EspectrometríaEspectrometríade Masasde Masas

Q. Georgina Duarte LisciQ. Georgina Duarte LisciFacultad de QuímicaFacultad de Química

UNAMUNAM

Investigador (es) Año Contribución

J.J. Thompson 1912 Primer espectrómetro de masas

Dempster 1918 Electro-ionización y enfoque magnético

Stephens 1946 Analizador de Tiempo de Vuelo (TOF)

Nier-Johnson 1952 Instrumentos de doble enfoque

Paul, Steinwedel,Raether, Reinhard y von Zahn

1953-58

Analizador cuadrupolar

Wiley y McLaren1955 Diseño avanzado del analizador de tiempo

de vuelo (TOF)

Gohlke yMcLafferty

1956 Cromatografía de Gases/Espectrometría de Masas

Beynon 1956 Espectrometría de Masas de alta resolución

Munson y Field 1966 Ionización Química

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNCronología de la EMCronología de la EM

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNCronología de la EMCronología de la EM

Investigador (es)Investigador (es) AAññoo ContribuciContribucióónn

Dole, Mack, Hines, M. Ferguson y Alice 1968

Ionización por Electro-spray (ESI)

McLafferty1973

Cromatografía de Líquidos/Espectrometría de Masas

Barber, Bordoli, Sedgwick, Tyler, Surman yVickerman

1981Bombardeo de átomos rápidos (FAB)

Blakely y Vestal1983

Ionización porTermo-spray

Yamashita, Fenn, Aleksandrov, Gall, Krasnov, Nikolaev,Pavlenko, Shkurov, Dokl,Baram y Garacher

1984Aplicación de la ionización por Electro-spray (ESI) en macromoléculas

J. J. Thompson, 1912J. J. Thompson, 1912

JJosephoseph JJohnohnThompson, 1912Thompson, 1912

Ventajas de la Ventajas de la Espectrometría de MasasEspectrometría de Masas

Capacidad de IdentificaciónCapacidad de IdentificaciónIdentificación inequívoca de casi cualquier tipo de substancia, desde

átomos hasta moléculas complejas de peso molecular elevadoAnálisis cualitativo y cuantitativoAnálisis cualitativo y cuantitativo

Identificación de una substancia en presencia de otras similaresIdentificación de una substancia en presencia de otras similares

Alta sensibilidadAlta sensibilidad

Técnica universal y específicaTécnica universal y específica

Información isotópicaInformación isotópica

Información estructural, energías de enlaces, cinética,Información estructural, energías de enlaces, cinética,fisicoquímica, etc.fisicoquímica, etc.

Técnica rápida (análisis en línea en tiempos reales, control deTécnica rápida (análisis en línea en tiempos reales, control deprocesos enzimáticos, metabólicos, etc)procesos enzimáticos, metabólicos, etc)

¿Por qué es importante la ¿Por qué es importante la Espectrometría de Masas?Espectrometría de Masas?

Porque es una técnica analítica poderosa Porque es una técnica analítica poderosa utilizada para:utilizada para:

Identificar compuestos químicosIdentificar compuestos químicosCuantificar compuestos químicosCuantificar compuestos químicosProveer información válida en áreas como la Proveer información válida en áreas como la química, física, astronomía, geología, química, física, astronomía, geología, biología, criminalística, etc.biología, criminalística, etc.

Algunas aplicaciones específicasAlgunas aplicaciones específicasde la Espectrometría de Masas:de la Espectrometría de Masas:

Detectar e identificar el uso de fármacos de Detectar e identificar el uso de fármacos de abuso en atletas (antidoping)abuso en atletas (antidoping)Monitorear los gases de la respiración en Monitorear los gases de la respiración en pacientes durante cirugíapacientes durante cirugíaDeterminar la composición de materiales Determinar la composición de materiales provenientes del espacio exteriorprovenientes del espacio exteriorDeterminar adulteración en la miel de abejaDeterminar adulteración en la miel de abeja

Localizar depósitos petroleros (midiendo Localizar depósitos petroleros (midiendo precursores del petróleo en rocas)precursores del petróleo en rocas)Monitorear fermentaciones en línea (industria Monitorear fermentaciones en línea (industria biotecnológica)biotecnológica)Detectar contaminantes orgánicos en Detectar contaminantes orgánicos en aire, aire, agua, suelo y alimentosagua, suelo y alimentosDeterminar algunos tipos de envenenamientoDeterminar algunos tipos de envenenamiento(criminalística)(criminalística)

