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第四章 药物的含量测定方法与验证. 定量方法特点:. 第一节 定量分析方法的分类与特点. 一、容量分析法 (一)容量分析法的特点 操作简单、快速; 比较准确( RSD < 0.2% ); 仪器普通易得。. (二)容量分析法的有关计算. 1. 滴定度( T )的概念 每 1ml 滴定液相当于被测物质的量 (mg) 2. 滴定度的计算 aA + bB cC + dD T = M × a/b × B 3. 百分含量的计算(原料药) - PowerPoint PPT Presentation
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第四章 第四章
药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证
分析方法 方法优点 方法缺点 适用对象
容量分析法 简便、准确度好、精密度高
专属性差 化学原料药含量测定
光谱分析法 简便、快速、灵敏度高
专属性差 制剂中溶出度、释放度测定
色谱法 灵敏度高、专属性好
操作相对复杂 (低)制剂的含量测定
定量方法特点:
第一节第一节 定量分析方法的分类与特点 定量分析方法的分类与特点
一、容量分析法
(一)容量分析法的特点
操作简单、快速;
比较准确( RSD< 0.2%);
仪器普通易得。
1. 滴定度( T )的概念 每 1ml滴定液相当于被测物质的量(mg)
2. 滴定度的计算 aA + bB cC + dD
T = M×a/b×B
3. 百分含量的计算(原料药)
( 1 )直接滴定法 D% = V ×F × T/W ×100%
F = 实际浓度 / 规定浓度
(二)容量分析法的有关计算
( 2 )剩余滴定法
%m
FVVT
s
)(
百分含量
T—— 滴定度,每 1ml 滴定液相当于被测组分的 mg 数
V—— 滴定时,供试品消耗滴定液的体积( ml ) V0—— 滴定时,空白消耗滴定液的体积( m
l )F—— 浓度校正因子
ms—— 供试品的质量
双相滴定法测定苯甲酸钠含量。取本品双相滴定法测定苯甲酸钠含量。取本品0.3220g,0.3220g, 加水加水 15ml15ml ,乙醚,乙醚 30ml30ml 与甲基橙与甲基橙33 滴,用滴,用 0.1062mol/L0.1062mol/L 盐酸滴定,至水层显盐酸滴定,至水层显橙红色,分取水层,置具塞锥形瓶中,加乙醚橙红色,分取水层,置具塞锥形瓶中,加乙醚20ml20ml ,振摇,继续滴定至持续橙红色,消耗,振摇,继续滴定至持续橙红色,消耗盐酸体积盐酸体积 21.05ml21.05ml 。计算样品中苯甲酸钠含。计算样品中苯甲酸钠含量。苯甲酸钠分子量量。苯甲酸钠分子量 144.1144.1 。。
司可巴比妥的含量测定:取供试品司可巴比妥的含量测定:取供试品 0.1301g0.1301g ,置碘量瓶中,加,置碘量瓶中,加
水水 10ml10ml ,振摇使溶解,精密加溴滴定液(,振摇使溶解,精密加溴滴定液( 0.1mol/L)25ml0.1mol/L)25ml ,,
再加盐酸再加盐酸 5ml5ml ,立即密塞并振摇,立即密塞并振摇 1min1min ,暗处静置,暗处静置 15min15min 后,后,
加碘化钾试液加碘化钾试液 10ml10ml ,立即密塞摇匀,用,立即密塞摇匀,用 0.0999mol/L0.0999mol/L 硫代硫硫代硫
酸钠滴定液滴定,至近终点时加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消酸钠滴定液滴定,至近终点时加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消
失,并将滴定结果用空白试验校正。已知:样品消耗硫代硫酸钠失,并将滴定结果用空白试验校正。已知:样品消耗硫代硫酸钠
滴定液滴定液 15.05ml15.05ml ,空白消耗,空白消耗 25.05ml25.05ml ,每,每 mlml 溴滴定液溴滴定液
(( 0.1mol/L)0.1mol/L) 相当于相当于 13.01mg13.01mg 的司可巴比妥。计算含量的司可巴比妥。计算含量
片剂含量测定结果的计算
%100/
%100%
片)标示量(
)平均片重()供试品重()测得量(
标示量每片含量
标示量
g
ggg
%100%
标示量
平均片重标示量 sm
TVF
烟酸片含量测定
取本品 10 片精密称定为 3.5840g ,研细,精密称取 0.3729g ,置 100 mL 锥形瓶中水浴加热溶解后,放冷。加酚酞指示剂 3 滴,用氢氧化钠滴定液( 0.1005mol/L) 滴定至粉红色消耗 25.02 mL 。每 1mL 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 相当 12.31mg 的烟酸。求供试品中烟酸的标示百分含量(标示量 0.3g/ 片)。
标示量%=
