天然药物化学实验天然药物化学实验

实验一 薄层色谱和纸层色谱实验一 薄层色谱和纸层色谱

一、实验目的一、实验目的 11 ．掌握薄层色谱的原理和操作方法；．掌握薄层色谱的原理和操作方法；

22 ．掌握纸层色谱的原理和操作方法；．掌握纸层色谱的原理和操作方法； 33 ．掌握氧化铝软板的制备方法及氧化铝活度．掌握氧化铝软板的制备方法及氧化铝活度

的测定方法；的测定方法； 44 ．了解各种色谱方法的适用范围和影响色谱．了解各种色谱方法的适用范围和影响色谱

结果的各种因素。 结果的各种因素。

二、概述二、概述

薄层色谱法（原理及操作详见第一章第三节薄层色谱法（原理及操作详见第一章第三节一）分离速度快、分离效果好、灵敏度高，一）分离速度快、分离效果好、灵敏度高，操作简单，显色方便，适用于微量样品的分操作简单，显色方便，适用于微量样品的分离、鉴定，生药的定性，定量分析，化合物离、鉴定，生药的定性，定量分析，化合物纯度检查和寻找柱层色普的最佳条件及检识纯度检查和寻找柱层色普的最佳条件及检识柱层色谱分离结果。是研究天然药物成分工柱层色谱分离结果。是研究天然药物成分工作中最常用的色谱方法之一，也是植化实验作中最常用的色谱方法之一，也是植化实验中要求必须掌握的基本技术之一。中要求必须掌握的基本技术之一。

纸层色谱（原理及操作详见第一章第三节纸层色谱（原理及操作详见第一章第三节三）是分配色谱的一种，在分离鉴定水溶性三）是分配色谱的一种，在分离鉴定水溶性大的化合物时应用较多，也是一种有用的色大的化合物时应用较多，也是一种有用的色谱方法。谱方法。

色谱用硅胶或氧化铝，在使用前应对其活性色谱用硅胶或氧化铝，在使用前应对其活性进行测定，以保证其具有较好的分离效果。进行测定，以保证其具有较好的分离效果。

本实验主要学习薄层色谱和纸层色谱的基本本实验主要学习薄层色谱和纸层色谱的基本操作。操作。

三、实验方法三、实验方法 1.1. 氧化铝活度的测定氧化铝活度的测定 （（ 11 ）氧化铝软板（自制））氧化铝软板（自制） 5×15cm5×15cm （（ 22 ）样品：）样品： aa ．偶氯苯 ．偶氯苯 0.6mg0.6mg ／／

ImlIml （（ CCl4CCl4 ）） bb ．对甲氧基偶氯苯．对甲氧基偶氯苯 0.4mg0.4mg ／／ ImlIml cc ．苏丹黄．苏丹黄 0.4mg0.4mg ／／ mlml （（ 33 ）展开剂：）展开剂： ccl4ccl4 （（ 1010 ～～ 20ml20ml ）） 计算计算 RfRf 值并与附录值并与附录 55 表二数据对照，确定氧表二数据对照，确定氧

化铝活性级别。化铝活性级别。

2.2. 三颗针生物碱的氧化铝色谱三颗针生物碱的氧化铝色谱 （（ 11 ）氧化铝软板，同）氧化铝软板，同 11 （（ 11 ）） （（ 22 ）样品：）样品： aa ．小檗碱．小檗碱 lmglmg ／／ mlml （（ CH3 CH3

OHOH ）） bb ．小檗胺．小檗胺 1mg1mg ／／ mlml （（ CH3OHCH3OH ）） （（ 33 ）展开剂：氯仿：甲醇（）展开剂：氯仿：甲醇（ 99 ：： 11 ）） （（ 44 ）显色剂：改良碘化铁钾（拿出后立即）显色剂：改良碘化铁钾（拿出后立即

划出溶剂前沿，趁湿轻轻喷雾）划出溶剂前沿，趁湿轻轻喷雾）

3.3. 生物碱的纸层色谱生物碱的纸层色谱 (1)3.5 X 30 cm(1)3.5 X 30 cm 长的色谱用杭州新华滤纸长的色谱用杭州新华滤纸 (2)(2) 样品：同样品：同 22 （（ 22 ）） (3)(3) 溶剂系统：正丁醇：冰醋酸：水（溶剂系统：正丁醇：冰醋酸：水（ 4:14:1 ：：

5)( 20 ml5)( 20 ml ／人）、上层为移动相，下层用作固／人）、上层为移动相，下层用作固定相，滤纸提前一周点样，于实验前一天晚用定相，滤纸提前一周点样，于实验前一天晚用下层饱和。展开前迅速移走固定相液，换成移下层饱和。展开前迅速移走固定相液，换成移动相动相 ,, 将滤纸条浸入移动相中，滤纸不能碰溶将滤纸条浸入移动相中，滤纸不能碰溶剂器壁，展距剂器壁，展距 25cm25cm 以上。以上。