Algunas aplicaciones específicasAlgunas aplicaciones específicasde la Espectrometría de Masas:de la Espectrometría de Masas:

INTRODUCCIÓNINTRODUCCIÓNEM Diagrama GeneralEM Diagrama General

SistemaSistemade entradade entrada

CámaraCámaradede

IonizaciónIonización AnalizadorAnalizadorDetectorDetector

Sistemade Cómputo

S i s t e m a d e A l t o V a c í oS i s t e m a d e A l t o V a c í o

Componentes principales Componentes principales de de un un Espectrómetro Espectrómetro de de MasasMasas

SistemaSistema dede bombeobombeoSistema de entradaSistema de entradaFuenteFuente de de IonesIones (Cámara de Ionización)(Cámara de Ionización)Óptica IónicaÓptica IónicaAnalizador MásicoAnalizador MásicoDetectorDetectorLíneaLínea de de transferencia transferencia (CG(CG--EM)EM)

Sistema de BombeoSistema de BombeoTiposTipos de de Bombas Bombas de de VacíoVacío

Sistemas de EntradaSistemas de Entrada

•• Muestras PurasMuestras PurasEntrada directaEntrada directa

Sonda de Introducción Directa (DIP)Sonda de Introducción Directa (DIP)Sonda de Exposición Directa (DEP)Sonda de Exposición Directa (DEP)

•• MezclasMezclasCromatografía de GasesCromatografía de GasesCromatografía de LíquidosCromatografía de LíquidosElectrocromatografíaElectrocromatografíaElectroforesis CapilarElectroforesis CapilarExtracción de Fluídos SupercríticosExtracción de Fluídos Supercríticos

Sonda de Inserción Directa (DIP)Sonda de Inserción Directa (DIP)

Sonda de Esposición Directa (DEP)Sonda de Esposición Directa (DEP)

La muestra en disolución se coloca en un tubo capilar de vidrio

Temperatura máxima: 300oC

Diferentes velocidades de Calentamiento

Posibilidad de calentamiento directo de la muestra (sin solubilizar)

La muestra en disolución se coloca en un filamento

Calentamiento balístico

Rampas de temperatura programables

Alcanza hasta 1000oC

Entrada DirectaEntrada Directa

Tipos de IonizaciónTipos de IonizaciónIonización en Fase Gaseosa:Ionización en Fase Gaseosa:

Ionización y Desorción:Ionización y Desorción:

Bombardeo de Partículas:Bombardeo de Partículas:

Ionización a Presión Ionización a Presión Atmosférica:Atmosférica:

Desorción LasserDesorción Lasser

Electroionización (EI)Electroionización (EI)Ionización Química (CI)Ionización Química (CI)Desorción de Campo (FD)Desorción de Campo (FD)Ionización de Campo (FI)Ionización de Campo (FI)Bombardeo de Atomos Rápidos Bombardeo de Atomos Rápidos

(FAB)(FAB)Espectrometría de Ión Másico Espectrometría de Ión Másico

Secundario (SIMS)Secundario (SIMS)Electroespray (ESI)Electroespray (ESI)TermosprayTermosprayIonización Química a Presión Ionización Química a Presión

Atmosférica (APCI)Atmosférica (APCI)Ionización por desorción lasser en Ionización por desorción lasser en

matriz asistida (MALDI)matriz asistida (MALDI)

CÁMARA DE IONIZACIÓNCÁMARA DE IONIZACIÓNIonización ElectrónicaIonización Electrónica

+ - + Hacia el Analizador

Magneto

Magneto

+++ +++

++----

Target

Filamento

Repeledor

CÁMARA DE IONIZACIÓNCÁMARA DE IONIZACIÓNIonización ElectrónicaIonización Electrónica

Las moléculas de la muestra son ionizadas Las moléculas de la muestra son ionizadas por un haz de electrones (70 eV)por un haz de electrones (70 eV)Los iones son expulsados de la cámara y Los iones son expulsados de la cámara y dirigidos al analizadordirigidos al analizadorSe producen iones positivos y negativos:Se producen iones positivos y negativos:

90%90%10%10%

M + eM + e--

M + eM + e--

MM+. + 2+ 2 ee--

MM--.

