Bacteriología

Seminario 3

Bacterias Gram negativas Parte 1

Microbiología 1II Cátedra

Facultad de Medicina (UBA)

Objetivos

1. Recordar la estructura de las bacterias gram negativas

2. Reconocer la estructura y la función del LPS, como endotoxina

3. Diferenciar entre Bacteria entérica y enterobacterias

4. Reconocer los factores de patogenicidad en general de las bacterias gram (-)

5. Caracterizar Virotipos de E. coli

6. Identificar factores de patogenicidad de las bacterias del género Shigella y Salmonella

7. Reconocer los factores de patogenicidad principales del género Pseudomonas spp

Bacterias Gram negativas

Cocos / Cocobacilos

Aerobios Estrictos

Oxidasa (+)

Neisseria Moraxella

Anaerobios Facultativos

Oxidasa (+)

Pasteurella

Oxidasa (-) Acinetobacter

Anaerobios Estrictos

Veillonella

Bacilos

Aerobios Estrictos

Oxidasa positiva Pseudomonas

Anaerobios Facultativos

Fácil desarrollo

Oxidasa (-)

Fermentadoras de lactosa

Escherichia Enterobacter

Klebsiella

No fermentadoras de lactosa

Shigella Salmonella

Proteus Yersinia

Oxidasa (+) Vibrio

Aeromonas

Fastidiosas

Bordetella Brucella

Haemophilus Campylobacter

Helicobacter Legionella

Bacteroides Porphyromonas

Prevotella Fusobacterium

Anaerobios Estrictos

ENVOLTURA EN GRAM NEGATIVOS

Membrana citoplasmática (bicapa lipídica)

Pared celular

Cápsula

Periplasma

Membrana externa

Solo en gramnegativas

Diferencias en las envolturas de las gramnegativas:

Pared celular:• Es una pared mas delgada

• Presenta baja cantidad de peptidoglicanos (mureína)

• Carece de ácidos teicoicos

• Se encuentra sumergida en el periplasma

Periplasma:

• Gel formado por agua, sales, peptiglicanos y proteínas.

• Participa en el transporte de solutos, secreción de proteínas y

actividades hidrolíticas.

MEMBRANA EXTERNA

• Solo en Gram Negativos

• Bicapa lipídica ASIMETRICA

• Lado externo: LPS (posee actividad de endotoxina)

• Lado interno: Lipoproteína de Braun (une membrana

externa con pared celular).

• Presenta porinas (nutrición y ATB) [ej: OmpC y OmpF de la

E.coli]

ESTRUCTURA DEL LIPOPOLISACÁRIDO

v ANTÍGENO SOMÁTICO O: Es un potente estimulador de la respuesta inmune

v CORE

v LÍPIDO A: Es responsable de la actividad endotóxica del LPS

El LPS constituye una endotoxina que se libera cuando la bacteria se divide o muere.Está formado por fosfolípidos y proteínas de membrana externa.

ENDOTOXINA

• Respecto a las Exotoxinas, son menos potentes y menos específicas en su acción, ya que no actúan enzimáticamente.

• Son estables al calor (no se desnaturalizan a 100ºC durante 30 minutos), pero se degradan por ciertos agentes oxidantes potentes (superóxido, peróxido, hipoclorito).

• No pueden ser convertidas en toxoides. • Son tóxicas para la mayoría de los mamíferos. • Son antigénicas, pero rara vez provocan respuestas

inmunitarias que dan plena protección frente a la exposición secundaria a la endotoxina.

ENDOTOXINAS

ENTEROBACTERIAS

Familia ENTEROBACTERIAS

• Bacilos gramnegativos.• Anaerobias facultativas.• Fermentan la glucosa.• Reducen los nitratos.• Son catalasa-positivas y oxidasa-negativas.• Ubicuas.• Inmóviles o móviles con flagelos perítricos.• No forman esporas.• Algunas presentan cápsulas prominentes, mientras

que otras están rodeadas de una capa viscosa, difusible y suelta.

• Poseen antígeno común enterobacteriano • Se adquieren de un reservorio animal, de un portador

humano o por diseminación endógena.• Incluye géneros que pueden ser:

– Patógenos primarios.– Flora comensal normal y producir infecciones

oportunistas.– Flora comensal que deviene patógena cuando

adquiere genes con factores de virulencia presentes en plásmidos, bacteriófagos e islas de patogenicidad.