V × T × F × 平均片重
W × 标示量×100 %
=25.02 ×12.31/1000 ×0.1005/0.1×0.3584
0.3729 ×0.3
= 99.17%
×100 %
二、光谱分析法 (一)紫外 - 可见分光光度法( 200nm~ 760nm)
灵敏度高,可达 10-
7g/ml ~ 10-4g/ml
1. 特点 准确度高, RSD ( % ) < 2%
仪器价格低廉操作简单,易普及,应用广
2. 定量:朗伯 - 比耳定律 A = E1%1cmCl
3. 仪器校正和检定 波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,
313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与 576.96nm
或用仪器中氘灯的 486.02nm与 656.10nm进行校正。
吸收度的检定:用 K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4 液至1000ml
波长 (nm) 235(最小 ) 257(最大 ) 313(最小 ) 350(最大 )
E1%1cm 124.5 144.0 48.62
106.6
杂散光检查: 试剂 浓度 (g/ml) 测定波长 透光率(%)
NaI 1.00 220nm < 0.8 NaNO2 5.00 340nm < 0.8
4. 对溶剂的要求 :
220~ 240nm 241~ 250nm 251~300nm 300nm以上
溶剂 + 吸收池 A < 0.40 < 0.20 < 0.10 < 0.05
5. 测定方法 要求供试品溶液的 A 应在 0.3 ~ 0.7
对照品比较法: Cx=(Ax/Ar)Cr;
含量 %=Cx×D/W×100 %
常用方法 吸收系数法: 含量 %= (E1%1cm )x/(E1%
1cm )r ×100
%
计算分光光度法: VitA 的三点校正法
比色法
硫喷妥钠的含量测定:取供试品 0.2500g ,用水稀释至500ml ,精密取 1ml用 0.4%NaOH 溶液定量稀释至100ml ,作为供试品溶液;另取硫喷妥对照品用0.4%NaOH 溶液配制浓度为 5.0µg/ml 作为对照品溶液。照分光光度法,在 304nm 波长处分别测得供试品和对照品的吸收度为 0.520和 0.545 ,已知 1mg 硫喷妥相当于1.091mg 的硫喷妥钠,试计算硫喷妥钠的含量
对
供对供
对
供
对
供
对
供
对
供
A
Acc
c
c
A
AlcE
lcE
A
A
%1
cm1
%1cm1对照品比较法
( 2 )吸收系数法
100)g/ml(
)g/100ml(
1%1cm
1%1cm
%1cm1
lE
Ac
lE
Ac
clEA
%m
VnlE
A
s
%cm
百分含量
对乙酰氨基酚的含量测定方法为对乙酰氨基酚的含量测定方法为
精密称取本品精密称取本品 40.1mg40.1mg ,置,置 250ml250ml 量瓶中,加量瓶中,加 0.4%0.4%
氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 50ml50ml 溶解后,加水至刻度,摇匀,精密溶解后,加水至刻度,摇匀,精密
量取量取 5ml5ml ,置,置 100ml100ml 量瓶中,加量瓶中,加 0.4%0.4% 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液
10ml10ml ,加水至刻度,摇匀。在,加水至刻度,摇匀。在 257nm257nm 的波长处测定吸的波长处测定吸
收度为收度为 0.5700.570 ,按,按 CC88HH99NONO22 的百分吸收系数为的百分吸收系数为 715715 计计
算。算。
(二)荧光分光光度法 灵敏度高,可达 10-12g/ml ~ 10-10g/ml
在低浓度进行测定,防止 F 与 C 不成正比及自熄灭作用
1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度,防止样品液荧光衰减
灵敏度高,但干扰因素多。
制备荧光衍生物,可提高其灵敏度和选择性。
用样品量少。
2. 荧光分析仪 有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光
器;且激发光源、样品池和检测
器成直角。
3. 含量测定 常用的方法为对照品比较法 :
Cx = (Rx-Rxb)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P2010 收载利血平片
三、色谱分析法三、色谱分析法 色谱分析法的特点与适用范围色谱分析法的特点与适用范围高灵敏度,可达高灵敏度,可达 1010-15-15g/ml g/ml ~~ 1010-12-12g/ml g/ml
高专属性,强分离能力高专属性,强分离能力高效能,可多组分同时定量分析高效能,可多组分同时定量分析
