微生物学实验四

免疫与病原生物学教研室

内 容观察五糖发酵管试验结果结核杆菌抗酸染色 牙垢螺旋体镀银染色 细菌特殊结构观察

五糖发酵管试验结果 五糖 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖

伤寒杆菌 + - + + -

痢疾杆菌 + - - + -

大肠杆菌 + + + + +

菌

原理 结核杆菌菌体内脂类物质较多 (可高达 40%), 染色时它与石炭酸复红在加温的条件下结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用（抗酸性），因而抗酸菌能保持复红的颜色。相反，非抗酸性细菌体内含脂类少，易被酸性酒精脱色，脱色后被美蓝复染成蓝色。 此外 , 与抗酸菌细胞壁的完整性也有关系，当细胞破裂时，其抗酸染色性质亦消失。 完整的细胞壁也能限制染料的进入。因此，必须加温以促进细菌着色。

结核杆菌抗酸染色目的目的 学习抗酸染色法，掌握结核分枝杆菌形态学特征，

为临床诊断提供依据。

实验材料

1. 肺结核病人痰液

2.石炭酸复红染色液、 3%盐酸酒精脱色剂、碱性美兰染色液。

3.酒精灯、接种环、木夹、染色盘、染色架、载玻片、吸水纸、滤纸片。

1. 涂片：用毛细管取标本，在玻片上涂一薄厚适中的膜。2.自然干燥3. 固定：在火焰中连续通过三次。4.染色：将固定后的玻片冷却片刻，在涂膜上加盖滤纸片，用木夹夹住载玻片，滴加石炭酸复红染液于滤纸上数滴，在火焰上方约 15cm 高度徐徐加温至出现蒸汽（勿沸腾、勿干），可暂时离开火焰，如此反复 2-3 次（约 5分钟）。然后去掉滤纸片，使涂片冷却片刻。

实验方法

5. 脱色：用 3% 盐酸酒精脱色。不时轻摇玻片， 30秒，水洗

6. 复染：滴加碱性美兰液数滴， 30秒，水洗

7. 吸干

8. 油镜镜检

实验结果

螺旋体（ spirochete ） 是一类细长柔软弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。

钩端螺旋体

密螺旋体

疏螺旋体

[ 原理 ]

AgNO3+NH4OH AgOH↓+NH4NO3

AgOH+X( 菌体中嘌呤 )→AgX （嘌呤银兰）

牙垢螺旋体——镀银染色法

[ 材料 ]

牙签、镊子、玻片 固定液、媒染剂 硝酸银氨溶液

[ 方法 ] 涂片 自然干燥 固定液

1 分钟水洗

媒染液30 秒、水洗硝酸银氨液染色

30 秒镜检 水洗 、吸干

[ 材料 ]

牙签、镊子、玻片 固定液、媒染剂、 硝酸银氨溶液

[结果 ]

观察细菌的特殊结构

1 ．荚膜2 ．芽胞3 ．鞭毛

肺炎链球菌荚膜

肺炎链球菌荚膜

破伤风梭菌芽胞

破伤风梭菌芽胞

伤伤寒寒杆杆菌菌周周鞭鞭毛毛

单毛菌

双毛菌

丛毛菌

周毛菌