Familia EnterobacteriaceaeFamilia Enterobacteriaceae

Género Escherichia Género Klebsiella Género Salmonella Género Shigella Género Citrobacter Género Enterobacter Género Morganella Género Proteus Género Serratia Género Yersinia

Es el grupo más grande y heterogéneo de bacilos gramnegativos con importancia

clínica.

Estos géneros se han clasificado según sus propiedades bioquímicas (baterías

bioquímicas), estructura antigénica (serotipificación) e hibridación y

secuenciación de su material genético.

A pesar de la complejidad de la familia menos de 20 especies son responsables de

la mayor parte de las enfermedades humanas.

Factores de patogenicidad• Fimbrias comunes adherencia a receptores específicos.• Pili sexuales transferencia genética horizontal entre bacterias.• Endotoxina lípido A del LPS que se libera durante la lisis celular.• Cápsula evasión de la respuesta inmune.• Variación de fase antigénica El antígeno capsular K y el antígeno flagelar H

se pueden expresar alternativamente o no expresarse en absoluto (variación de fase).

• Sistemas de secreción tipo III facilita la secreción de factores de virulencia bacterianos. Sus efectos son diferentes, y su ausencia comporta pérdida de virulencia.

• Secuestro de factores de crecimiento sideróforos y hemolisinas.• Resistencia al efecto bactericida del suero evasión del complemento.• Resistencia antimicrobiana a través de plásmidos transferibles entre

especies, géneros y familias de bacterias.

Lipopolisacárido (LPS)

Principal antígeno de la pared celular, termoestable, formado por:

1.Polisacárido O somático (más externo): permite la clasificación epidemiológica de las cepas dentro de una especie.

2.Antígeno común bacteriano: polisacárido central compartido por la familia.

3.Lípido A: responsable de la actividad de endotoxina.

La clasificación epidemiológica (serológica) de las enterobacterias se basa en 3 grupos de antígenos:

Polisacáridos somáticos O (termoestable) Reactividad cruzada con géneros relacionados (Salmonella/Citrobacter, Escherichia/Shigella)

Antígenos capsulares K (termolábil).

Proteínas flagelares H (termolábil) Pueden estar ausentes, sufrir variaciones antigénicas y estar presentes en 2 fases.

El cultivo en agar MacConkey permite distinguir a las Enterobacterias según su capacidad de fermentar la lactosa:

Cepas fermentadoras de lactosa

Cepas que no fermentan lactosa o lo hacen lentamente

Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter y Serratia

Proteus, Salmonella*, Shigella*, Yersinia spp.

* Presentan resistencia a las sales biliares en algunos medios selectivos.

Medio de cultivo especifico para enterobacterias:

Escherichia coli

• Flora habitual del tubo digestivo.• Indicador de contaminación fecal • Crecimiento rápido en la mayoría de los medios de cultivo. (Fermentadora de Lac)

• Produce principalmente 3 tipos de infecciones en humanos, (dependientes de los determinantes de patogenicidad de E.coli) :– Infecciones del tracto urinario (ITU)– Meningitis neonatal– Enfermedades intestinales

Clasificación• La reactividad serológica frente al antígeno O identifica el serogrupo y

frente al antígeno H identifica el serotipo.

• La virotipificación analiza:– Los patrones de adherencia de la bacteria a las células del huésped.– Los efectos de la adherencia sobre las células del huésped.– La producción de toxinas.– Las características de invasividad de la bacteria.

Se conocen 6 virotipos definidos:1. E. coli enterotoxigénica (ECET).2. E. coli enteropatógena (ECEP).3. E. coli enterohemorrágica (ECEH).4. E. coli enteroinvasiva (ECEI).5. E. coli enteroagregativa (ECEA).6. E. coli de adherencia difusa (ECAD).

Infecciones del Tracto Urinario (ITU)

• E. coli uropatógena causa el 90% de las ITU no complicadas (Vías anatómicas normales, sin obstrucción)

• La bacteria coloniza región perineal y asciende a vejiga• Las UTI son más frecuentes en mujeres • En las ITU complicadas (Ej. sondados), la etiología en variada

Factores de virulencia:• Fimbria P y Fimbrias tipo 1: adherencia evitando la

eliminación durante la micción.• Sideróforos.• Hemolisinas: lisis de eritrocitos y otras células.• Antígenos K.

