日皮会誌:105 (5), 699―706, 1995 (平７）

培養ヒト表皮角化細胞と真皮線維芽細胞の増殖とサイトカイン

　　　　　　　産生に対する乾癖治療薬の影響

丸山

岩月

幸治1)2)

啓氏1)

張

小野

　　　　　　　　　　要　　旨

　乾癖治療薬の皮膚細胞に対する作用を明らかにする

ために，われわれは正常ヒト表皮角化細胞(ＮＨＫ)，

真皮線維芽細胞(ＨＤＦ)の増殖とそれらの細胞が産生

するサイトカインに対する影響を検討した．乾癖治療

薬として, corticosteroids〔hydrocortisone (HC),

dexamethasone (Dex)〕, VitaminDs誘導体〔!,25，

dihydroxyvitamin Ｄ，(1,25(ＯＨ)Ｊ)ムMC903〕，合

成retinoids fetretinate(Etret), Am-80〕, cyclosporin

Ａ(ＣＳＡ)を対象とした．細胞増殖の検討はＭＴＴ法，

サイトカインについてはinterleukin (IL) -6, Iし8を

ＥＬＩＳＡにより測定した.

　Ｄｅｘ，ＣＳＡ，1,25(ＯＨ)2D3，MC903は10-8～10-6M濃

度範囲においてＮＨＫの増殖を濃度依存性に抑制し

た．その10-6M濃度における増殖抑制率はＤｅｘと

ＣＳＡが約50%, 1,25(OH),D3とMC903が約30％で

あった．また，10-６Ｍ濃度の1,25 (OH几Ｄ,とMC903は

ＨＤＦの増殖を約30％抑制したが, DexとＣＳＡは

ＨＤＦの増殖には影響しなかった.一方｡EtretはNHK

の増殖に対して軽度の促進傾向を示した．サイトカイ

ンの産主に対する影響において, DexはIし1α刺激

ＮＨＫとIIDFによるIL-8産生を著明に抑制し，さら

にＨＤＦ産生のIし6を有意に抑制した. CsAはIL-1α

およびphorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)刺激

によるＮＨＫのIL-8産生を抑制した.1,25(ＯＨ)2D3と

MC903はＰＭＡ刺激によるＮＨＫ産生のIL-8, lL-la

刺激によるＨＤＦ産主のIL-8をそれぞれ抑制した．一

方, EtretはＰＭＡ刺激によるＮＨＫのIし8産生を抑

制したが, IL-1α刺激に対する調節効果はほとんど認

1）福島県立医科大学皮膚科学教室（主任　金子史男教

　授）

2）日東電工（株）メディカル事業部開発センター

3）北京医科大学第一医院皮膚科

平成６年９月12日受付，平成６年12月27日掲載決定

別刷請求先:（〒960-12）福島市光が丘１番地

　福島県立医科大学皮膚科学教室　金子　史男

建中1)3)

一郎1)

小嶋

金子

幸夫I）

史男1）

められなかった．

　以上の結果から，皮膚細胞の増殖とサイトカイン産

生に対して乾癖治療薬はそれぞれ特徴的な調節作用を

有することが示唆された．

　　　　　　　　　　緒　　言

　乾癖皮疹部において表皮細胞と浸潤炎症細胞とによ

るinterleukin (IL)-l, IL-6, IL-8, transforming

growth factor (TGF) aなどのサイトカイン･ネット

ワークの形成が本症における病因・病態と関連するこ

とが指摘されている1)~4).特に, y-mterferon(ffN-y),

Iし6, IL-8(よ皮疹部で増加していることが明らかにさ

れ５ト12)，IL-6はmultifunctinalproinflammatory cyto-

kineとして知られ13)角化細胞の増殖も惹起する町

IL-8は好中球遊走因子14)として作用するのみならず角

化細胞の増殖因子15)としても作用する．すなわち,乾癖

の特徴である表皮肥厚と炎症性細胞の浸潤はこれらの

サイトカインの産生・増加と密接に関与する11)ことが

示唆される．一方，皮疹部に浸潤した細胞はＴ helper

type 1 (Thl) cellが優位であることが明らかにされ

た汽このことから, Thl cellから放出されたIFN-y,

IL-2, IL-12などの影響を受けて，皮膚細胞にIL-6, IL-

8などが誘導されるとともに接着分子の表現と応答す

るサイトカインを産生し，乾癖の病変形成にこれらの

サイトカインが関与することが推察される．このよう

に乾癖皮疹部においては表皮細胞のみならずＴ細胞

も関与した相互作用の結果,サイトカイン･ネットワー

クによるdysregulationが生ずる．われわれはこれま

でにIFN-7は正常ヒト表皮角化細胞(ＮＨＫ.)の増殖

を抑制し，Iし1αの産土を増加させることを報告し

た17)18)