色谱法分类: 色谱法分类: PCPC ;; TLCTLC ;柱色谱;;柱色谱; GCGC ,, HPLCHPLC
高相液相色谱法分类:吸附;分配;离子交换;排阻色高相液相色谱法分类:吸附;分配;离子交换;排阻色
谱等。谱等。
高效液相色谱仪
色谱柱
色谱柱是实现分离的核心部件,要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用
正相 HPLC :极性填充剂,弱极性流动相
反相 HPLC :固定相极性小于流动相极性,大多 C18 柱、甲醇、乙腈、水(缓冲液)作流动相。一般色谱柱使用温度不超过 40℃ ,流动相 pH 控制在 28 之间。
检测器
作用—— 用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。
目前最常用的检测器主要有:
紫外 - 可见检测器
荧光检测器
电化学检测器
蒸发光散射检测器
质谱检测器
二极管阵列检测器色谱图
常规色谱图
三维色谱图
光谱图
1. 对 HPLC 仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数: n =
5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 分离度: R = 2 ( tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于1.5
重复性:RSD≤2%
拖尾因子: T = W0.05h/2A 应在 0.95 ~ 1.05
正常峰和不正常峰如何判断?
用拖尾因子(对称因子): T
T= W0.05h/2A
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3. 测定方法 标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法
含量 = ×CR
AX
AR
外标一点法:一种浓度对照物对比样品中待测组分含量前提:截距接近 0 ,对照品浓度与待测组分浓度接近
内标法:内标法:
对内标物要求:a .内标物须为原样品中不含组分b .内标物与待测物保留时间应接近且 R>1.5
c .内标物为高纯度标准物质,或含量已知物质
siis AAmm 和测混 匀 进 样过 程 :
校正因子( f)=
AS/CS
AR/CR含量( CX)=f A’S/CS’
AX
内标法优点:内标法优点:
进样量不超量时,重复性及操作条件对结果无影响进样量不超量时,重复性及操作条件对结果无影响
只需待测组分和内标物出峰,与其他组分是否出峰只需待测组分和内标物出峰,与其他组分是否出峰无关 。无关 。
内标法缺点:内标法缺点:
制样要求高;须寻找合适内标物制样要求高;须寻找合适内标物
外标法特点:外标法特点:
11 )不需要校正因子,不需要所有组分出峰 )不需要校正因子,不需要所有组分出峰
22 )结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大)结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大
→→ 每次进样量应一致,否则产生误差每次进样量应一致,否则产生误差
例:醋酸氢化可的松的含量采用例:醋酸氢化可的松的含量采用 HPLCHPLC 法测定:取法测定:取本品对照品适量,精密称定,加甲醇定量稀释成每本品对照品适量,精密称定,加甲醇定量稀释成每mlml约含约含 0.35mg0.35mg 的溶液。精密量取该溶液和内标的溶液。精密量取该溶液和内标溶液(溶液( 0.30mg/ml0.30mg/ml炔诺酮甲醇溶液)各炔诺酮甲醇溶液)各 5ml5ml ,置,置25ml25ml 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,取量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,取 10ul10ul
注入液相色谱仪,记录色谱图。另取本品适量,同注入液相色谱仪,记录色谱图。另取本品适量,同法测定,按内标法计算含量。已知:对照品取样为法测定,按内标法计算含量。已知:对照品取样为36.2mg36.2mg ,样品取样为,样品取样为 35.5mg35.5mg ,测得对照液中醋,测得对照液中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为酸氢化可的松和内标的峰面积分别为 54678245467824和和61258436125843 ,样品液中药物和内标的峰面积分别为,样品液中药物和内标的峰面积分别为52213455221345和和 61228456122845 ,计算本品的含量 ,计算本品的含量
概述概述
含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固
