++ 抗体反应抗体反应

正向定型正向定型（（ direct typingdirect typing）） :: 已知特异性抗体（标准血清） 检测红细胞上的未知抗已知特异性抗体（标准血清） 检测红细胞上的未知抗

原原

反向定型反向定型（（ indirect typing):indirect typing): 已知血型的标准红细胞 检测血清中的未知抗体 已知血型的标准红细胞 检测血清中的未知抗体

ABOABO 血型正、反向鉴定及结果判断血型正、反向鉴定及结果判断

正向定型 反向定型

（标准血清+被检查红细胞） （标准红细胞+被检查血清）

结果判读

抗 A 抗 B 抗 AB（O型血清） A型红细胞

B型红细胞

O型红细胞

+ - + - + - A型 - + + + - - B型 + + + - - - AB型 - - - + + - O型

鉴定鉴定 ABOABO 血型常用以下几种方法 血型常用以下几种方法

1. 1. 生理盐水凝集法生理盐水凝集法 盐水介质盐水介质

原理：原理： Ag+Ab AgAbAg+Ab AgAb

1. 1. 生理盐水凝集法生理盐水凝集法用生理盐水为介质，测用生理盐水为介质，测 IgMIgM 型抗体 型抗体

玻片法玻片法

试管法试管法

抗抗 AA 、抗、抗 BB标准血清来源标准血清来源1.1.从健康壮年人血清中获得从健康壮年人血清中获得

2. 2. 研制获得的单克隆抗体研制获得的单克隆抗体

正向定型血型鉴定操作程序图（玻片法）

A抗原 +抗 A抗体

B抗原 +抗 B抗体

血型鉴定血型鉴定

试管法试管法11 、每个被检者准备小试管、每个被检者准备小试管 11支，贴好名签，加入等支，贴好名签，加入等渗盐水渗盐水 11mlml 。。从毛细血管采血配成从毛细血管采血配成 5%5% 的红细胞悬的红细胞悬液，注意血液不能凝结。液，注意血液不能凝结。

22 、每个被检者准备小试管、每个被检者准备小试管 33支，分别贴上支，分别贴上 AA、、 BB标标签，并标上姓名，按标签分别加抗签，并标上姓名，按标签分别加抗 AA、、 BB 抗体抗体 22滴。滴。

33 、两管各加被检红细胞悬液、两管各加被检红细胞悬液 11滴混匀。滴混匀。44 、放在离心机内，用、放在离心机内，用 1000~30001000~3000 转转 // 分，分， 11 分钟，分钟，

观察现象。观察现象。

加试剂抗体血清加试剂抗体血清

加被检红细胞悬液加被检红细胞悬液

离心离心

相对应的抗原抗体反应相对应的抗原抗体反应

观察结果观察结果

反向定型反向定型

一、用途：当没有合适的标准血清，或用标准血清鉴定出现可疑结果时，一、用途：当没有合适的标准血清，或用标准血清鉴定出现可疑结果时，可用此法核对。可用此法核对。

二、标准红细胞悬液的配置：分别取已知敏感性高的标准二、标准红细胞悬液的配置：分别取已知敏感性高的标准 AA、、 BB、、 00 、、三三型 人的红细胞红洗涤三次，配成型 人的红细胞红洗涤三次，配成 5%5% 的红细胞悬液（若无标准红细胞，的红细胞悬液（若无标准红细胞，可用可用 55个个 AA 型，型， 22个个 BB 型，型， 22个个 OO 型人红细胞，分别按型混合，代作型人红细胞，分别按型混合，代作已知标准红细胞）已知标准红细胞）

三、方法三、方法11 、从被检者静脉，制成血清或血浆。、从被检者静脉，制成血清或血浆。22 、试管的准备，同标准血清鉴定法、试管的准备，同标准血清鉴定法33 、在、在 AA 管放标准管放标准 AA 型红细胞型红细胞 11 滴，滴， BB 管放标准管放标准 BB 型红细胞型红细胞 11 滴，在滴，在 OO