　乾癖の治療は，従来ステロイド外用，レチノイド内

服, PUVA療法などが行われているが，最近，乾癖治

療薬としてvitamin ＤバＶＤ３)誘導体やcyclosporin A

(ＣｓＡ)が有効であることが総括され19)20)試みられて

いる．今回，われわれは乾癖治療薬の皮膚細胞に対す

700

丸山　幸治ほか

る直接の影響を明らかにする目的で, NHKと真皮線

維芽細胞(ＨＤＦ)の増殖およびIL-1α刺激により炎症

を惹起した状態の細胞から産生されるIL-6とIL-8に

対する乾癖治療薬の影響を検討した．

　　　　　　　　　　材料と方法

　1.乾癖治療薬

　乾癖治療薬として, corticosteroids〔hydrocortisone

(HC), dexamethasone (Dex)〕, VDs誘導体〔1,25-

dihydroxyvitamin Ｄ３(],25(OH)2DムMC903((十)－

(5Z, 7E) -9,10-Secochola-5,7,10 (19), 22-tetraene-l

α，3β, 24, (R) -triol) (帝國製薬)〕，合成retinoids

〔etretinate (Etret) (日本ロッシュ)，Λm-80 (4-〔(5，

6,7,8-Tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-

naphthalenyl) -carbamoyl〕benzoic acid) (塩野義製

薬)〕, CsA(サンド薬品)を用いた. Dex, EtretとCsA

はdimethylsu!foxideに，1,25(ＯＨ)2D3，MC903およ

びAm-80はisopropanolに，ＨＣはethanolにそれぞ

れ溶解し，10-3Mの濃度溶液として－2『Ｃ保存した．

各薬物はそれぞれのvehicleが最終濃度, 0.1%以下に

なるように調製して使用した．

　2. NHKおよびＨＤＦの培養と増殖評価

　ＮＨＫは前報18)21)に従い皮膚移植術時に得られた皮

膚小片から分離した．まず，皮膚をpenicillin (lOOU/

ml), streptomycin (100μg/ml)加Dispase II (200U/

�)にて4°C, overnight処理し，表皮を剥離した．次

いで表皮を0.25%trypsin/0.02%EDTAにて５分処

理し, NHKを分離した. NHKの初代培養は

mitomycin-C処理3T3　feeder　layerを用いてker-

atinocyte growth medium (ＫＧＭ)(クラボウ社製)

