Caso 1 Aspectos Final

8/18/2019 Caso 1 Aspectos Final

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Caso 1. Caracterización de lactato deshidrogenasa deLactobacillus brevis

1.Enzima

La lactato deshidrogenasa, cataliza una reacción donde hay transferenciade electrones, por lo que se trata de una oxidorreductasa con el códigoEC 1.1.1.27, por lo que:

xidorreductasa

!ct"a en grupos C#$ # co%o donadores.

Con &!'( o &!'#)( co%o aceptor. 1.1.1.27 Lactato deshidrogenasa

*+anehisa y oto, 2---

2. Bosquejo del ensayo

'e/ido a que hay una relación equi%olar entre los dos productos *&!'#y piru0ato , puede seguirse la for%ación de piru0ato a tra0 s de lageneración de &!'# a 3- n%, dado que tiene a %ayor a/sorción y sesigue la Ley de 4eer. Ca/e %encionar que no se puede utilizar 25- yaque se traslapan a%/os cofactores *6ig%a$!ldrich, 2-1 .

)or lo tanto, el ensayo consistir8a en %onitorear la for%ación de &!'#%ediante espectrofoto%etr8a 9 a 3- n%. 'ado que se sigue la Ley de4eer, se puede o/tener una relación lineal, para lo que es necesariorealizar una cur0a de cali/ración que per%ita con0ertir las a/sor/anciasa su equi0alente en concentración.


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3. Tablas y Gr !cas

El an;lisis de los datos fue lle0ado a ca/o con


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2-

-.121

-.-@

-.-77

-.-@7

-.-22271

-

-.2A

-.2 2

-.152

-.2 2

-.-52A 2


6/26

7-

-.3 -

-.31

-. A3

[email protected] 2 @


7/26


8/26

A-

-.3

-.3AA

-.3A7

-.377

-.-1A771

1--

-. @

-. 21

-. 1@

-. 25

-.-11-1

1 -

-.7-

-.5@7

-.721

-.7-A


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-.-1222

'.E., 'es0iación est;ndar.

)osterior%ente, se agregaron /arras de error para representar lades0iación est;ndar *0er "igura 1 y se insertó la l8nea de tendenciapara as8 o/tener la ecuación que correlacione la concentración de &!'#con la a/sor/ancia a 3- n%.

"igura 1. Cur%a est ndar de &'#(. 6e o/ser0a una correlaciónlineal, lo cual per%ite realizar una regresión y o/tener los coeBcientes% -.-- 5 y / $-.-1 .


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9na 0ez que se cuenta con esta ecuación y -.-- 5x$-.-1 , se

transfor%aron los datos de una cin tica de la L'# *0er datos en el ExceladDunto en concentración de &!'# *=< *0er Tabla 2 . 6e graBcaron las3 r plicas co%o se o/ser0a en la "igura 2 , as8 co%o la "igura 3 dondese pro%edian todas las r plicas y se representa la des0iación est;ndarco%o /arras de error.

Tabla 2.#atos de cin)tica. 6e %uestra las concentraciones o/tenidas trastransfor%ar las a/sor/ancias con la cur0a tipo.

>&!'#? *=<

>6? *=<

!

4

C

'

'.E.


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)ro%edio

2A.3@

27.52-

2A.3@

2A.3@

-.3 5

2A.273@

1-

A.-@1

A.-@1

5. 35

A.-@1

-.A725

7.5 3@


19/26

1

3 .-72

3 .-72

33.1@@

3 . 27

-.A 3

33.317

2-

2.- 2

1.1A-

-. -7

37.5A@

1.AA3@

-. -71


20/26

-

3.57-

@.@-

5-.77A52. 2

. 7@3

@.35@-

-

5A.5 1

7-. 75

7 .A55

72.121

2.2 2@

71.23A5


21/26

5-

[email protected]

7 .A55

7A.22@

72.121. 7--

7 .A2@

A-

A3. 7

7A.22@

A3. 7

A5.@

.7-2-

A .3533


22/26

1--

A5.@

A1.71@

A7.A27

A7.-7@

2.A1-3A .A@ 2

12-

[email protected]

@@.171

AA.7--

A7.513

A.2235

AA.5353


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1 -

@ .-5

A5.@

A7.A27

@ .1 3

. 133

@-.2335

2--

@1. 1A

AA.7--

A-.A37

A7. 5-

3.3 @

A7.1-51


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'.E., 'es0iación est;ndar

-2--

3--

-

2-

3-

5-

A-

1--

12-

!4C'

Concentración de *actato +u,-

elocidad de /eación +u, de &'#(0s-

"igura 2. Cin)tica de la generación de &'#(. 6e %uestran las 3r plicas y se o/ser0a el co%porta%iento de una enzi%a


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inal%ente, se graBcaron los l8%ites del rango de datos de laconcentración *0er "igura para 0alidar la adecuación de la ecuaciónpara interpretar los datos.

"igura . , nimo y m 4imo en cur%a est ndar. 6e to%aron los0alores %8ni%os y %;xi%os de a/sor/ancia con sus respecti0asconcentraciones, con el Bn de e0aluar la adecuación de la cur0a. 'adoque dichos 0alores se encuentran en el rango, se deter%ina que la cur0aes adecuada para la interpretación de los datos.

Contribuciones de autor a

Fesolución del caso: )!), !) y G!)F. #oDa de c;lculo: G!)F. Edición degr;Bcas: !). Fedacción y uniBcación del docu%ento: )!).

Bibliogra5 a

Kanehisa, M. and Goto, S.(2000). KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes. NucleicAcids es. 2!, 2"#$0


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6ig%a$!ldrich. *2-1 . Product Information: L-Lactic Dehydrogenase frombovine heart . Fecuperado dehttps:HHIII.sig%aaldrich.co%HcontentHda%Hsig%a$aldrichHdocsH

6ig%aH)roductJKnfor%ationJ6heetH1Hl @15pis.pdf

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