Meningitis neonatal

• Se relaciona con la producción del antígeno capsular K-1• Invade el torrrente sanguíneo de niños desde nasofaringe o

tracto gastrointestinal (TGI) y llega a meninges• En el diagnóstico puede realizarse cultivo o detección del Ag K

-1 por métodos rápidos (atención: reacción cruzada con Ag capsular tipo B de N.meningitidis)

Factores de virulencia:• Cápsula K-1 (a pesar de que sólo 18% de las cepas

involucradas sintetizan K-1)

Enfermedades intestinales

• Recordar los distintos virotipos:– E. coli enterotoxigénica (ECET).– E. coli enteropatógena (ECEP).– E. coli enterohemorrágica (ECEH).– E. coli enteroinvasiva (ECEI).– E. coli enteroagregativa (ECEA).– E. coli de adherencia difusa (ECAD).

• En todos los casos, se asocian con el estado socio-sanitario y la gravedad dependerá del estado inmune del paciente

Escherichia coli Enterotoxigénica (ECET)

• “Diarrea de viajero”: acuosa profusa autolimitada.• Transmisión fecal-oral, no persona-persona• Adultos en zona endémica: inmunidad

• CFA : Adherencia al epitelio y entre bacterias, receptores para bacteriófagos portadores de enterotoxinas u otros factores de virulencia. Plasmídica• LT-1. Estructura A-B, función homóloga a la toxina del cólera: ↑ [AMPc] excreción de electrolitos con arrastre de agua. Plasmídica•STa. Efecto semejante a la toxina termolábil a través de la estimulación de la guanilatociclasa: ↑ [GMPc] excreción de electrolitos con arrastre de agua. Plasmídica

Adhesinas Exotoxinas

Fimbrias o pili tipo I.Antígenos del factor de colonización (CFA/I, CFA/II, CFA/III)

Toxina termolábil (LT-1)Toxina Termoestable (STa)

Escherichia coli Enteropatógena (ECEP)

• Diarrea infantil. Transmisión persona-persona y fecal-oral.

• Moderadamente invasivas. Heces con mucus, sin sangre.

• Efecto de adherencia y borrado de las microvellosidades: Pérdida de la capacidad de absorción de la mucosa.

•BFP: adherencia y secreción activa de proteínas hacia el interior de la célula epitelial (sistema de secreción tipo III bacteriano).•Intimina (adhesina no fimbrial, es una proteína de membrana externa): polimerización de actina, pérdida de la integridad celular muerte celular.

Adhesinas Exotoxinas

Pili formadores de haces (Bfp). Intimina.

Ninguna.

Escherichia coli Enterohemorrágica (ECEH) Adhesinas Exotoxinas

Pili formadores de haces (Bfp); Intimina.

Toxinas de Shiga (Stx-1, Stx-2) obtenidas a partir de bacteriófagos lisogénicos. Se unen a células que expresan Gb3 (glicolipido de membrana).

• Diarrea acuosa seguida de colitis hemorrágica a los 2 días, sin fiebre o con febrícula, puede progresar a SUH (insuficiencia renal aguda, trombocitopenia y anemia hemolítica microangiopática).

• Moderadamente invasiva• Cepa más frecuente: O157:H7• Transmisión persona-persona (inóculo o DI bajo).• Incidencia máxima en menores de 5 años.• Los casos y brotes se han asociado con el consumo de carne

mal cocida (especialmente carne picada), leche cruda, jugo de manzana sin pasteurizar, aguas contaminadas y brotes de alfalfa, y también se ha aislado de aves de corral, carne de cerdo y de cordero..

• Mediada por las toxinas Shiga, que interrumpen la síntesis de proteínas. Lesiones unión/borrado con la destrucción de la vellosidad intestinal, que produce malabsorción (ídem ECEP)

Escherichia coli Enteroinvasiva (ECEI)

• Contagio por alimentos contaminados.• Colonizan el intestino grueso.• Invaden las células colónicas, lisan las vacuolas

fagocíticas y se replican en el citoplasma de la célula.