にて行った.NHKはsubconfluency時にfeeder layer

非存在下で継代し，実験には２代目あるいは３代目の

細胞を用いた．

　ＨＤＦは，皮膚摘出術により得られた正常部皮膚小

片を細切し, 20%fetal calf serum加Dulbecco's

MEM (FCS/DMEM)にて器官培養することにより遊

走増殖させた. HDFの継代は0.25%trypsin/0.02%

ＥＤＴＡを用いて行い,綴代後は10%FCS/DMEMによ

り培養し３代目以降の細胞を実験に供した．

　ＮＨＫおよびＨＤＦの増殖に対する乾癖治療薬の影

響をみるために，細胞数をMosmannによるMTT

法22)により評価した．ＭＴＴ法は, MTT (3- (4,5-

dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tertazolium bro-

mide)が生細胞ミトコンドリア酵素により代謝生成さ

れたformazanを比色する定量法で,以下に概略する．

まず，細胞を96 well plateに2,000cells/100μ1培地/

well密度にて播種し24～48時間培養した．各細胞の増

殖培地としてＮＨＫにはKGM, HDFには10％ＦＣＳ/

DMEMを使用した.各wellに各薬剤溶液50μ1を添加

し最終濃度を!0‥8～10‥6Mに調製した．コントロール

はvehicleのみを添加し，各薬剤濃度について６～８

連で行った.48時間刺激培養後,各wellにＭＴＴ溶液

を加え３～４時間代謝させた．次に，細胞内に生成さ

れたformazanを0.04NHC1/0.5%SDS/isopropanol

溶液23)で抽出し, 550nmの吸光度をmicroplate

reader (EAR400, SLT-Labinstruments, Austria)に

て測定した．この操作はdonorの異なる細胞について

繰り返し，結果は各薬剤刺激による吸光度をvehicle

添加コントロールの吸光度に対する％，すなわち，対

コントロール成長率で表示した．

　3. NHKとＨＤＦのサイトカイン産生に対する乾

癖治療薬の影響

　ＮＨＫのIL-8産主に対する乾癖治療薬の影響につい

て以下の実験を行った.24 well plateに継代した

ＮＨＫをＫＧＭにてsubconfluencyまで増殖させた

後,培地をHC-freeのＫＧＭに交換して24時間培養し

た．その後, 5ng/ml recombinant lし1α(rIL-1α)(犬

塚製薬)あるいはphorbol 12-myristate 13-acetate

(ＰＭＡ : 50ng/ml)/lipopolysaccharide (LPS : 10μｇ/

ml)と各薬剤(10-６Ｍ)を含有したHC-freeのKGM

にて置換し，48時間刺激培養して各３連で薬剤の影響

をみた．刺激後に培養上清を採取し，サイトカイン測

定まで－80°Ｃ保存した．刺激終了時における細胞は

0.25%trypsin/0.02%EDTAにより剥離し，その数を

計数した. HDFのIL-6, Iし8産生に対する乾癖治療薬

の影響についてＮＨＫと同様に検討した.但し, HDFs

は10%FCS/DMEMにrIL-lad.Ong/ml)および各薬

剤(10-6M)を添加して48時間刺激培養した．

　培養土清中のIL-6,1し8濃度は各々ＥＬＩＳＡキット:

IL-6 (Biosource international, USA)およびIL-8(Ｒ

＆D Systems, ＵＳＡ)により定量し，刺激培養終了時

の細胞数で補正しか．

　　　　　　　　　　結　　果

　1) NHKの増殖とIL･8産生に対する乾癖治療薬の

影響

　乾癖治療薬のＮＨＫ増殖に対する影響をMTT

assayにより評価し，薬剤を加えていないＮＨＫの増

殖数(コン1,ロール)に対する増殖％で示した(Fig.

1). Dex, 1,25(OH) ,D,, MC903, CsAは濃度依存性

40　20

１　１

100

　80　60　§

一O1)ＵＯ３lO％

20　０

乾癖治療薬の皮膚細胞への影響

工

］ バ占 Ｔ

］ソ宍 ｊ］

･●･7 -8 -6 -7 -8･6 -７二ｔ -6 -７ 七一6-7-8 -6 -7 -8 (logM)

　Dex　l･25〈ＯＨ〉２Ｄ３ MC903　Etret　　Am-60 CSA

Fig. 1　Effects of antipsoriatic agents on NHK

　proliferation

　NHKs were cultured in KGM with or without

　antipsoriatic agent. After 48 h incubation, NHK

　proliferation was evaluated by MTT assay･

　Results are expressed as mean土SD of 4 different

　strains. *p<0.05, **p<0.01 (Dunnett's test vs.

　control)

にＮＨＫの増殖を抑制し，薬剤濃度の10-６Ｍにおける

増殖抑制率はDex, CsAが約50%, 1,25(OH)2D3,

MC903が約30％であった.一方, EtretはＮＨＫの増殖

を軽度促進する傾向にあったが，統計的有意差は認め

られなかった. NHKのIL-8産生は，rlしlQ;(5ng/ml)

刺激により約２倍増加しか. NHK strainによってIL-

8産生レベルが異なったため，各strainごとにｒIL-1α

刺激時のIL-8産生量に対する薬剤添加によるIL-8産

生増減量％を求め，各薬剤の効果を比較した(Fig. 2).

ｒIL-1α刺激ＮＨＫにおいて増加したIL-8は10-6Mの

ＤｅｘおよびＣＳＡにより約60％減少した．なお，ｒlし1α

と各薬剤の同時刺激培養における実験終了時の細胞数

は各strain別にそれぞれ0.7～1.1×10=, 1.7～3.0×

105，2.2～3.7×10=cells/wellの範囲であった．また，

ＰＭＡ刺激により増加したIL-8はHC, CsA,!,25

(OH)2D3,MC903,Etretによって20～30％抑制された

(Table l).