Espectro ElectromagnéticoEspectro Electromagnético

70 eV70 eV

Ionización ElectrónicaIonización Electrónica

Excitación electrónica (similar a la teoría de UV) en orden decreciente se ionizan preferentemente los electrones:

n > π > σn

π

σ

R-O-R..

R-O-R+.

R-CH CH-R:: R-CH CH-R+.:R-CH 2 CH 2-R: R-CH 2 CH 2-R+.

70 70 eV eV de energíade energíaProduce el Ion Molecular y una gran cantidad de Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de iones iones con diferentes estados de energíacon diferentes estados de energíaAquellos Aquellos iones iones con gran cantidad de energía interna con gran cantidad de energía interna ((vibracionalvibracional, rotacional y electrónica) liberan esta , rotacional y electrónica) liberan esta energía por medio de la fragmentaciónenergía por medio de la fragmentaciónLos Los iones iones con baja energía permanecen intactos (Ion con baja energía permanecen intactos (Ion Molecular)Molecular)Es la técnica de ionización más comúnEs la técnica de ionización más comúnEs la técnica de ionización de la que se obtiene más Es la técnica de ionización de la que se obtiene más informacióninformaciónTodas las bibliotecas comerciales disponibles están Todas las bibliotecas comerciales disponibles están basadas en los espectros obtenidos por esta ionizaciónbasadas en los espectros obtenidos por esta ionizaciónEs la ionización que más se utiliza con el sistema CGEs la ionización que más se utiliza con el sistema CG--EMEM

Ionización ElectrónicaIonización Electrónica

¿CÓMO SE GENERA UN ¿CÓMO SE GENERA UN ESPECTRO DE MASAS POR IE?ESPECTRO DE MASAS POR IE?

Analizador Detector

Cámara de Ionización

Espectro de Masas m/z

%

FilamentoFilamento

Ionización ElectrónicaIonización ElectrónicaMetanol (CHMetanol (CH33OH, P.M. 32)OH, P.M. 32)

33

32

31

30

29

17

15

12C16O1H

13C

Ionización QuímicaIonización QuímicaEs Es una técnica una técnica de de ionización significativamente más ionización significativamente más suave suave que que IE.IE.Se Se utiliza cuando utiliza cuando en el en el espectro por espectro por IE no IE no aparece aparece el ion el ion molecular,molecular, para confirmar para confirmar el ion molecular o el ion molecular o para para aumentar aumentar la la intensidad intensidad de de algunos iones fragmento algunos iones fragmento a a masas altasmasas altas..Se Se utiliza utiliza un gas un gas reactivoreactivo ((metanometano, , isobutanoisobutano, , amoníacoamoníaco, etc.) , etc.) queque eses ionizadoionizado porpor IE. Los IE. Los ionesionesresultantesresultantes reaccionanreaccionan con con laslas moléculasmoléculas del del analitoanalitoqueque se se encuentranencuentran en la en la fuentefuente, con , con transferenciatransferencia de de carga carga ((protónprotón) ) las moléculas neutras las moléculas neutras del del analito analito se se transforman transforman en en ionesiones. . AlgunosAlgunos ionesiones molecularesmoleculares son son demasiadodemasiado inestablesinestablesparapara permanecerpermanecer intactosintactos aúnaún utilizando esta técnicautilizando esta técnica. .

CH4 + e- 2CH4 -e+ +..

CH4+

+

.+CH4 CH5 ++ CH3

+CH5 ++M MH CH4

Ionización QuímicaIonización QuímicaReaccionesReacciones

analito Protonación

IE IQ

Malatión(Pesticida)P.M. 330

Ionización QuímicaIonización QuímicaEjemploEjemplo

Ionización Ionización por FABpor FAB

La energía para desorción es La energía para desorción es suministrada por un haz de átomos de suministrada por un haz de átomos de Xenón ó Argón de alta energía (6Xenón ó Argón de alta energía (6--10 10 KeV)KeV)Se utiliza para ionizar moléculas polares Se utiliza para ionizar moléculas polares y/o lábiles (Ej.organometálicos)y/o lábiles (Ej.organometálicos)