型管放标准型管放标准 oo 型红细胞型红细胞 11 滴。滴。44 、各加被检血清、各加被检血清 22 滴，分别混匀，离心后判断结果同前。滴，分别混匀，离心后判断结果同前。

在特殊环境，没有标准血清和标准在特殊环境，没有标准血清和标准红细胞，仅知一个红细胞，仅知一个 AA 型（或型（或 BB 型）人型）人时，若用血液，怎么来鉴定人的血型？时，若用血液，怎么来鉴定人的血型？

问题

已知 A 型红细胞 + 被检者血清

已知 A 型血清 + 被检得红细胞

2.2. 微柱凝胶技术微柱凝胶技术微柱凝胶技术是液相技术与固相技术的巧妙微柱凝胶技术是液相技术与固相技术的巧妙

组合，是凝胶过滤技术、离心技术、红细胞组合，是凝胶过滤技术、离心技术、红细胞凝集试验技术（特异性抗体抗原反应）的完凝集试验技术（特异性抗体抗原反应）的完美结合。通过对凝胶种类的选择和凝胶浓度美结合。通过对凝胶种类的选择和凝胶浓度的调节来控制分子筛孔径大小的调节来控制分子筛孔径大小 ,, 使分子筛只使分子筛只允许游离红细胞通过允许游离红细胞通过 ,,从而达到分辩凝集红从而达到分辩凝集红细胞和非凝集红细胞的目的。细胞和非凝集红细胞的目的。微柱凝胶技术微柱凝胶技术是目前最易大规模推广、最适于常规试验的是目前最易大规模推广、最适于常规试验的最好血型血清学试验技术。最好血型血清学试验技术。

微柱凝胶技术原理微柱凝胶技术原理当抗原抗体反应时红细胞发生凝集（包括已当抗原抗体反应时红细胞发生凝集（包括已致敏的红细胞通过抗人球蛋白的桥连作用发致敏的红细胞通过抗人球蛋白的桥连作用发生的凝集），在一定的离心力作用下，凝集生的凝集），在一定的离心力作用下，凝集的红细胞不能通过凝胶间隙而留在凝胶分离的红细胞不能通过凝胶间隙而留在凝胶分离柱上层或分散在凝胶分离柱中，此为阳性反柱上层或分散在凝胶分离柱中，此为阳性反应；而未凝集的红细胞在离心力的作用下可应；而未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶间隙而沉积于凝胶分离柱的底部，通过凝胶间隙而沉积于凝胶分离柱的底部，此为阴性反应。此为阴性反应。

微柱凝胶种类微柱凝胶种类（一）中性胶（又称空白胶，仅含有葡聚糖凝胶）：（一）中性胶（又称空白胶，仅含有葡聚糖凝胶）：

用做检测用做检测 IgMIgM 抗体与相应抗原红细胞的反应。如抗体与相应抗原红细胞的反应。如ABOABO 反定型。反定型。

（二）特异性胶（如加入过抗（二）特异性胶（如加入过抗 -A-A 、抗、抗 -B-B 、抗、抗 -D-D等特异性抗体的凝胶）：利用包被的抗体检测相应等特异性抗体的凝胶）：利用包被的抗体检测相应抗原。抗原。

（三）抗球蛋白胶（包被了单特异性或多特异性抗（三）抗球蛋白胶（包被了单特异性或多特异性抗人球蛋白试剂的凝胶）。用于检测人球蛋白试剂的凝胶）。用于检测 IgGIgG 抗体与相应抗体与相应抗原红细胞的反应。抗原红细胞的反应。

微柱凝胶卡的设计微柱凝胶卡的设计（一）每卡有（一）每卡有 66孔或孔或 88孔不等，国内产品目孔不等，国内产品目前均为前均为 66孔孔

（二）每孔根据不同用途，采用不同设计。（二）每孔根据不同用途，采用不同设计。每孔加入的可以是中性胶、特异性胶或抗球每孔加入的可以是中性胶、特异性胶或抗球蛋白胶；蛋白胶；