　2) HDFの増殖,IL-6およびIL-8産生に対する乾癖

治療薬の影響

　ＨＤＦの増殖は1,25 (Oil)2D3とMC903によって約

30％抑制され(Fig. 3), Dex, CsAはＨＤＦの増殖を

ほとんど抑制せずＮＨＫに対する影響とは著しく異

なった. HDF産生のIし8は, rIL-1α(l.Ong/ml)刺

激により著明に増加した．その増加したIL-8は,10-6M

濃度のＤｅｘでは55.9±12.6%, 1,25(OH)2D3では

62.6±25.5%, MC903では47.4±24.1%まで低下を示

々｜

iioo

－

３50

０

ｎｏｎi･Deχ

701

゛CsA ゛1,2S(OH)2D3÷MC903　-t-Etret　+Am-80

　　　　　　　　　　　　　　　-

　1レla stitnulatlon

Fig. 2　Effect of antipsoriatic agents on ＩＬ･8secre-

　tion by NHKs stimulated with rIL-1α

　After 48 h incubation, IL¬8 levels were measured

　in the culture media of NHKs incubated with ｒlし

　1α(5ng/ml) in the presence or absence of antip-

　soriatic agent (10-6M).Ｅａｃｈ IL-8 level is ｅχpres-

　sed as ａ percentage against the level of IL-8

　produced by NHKs stimulated with rIL-1αalone

　(mean十SD of 3 different strains). The statistical

　analysis was performed by Dunnett's test.

し，これらの薬剤により有意に抑制された(Fig. 4).

なお, rIL-1αと各薬剤の同時刺激培養における実験終

了時の細胞数は各strain別にそれぞれ1.5～2.3×

10% 1.4～1.9×10=cells/weIlの範囲であった．また，

無刺激状態のＨＤＦのIL-8産生に対してＤｅｘは抑制

的にAm-80は促進的に作用したが，他の薬剤はほとん

ど影響を及ぼさなかった(Table 2).なお，各薬剤刺

激培養終了時の細胞数は1.0～1.5×10=cells/wellの

範囲であった.一方,ｒlし1α刺激により増加したHDF

のIし6産主は, Dex(l(戸Ｍ)によって約70％抑制され

たが，他の薬剤はほとんど抑制効果を示さなかった

(Fig. 5).

　　　　　　　　　　考　　察

　乾癖は表皮の増殖と炎症性細胞の浸潤が特徴である

ことから，その治療薬はそれらを抑制調節する薬理作

用が必要である．この観点から，われわれはin vitro 培

養細胞系における表皮細胞の増殖および表皮細胞によ

るサイトカイン産生に対する乾癖治療薬の影響につい

て検討した。

　ＮＨＫとＨＤＦではそれらの細胞数とＭＴＴ代謝物

の吸光度は比例することから，細胞数の増減をMTT

assayにより評価可能であることを既に報告した24)

今回, MTT assayを用いてＮＨＫとＨＤＦの増殖に

゛CsA ゛1,25(0・２Ｄ３十MCgO3　+Etr≪t　÷Am-BO

　　　　　　　　　　　　　　　　IL･lastimulation

Fig. 4　Effects of antipsoriatic agents on ＩＬ一8

　secretion by HDFs stimulated with ｒlし1α

　HDFs were incubated for 48 h with ｒIL-1α（１ｎｇ/

　ml) in the presence or absence of antipsoriatic

　agent (10一6M）.ＴｈｅIL-8 level is ｅχpressed as ａ

　percentage against the lレ8 produced by HDFs

　stimulated with rIL-1αalone (mean士SD of 6

　samples from two different strains).

角化細胞でみられるケラチン蛋白Kl, K6, KIO, K16

およびtype ｌtransglutaminase の合成を抑制するが，

基底細胞によるK5, K14に対してほとんど影響しな

い33)ことから，角化細胞の分化調節に関与したと考え

られる．

　乾癖皮疹部におけるサイトカイン・ネットワークの

702 丸山　幸治ほか

Table l　Inhibitory effectsof antipsoriaticagents

　on IL-8 production by NHKs stimulated with

　PMA/LPS

IL-8 inhibition　　　(％)

HC

CsA

1,25(OH) A

MC903

Etret°

35.3土13.4

18.9土10.0

29.9土4.3

23.4土3.5

22.2土２．５

8 : PMA stimulation

inhibition(%) = [contro川Ｌ･8)-treatment(IL-8)]

