POTENCY OF ANTIOXIDANT, ANTICHOLESTEROL AND PLATELETANTIAGGREGATION OF BLACK TEA (Cameliasinensis )ABSTRAKPotensi Antioksidan,Antikolesterol dan AntiagregasiPlatelet Teh Hitam (Cameliasinensis )Berdasar studi epidemiologi menunjukkan adanya hubungan terbalik yaitu antara makanan yang kaya polifenol, flavonoid dan pengurangan risiko penyakit kardiovaskuler. Hubungan ini terutama disebabkan oleh aktivitas antioksidan, antikolesterol dan antiagregasi dari polifenol, serta aterogenesis yang dipicu oleh hiperkolesterol, peroksidasi lipid dan hiper agregasi platelet. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan, antiagregasi dan antikolesterol dari ekstrak metanol dan fraksi-fraksi teh hitam (Camelia sinensis). Untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak metanol dan fraksi-fraksi teh hitam dibanding (-)-Epigallocatechine 3-gallate (EGCG), aktivitas antikolesterol dibandingkan simvastatin dan antiagregasi dibandingkan aspirin. Aktivitas antioksidan adalah penghambatan radikal bebas 1,1- diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) dilakukan pada 2 konsentrasi yaitu 100 g/mL, 50 g/mL dan antikolesterol adalah aktivitas kolesterol oksidase dilakukan pada 2konsentrasi yaitu 100 g/mL, 50 g/mL. Aktivitas antiagregasi menggunakan agonist epinephrine (EPN) pada konsentrasi agonist 300 M, 75 M dan konsentrasi 37,1 g/mL ekstrak metanol dan fraksifraksi teh hitam. Untuk mengetahui perbedaan perlakuan, data dianalisis menggunakan Analysis of Variance (ANOVA) dilanjutkan uji jarak berganda Duncan. Hasil penelitian menunjukkan pemerangkapan DPPH memiliki aktivitas antioksidan tinggisebesar 88,59-93,556%, antikolesterol menunjukkan aktivitas kolesterol oksidase tinggi sebesar 93,663-97,434%, antiagregasi menunjukkan aktivitas rendah sampai tinggi sebesar 79,967-4,31%. Berdasarkanhasil uji jarak berganda Duncan aktivitas antioksidan tidak berbeda nyata antar ekstrak dan fraksi-fraksi teh hitam, aktivitas antikolesterol tertinggi adalah ekstrak teh hitam 0,005 g/mL sebesar 97,434% aktivitas antiagregasi tertinggi pada agonist EPN 75 M sebesar 4,310% dan fraksi air 37,1 g/mL pada agonist EPN 300 M sebesar 21,833%.PENDAHULUAN

Kolesterol plasmatinggi merupakan salah satu faktor risiko terbesar yang berkontribusi terhadap prevalensi dan keparahan penyakit kardiovaskular (CVD) (Sasazuki et al 2000;. Yung et al 2008.). Berbagai faktor yang berkontribusi terhadap efek menguntungkan dari makanan fungsional, banyak perhatian telah ditujukan kepada polifenol tanaman (Grassi et al. 2008). Studi epidemiologis menunjukkan korelasi terbalik antara dietkaya polifenoldengan risiko dan mengurangi CVD (Hertog et al 1996;. Mukamal et al. 2002; Yung et al. 2008). Teh (Camelia sinensis L) merupakan salah satu paling minuman populer di dunia karena rasa dan aroma yang menarik. Polifenol adalah kelompok yang paling signifikan dari komponen teh, terutama flavonoid (Willson 1999;Cabrera et al. 2006). Studi menggunakan model hewan aterosklerosis menunjukkan bahwa diet konsumsi flavonoid menunda pengembangan plak aterosklerosis (Grassi et al. 2008). Dalam sebuah studi jangka panjang dari Kohort Belanda konsumsi teh tertinggi dikaitkan dengan risiko yang lebih rendah kematian akibat penyakit jantung koroner (Geleijnse et al 2002;. Yang dan Landau 2000). Teh hitam merupakan sumber utama dari flavonoid, dengan efek antioksidan yang dapat membantu untuk menghambat aterosklerosis (Sesso et al. 1999). Potensi efek perlindungan dari flavonoidtelah dikaitkan dengan aktivitas antioksidan, antiinflamasi dan antithrombogenic (Hertog 1996; Middleton 1998; Leenen et al. 2005; Geleijnse et al. 2002). Flavonoid juga dapat meningkatkan fungsi vaskular pada hewan percobaan (Duffy et al, 2001;. Geleijnse et al. 2002). Risiko relatif kejadian infark miokard lebih rendah pada teh peminum dengan asupan harian> 375 mL dibandingkan bukan peminum teh. Peningkatan asupan teh dan flavonoid dapat berperan dalam pencegahan primer penyakit jantung iskemik (Geleijnse et al. 2002). Daun teh segar yang kaya monomer flavanol yang dikenal sebagai katekin.