程度而异。卤素与芳环相连牢固;与脂肪族碳相连,结合不程度而异。卤素与芳环相连牢固;与脂肪族碳相连,结合不
牢固。牢固。
含金属药物:金属不直接与碳相连为含金属的有机药物,不含金属药物:金属不直接与碳相连为含金属的有机药物,不
牢固,一般直接测定;金属与碳相连为有机金属药物,须适牢固,一般直接测定;金属与碳相连为有机金属药物,须适
当处理。当处理。
第二节 定量分析样品前处理方法第二节 定量分析样品前处理方法
不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法
11 、直接测定法、直接测定法
金属元素不直接与碳原子相连的含金属有机药物或金属元素不直接与碳原子相连的含金属有机药物或C-MC-M键结合不牢的有机金属药物,在水溶液中可键结合不牢的有机金属药物,在水溶液中可电离,不须破坏直接采用适当的方法测定电离,不须破坏直接采用适当的方法测定
如葡萄糖酸钙中的钙离子如葡萄糖酸钙中的钙离子 -EDTA-EDTA络合滴定络合滴定
一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法
22 、经(酸、碱)水解后测定法、经(酸、碱)水解后测定法
方法原理(卤素):将含卤素的有机药物溶于适方法原理(卤素):将含卤素的有机药物溶于适当溶剂中,加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使当溶剂中,加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变为其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变为无机卤素离子,然后采用间接银量法测定。如三无机卤素离子,然后采用间接银量法测定。如三氯叔丁醇的测定。氯叔丁醇的测定。
间接银量法:定量加入过量的间接银量法:定量加入过量的 AgNOAgNO33 ,过量的,过量的硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂,硫酸铁铵为指示剂硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂,硫酸铁铵为指示剂滴定。滴定。
CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH
△回流
(CH3)2CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O
NaCl + AgNO3 AgCl↓ + NaNO3
AgNO3 + NH4SCN AgSCN ↓ + NH4NO3
(淡棕红色)
(Ksp=1.56×10–10 )
(Ksp=1.0×1012 )
Fe3+ + SCNˉ Fe (SCN) 2+
33 、经还原后测定法、经还原后测定法
碱性还原后测定碱性还原后测定 方法原理;在氢氧化钠和锌粉存在的条件下,有方法原理;在氢氧化钠和锌粉存在的条件下,有机药物(多用于含碘有机药物)加热回流,发生机药物(多用于含碘有机药物)加热回流,发生还原裂解反应,使有机结合的卤素(碘)转变为还原裂解反应,使有机结合的卤素(碘)转变为无机卤素离子(碘离子),继而采用间接银量法无机卤素离子(碘离子),继而采用间接银量法或其他方法进行测定,如泛影酸的测定。或其他方法进行测定,如泛影酸的测定。
适用范围:碘原子与苯环直接相连的药物。适用范围:碘原子与苯环直接相连的药物。
例 泛影酸的测定 取本品约 0.4g ,精密称定,加氢氧化钠溶液
30ml 与锌粉 1.0g ,加热回流 30min ,放冷,冷凝管用少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水洗涤 3 次,每次 15ml ,洗液与滤液合并,加冰醋酸 5ml 与曙红钠指示液 5 滴,用硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 滴定。每 1ml 硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 相当于
20.46mg 的 C11H9 I 3N2O4 。
COOH
I
NHCOCH3
I
I
H3COCHN
+ 11NaOH + Zn
回流
△
COONa
N H2 H2N
+ 3NaI + 2CH3COONa
+ 2Na2ZnO2 + H2O
酸性还原后测定法酸性还原后测定法 方法原理;在醋酸和锌粉存在的条件下,有机方法原理;在醋酸和锌粉存在的条件下,有机药物(多用于含碘有机药物),发生还原裂解药物(多用于含碘有机药物),发生还原裂解反应,使有机结合的卤素(碘)转变为无机卤反应,使有机结合的卤素(碘)转变为无机卤素离子(碘离子),采用银量法测定卤素离子素离子(碘离子),采用银量法测定卤素离子的含量。的含量。
二、经有机破坏的分析方法二、经有机破坏的分析方法
(一)、湿法破坏(一)、湿法破坏