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　/control(IL-8)χ100

対する乾癖治療薬の影響を検討した．その結果, 1,25

(ＯＨ)2D3およびMC903はＮＨＫとＨＤＦ両細胞の増

殖を濃度依存性に抑制した．これまでに1,25 (OH几D3

は, NHKの分化を促進し，その増殖を抑制し25)~27)

ＨＤＦの増殖をreceptor依存性に抑制する28)ことが報

告されている. DexとＣＳＡは特異的にＮＨＫ増殖を

抑制したが，これはこれらの薬剤に対するそれぞれの

細胞感受性の差あるいは培養液中の血清などが影響す

ることが推定された．これまでの報告ではＣＳＡの

ＮＨＫ増殖に対する効果は培養液中の血清の存在に

よって異なる29)~31)すなわち，血清存在下でのCsA

(0.1～30μｇ/mDは, NHKのthymidineの取り込みを

阻害しないが，無血清培地MCDB153 (Clonetics,

ＵＳＡ)では1～10μ■g/mlの範囲でＮＨＫの増殖を抑制

し，その細胞に結合したＣＳＡレベルは無血清の方が２

～３倍高値であり31)，ＣＳＡがplasma中のlipo-

proteinsと結合する32)ことが明らかにされている．こ

れらのことから, CsAは血清存在下ではlipoproteins

などの成分に結合するため, HDF培養においては細

胞に結合する濃度の低下を来たし，その効果が軽減さ

れた可能性がある．一方, DexではMTT assay 時の

顕微鏡観察において各細胞のＭＴＴ代謝物の呈色反

応の低下が観察されており, Dexがミトコンドリア活

性を抑制したことも考えられ，結果としてMTT

assayによる細胞数の表示では低値を示したことが推

察された．一方, EtretはＮＨＫの増殖を軽度ではある

が促進する傾向が認められ，他の薬剤とは異なる作用

を有しか．われわれはすでにf:tretはＫＧＭ培養にお

いてＮＨＫの増殖を促進させること，また, PMA刺激

によりarrest状態にあるＮＨＫの増殖を一部回復さ

せることを報告した42)これはレチノイドが分化した

140

120

10０

　０　０　０

　８　６　４

一〇』ｌＵＯＯ

10％

20　０

T T T。T T ゃゃＴ Ｔｊ　ｌ 」 １

ｊ

ソソ ｜

4 -7 -8 -6 -7 -8 -6 ･７ ･8 ･6 ･7 -8 ･6 ･7 -8-一一一一　Dei　l･25《ＯＨ)２Ｄ３ MC9I)3　Etra　Am-80

･6 ･7 -a (logM)

Fig. 3　Effects of antipsoriatic agents on HDF

　proliferation

　HDFs were cultured in 10％ＦＣＳ/ＤＭＥＭ with or

　without antipsoriatic agent. After 48 h incuba-

　tion, HDFs were subjected to MTT assay･

　Results are expressed as mean士SD of 4 different

　strains

　*p<0.05, **pく0.01 (Dunnett's test vs. control)

150

00　　　　　50

1(％)ｕｏ!ｉａｊｏａｓＢ-ｎi

０

ｎＯｎ イＤ頓X

乾癖治療薬の皮膚細胞への影響

Table 2　Effects of antipsoriatic agen七s on Iし8

　production by unstimulated HDFs

　　IL-8(pg/W cells)

C!

C2

Deχ

CsA

1,25(OH)2D3

MC903

Etret

Am･80

n.1土0.9

12.7士3.0

　4.6土1.0*

11.3土3.3

11.1士2.1

　7.4土!.7

13.7土2.5

26.1土6.4"

Cl : vehicle control of isopropanol

Ｃ２: vehicle control of dimelhylsulfoxide

*pく0.05(Dunnett's test vs. C2)

¨pくO.OKDunnett's test vs. CD

異常については，特にIL-6, IL-8などが増加して乾癖

の病変形成に重要な役割を演じている1)‘-4)このこと

から，乾癖治療薬としてはその過剰産生を抑制調節す

る作用が望ましい．最近，各種乾癖治療薬のhuman

dermal microvascular endothelial cells (ＨＤＭＥＣ)