（三）每孔分为反应腔和凝胶分离柱两部分。（三）每孔分为反应腔和凝胶分离柱两部分。

凝胶试验使用的试剂和器材凝胶试验使用的试剂和器材

2.2.微柱凝胶法微柱凝胶法红细胞抗原与相应抗体在红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质微柱凝胶介质中发生凝集中发生凝集

发应 发应

ABOABO 血型鉴定质量控制血型鉴定质量控制11 、技术上的失误、技术上的失误

假阴性假阴性

①抗体试剂与红细胞比例不对应。①抗体试剂与红细胞比例不对应。②红细胞悬液过淡。②红细胞悬液过淡。③离心速度、时间不够。③离心速度、时间不够。④忽略观察溶血现象，因溶血也是阳性反应。④忽略观察溶血现象，因溶血也是阳性反应。

假阳性假阳性

①离心速度过大或离心时间过长。①离心速度过大或离心时间过长。②使用了受到细菌污染的抗体试剂和盐②使用了受到细菌污染的抗体试剂和盐水。水。③使用不干净的玻璃试管等。③使用不干净的玻璃试管等。

造成假阳性或假阴性的人为原因：造成假阳性或假阴性的人为原因：①标本张冠李戴。①标本张冠李戴。②未加入或使用了失效的试剂。②未加入或使用了失效的试剂。③操作者不能正确识别和解释试验结果。③操作者不能正确识别和解释试验结果。

④人为的书写错误。④人为的书写错误。

ABOABO 血型鉴定质量控制血型鉴定质量控制22 、被检人血清标本的问题、被检人血清标本的问题①① 婴儿及老年人，婴儿及老年人， 44～～ 66月婴儿血清中月婴儿血清中

ABOABO 抗体很弱抗体很弱

②② 疾病影响引起假凝集或弱凝集。疾病影响引起假凝集或弱凝集。

③③ 治疗措施的影响治疗措施的影响

ABOABO 血型鉴定质量控制血型鉴定质量控制33 、被检者红细胞的问题、被检者红细胞的问题①① 红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱如弱红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱如弱

AA 、弱、弱 BB 亚型和白血症或恶性肿瘤患者亚型和白血症或恶性肿瘤患者

②② 红细胞获得性异常，如红细胞获得性异常，如 OO 型或型或 AA 型病人型病人因肠道细菌感染使红细胞上获得类因肠道细菌感染使红细胞上获得类 BB 抗原抗原

③③ 细菌污染细菌污染

正反定型结果不一致的解决办法 正反定型结果不一致的解决办法 首先重复试验首先重复试验，，不符则继续做下列试验。不符则继续做下列试验。（（ 11 ）重新采集献血员和受血者的新鲜血液标本）重新采集献血员和受血者的新鲜血液标本（（ 22 ）多次洗涤被测红细胞和标准红细胞）多次洗涤被测红细胞和标准红细胞（（ 33 ）用抗）用抗 A1A1 、抗、抗 ABAB 检测红细胞。检测红细胞。（（ 44 ）如怀疑血清中有抗）如怀疑血清中有抗 A1A1 ，可用数份，可用数份 A2A2红细胞标本红细胞标本

进行检验。进行检验。（（ 55 ）如果试验结果未见凝集，应将正向及反向试验至少）如果试验结果未见凝集，应将正向及反向试验至少

在室温在在室温在 40℃40℃ 放置放置 30min30min ，用显微镜检查核实。，用显微镜检查核实。（（ 66 ）若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型不符，可进）若怀疑是由于抗原减弱造成的正反定型不符，可进

一步做木瓜酶试验、直接抗球蛋白试验、吸收放散试验等一步做木瓜酶试验、直接抗球蛋白试验、吸收放散试验等加以鉴别。加以鉴别。

三、三、 ABOABO 血型鉴定的临床意义血型鉴定的临床意义1. 1. 输血 输血

2.2.新生儿溶血新生儿溶血

3.3. 器官移植器官移植

4. 4. 其它 其它 如亲自鉴定、法医学鉴定等如亲自鉴定、法医学鉴定等