The catechinutama yang ditemukandalam the adalah (-) - epicatechin (EC), (-) - epigallocatechin (EGC), (-) - gallateepicatechin(EKG) dan (-) - epigallocatechingallate(EGCG). EGCG adalahyang paling melimpahcatechindalamteh (Graham 1992; Freidan Higdon 2003).Hitammanufakturteh, dauntehkarenatertimpamemungkinkanoksidasepolifenoluntukmengkatalisasioksidasi, yang menyebabkanpolimerisasikatekin.Katekintersisa account untuk 3-10% daripadatandalamtehhitam yang diseduh. Theaflavin (TF),yang meliputitheaflavin (TF1), theaflavin-3-gallate (TF2), theaflavin-3'-gallate (TF2B) dan theaflavin-3,3'-digallate (TF3), adalahkunciuntukkarakteristikwarnadan rasa tehhitam, dan account untuk 2-6% daripadatan di diseduhtehhitam. Fraksi utama dari hitam polifenol teh, akuntansi untuk> 20% padatan dalam teh hitam diseduh, adalah dikenal sebagai the arubigens (Yang danLandau 2000).

Penelitianiniadalahuntukmengevaluasiantioksidan, anticholesteroldanantiaggregation platelet ekstrakmetanol, fraksitehhitamsecara in vitroassay.

BAHAN DAN METODE

Tanamandankimiabahan

daun kering teh hitam yang diperoleh dariWalini Tea Company, Indonesia. DPPH (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil) (Sigma Chemical Co); methanol untuk HPLC (Merck); (-) Epigallocatechingallate (EGCG) (Sigma Chemical Co); dimetilsulfoksida(Merck); Kolesterol KIT (Randox) reagenmengandung 4-Aminoantipyrine, fenol, peroksidase, kolesterol esterase, kolesteroloksidase; Simvastatin (Kimia Farma); Kolesterol (Sigma Chemical Co), Epinefrin (EPN) (Helena Laboratories 2008).

Ekstraksi dan fraksinasi

Daun kering teh hitam diekstraksi dengan teknik maserasi, diproduksi 7,8% metanol ekstrak. Fraksinasi menggunakan metode partisi cair. Langkah pertama digunakan n-heksana: air (7: 3) sebagai pelarut yang dihasilkan fraksi heksana 20,45%. Langkah kedua digunakan etil asetat: air (9: 1 etil asetat diproduksi fraksi 10,93% dan langkah ketiga digunakan n-butanol: air (9: 1) sebagai pelarut yang dihasilkan butanol fraksi 3,30% dan tetap itu

fraksi air 14,14%.

Pengujian aktivitas radikal DPPH.

DPPH assay dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Frum dan Viljoen (2006). Pipet 50 uL sampel (dua konsentrasi) masuk pada microtitre yang piring dan kemudian ditambahkan 200 uL 0,077 mmol solusi / L metanol DPPH dan digojok dengan sempurna dan terus dttempatkan di ruang gelap selama 30 menit pada suhu kamar, absorpban di baca pada elisa reader di 517 nm.