硝酸硝酸 -- 高氯酸法:破坏能力强,反应激烈,需防止爆炸。高氯酸法:破坏能力强,反应激烈,需防止爆炸。
适用于生物样品的破坏,所得的无机金属离子为适用于生物样品的破坏,所得的无机金属离子为高价态。。
硝酸硝酸 -- 硫酸法:适用于与碳原子结合牢固的绝大多数含金硫酸法:适用于与碳原子结合牢固的绝大多数含金
属有机药物的破坏分解(但不适用于含碱土金属类有机药属有机药物的破坏分解(但不适用于含碱土金属类有机药
物),所得的无机金属离子为物),所得的无机金属离子为高价态。。
硫酸硫酸 -- 硫酸盐法:常用的硫酸盐为硫酸钾,所得的无机金硫酸盐法:常用的硫酸盐为硫酸钾,所得的无机金
属离子为属离子为低价态。常用于含砷或锑有机药物的破坏分析。。常用于含砷或锑有机药物的破坏分析。
凯氏定氮法凯氏定氮法 -- 含氮有机药物定量分析方法含氮有机药物定量分析方法
原理:常用凯氏定氮法测定天然有机物原理:常用凯氏定氮法测定天然有机物 (( 如蛋白质、核酸及如蛋白质、核酸及
氨基酸等氨基酸等 )) 的含氮量。含氮的有机物与浓硫酸共热时,其中的含氮量。含氮的有机物与浓硫酸共热时,其中
的碳、氢元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并的碳、氢元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并
进一步与硫酸作用生成硫酸铵。浓碱可使消化液中的硫酸铵进一步与硫酸作用生成硫酸铵。浓碱可使消化液中的硫酸铵
分解,游离出氨,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量的硼酸分解,游离出氨,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量的硼酸
溶液中,硼酸吸收氨后用标准无机酸滴定,最后根据所用标溶液中,硼酸吸收氨后用标准无机酸滴定,最后根据所用标
准酸的摩尔数计算出待测物中的总氮量。 准酸的摩尔数计算出待测物中的总氮量。
CHCH22NHNH22COOH+3HCOOH+3H22SOSO4 4 2CO2CO22+3SO+3SO22十十 4H4H22OO 十十 NHNH33
2NH2NH33+H+H22SOSO4 4 (NH(NH44))22SOSO44
(NH(NH44))22SOSO44 +2NaOH 2NH +2NaOH 2NH33+H+H22O+NaO+Na22SOSO44
NHNH33+H+H33BOBO3 3 NH NH44BOBO22+H2O+H2O
NHNH44BOBO22+H+H22SOSO44+2H+2H22O O (NH(NH44))22SOSO44 +2H +2H33BOBO33 ((直接滴直接滴
定法定法))
还可用剩余滴定法或甲醛法滴定还可用剩余滴定法或甲醛法滴定
消解剂:消解剂:硫酸硫酸消解时通常需要加入消解时通常需要加入硫酸钾或硫酸钠硫酸钾或硫酸钠以提以提
高反应液的沸点,并加入高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂硫酸铜作为催化剂,以促进反,以促进反
应的进行。对某些难以分解的药物(如含氮杂环结构药应的进行。对某些难以分解的药物(如含氮杂环结构药
物),在消解过程中常还需加入辅助氧化剂,以使分解物),在消解过程中常还需加入辅助氧化剂,以使分解
完全并缩短消解时间。常用的完全并缩短消解时间。常用的辅助氧化剂有过氧化氢和辅助氧化剂有过氧化氢和
高氯酸高氯酸,但需慎用。,但需慎用。
某一固体样品中的含氮量是用某一固体样品中的含氮量是用 100g100g该物质该物质 (( 干干重重 )) 中所含氮的中所含氮的 gg 数来表示数来表示 (( %% )) 。因此在定氮前,。因此在定氮前,应先将固体样品中的水分除掉。若样品为液体应先将固体样品中的水分除掉。若样品为液体 (( 如如血清等血清等 )) ,可取一定体积样品直接消化测定。,可取一定体积样品直接消化测定。
常量法取供试品的量约相当于常量法取供试品的量约相当于含氮量含氮量 25~30mg25~30mg
半微量法供试品取样量约相当于半微量法供试品取样量约相当于含氮量含氮量1.0~2.0mg1.0~2.0mg
中国药典用本法测定含有中国药典用本法测定含有氨基或酰胺结构的药物含量氨基或酰胺结构的药物含量。对。对
于以于以偶氮或肼偶氮或肼等结构存在的含氮药物,因在消解过程中易等结构存在的含氮药物,因在消解过程中易
于生成氮气而损失,须在消解前于生成氮气而损失,须在消解前加锌粉还原加锌粉还原后再依法处理;后再依法处理;
而而杂环中的氮杂环中的氮因不易断键而难以消解,可用因不易断键而难以消解,可用氢碘酸或红磷氢碘酸或红磷
还原为氢化杂环还原为氢化杂环后再行消解。对于后再行消解。对于含氮量较高含氮量较高的样品(超的样品(超
过过 10%10% ),可在消解液中加入),可在消解液中加入少量多碳化合物少量多碳化合物,如蔗糖、,如蔗糖、
淀粉等作为还原剂,以利于氮转变为氨。淀粉等作为还原剂,以利于氮转变为氨。
(二)、干法破坏(二)、干法破坏11 、高温炽灼法、高温炽灼法