Ionización Ionización por FABpor FAB

Xe+Xe Xe+

Xe+Xe

Xe+

Xe+

Xe+Xe+

Xe XeXeXe

Ionización Intercambio de carga

Voltaje de aceleración

Xe+M

Xe+M

M+

M-

Xe

Xe

MM+ M+ M+H+

M-H-

Ionización por transferencia de cargaProcesos primarios Procesos secundarios

Ionización Ionización por FABpor FAB

ANALIZADORESANALIZADORES

El El objetivoobjetivo del del analizadoranalizador de de masas es resolver los masas es resolver los iones despuésiones después de de que fueron formadosque fueron formados en la en la fuentefuentede de ionizaciionizacióón.n.La La diferencia entrediferencia entre GC/MS y LC/MS son GC/MS y LC/MS son laslas ttéécnicascnicasde de ionizaciionizacióón n utilizadas utilizadas (no el (no el analizadoranalizador))AnalizadoresAnalizadores mmáás s utilizadosutilizados::

Sector Sector MagnMagnééticoticoCuadrupoloCuadrupolo

TrampaTrampa de de IonesIonesTiempoTiempo de de VueloVuelo

Sector MagnéticoSector Magnético

Magneto

Cámara de ionización

Detector

Cámara de Ionización

Sector magnéticoSector magnético: El campo magnético ejerce una : El campo magnético ejerce una fuerza perpendicular al movimiento del ion para fuerza perpendicular al movimiento del ion para deflectar los iones de acuerdo a su deflectar los iones de acuerdo a su momentomomento..

Sector eléctricoSector eléctrico: El campo eléctrico ejerce una fuerza : El campo eléctrico ejerce una fuerza perpendicular al movimiento del ion para deflectar los perpendicular al movimiento del ion para deflectar los iones de acuerdo a su iones de acuerdo a su energía cinéticaenergía cinética..

Al salir los iones de la cámara de ionización tienen Al salir los iones de la cámara de ionización tienen diferente velocidad, para obtener una mejor diferente velocidad, para obtener una mejor resolución es necesario adicionar un sector eléctrico resolución es necesario adicionar un sector eléctrico que colime o reúna los iones de acuerdo a su energía que colime o reúna los iones de acuerdo a su energía cinética.cinética.

Sector Magnético Sector Magnético y Sector Eléctricoy Sector Eléctrico

Doble SectorDoble Sector

m/z=Bm/z=B22rr22/2V/2V

Sector MagnéticoSector MagnéticoDoble sectorDoble sector

GeometríaGeometría

NierNier -- JohnsonJohnson

Geometría Inversa: Geometría Inversa:

1.1. Sector MagnéticoSector Magnético

2.2. Sector EléctricoSector Eléctrico

Sector Electrostático

••VentajasVentajas::––Excelente resoluciExcelente resolucióón de n de masamasa––Excelente exactitudExcelente exactitud de de masamasa––Excelente sensibilidadExcelente sensibilidad

••DesventajasDesventajas::––PrecioPrecio: : SistemasSistemas de alto de alto costocosto––AdquisiciAdquisicióón n espectral lentaespectral lenta((tiempostiempos de ande anáálisislisis largos)largos)

Sector MagnéticoSector Magnético

CuadrupoloCuadrupolo

CuadrupoloCuadrupolo

Todos losvalores de m/z

entran

Un valorde m/z

sale

+

-+

-

Separación basada en la estabilidad del valor de m/z dentro de los campos de RF y CD sobre las barras cuadrupolo

CuadrupoloCuadrupolo

••VentajaVentaja::––PrecioPrecio: el : el sistema menos carosistema menos caro del del mercadomercado

••DesventajasDesventajas::––Los lLos líímites de mites de deteccideteccióón no son n no son tan tan buenos comobuenos como en en otros sistemasotros sistemas––AdquisiciAdquisicióón n espectral lentaespectral lenta((tiempostiempos de ande anáálisislisis largos)largos)––RangoRango de de masas limitadomasas limitado