• Se diseminan lateralmente a las células adyacentes por polimerización de actina (relacionadas con Shigella y Listeria).

• Destrucción del epitelio con infiltración inflamatoria.

• Produce diarrea acuosa que puede evolucionar a disentería y a ulceración colónica.

Adhesinas Exotoxinas

Antígeno del plásmido invasivo (lpa). Hemolisina (HlyA).No produce toxina de Shiga.

Escherichia coli Enteroagregativa (ECEA) Adhesinas Exotoxinas

Fimbrias adherentes agregantes (AAF/I, AAF/II, AAF/III). Toxina termoestable enteroagregante (EAST).Toxina codificada con plásmidos (Pet).

• Diarrea infantil, acuosa y persistente, con presencia de mucus. Diarrea del viajero.

• Diarrea crónica con retraso del crecimiento, gastroenteritis.

• BFP. Adherencia entre bacterias, bacteria-epitelio, bacteria –mucus.

• AAF. Adherencia con agrupación en pilas de ladrillos.

• Formación de una biopelícula gruesa por producción de moco sobre las células epiteliales que las protege de la fagocitosis y los ATB prolongada colonización y malabsorción.

• EAST y Pet. Secreción de líquido, daño de las células intestinales. Plasmídicas

Escherichia coli de Adherencia Difusa (ECAD)Escherichia coli de Adherencia Difusa (ECAD)

•Aparecen dispersas sobre la superficie celular.•Formación de proyecciones largas de la membrana de la célula eucariota que envuelven a la bacteria.•Existe poca información acerca de sus factores de virulencia.•Producen diarreas acuosas sin sangre ni leucocitos fecales.

Adhesinas Exotoxinas

Patrón de adherencia a células Hep-2 en cultivo. Se desconoce.

Gastroenteritis producidas por Escherichia coliMicroorganismo Lugar de acción Enfermedad Patogenia

E. coli enterotoxigénica (ECET)

Intestino delgado. Diarrea del viajero; diarrea infantil; diarrea acuosa, vómitos, espasmos abdominales, náuseas, febrícula.

Enterotoxinas termoestables y/o termolábiles mediadas por plásmidos que estimulan la hipersecreción de líquidos y electrolitos.

E. coli enteropatógena (ECEP)

Intestino delgado. Diarrea infantil, diarrea acuosa y vómitos, heces no sanguinolentas.

Histopatología unión/borrado mediada por un plásmido con alteración de la estructura normal de la microvellosidad, dando malabsorción y diarrea.

E. coli enteroagregativa (ECEAg)

Intestino delgado. Diarrea infantil, diarrea del viajero; diarrea acuosa persistente con vómitos, deshidratación , febrícula y hemorragia; disminución de la absorción de líquidos.

Adherencia agregativa de los bacilos mediada por un plásmido con acortamiento de las microvellosidades; infiltración mononuclear.

E. coli enterohemorrágica (ECEH)

Intestino grueso. Diarrea acuosa seguida de colitis hemorrágica, sin fiebre o con febrícula, puede progresar a SUH.

Mediada por las toxinas Shiga, que interrumpen la síntesis de proteínas. Lesiones unión/borrado con la destrucción de la vellosidad intestinal, que produce malabsorción.

E. coli enteronvasiva (ECEI)

Intestino grueso. Fiebre, espasmos, diarrea acuosa, puede progresar a disentería.

Invasión mediada por un plásmido y destrucción de las células que recubren el colon.

E. coli enteroadherente (ECEAd)

Diarreas acuosas sin sangre ni leucocitos fecales.

Formación de proyecciones largas de la membrana de la célula eucariota que envuelven a la bacteria.

Otras infecciones extraintestinales

En todas estas infecciones, es importante el estado del paciente, ya que la mayoría son infecciones oportunistas, especialmente en el ambiente hospitalario (sondas, asistencia respiratoria mecánica, cirugías, prevalencia de cepas resistentes, etc)

• Bacteriemia, sepsis, septicemia• Infecciones del tracto respiratorio• Infecciones de piel y de heridas

Shigella• Enterobacteria• Bacilo gram (-)• Inmóvil• Anaerobio facultativo• Oxidasa negativo• No fermenta lactosa pero si la glucosa (no hay producción de gas)• Los humanos son los únicos reservorios• Transmisión fecal-oral (persona a persona)• Se requiere una baja dosis infectiva

• Cuatro especies (todas patógenas para los humanos):§ S. dysenteriae (grupo A; infecciones más graves, espec. tipo 1))§ S.flexneri (grupo B)§ S.boydii (grupo C)§ S.sonnei (grupo D)

Shigella dysenteriae: La tipo I es la invasiva y produce Toxina de Shiga.