UjiaktivitasAnticholesterol

Uji anticholesterol dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Iswantiniet al. (2005) dan Kolesterol (Chol)Enzimatik Metode Endpoint (RandoxLaboratorium Ltd 2009).Kolesterol dilarutkan dalam kloroform dengan konsentrasi 25 mg / 10 ml. Uji Anticholesterol yang digunakan manual Kolesterol (Randox2009). Pipet 5 uL sampel (duakonsentrasi) masuk pada plat microtitre dan kemudian ditambahkan 1 mL Randox reagen dan 5 uL kolesterol sebagai sampel. Blangko terdiri dari 10 (L air suling dan 1000 (L Randox reagen; kontrol negatif terdiri dari 10 uL kolesterol dan 1000 (L Randox reagen; standar terdiri dari 10 uL Randox standar dan 1000 (L Randox reagen. Campuran dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar, mengukur absorbansi dengan mikrotiter reader pada 500 nm terhadap blangko.

Pengujian Aktivitas antiaggregation platelet

Aktivitasagregasi trombosit diukur dengan Agregasi Chromogenic Kinetic System (PAKET-4). Pipet ukur 450 uL plasma tanpa trombosit (PPP) ke kuvet a. Pipet ukur 450 uL plasma kaya platelet (PRP) dan 40 uL sampel ke cuvettes dengan batang pengaduk, menetaskan cuvettes di 370 C selama 3-5 menit. Masukkan cuvette PPP ke

channel yang tepat dan mengatur instrumen, masukkan kuvet PRP ke channel yang tepat. Tambahkan 50 uL EPN

di tingkat 300 pM, 75 pM ke kuvet PRP dan merekam persen agregasi (Helena Laboratories 2008).

Analisis statistik

Untuk memverifikasi signifikansi statistik dari parameter, data dihitung termasuk nilai rata2 dan standar deviasi (M SD) dan 95% interval kepercayaan (CI) dari rata2. Untuk membandingkan antara perlakuan, analisis yang digunakan varians (ANOVA) dengan acak desain. P-nilai kurang dari 0,05 dianggap sebagai statiscally signifikan. Selanjutnya untuk mengetahui perbedaan tingkat antara perlakuan dan untuk mengetahui treatmet terbaik digunakan Duncan uji jarak berganda baru 95% interval kepercayaan. Analisisstatisticdigunakan program SPSS 16.0.HASIL DAN DISCCUSSIONS

DPPH aktivitas scavenging

Tidak ada yang berbeda antara konsentrasi dan di antara agen antioksidan. Semua perawatan (ekstrak, fraksi teh hitam dan dua konsentrasi) memiliki aktivitas serupa dan tinggi antioksidan (p = 0,07> 0,05), aktivitas antioksidan tertinggi fraksi butanol pada tingkat 100 mg / mL (93,56%), antioksidan terendah fraksi etil asetat pada tingkat 100 mg /mL (88,59%).

Dasarpenetapan DPPH adalah penangkapan radikal DPPH diikuti dengan memantau penurunan absorbansi pada 517 nm yang terjadikarena pengurangan oleh antioksidan(AH) atau reaksi dengan radikal bebasspesies (R *):

Berdasarkan hasil uji aktivitas penangkapan radikal DPPH, sampel yang mengandung antioksidan dimana hidrogen (H) ditangkap oleh DPPH antioksidan radikal bebas atau menyumbangkan hidrogen (H) ditunjukkan warna ungu

(DPPH radikal bebas) menjadi 1,1- warna kuning diphenyl-2-picrylhydrazyn (Kikugawa et al, 2001;. Gordon 2001).

Ketika DPPH * bereaksi dengan senyawa antioksidan, yang dapat menyumbangkan hidrogen, itu berkurang. Perubahan warna (dari violet menjadi kunig) diukur pada 517 nm (Miliauskas et al. 2003).