将有机物灼烧灰化以达分解的目的。将适量样品置于瓷将有机物灼烧灰化以达分解的目的。将适量样品置于瓷
坩埚或铂坩埚中,加入无水碳酸钠、氢氧化钙或轻质氧坩埚或铂坩埚中,加入无水碳酸钠、氢氧化钙或轻质氧
化镁等以助灰化,混匀后,先小火加热使样品完全炭化,化镁等以助灰化,混匀后,先小火加热使样品完全炭化,
然后高温灼烧,使其完全灰化。然后高温灼烧,使其完全灰化。
本法适用于湿法不易破坏完全的药物以及不能用硫酸进本法适用于湿法不易破坏完全的药物以及不能用硫酸进
行破坏的有机药物。行破坏的有机药物。
22 、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法
系指将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中系指将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采用当的吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采用适宜的分析方法进行鉴别,检查或含量测定。适宜的分析方法进行鉴别,检查或含量测定。
NaCl
HClOClC
NaOH
2
溶液
点燃
适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析
本法简便、快速、破坏完全,尤其用于微量样品分析
基本原理基本原理
有机物 充有机物 充 OO22烧瓶 燃烧 产物 吸收液 →分析烧瓶 燃烧 产物 吸收液 →分析
仪器装置和设备仪器装置和设备
(( 11 )燃烧瓶)燃烧瓶
(( 22 )称样材料及称样方法:无灰滤纸:适用于固体;纸袋:)称样材料及称样方法:无灰滤纸:适用于固体;纸袋:
适用于液体适用于液体
(( 33 )氧气:采用钢瓶氧气,防止导气管污染。)氧气:采用钢瓶氧气,防止导气管污染。
(( 44 )吸收液:定量吸收供试品的燃烧分解产物,使其转变为)吸收液:定量吸收供试品的燃烧分解产物,使其转变为
便于测定的价态。便于测定的价态。
药物药物 破坏后破坏后 吸收液吸收液 定量方法定量方法含氟含氟 氟化氢氟化氢 水水 硒素氟蓝比色硒素氟蓝比色
法法含氯含氯 氯化氢氯化氢 NaOHNaOH 水溶水溶
液液银量法银量法
含溴含溴 溴溴 ++ 溴化氢溴化氢 NaOHNaOH 水溶水溶液液 ++ 还原剂还原剂
SOSO22
银量法银量法
含碘含碘 各种价态碘各种价态碘 NaOHNaOH 水溶水溶液液 ++ 还原剂还原剂
SOSO22
银量法银量法
含硫含硫 三氧化硫三氧化硫 HH22OO22 溶液溶液 重量法重量法含磷含磷 五氧化二磷五氧化二磷 水水 磷钼蓝比色法磷钼蓝比色法含硒含硒 四价硒四价硒 ++ 少量六价硒少量六价硒 硝酸溶液硝酸溶液 二氨基萘比色二氨基萘比色
法法
选择原则:被测物质的种类及所用分析方法选择原则:被测物质的种类及所用分析方法
33 、注意事项:、注意事项:
(( 11 )燃烧瓶:大小适宜、干净、有防爆措施)燃烧瓶:大小适宜、干净、有防爆措施
(( 22 )氧气要充足:燃烧完全(不得有黑色炭化物))氧气要充足:燃烧完全(不得有黑色炭化物)
(( 33 )产生烟雾应完全被吸收:充分振摇)产生烟雾应完全被吸收:充分振摇
烟雾颜色:碘,紫色;溴,红棕色;氟、氯烟雾颜色:碘,紫色;溴,红棕色;氟、氯 ,, 白白
(( 44 )测定氟化物:石英制燃烧瓶)测定氟化物:石英制燃烧瓶
待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积
3~5mg3~5mg (微量分析) (微量分析) 150~250ml150~250ml
20~30mg20~30mg (半微量分(半微量分析)析) 300~500ml300~500ml
50~60mg50~60mg 1000ml1000ml
0.6~0.7g0.6~0.7g 或更多或更多 2000ml2000ml 或特殊或特殊结构的燃烧瓶结构的燃烧瓶
正确选用燃烧瓶的目的在于:样
品能在足够的氧气中燃烧分解完全;有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中;防止爆炸的可能性。
需验证的分析项目需验证的分析项目
1. 1. 鉴别试验;鉴别试验;
2. 2. 杂质定量或限度检查;杂质定量或限度检查;
3. 3. 原料或制剂中有效成分含量测定;原料或制剂中有效成分含量测定;
4. 4. 制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)的测定;制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)的测定;
5. 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。
第三节 药品质量标准分析方法验证
一、准确度
是指用该方法测定结果与真实值接近的程度,用回收率表示