TOXINA de SHIGAExotoxina tipo A-BCodificada en el cromosoma (diferencia con ECEH)Mecanismo:• Actúa sobre el endotelio vascular. • Subunidades B se unen a Gb3 (componente de la membrana celular) • El complejo entra en la célula. • La subunidad A interactúa con los ribosomas para inactivarlos. A es una

N-glicosidasa que modifica el componente RNA del ribosoma para inactivarlo-interrumpir la síntesis proteica- muerte celular.

• Deterioro del endotelio y hemorragia (diarrea con sangre)• La toxina es efectiva contra pequeños vasos sanguíneos (en el tracto

digestivo, riñón y pulmones), pero no contra los grandes vasos (arterias o venas más importantes). Un sitio de daño es el endotelio vascular del glomérulo

SHIGELOSIS: Se caracteriza por la presencia de espasmos abdominales, diarrea, fiebre elevada (diferencia con la ECEI) y heces sanguinolentas. Los síntomas aparecen 1 a 3 días tras la ingestión de los bacilos

1. Enfermedad diarreica aguda: profusa diarrea acuosa sin invasión mucosa.

2. Enfermedad sistémica sin bacteriemia: espasmos abdominales con abundante pus y sangre en las heces (DISENTERIA). Es consecuencia de la invasión de la mucosa colónica por las bacterias.

SUH: Puede ocurrir luego de la infección por S.dysenteriae tipo 1. Produce insuficiencia renal, anemia hemolítica, trombocitopenia y defectos de la coagulación. A menudo es mortal y con frecuencia debilitante. Argentina: 400 nuevos casos por año.

SINDROME DE REITER: Puede ocurrir en 3% de los casos de diarrea por S.flexneri luego de meses o años . Cursa con dolor articular, irritación ocular y dolor al orinar. Existe predisposición en personas HLA-B27.

Prevención:

• Cloración del agua no potable• Higiene personal

• Adecuado manejo de alimentos

Salmonella• Enterobacteria (patógeno primario)• Bacilo gram (-)• Móvil (flagelos)• Anaerobio facultativo• Oxidasa negativo• No fermentan lactosa y producen SH2

• La especie Salmonella enterica presenta distintos serotipos:• Salmonella typhi (infección sistémica)• Salmonella paratyphi• Salmonella cholerae-suis• Salmonella enteritidis (infección localizada autolimitada)

Estructura y antígenos de Salmonella

Antígeno O (somático) • Resistente al calor y al alcohol• Secuencias repetidas de polisacáridos

de la porción variable del LPS.

Antígeno H (flagelar)• Antígenos proteicos (termolábil).• Presentan variación de fase.

Antígeno Vi (capsular)• Polisacárido capsular• Sólo en S.typhi, S.paratyphi C y

S.dublin

• Puede colonizar casi todos los animales (ganado, roedores, animales domésticos) y al ser humano.

• Solo la especie Salmonella enterica es patógena para el hombre.• Las cepas S. typhi y S. paratyphi pueden sobrevivir en la vesícula

biliar (portadores crónicos).• Las vías de infección son la ingesta de alimentos contaminados

(aves, huevos, productos lácteos) y la transmisión fecal-oral.• S. typhi se contrae al ingerir agua o alimentos contaminados por

un manipulador infectado. No existe reservorio animal.