CuadrupoloCuadrupolo

FilamentoFilamento

Paso de los electronesPaso de los electrones

Salida de los ionesSalida de los iones

DetectorDetector

Centro de la trampaCentro de la trampa

Parte superior del electrodoParte superior del electrodo

Parte inferior del electrodoParte inferior del electrodo

Trampa de IonesTrampa de Iones

Trampa de IonesTrampa de Iones

••VentajasVentajas::––Capacidad paraCapacidad para MS/MS MS/MS ––PrecioPrecio: no tan : no tan bajo como los bajo como los cuadrupolarescuadrupolares––LLíímites de mites de deteccideteccióón n mejores que mejores que los cuadrupolareslos cuadrupolares ••DesventajasDesventajas::

––ReaccionesReacciones ionion--molmolééculacula––AdquisiciAdquisicióón n espectral lentaespectral lenta((tiempostiempos de ande anáálisislisis largos)largos)––RangoRango de de masas limitadomasas limitado

Trampa de IonesTrampa de Iones

El detector es colocado en el punto focalEl detector es colocado en el punto focalpara asegurar una óptima resolución másicapara asegurar una óptima resolución másica

DetectorDetector

Tiempo de Vuelo (TOF)Tiempo de Vuelo (TOF)Con ReflectrónCon Reflectrón

ReflectrónReflectrón

••VentajasVentajas::––Potencial para rangosPotencial para rangos de de masasmasas mmáás s grandes grandes ––Buena Buena resoluciresolucióón y n y exactitudexactitud de de masasmasas––Excelente sensibilidadExcelente sensibilidad––La La masmas rráápida adquisicipida adquisicióón n espectralespectral ((los tiemposlos tiempos mmáás s cortoscortos de ande anáálisislisis))

••DesventajaDesventaja::––PrecioPrecio: : tiendetiende a ser ma ser máás s caro que los caro que los sistemas cuadrupolaressistemas cuadrupolares y y algunas algunas trampastrampas de de iones pero menos costoso iones pero menos costoso que losque los de de sectoressectores

Tiempo de Vuelo (TOF)Tiempo de Vuelo (TOF)

Sistema CG/EMTOFSistema CG/EMTOF

En elEn el sistemasistema MS/TOFMS/TOF las abundanciaslas abundancias dede los iones permanecen los iones permanecen constantesconstantes aa travéstravés dede todotodo elel pico cromatográficopico cromatográfico.. Esto esEsto es la clave la clave dede los algoritmos automatizados que permitenlos algoritmos automatizados que permiten ““descubrirdescubrir””señalesseñales dede compuestos que coeluyencompuestos que coeluyen. .

El softwareEl software identifica automáticamente las posicionesidentifica automáticamente las posiciones dede los picoslos picosen elen el cromatograma acromatograma aúún aqun aquééllos que esten bajollos que esten bajo la lla lííneanea base.base.

AlgoritmoAlgoritmo dede Detección Detección AutomáticaAutomática dede PicosPicos

EnmascaramientoEnmascaramiento yy CoeluciónCoelución

Propylene Glycol

139 Analitos16 minutos

139 Analitos16 minutos

95 Analitos1 hora 15 minutos

95 Analitos1 hora 15 minutos

Análisis TradicionalAnálisis Tradicional dede PetróleoPetróleo((NaftaNafta))

Análisis Análisis Elemental Elemental ((CombustiónCombustión--ReducciónReducción))

La La informacióninformaciónobtenidaobtenida se se reportareportacomocomo porcentajesporcentajes de de elementoselementos (C, H, N, S, (C, H, N, S, y O). y O). Hay Hay rompimiento rompimiento de de todostodos los los enlacesenlaces

Análisis por Análisis por Espectrometría Espectrometría de de MasasMasas

En En Espectrometría Espectrometría de de Masas Masas la la energía energía impartida porimpartida por el el hazhazde de electroneselectrones a la a la molécula rompe molécula rompe algunosalgunos de de los los enlaces. enlaces. Porciones Porciones grandes grandes de la de la estructura estructura de la de la molécula molécula permanecen intactas permanecen intactas permitiendo permitiendo la la identificación identificación del del analitoanalito..