Teh hitam memiliki antioksidan yang tinggi karena mengandung flavonoid,ada EC, EKG, EGC, EGCG, TF1,

TF3, TF2B, thearubigins, kaempferol,Myricetin, Quercetin (USDA 2003). Sifat yang paling dikenalluastehpolifenol yang mempunyaiaktivitasantioksidanyang timbuldarikemampuanmerekauntuk

Menangkap spesies oksigen reaktif (Yang dan Landau 2000). Antioksidan makanan, terutama teh dan teh flavonoid telah menarik minat meningkat karena radikal relatif kuat mereka (Nanjo et al 1996.; Mandel et al. 2004).

Aktivitas anticholesterol

Aktivitas Anticholesterol antara ekstrak, fraksi teh hitam dan konsentrasi perlakuan, signifikan (P = 0,00 93,66% meskipun lebih rendah dari simvastatin. Semua anticholesterol agen kecuali fraksi butanol menunjukkan bahwa konsentrasi tinggi (0,005 mg / mL) lebih aktif daripada konsentrasi yang lebih rendah. Penelitian sebelumnya beberapa katekin telah terbukti menghambat enzim kunci (squalene epoxidase) di jalur dari biosintesis kolesterol. Theaflavin ditemukan dua kali lebih efektif dalam menghalangi aktivitas squalene epoxidase (Leung et al. 2001; Wang et al. 2001; Cooper et al. 2005). Ekstrak teh hitam mengandung polifenol, flavonoid, catechin(USDA 2003), secara in vitro dan in vivostudi yang telah dilakukan, teh atau katekin menghambatpenyerapan usus pada diet lipid. Studi in vitro menunjukkan bahwa katekin, khususnya EGCG, mengganggu dengan emulsifikasi, pencernaan, dan misel solubilisasi lipid, langkah-langkah kritisyang terlibat dalam penyerapan usus pada lemak makanan, kolesterol, dan lipid lainnya. Teh atau katekin yang menurunkan penyerapan dan akumulasi jaringan lainnya lipofilik organik senyawa sehingga dapat digunakan sebagai agenterapi penurun lipid yang aman dan efektif (Koo dan Noh 2007). Dihewan, catechin mengurangi kelarutan kolesterol dalam misel suatu aksi yang konsisten dengan pengamatan bahwa dosis tinggi teh memodulasi kadar kolesterol pada hewan yang diberi kolesterol tinggi (Yang et al, 2001;. Cooper et al.2005).

Berdasarkan Tabel 1 menunjukkan simvastatin yang memiliki aktivitas anticholesterol tinggi, data ini divalidasi dengan studi sebelumnya yang statin sebagai 3 - hidroksi - 3 - methylglutaryl koenzim A ( HMG - CoA ) reduktase( yaitu , simvastatin ) telah diterima sebagai pilihan pertama untuk menurunkan lowdensity lipoprotein ( LDL ) , level kolesterol ( Hubacek dan Bobkova 2006) . Inhibitor ini bertindak terutama dengan menghambat biosintesis seluler kolesterol dalam hati ( Risovic et al .2006) .

Menurut aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa ekstrak metanol dan fraksi teh hitam memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi dan sesuai dengan Tabel1 menunjukkan bahwa ekstrak dan fraksi teh hitam ditunjukkan aktivitas anticholesterol tinggi. Hasil ini telah divalidasi dengan penelitian sebelumnya bahwa efek positif dari nutrisi antioksidan alami pada disfungsi kardiovaskular, yang dihasilkan dari beberapa faktor , seperti plak aterosklerotik , low-density lipoprotein ( LDL ) oksidasi , trigliserida , dan metabolisme kolesterol ( Mandel et al . 2004) .

Aktivitasantiaggregation platelet

Aktivitas Antiaggregation antara ekstrak teh hitam, pecahan dan agoniskonsentrasi perlakuan menunjukkan nilai yang signifikan (p = 0,00