Factores de virulencia:• ADHERENCIA E INVASIÓN

– Adhesión (fimbrias)– “Splash” (reorganización del citoesqueleto)– Internalización en una vesícula endocítica– División bacteriana en la vesícula– Fusión de vesículas– vesícula grande, llena de bacterias

• SOBREVIDA EN FAGOCITOS

Dos estrategias:– Resistir a las formas reactivas del oxígeno– Resistir a las defensinas (péptidos tóxicos que matan bacterias)

BACTERIA INTRACELULAR FACULTATIVA

• RESISTENCIA AL EFECTO BACTERICIDA DEL SUERO– Capacidad para producir una infección sistémica.– La cápsula evade los Ac. generados contra los Ag. somáticos y escapa al

sistema del complemento.• LPS

– Actividad de endotoxina dependiente del lípido A. – Se libera durante la lisis celular– Causante de las manifestaciones sistémicas : activación del complemento,

liberación de citocinas, leucocitosis, CID, fiebre , shock y muerte.• ANTÍGENO Vi

– Ag. Capsular que protege a las bacterias encapsuladas de la fagocitosis– Interfieren en la unión de los Ac. a las bacterias y son poco inmunogénicos (no

activan complemento)• VARIACIÓN DE FASE ANTIGÉNICA (expresión alternativa de los Ag. H y Vi)

• PLÁSMIDOS (resistencia a los ATB)

• SIDERÓFOROS (proteínas con alta afinidad por el hierro)

S. typhi:• Coloniza solo al hombre• Vía de transmisión fecal-oral (se elimina por heces)• Fuentes de contagio:

– alimentos o bebidas contaminados por manipuladores infectados.– Aguas contaminadas – Mariscos que concentran (mejillones, ostras), consumidos crudos o

mal cocidos

• Agente causal de la FIEBRE TIFOIDEA (cuadro sistémico grave)

RECORDAR: La fiebre tifoidea es causada por la Salmonella Typhi. En cambio el TIFUS es causado por

las especies de Rickettsia (del grupo tífico)

Patogenia

• Se adhiere a las células M del íleon y se produce transcitosis hacia la placa de Peyer.

• Luego es fagocitada por los macrófagos (dentro de la placa de Peyer)

• Evade los mecanismos bactericidas del macrófago y se replica en el interior de las vacuolas (diferencia con shigella)

• Luego se disemina por la circulación sanguínea donde las bacterias son capturadas por los macrófagos del sistema reticuloendotelial.

• El LPS y los productos del macrófago producen fiebre elevada.• Luego por medio de la bilis (colonización de la vesícula biliar)

vuelven a localizarse en el intestino produciendo alteraciones locales (ulceración de la mucosa)

Colonización asintomática: • El sitio primario de portación de S. typhi es el conducto y la

vesícula biliar• Es difícil de erradicar• Hay portadores crónicos (colonización crónica luego de una

enfermedad sintomática). Los ATB no son generalmente efectivos (a pesar de que las bacterias pueden ser sensibles) debido a la poca penetración del ATB en el sitio de portación

Manifestaciones clínicas:

• 1ra. semana:Letargo, fiebre, malestar general, dolores generalizados, constipación

• 2da. semana:Paciente gravemente enfermo, fiebre sostenida +40°C, abdomen doloroso a la palpación y con roséola tífica, exantema maculopapular rosado en tórax y abdomen.

• Entre la 2da y 3ra. semana:Diarrea

• Después de la 3ra. semana:Mejoría si no aparecen complicaciones: perforación intestinal, hemorragia severa, colecistitis, abscesos, neumonía

S. paratyphi

• Causa una enfermedad febril mas leve: FIEBRE PARATIFOIDEA.

• Tiene un cuadro clínico similar pero de carácter más benigno.

S. enteritidis• Es una zoonosis.• Las salmonellas son los patógenos más frecuentes en

la diarrea bacteriana.• Hay adherencia e invasión de la mucosa intestinal

pero la bacteria no pasa a la circulación sanguínea (diferencia con S. typhi).

• En Argentina la causa más frecuente es por consumo de mayonesa casera (preparada con huevo contaminados)

Ingreso de las bacterias

Invasión de células de la mucosa

Respuesta inflamatoria: dolor y liberaciónde prostaglandinas

Prostaglandinas aumentan cAMP

Se inhibe la captación de Na y se estimulala secreción de K

Pérdida de agua, diarrea

S. cholerae-suis:

• Causa mas frecuente de septicemia por Salmonella.

• El riesgo de bacteriemia es más alto en pacientes

pediátricos, geriátricos o inmunodeprimidos.

• Se caracteriza por fiebre y bacteriemia crónica sin

manifestaciones de enterocolitis ni fiebre entérica.