（（ 44 ）显色剂：改良碘化铋钾）显色剂：改良碘化铋钾 4.4. 黄酮类成分的聚酸胺薄层色谱黄酮类成分的聚酸胺薄层色谱 （（ 11 ）色谱用聚酰胺薄膜（）色谱用聚酰胺薄膜（ 3 X 6cm3 X 6cm ）） （（ 22 ）样品：）样品： aa ．芦丁．芦丁 bb 槲皮素槲皮素 （（ 33 ）展开剂：）展开剂： 9595 ％乙醇％乙醇 （（ 44 ）显色剂：先在日光及紫外灯（）显色剂：先在日光及紫外灯（ 365n365n

mm ）下观察，再用）下观察，再用 11 ％％ AlCl3AlCl3 ／／ EtOHEtOH 液喷后液喷后再观察再观察

四、习题四、习题 1.1. 薄层色谱按原理分为几类？基本色谱原理是薄层色谱按原理分为几类？基本色谱原理是什么？各适合分离什么类型的化合物？什么？各适合分离什么类型的化合物？

2.2. 纸层色谱的色谱原理，适用范围？纸层色谱的色谱原理，适用范围？ 3.3. 实验中实验中 RfRf 值如何测量？值如何测量？ 4.4. 影响薄层色谱结果的因素有哪些？影响薄层色谱结果的因素有哪些？ 5.5.比较各种色谱中各种成分比较各种色谱中各种成分 RfRf 值大小，并说值大小，并说明原因。明原因。

天然药物化学实验天然药物化学实验

实验二 秦皮中七叶甙，七叶内酯的实验二 秦皮中七叶甙，七叶内酯的提取、分离、鉴定及含量测定提取、分离、鉴定及含量测定

一、实验目的一、实验目的 1.1. 学习用有机溶剂提取、分离香豆素类成分学习用有机溶剂提取、分离香豆素类成分

的方法的方法 2.2.熟悉香豆素类成分的结构性质及鉴别方法熟悉香豆素类成分的结构性质及鉴别方法 3.3. 了解七叶甙和七叶内酯的一般性质及色谱了解七叶甙和七叶内酯的一般性质及色谱

行为行为

二、概述二、概述 秦皮为木樨科白蜡树属植物白蜡树或苦枥白秦皮为木樨科白蜡树属植物白蜡树或苦枥白蜡树或小叶白蜡树的树皮。具有清热、燥湿、蜡树或小叶白蜡树的树皮。具有清热、燥湿、收敛作用。主治湿热、痢疾、目赤肿痛等症。收敛作用。主治湿热、痢疾、目赤肿痛等症。

秦皮中含有多种内酯类成分及皂甙、鞣质等，秦皮中含有多种内酯类成分及皂甙、鞣质等，其中主要有七叶甙、七叶内酯、秦皮甙及秦皮其中主要有七叶甙、七叶内酯、秦皮甙及秦皮素等，多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对素等，多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒副作用小，几无苦味，退热作用，毒副作用小，几无苦味，

适于小儿服用。适于小儿服用。

秦皮中香豆素类成分的物理性质秦皮中香豆素类成分的物理性质 七叶甙七叶甙 (esculin) m.p(oC) (esculin) m.p(oC) ：： 205-206 205-206 形态：形态：白色粉末状结晶 溶解性：易溶于热水（白色粉末状结晶 溶解性：易溶于热水（ 11 ：：1313 ），可溶于乙醇（），可溶于乙醇（ 11 ：： 2424 ），微溶于冷水），微溶于冷水（（ 11 ：： 610610 ），难溶于乙酸乙酯、不溶于乙醚，），难溶于乙酸乙酯、不溶于乙醚，氯仿，在稀酸中可水解氯仿，在稀酸中可水解

七叶内酯七叶内酯 (esculetin) m.p(oC) (esculetin) m.p(oC) ：： 276276形态 ：形态 ：黄色针状结晶 溶解性 ：易溶于沸乙醇及氢氧黄色针状结晶 溶解性 ：易溶于沸乙醇及氢氧化钠液，可溶于乙醇、乙酸乙酯，稍溶于沸水，化钠液，可溶于乙醇、乙酸乙酯，稍溶于沸水，几乎不溶于乙醚、氯仿 几乎不溶于乙醚、氯仿

