HEMOGRAMA MANUALBqco. Gonzalo A OjedaCtedra Hematologa ClnicaFa.C.E.N.A-U.N.N.E2011

Definicin

ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS

CORPUSCULARES DE LA SANGRECUANTITATIVO : Recuento de GR, GB

Dosaje de Hbndices Hematimtricos ( VCM, HCM, CHCM )Frmula Leucocitaria

CUALITATIVO : Frmula LeucocitariaEstudio Morfolgico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

Determinaciones Adicionales

RECUENTO DE Pq

Reticulocitos

VSG

ETAPA Pre-ANALTICA

Condiciones del Paciente

Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente

NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).

NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FSICA INTENSA

PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION

DATOS A TENER EN CUENTA

EDAD DX. PRESUNTIVO SEXO

REFERENTE A LA MUESTRA

TIPO DE MUESTRA-VENOSA

-CAPILAR

-ARTERIAL??

PUNCION VENOSA

VENTAJAS-Tcnica rpida y segura-Permite obtener volmenes adecuados para las dems determinaciones.-Permite repetir el anlisis en caso de dudas.-Reduce los posibles errores de la puncin capilar.

DESVENTAJAS-Resultados errneos por hemo-concentracin (torniquete pro-longado)-Hematomas y dolor (extraccindificultosa)-No se recomienda en neonatoso pacientes quemados.-Paciente Oncolgicos

PUNCION CAPILAR

VENTAJAS-Resulta sencillo para neonatos ynios-Se puede realizar ms de una vez en pacientes especiales (que-mados, oncolgicos, etc)-til en pacientes con patologasHemorrgicas.

DESVENTAJAS-Recuentos errneos por hemo-concentracin o hemodilucin-Dificultad para obtener flujo continuo.-Recuentos de Pq disminuidos, coagulacin.-Errores por contaminacin-Paciente Oncolgicos

ANTICOAGULANTES SALES DE EDTA :Forman complejos con el Ca++, efectivo en

pequeas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilucin a tener en cuenta) 0.01mL (10 L) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 L ms 1 mL de sangre (1:100)PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48 SIN ALTERAR LOS VALORES

MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Acta precipitando el Ca+Proporcin 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)

HEPARINA: Acta neutralizando la trombina. Proporcin 10-50 UI/mL sangre.

Obtenida la muestra

HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES

ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!

ETAPA ANALTICA

RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Frmula Leucocitaria

RECUENTO DE GB

DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK-Acido actico glacial (20 mL)-Cristal Violeta 1% (10 mL)-Levar a 1000 mL con agua destilada Dilucin : 1/20

380 L + 20 L muestra

Muestra

HomogeneizarPor agitacin

Secar con papelel dispositivo de

cargado

RECUENTO DE GBCAMARA DENEUBAUER

PIPETAS

CAMARA DE NEUBAUERSe trata de un portaobjetos con una depresin en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separacin entre dos lneas consecutivas de 0.25 mm. As pues el rea sombreada y marcada L corresponde a 1 mm. La depresin central del cubreobjetos esthundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos ste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm.

Aumento 10X

Aumento 10x

Consideraciones prcticas PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE

OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD

EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO

NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL

TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE

Elementos contados 4 mmX 1mmX N / 4

Dado que el espesor de la cmara es 0.1 mm, para expresar el nmero de elementos por mm deberemos multiplicar el valor X por 10.

X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilucin de 1/20, debemos multiplicar por

la dilucin, es decir:X= Nx10x20= N x 50= N de GB/mm

4

Segn el ICSH, debe expresarse este resultado en N de GB. 10x9/l

Clculos

Valores de Referencia

ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm NIOS- RN : 12.000 a 25.000 GB / mm- Hasta 1 ao : 6000 a 18.000 GB / mm- 3 a 6 aos : 5000 a 15.000 GB / mm- 6 a 12 aos: 4500 a 13.500 GB / mm

CAUSAS DE ERROR DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE

DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION

DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR

LEUCOCITOSIS

FISIOLGICAS- Embarazo, Lactancia, Puerperio, Perodo

menstrual- Ejercicio violento, Stress.

LEUCOCITOSIS PATOLOGICASCAUSAS INFECCIOSAS

-Bacterias pigenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo.-Tos convulsa (Bordetella)Leucocitosis con Linfocitosis

-Sarampin (Inc)-Cuadros septicos : Peritonitis, Neumona

CAUSAS NO INFECCIOSAS-Cuadros inflamatorios-Post hemorragias-Vmitos, convulsiones, crisis eclmp-sicas, epilepsia, taquicardias-Hipertemias no infecciosas-Quemaduras extensas-Sock traumtico-IMC, necrosis de tejido tumoral, pan-creatitis.-Leucemias-Enfermedades metablicas : DBT, Coma diabtico, Acidosis-IRC-Endcrinopatias : Cushing- Corticoterapia

Leucopenias-Constitucional (Rara) tener presente resultados previos-Digestiva (post prandial)-Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea-Sepsis de mala evolucin-Casi todas las virosis (Sarampin, Varicela, Gripe, Neumona )-Intoxicacin por benzoles o sulfas-Hemopatas: Leucemias leucopnicas, aplasia medular, etc-Afecciones hepatoesplnicas-Cirrosis heptica, trombosis de la vena porta o esplnica-Leucopenias alrgicas, shock anafilctico-Afecciones reumticas-Quimioterapia-Leucopenias carenciales-Colagenopatas: LES, Esclerodermia-AINES

DOSAJE DE Hb

Mtodo de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comit

Internacional para la Estandarizacin de Hematologa (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el ms recomendado.