• Pueden desarrollarse lesiones supurativas locales en

tracto biliar, articulaciones y pulmón.

DIAGNÓSTICO1. Directo: aislamiento en cultivo

• Hemocultivo: para las especies que pueden producir bacteriemia (se positiviza al mismo tiempo que aparece la fiebre)

• Coprocultivo:§ Se utilizan muestras de heces que no tengas mas de media hora

de obtenidas, en un frasco estéril, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodón.

§ La muestra puede enriquecerse en medio con selenito de sodio§ Cultivo en MacConkey, Levine y S-S (colonias no fermentadoras de

lactosa)§ Primero se identifica el género salmonella y luego mediante

aglutinación con antisueros específicos, la determinación del serotipo.

• Urocultivo: se positiviza a la 3º semana de la aparición de los síntomas de la Fiebre tifoidea

2. Indirecto: diagnóstico serológico para Fiebre tifoidea: Se buscan Ac. aglutinantes para los Ag. H y O en la prueba de Widal. Aparecen entre la segunda y cuarta semana.

Vibrio spp.

Vibrio cholerae

• Bacilo Gram negativo y curvo

• Son oxidasa positivo

• Agente etiológico del Cólera

• Sensible a los ácidos (deben ingerirse grandes cantidades para superar la barrera de la acidez gástrica) y sensibles a temperatura mayor de 56°C por 30 min.

• Sobreviven en estanques, ríos, aguas cloacales, agua de mar, crustáceos y peces

• Por su antigeno “O”: 139 serogrupos

• Serogrupo O1 presenta 3 antígenos distintos: A, B y C que permiten la clasificación en serotipo:

- Ogawa (A, B) - Inaba (A,C) - Hikojima (A,B yC)

• Serogrupo O1 se clasifica dependiendo de las pruebas bioquímicas en biotipos :

- Clásico: Enfermedades más severas, excretan periodos cortos, DI alta

- El Tor: Enfermedades moderadas, excretan periodos largos ,DI baja

Clasificación: V.cholerae

FACTORES DE VIRULENCIA

• Flagelo polar : motilidad• Adherencia: hemaglutinina y el Pili metil-fenil-alanina• Factores de despegue: mucinasas dependientes de Ca y Zinc

• TOXINA DEL CÓLERA: Estructura AB La subunidad B se une al receptor ganglosido GM1 del enterocito La subunidad A actúa sobre la proteína Gs con la siguiente estimulación de la adenilato ciclasa y aumento del AMPc, esto lleva a la hipersecreción de Cl , K, HCO3 y agua hacia la luz intestinal

• Toxina Zot Actúa sobre la zona ocludens , lo que afecta a la unión de los enterocitos

• Toxina Ace ATPasa transportadora de iones, que origina acumulación de fluidos

Vibrio cholerae

Mecanismo de acción de la toxina del cólera (tipo A-B5)

DIAGNOSTICO:

• Se toma la muestra a partir de materia fecal • El cultivo se realiza en medio de agar de sangre, agar

MacConkey medio TCBS (tiosulfato - citrato- bilis- sacarosa) que favorece el crecimiento selectivo de V. cholerae ante otros bacilos gramnegativos

• Existe la técnica de Elisa que detecta la toxina colérica sin previo cultivo de la bacteria, directamente sobre el material fecal

• Pruebas Bioquímicas: Prueba de oxidasa (positiva)• Para la presencia de Ag O1 y O139 (mediante Ac)• Antisueros contra Ogawa e Inaba

Pseudomonas spp.

Pseudomonas aeruginosa• Bacilos gramnegativos, restos o ligeramente curvados, que se

disponen en parejas.• Aerobios, pueden crecer en forma anaerobia, no fermentadores,

oxidasa-positivos. • Cápsula mucoide de polisacáridos biofilms.• Algunas especies producen pigmentos difundibles: piocianina

(azul), pioverdina (verde-amarillento) y piorrubina (pardo-rojizo).

• Oportunistas, ubicuos en la naturaleza.• Reservorios húmedos hospitalarios, soluciones desinfectantes, agua destilada.

Pseudomonas aeruginosa

• Requerimientos nutricionales sencillos en medios normales de laboratorio, versatilidad nutricional, produce colonias hemolíticas, pigmentadas.