秦皮素秦皮素 (fraxin) m.p(oC)(fraxin) m.p(oC) ： ： 227-228 227-228 秦皮甙秦皮甙 (fraxetin) m.p(oC) (fraxetin) m.p(oC) ：： 205 205

三、实验方法三、实验方法 （一）提取（一）提取 取秦皮粗粉 取秦皮粗粉 150g150g 于索氏提取器中，加 于索氏提取器中，加

400ml400ml 乙醇回流 乙醇回流 10-1210-12 小时小时 ,,得乙醇取液。得乙醇取液。减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。

（二）分离：（二）分离： 在上述浸膏中加 在上述浸膏中加 40ml40ml 水热溶之，移于分液水热溶之，移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿提漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿提

取过的水层蒸会残留氯仿，加等体积乙酸乙酯取过的水层蒸会残留氯仿，加等体积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠

脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量、放置析晶，即有黄色针状醇中，浓缩至适量、放置析晶，即有黄色针状结晶析出，滤取结晶。水、甲醇、水反复重结结晶析出，滤取结晶。水、甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。晶，即得七叶内酯。

将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析晶，即有微黄色晶体析出，滤取结晶。晶，即有微黄色晶体析出，滤取结晶。

以甲醇，水反复重结晶，即得七叶苷。以甲醇，水反复重结晶，即得七叶苷。 （三）鉴定：（三）鉴定： 1.1. 化学检识：取七叶式、七叶内酯各少许分化学检识：取七叶式、七叶内酯各少许分

别置试管中，加乙醇 别置试管中，加乙醇 lmllml 溶解。加 溶解。加 11 ％ ％ Fe-Fe-Cl3Cl3 溶液溶液 22 ～～ 33滴，显暗绿色，再滴加浓氨水滴，显暗绿色，再滴加浓氨水33滴，加水滴，加水 6ml6ml ，日光下观察显深红色。，日光下观察显深红色。

2.2. 薄层鉴定：薄层鉴定： 吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶 GG 样品：七叶甙、七叶内酯标准品及自制七叶甙，样品：七叶甙、七叶内酯标准品及自制七叶甙，七叶内酯的醇溶液。七叶内酯的醇溶液。

展开剂：甲酸一甲酸乙酯一甲苯（展开剂：甲酸一甲酸乙酯一甲苯（ 11 ：： 44 ：： 55 ）） 显色：显色： 11 ）） UV254UV254 灯下观察，七叶甙为灰色荧灯下观察，七叶甙为灰色荧

光，七叶内酯为灰褐色。光，七叶内酯为灰褐色。 22 ）以重氨化对硝基苯胺喷雾显色，七叶甙和七）以重氨化对硝基苯胺喷雾显色，七叶甙和七叶内酯均呈玛瑙色。叶内酯均呈玛瑙色。

结果：七叶甙 结果：七叶甙 RfRf ＝＝ 0.04,0.04,七叶内酯七叶内酯 Rf Rf ＝＝ 0.280.28

（四）含量测定：（四）含量测定： 秦皮中内酯类的含量测定：秦皮中内酯类可秦皮中内酯类的含量测定：秦皮中内酯类可

用极谱法以用极谱法以 PH9.0PH9.0硼酸盐一氯化钾缓冲液为底硼酸盐一氯化钾缓冲液为底液进行测定，半波电位为液进行测定，半波电位为 -1067V-1067V ，浓度在，浓度在0.1-0.5mg0.1-0.5mg ／／ mlml 范围内，波高与浓度呈线形关范围内，波高与浓度呈线形关系。系。

生药用乙醇回流加热生药用乙醇回流加热 22 小时，取一定量上清液小时，取一定量上清液于极谱池中，挥去乙醇，加入于极谱池中，挥去乙醇，加入 10mlPH9.010mlPH9.0

PH9.0PH9.0硼酸盐一氯化钾缓冲溶液，放入 硼酸盐一氯化钾缓冲溶液，放入 20OC20OC恒温水浴中，通氮去氧 恒温水浴中，通氮去氧 44 分钟，记录极谱图．分钟，记录极谱图．

由标准曲线计算含量。由标准曲线计算含量。

（五）光谱法：（五）光谱法： UVUV 光谱：用光谱：用 EtOHEtOH 作溶剂作溶剂

四、习题四、习题 11香豆素类化合物可采用哪些提取方法？香豆素类化合物可采用哪些提取方法？ 22 ．香豆素化合物在．香豆素化合物在 TLCTLC 中常用哪些吸附中常用哪些吸附

剂，展开剂和显色剂？剂，展开剂和显色剂？ 五、参考文献五、参考文献 冀春茹等．中药化学实验技术与实冀春茹等．中药化学实验技术与实

验，验， 1986.11986.1 ：： 287287 ～～ 289289