(一)含量测定方法的准确度
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定;或与已建准确
度的另一方法测定的结果进行比较。
2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原
料对照品的方法作回收率试验,然后计算RSD 。
具体做法:测定高、中、低三个浓度( n=3 ) , 共 9 个数据来评价,回收率的 RSD < 2% ;用 UV 和 HPLC 法时,一般回收率可达 98% ~ 102% ;容量法可达 99.7% ~ 100.3%
二、精密度 是指在规定的测试条件下,同一个均匀样品,经多次测定结果 之间的接近程度。
(一)精密度表示方法 1. 偏差 (deviation , d) d = 测得值 - 平均值 =Xi-X
2. 标准偏差( standard deviation, SD 或 S )
S =[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2
3. 相对标准差 (relative standard deviation, RSD)
RSD= 标准偏差 / 平均值 ×100%=S/X ×100%
(二)重复性、中间精密度及重现性
1. 重复性 在相同条件下 ,由一个分析人员测定所得结果的精
密度 .
2. 中间精密度 在同一个实验室,不同时间由不同分析人员用不
同设备测定结果的精密度。
3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。
三、专属性
是指在其他成分 (如杂质、降解产物、辅料等 ) 可能存在下,
采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检
查、含量测定方法,均应考察其专属性。
(一)鉴别反应
应能与其它共存的物质或相似化合物区分,不含被测组分
的样品均应呈现负反应。
(二)含量测定和杂质测定
色谱法和其他分离法,应附代表性的图谱,以说明
专属性。
图中应注明各组分的位置,色谱法中分离度应符合要求。
在能
获得杂质的情况下,可加到试样中,考察对结果的干扰。在杂
质和降解物不能获得的情况下,可用已验证方法和药典方法进
行对照;也可用对试样加速破坏的方法进行验证。
四、检测限
是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量,是限度检验 指标。它无需测定,只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。 (一)常用的方法 1.非仪器分析目视法 用已知浓度被测物,试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。
2.仪器分析方法 GC和 HPLC法: LOD = S/N = 2或 3
五、定量限
是指样品中被测物能被定量测定的最低量,其测定结果应
具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时,要求
LOQ.
常用信噪比法确定定量限,一般以 S/N=10时,相应的浓度进行测定。
六、线性 是指在设定的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接
呈正比关系的程度。
UV法:首先制备一个标准系列,浓度点 n =5; A = 0.3~0.7
建立回归方程 C = aA + b ;r > 0.999。
HPLC法:制备一个标准系列,浓度点 n =5 ~ 7; 以 C 对 h或 A 或与
内标物的峰面积之比,建立回归方程 r > 0.999。
七、范围
是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法
适用的高低限度或量的区间。 原料药和制剂含量测定:范围应为测试浓度的 80% ~ 120% 。
制剂含量均匀度检查:范围应为测试浓度的 70% ~ 130% 。
溶出度或释放度中的溶出量测定:范围应为限度的 ±20%。
八、耐用性 是指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受
程度。典型的变动因素有:被测溶液的稳定性、样品提取次数、
时间等。
HPLC 法变动因素有:流动相组成与 pH ,色谱柱,柱温,流速。
GC 法变动因素有:色谱柱,固定相,担体、柱温、进样口和检测器温度等。
分析方法效能指标的要求分析方法效能指标的要求
1 、非定量方法:用于鉴别试验、杂质的限量检查,只对专属性、耐用性和检测限有要求,其余均无须要求。
2 、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定及溶出度测定,除了检测限和定量限外,其余均要求。
3 、杂质测定或制剂中降解物测定:属于微量定量分析,除检测限不必要求外,其余七项指标均应有所要求。。