のIL-6産生に対する影響34)が報告され，それによると

ＨＣとＤｅｘはサイトカイン刺激によって完進した

HDMECによるIL-6産生を濃度依存性に抑制し, VD3

誘導体のcalcitriolはそのIし6産生を軽度抑制する

が, CsAはほとんど影響しないと述べられている．ま

た, DexはＬＰＳやIL-1刺激によるmurine　macro-

phage cellline,human monocytes. endotherial cells.

fibroblastsのIL-6産生を抑制することも明らかにさ

れている3≒われわれの結果からは, DexはrlL-la刺

激によるＮＨＫとＨＤＦ両細胞のIL-8産生および

ＨＤＦ産生のIL-6を著明に抑制した. Dexの作用はin

vivoにおいて細胞からのIL-1, IL-6, IL-10, IFN-yな

ど多くのサイトカイン産生を抑制し36)，細胞に対する

刺激に拘わらずサイトカインの産生を全般的に抑制す

ると考えられる．したがって, Dexはサイトカイン産

生抑制の点から著効を有する薬剤と考えられるが，臨

床治療においてはステロイドとしての副作用が問題で

ある.

　ＣＳＡは本実験においてはＮＨＫの培養上清中のIL-

８レベルを低下させた．しかし, CsAはＮＨＫのIし８

ｍＲＮＡ発現を抑制しないとの報告37)があることから，

ＣＳＡの作用にはIL-8蛋白合成あるいは分泌機構に対

する抑制が推察され，このことはin ｖiｖｏにおいて表

皮細胞のIL-8産生を直接抑制することを期待させる．

15０

芭loo

:S

50

ｎ ｏ ｎ十Daχ

703

゛C9A ゛1･25(OH)2D3 +MC903　÷Etret　やAnﾄao

　　　　　　　　　　　　　　　　IL-1ostimulation

Fig. 5　Effects of antipsoriatic agents on IL-6

　secretion by HDFs stimulated with rlL-la

　The IL-6 level is expressed as ａ percentage

　against the ｌし6 produced by HDFs stimぶated

　with rIL-1αalone (mean上SD of 6 samples from

　two differentstrains).

実際の臨床において，乾癖患者にＣＳＡを3～14mg/

kg/dayにて投与した後の皮疹部中の濃度は約1～3

μｇ/�であり, in vitroにおける1μg/mlの実験では

ＣＳＡの細胞内濃度はin ｖiｖｏの約10倍になるとの結果

もあり, in vitroの効果からin ｖiｖｏにおける有効性

を証明する判断には議論の分かれるところであ

る31)38)このことからＣＳＡの乾癖に対する有効|生はＴ

細胞のIL-2産生抑制を通してその活性化や増殖を抑

制し，他のサイトカイン産生を調節するといったＴ細

胞を中心とした免疫抑制が主な作用機構として総括さ

れている3≒一方, HDFのサイトカイン産生に対する

効果は培地中の血清により阻害された可能性があり，

今後の検討課題である.

　1,25(ＯＨ)2D3とMC903は, PMA刺激によるNHK

のIL-8産生およびｒlし1α刺激によるＨＤＦのIL-8産

生を抑制し，その作用は細胞依存的であり刺激物質に

対する選択性があると考えられた．これまでに1,25

(ＯＨ)2D3はIL-1誘導のIL-8産生をhuman　ker-

atinocytes, fibroblasts,monocytesについて抑制する

が, endotherial cellsについては抑制しないことが報

告されている申．われわれはすでに1,25(ＯＨ)2D3と

MC903がＮＨＫ産生のIL-laおよびIL-8の分泌を調

節することを明らかにした2い．今回，これらの薬剤は

ＨＤＦのIL-8産生も調節することが示され，好中球遊

走に対して軽減効果が推察され，これらの結果から，

ＶＤ３誘導体はサイトカイン産主調節作用と角化細胞の

704 丸山　幸治ほか

増殖調節作用を有し，その臨床における治療の有効性

と相対的な低副作用2o）などを考慮すると，その乾癖治

療における有肝比は高いことが期待される.