ResoluciónResoluciónCálculo de MasaCálculo de Masa

3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:•• Masa Promedio:Masa Promedio: Se utiliza el peso atómico (es el

promedio de todos los isótopos) para cada elemento. C=12.01115, H=1.00797, O=15.9994, N=14.00674

•• Masa Monoisotópica:Masa Monoisotópica: Se utiliza la masa exacta del isótopo más abundante de cada elemento. C=12.000000, H=1.007825, O=15.994915, N=14.003074

•• Masa Nominal:Masa Nominal: Se utiliza la masa íntegra del isótopo más abundante de cada elemento. C=12, H=1, O=16, N=14

ResoluciónResolución

Es la capacidad de un espectrómetro Es la capacidad de un espectrómetro para distinguir entre dos iones con para distinguir entre dos iones con masas cercanas.masas cercanas.

Se expresa como Se expresa como R=m/R=m/∆∆mm, donde , donde ∆∆mm es es la diferencia de masas entre los dos la diferencia de masas entre los dos iones y iones y mm la masa nominal del ión de la masa nominal del ión de menor masa.menor masa.

ResoluciónResolución

CO+.

N2+.

+C2H4

.

CO+.

N2+. +

C2H4.

27 28 29 27.9949 28.0061 28.0313

Baja ResoluciónBaja Resolución Alta ResoluciónAlta Resolución

ResoluciónResoluciónEjemploEjemplo

Masa Nominal

Masa Monoisotópica

Masa Promedio

C17H32 236 236.2504 236.44459

C16H28O 236 236.2140 236.40096

C15H28N2 236 236.2252 236.40389

ResoluciónResoluciónEjemploEjemplo

Diferencia entre Masas Monoisotópicas

C17H32 y C16H28O 236.2504-236.2140=0.0364C17H32 y C15H28N2 236.2504-236.2252=0.0252C15H28N2 y C16H28O 236.2252-236.2140=0.0112

Resolución = R = m / Resolución = R = m / ∆∆mm Resolución necesaria C17H32 y C16H28O 236.2140 / 0.0364= 6,489 C17H32 y C15H28N2 236.2252 / 0.0252= 9,374 C15H28N2 y C16H28O 236.2140 / 0.0112= 21,090

Exactitud de MasaExactitud de Masa

Exactitud de MasaExactitud de Masa = = m/z Calculada m/z Calculada –– m/z Observadam/z Observadam/z Calculadam/z Calculada

x 10x 1066

Ejemplo:Ejemplo:400.0020 400.0020 –– 400.0000 =400.0000 =

400.0020400.00200.002 0.002 x10x1066 = 4.99 ppm= 4.99 ppm

400.0020400.0020

Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppmExactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm

SensibilidadSensibilidad•• Es una medida de la respuesta del Es una medida de la respuesta del

instrumento para iones de un compuesto en instrumento para iones de un compuesto en particularparticular

•• Indica el valor de la corriente iónica Indica el valor de la corriente iónica detectada en el colectordetectada en el colector

•• Siempre debe estar referida a un compuesto Siempre debe estar referida a un compuesto determinado (relación señaldeterminado (relación señal--ruido)ruido)

•• Disminuye al aumentar la resolución y la Disminuye al aumentar la resolución y la velocidad de barridovelocidad de barrido

•• Está determinada por la eficiencia de la Está determinada por la eficiencia de la ionización, eficiencia de la transmisión y ionización, eficiencia de la transmisión y respuesta del detectorrespuesta del detector

3

0 20 40 60 80 100 500 1000 2500 5000 50000

FID

NPD

ECD-CC

TCD

FPD-S

MS-Scan

MS-SIM

1

0.1

0.1

DETECTORDETECTOR

pg

SensibilidadSensibilidad y y Detectores para CGDetectores para CG

Diagrama Muestra PuraDiagrama Muestra Pura

Muestrapura

IEIE¿¿VolátilVolátil??

NoNo

Se obtuvo M

No se obtuvo M

IQIQ

SíSíDIPDIP

PM < 3000PM < 3000

PM > 3000PM > 3000

DEPDEP

FABFAB Otras técnicasOtras técnicas(ESI, MALDI)(ESI, MALDI)

++..

++..

Diagrama MezclaDiagrama Mezcla

MezclaMezcla SeSe obtuvoobtuvo MM

No se obtuvo MSíSí

NoNo

Otras técnicasOtras técnicasElectroesprayElectroespray,, , , FritFrit FABFAB

¿¿VolátilVolátil??

CG

HPLC

ECZ

IEIE IQIQ++..

++..