REACTIVO DE DRABKIN

Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH

a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb,

estable 6 meses.

Fundamento del MtodoHb ( Fe II )

Meta Hb ( Fe III)

Fe(CN)6K3

CIANMETAHEMOGLOBINA

KCN

MAXIMO DE ABSA 540 nm

Tcnica5 mL Rvo Drabkin + 20 L sangre entera anticoagulada

5 minutos

Leer a 540 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro confiltro verde

Curva de calibracin

Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo.

Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto )

Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilucin al y con el doble )

Curva de Calibracin

A=.b.C

g/dL

Abs

VENTAJAS DE LOS METODOS

KIT COMERCIAL-Controla la

linealidad del equipo-Estado del rvo

MUESTRA TESTIGO-Controla la linealidad del equipo-Controla la manipulacin del material de medicin volumtrico(en forma indirecta) pues elpatrn se procesacomo si fuese una muestra-Posible deterioro del reactivo-Variaciones de tensin, Int de la -Lampara,etc.

Para tener en cuenta

La determinacin de un patrn diario nos permite:

-Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro

-Controlar el factor humano-Cambios en la tensin elctrica o

funcionamiento del equipo de lectura.

VALORES DE REFERENCIA

13 17 g%13,5 17 g%Varones

12 15 g%11,5 - 14 g%Mujeres

LaboratorioBibliografa

HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

Definicin

ES EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL

Tcnica

1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Puncin digital: Con heparina2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR

EN UN EXTREMO CON PLASTILINA3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL:

15000 rpm 5 a 6 min4-LEER EN ABACO ESPECIAL

VENTAJAS

RPIDO < VOLMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR

LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES

Valores de referencia

Recin Nacido 52 65 % Varones 40 48 % Mujeres 37 47 %

VALORES BAJOS -ANEMIAS-FASE DE

RECUPERACIN DE PERDIDA DE

SANGRE-EMBARAZADAS

VALORES ALTOS

POLIGLOBULIA REAL

HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS , ECLAMPSIAS,

SHOCK QUIRURGICO O TRAUMATICO

ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS)

HIPOXIA DE LAS ALTURAS

FUMADORES

RECUENTO DE GLBULOS ROJOS EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA

PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS

EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.

VALORES DE REFERENCIA

Mujeres 4 4.8 millones/mm Varones : 4.5 -5.5 millones / mm RN : 5.6 millones / mm 4 semanas: 4 millones/ mm 6 semanas: 3.6 millones/ mm 12 semanas : 3.8 millones/mm 6 a 12 aos : 4.5 millones / mm

INDICES HEMATIMTRICOS

32 35 %29 3 pg90 5 fL

% de Hbcontenida en la masa globular total

Cantidad de Hbcontenida en un hematie

Expresa el volumen medio del GR

CHCMHCMVCM

Hto x 10GR

Hb x 10GR

Hb x 100Hto

ANLISIS DE FROTIS SANGUNEOS

Coloracin May Grwald - Giemsa

May Grwald-Eosinato Azul de Metileno-Metanol Giemsa-Eosinato de Azur II-Azur II-Glicerina y Metanol

TCNICA1-Realizar el extendido Dejar secar- Rotular2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIN)3-Agregar en igual proporcin al colorante

buffer o agua comn : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION)

4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO

5-Dejar secar Observar con Aceite de Inmersin

MG

Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes bsicas del

citoplasma (rosado) : hemates, grnulos de Eos, citoplasma de granulocitos.

Azul de Metileno: granulaciones especficas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basfilos, hemates policromatfilos, colorea levemente el ncleo.

Giemsa

Colorea fuertemente las granulaciones inespecficas (azurfilas), colorea adems fuertemente los ncleos diferenciando la cromatina.

Tie tambin cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer

RESUMIENDO NCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS

LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los grnulos linfoideos en rojo purpreo

LOS GRANULOS NEUTRFILOS .en rosado pardusco

LOS GRANULOS EOSINFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo

LOS GRANULOS BASFILOS: En azul marino con tonalidad violcea

ERITROCITOS en rosado rojizo

NEUTROFILO

BASOFILO

LINFOCITO

EOSINOFILO MONOCITO

Frmula Leucocitaria

Cayados0 - 2% Neutrfilos.50 - 70% Eosinfilos.0 8 % Basfilos0 1% Linfocitos20- 40 % Monocitos.. 4 6 %

OCULARES

OBJETIVOS

PLATINAMACRO

CONDENSADOR

MICRO

FIN