• Toleran amplias temperaturas (4-42ºC) y muchos desinfectantes • Pueden colonizar de forma transitoria el tracto respiratorio y digestivo

de los pacientes hospitalizados.• Multirresistencia (puede mutar a cepas aún más resistentes durante el

tratamiento) Sintetiza diferentes β-lactamasas. – Prevención: evitar uso innecesario de ATB de amplio espectro y contaminación.

Factores de Patogenicidad• Adhesinas:

• Flagelos y pili: movilidad• Alginato: cápsula mucoide (Slime-biofilm)

• Proteasa alcalina : interfiere con la formación de fibrina y puede lisar fibrina. Juntos, elastasa y proteasa alcalina destruyen la sustancia fundamental de la córnea y otras estructuras de soporte compuesta de fibrina y elastina, y ambas pueden inactivar interferón gamma y factor de necrosis tumoral

• Elastasa: rompe el colágeno, IgG, IgA, y complemento. También lisa fibronectina para exponer receptores en la mucosa del pulmón. Rompe el epitelio respiratorio e interfiere con la función ciliar.

• Leucocidina: Citotóxica• Fosfolipasa C y Lecitinasa: Actúan sinérgicamente sobre los lípidos

y lecitina.

Factores de Patogenicidad• Exoenxima S: Actividad ADP-ribosilante. Puede alterar la función

de células fagocíticas.• Exotoxina A (ETA): Exactamente el mismo mecanismo de acción

que la toxina diftérica pero en diferente receptor: ADP-ribosilación del factor de elongación- 2, que resulta en la inhibición de la síntesis de proteínas. La producción de ETA está regulada por el hierro exógeno. Actúa en ambos procesos de enfermedades locales y sistémicas. En septicemias, se observan anticuerpos anti-ETA en el suero.

• Piocianina: cataliza la producción de superóxido y peróxido de hidrógeno, estimula la liberación de IL-8 (atrae neutrófilos). Interrumpe la función normal de las cilias nasales y rompe el epitelio frespiratorio

Factores de Patogenicidad• Piocianina : cataliza la producción de superóxido y peróxido de hidrógeno, estimula la liberación de IL-8 (atrae neutrófilos). Interrumpe la función normal de las cilias nasales y rompe el epitelio frespiratorio

• Pioverdina: sideróforo, regula la secreción de ETA.

• LasA (serina proteasa) y LasB (metaloproteasa): degradación de elastina, del complemento, inhiben la quimiotaxis y función de los neutróflos, en la infecciones crónicas promueven la formación de inmunocomplejos.

• Lipopolisacáridos (LPS): endotoxina

Manifestaciones Clínicas• Infecciones pulmonares (pacientes con fibrosis quística, EPOC,

neutropénicos, pacientes en ARM) mortalidad 70%.• Infecciones cutáneas primarias quemaduras

– Foliculitis (aguas contaminadas: piletas, salones de belleza, acné, depilación).

– Osteocondritis del pie tras una herida penetrante.• Infecciones urinarias sondas urinarias.• Infecciones del oído

– Otitis externa/oído del nadador– Otitis externa maligna: invade tejidos subyacentes en

diabéticos y ancianos.– Otitis media crónica

Manifestaciones Clínicas• Infecciones oculares traumatismos en la córnea, lentes de

contacto, con posterior exposición a agua contaminada.• Ulceras corneales.• Bacteriemia

– Virulencia inherente, afecta a inmunodeprimidos (neutropenia, DBT, quemaduras extensas, neoplasias hematológicas).

– Mayor tasa de mortalidad que otros gramnegativos.– Ectima gangrenoso: lesiones cutáneas características con

vesículas eritematosas que se tornan hemorrágicas, necróticas y ulceradas.

• Endocarditis adictos a drogas parenterales.• Infecciones en aparato digestivo, sistema nervioso central y

sistema musculoesquelético.

Diagnóstico

• Cultivo en agar sangre o agar MacConkey en aerobiosis

• Morfología de las colonias: tamaño de la colonia, actividad hemolítica, pigmentación verde, olor dulce semejante al de las uvas.

• Reacción positiva de la oxidasa.• β-hemólisis.