　Zitnikら４叫よ, retinoic acid （ＲＡ）や他のretinoid

誘導体についてIし6産生に対する影響を詳細に検討

し，ＲＡはIL-1誘導のhuman lung fibroblasts のIL-6

産生をタンパクおよびｍＲＮＡレベルで抑制するが，

Etretにはその効果がないこと，またＴＮＦα誘導の

IL-6には効果がなく，さらにHeLa cell やmonocytes

産生のIし6にも効果がないことを述べている．われわ

れの結果もEtretはＨＤＦのIL-6産生を抑制しなかっ

たが，Iし8に対しては刺激依存性にＮＨＫのIL一8産生

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　文

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　　　Cytokines in skin lesions of psoriasis, Ｃｙtｏｋｉｎｅ,

を抑制した．既に報告した42）ようにEtretはＶＤ３誘導

体と同様にＰＭＡ刺激によるＮＨＫのIL-8産生に対

して抑制的に作用し，今回の結果からＶＤ,誘導体と

Etretとでは皮膚細胞増殖に対する作用は対照的であ

るが, PMA刺激によるＮＨＫのIL-8産生には共に抑

制的であることから，このIL-8産主の調節作用がこれ

らの薬剤の臨床効果を示す重要な役割を演じている可

能性がある．

　各薬剤を提供戴いた各製薬会社（サンド薬品，塩野義製

薬，帝國製薬，日本ロツシユ）ならびにrIL-1αを供与戴い

た大塚製薬に深謝致します．

献

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　　　　　　　In Vitro Effects of Antipsoriatic Agents on Cytokine Secretion and

　　　　　　　　　　　　Cell Proliferation of Normal Human Keratinocytes

　　　　　　　　　　　　　　　　　(NHK) and Dermal Fibroblasts (HDF)

　　　　　　Kohji Ｍａｒｕｙａｍａ１)2)，Jian･ZhongＺｈａｎｇ１)3)，ＹｕkioKojima", Keiji Iwatsuki''。

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ichiroｏｎ０１)ａｎｄFumio Ｋａｎｅｋ０１)

　　　　　　　　　　　　"Department of Dermatology, Fukushima Medical College

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(Director: Prof. F. Kaneko)

　　　　　　　　　　　　　　2)ＭｅｄｉＣａｌProducts Sector, Nitto Denko Corporation

　　　　3)Ｄｅｐａｒtｍｅｎtof Dermatology, The First Teaching Hospital of Beijin Medical University

　　　　　　　　(Received September 12，1994; accepted for publication December 27，1994)

　　To clarify the effects of antipsoriatic agents on cytokine secretion and cell proliferation of normal

human keratinocytes (NHKs) and dermal fibroblasts (HDFs), an in vit几7study was ｃａ�ed out using the

following agents: hydrocortisone (HC); dexamethasone (Dex); 1,25-dihydroxyvitamin Ｄパ1,25(OH),D3)

and its synthetic analogue MC903; cyclosporin Ａ (CsA); and etretinate (Etret) and its analogue Am-80.

The cell proliferation was measured by MTT assay, and cytokine levels were determined by ELISA.

　　NHK proliferation revealed to be inhibited by Dex and CsA in ａ dose-dependent manner as well as

by 1,25(OH).D3 and MC903. At 10-６Ｍ concentrations of these agents, the inhibition of cell proliferation

was nearly 50% by Dex and CsA and about 30％bｙ 1,25(OH)2D3 and MC903. Etret, however, was found

to be slightlystimulative on NHK proliferation. HDF proliferation was inhibited nearly 30％bｙ 1,25(OH)2

D3 and MC903, but scarecely by Dex or CsA.

　　Regarding the regulatory effects on cytokine production by agents, Dex markedly inhibited IL-8

secretion in both NHKs and HDFs, which were stimulated with lし1α, and also significantly reduced IL-

6 secretion of HDFs induced by IL-la. CsA showed an inhibitory effect on ｌし８secretion in NHKs

stimulated with IL-1αor phorbol 12-myristate 13-acetate (ＰＭＡ)，bｕtdid not inhibit the secretion in

HDFs. Both 1,25(OH)2D3 and MC903 significantly suppressed IL-8 secretion of HDFs stimulated with IL-

1αand that of NHKs stimulated by PMA. Etret reduced IL-8 secretion of NHKs stimulated with only

PMA. These findings suggest that each antipsoriatic agent has a different regulatory effect on cytokine

secretion and cell proliferation in NHKs and HDFs. They may therefore make different therapeutic

contributions to the treatment of psoriasis.

　　(Jpn ＪDermatol 105: 699～706, 1995)

Key words:　antipsoriatic agents, human keratinocytes, human dermal fibroblasts, cytokines