Guia Tinciones Bacterias_2014

7/21/2019 Guia Tinciones Bacterias_2014

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Descripción Macroscópica y Microscópica de Bacterias

OBJETIVO GENERAL

Conocer tinciones y formas como se describe microscópicamente las bacterias ymacroscópicamente sus colonias.

MARCO TEÓRICO

Aunque los microorganismos puede ser examinados directamente en los microscopios deluz, con frecuencia deben ser fijados y coloreados para aumentar la visibilidad y el detallede sus estructuras. Estas coloraciones o tinciones son técnicas que permiten observarlos enfunción de la capacidad de los mismos para retener determinadas sustancias, dependiendode naturaleza del colorante y su interacción con la célula.

Cuando se realizan estos montajes, se parte de lo que se conoce como frotis bacteriano, elcual tan solo es un extendido de bacterias que se ace a partir de un cultivo sobre unal!mina para as" poder ser visto en el microscopio. #u elaboración permite que lasestructuras internas y externas de la célula se preserven, evitando de este modo que enzimasy otras reacciones se presenten, impidiendo ver correctamente lo que se est! buscando.

Tinción de Gram

$entro de las tinciones que com%nmente se usan en microbiolog"a, encontramos unadescubierta en &''( por Cristian )ram, denominada Tinción de Gram. *ace parte delgrupo de las Tinciones Selectivas, las cuales se basan en el eco que los tipos de célulastienen distinta composición qu"mica y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a uncolorante. Esta tinción permite clasificar las bacterias por las caracter"sticas de la paredce!ar, logrando clasificarlas en dos tipos+

acterias Gram positivas+ -resentan una pared celular con una capa gruesa de peptidoglicano y dos clases de !cidos te"coicos.

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acterias Gram negativas: -resentan una pared celular con una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprote"nas.

El primer paso de la tinción de )ram debe ser siempre la fijación de la muestra de bacteriascon calor. o que va sucediendo al nivel microscópico cuando se adiciona cada uno de loscolorantes o reactivos es+

Cristal violeta+ /anto las bacterias )ram 012 como las )ram 032 se ti4en, al entrar estecolorante f!cilmente a la célula.

ugol+ Este entra en las células y forma un complejo insoluble con el cristal violeta,complejo que por su tama4o ya no puede salir de la célula.

Alcool acetona+ Esta sustancia afecta la pared celular llevando a que los poros de estase abran. Este efecto es el que diferencia los dos tipos de bacterias, debido a que las)ram 032 al tener una pared delgada dejaran salir el complejo anteriormente formadoquedando incolora, mientras las )ram 012 al tener una pared gruesa, por mas quesufran da4o, van a retener el complejo.

5uscina+ Este colorante ti4e el citoplasma bacteriano de un tono rosado en las )ram 032 pues al aberse salido el complejo permite que esta nueva sustancia entre y ti4a. En elcaso de las )ram 012, estas permanecen te4idas del tono morado del complejo pues al

#



no aber salido este de las células no permite que la fuscina entre. Como resultado finallas bacterias )ram 012 se observaran al microscopio de color 678A$7 y las bacterias)ram 032 lo ar!n de color 87#A$7 06adigan et al 9::;2.

Gra$ica "% &rincipio de a Tinción de Gram%

Tinción de 'impe

Existen otros tipos de tinciones, entre las que encontramos las denominadas Tinciones

Simples. A diferencia de la /inción de )ram, en la tinción simple solo puede describir laforma de las bacterias pues aunque el color resultante en similar al que se podr"a observar en una bacteria )ram 012 observar"a el mismo resultado si tuviera una bacteria )ram 032 pues no influye la composición de la pared celular en este caso pues aqu" tan solo se aplicaun colorante, el cual f!cilmente entra a la célula y la ti4e.

#e basan en el eco de que las células tienen una composición qu"mica diferente a la de su

entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante.Ejemplo de estas esta la tinción con azul de metileno o con el cristal violeta.

Formas de las bacterias

Varias son las formas que usted puede encontrar al observamicroscópicamente una bacteria (coco, bacilo, bacilo corto, espirilos,etc.) y relacionando la terminología de “Cultivo Puro se esperaría que siobserva uno de estos, solo encontrar! un tipo de forma, el encontrar

otra signi"caría que #ay tambi$n otro tipo de bacteria allí porconsiguiente no est! puro.

%as colonias bacterianas son la forma macroscópicamente como ustedpuede ver un grupo de bacterias en un medio solido, gran variedad deformas, color, elevaciones y #asta te&tura se puede observar cuando secaracteri'a esta estructura. continuación encontrara una guía gra"ca

(



para describir las bacterias microscópicamente (ra"ca *) ymacroscópicamente (colonia bacteriana, ra"ca +)

Gra$ica #% &rincipaes mor$oo)*as microscópicas de as +acterias%/omado de 6adigan et al . 09::;2. roc<+ iolog"a de los 6icroorganismos. &:= edición. -!gina >;.

Gra$ica (% &rincipaes mor$oo)*as macroscópicas ,coonia +acteriana-%

.



&ROCEDIMIENTO

?@#/86E@/A B#?C7 #7C?7@E#

• -ortaobjetos 0!minas2• 6icroscopio.• Asas 8edondas.• 6ecero.

• Cristal violeta• ugol• Alcool3acetona• 5uscina de )ram.• Aceite de ?nmersión.• Azul de 6etileno.• Agua.

Como primera medida l!vese las manos y tenga puesto los elementos de protección.$esinfecte el !rea de trabajo y finalizado el laboratorio desinfecte de nuevo.

Antes de comenzar a describir microscópicamente las bacterias, ded"quese a describir detalladamente la morfolog"a de la colonia 06acroscópica2. $escr"bala seg%n la forma, tipode elevación y tipo de borde.

/enga en cuenta que nunca debe abrirse la caja de -etri mas de un tercio y debe trabajar siempre cerca al mecero.

"% Tinción 'impe con A/! de Metieno o Crista Vioeta

/ome una lamina, m!rquela en un extremo por debajo con el nombre de la bacteriaque va a te4ir, la marca debe ser muy peque4a para no afectar la visión en elmicroscopio. #obre la l!mina coloque una peque4a gota de agua.

Caliente el asa redonda en el mecero. /ome la caja de la bacteria escogida, enfr"eel asa caliente tocando una parte del medio de cultivo donde no tenga bacteria.

/ome la bacteria raspando suavemente, sin arrancar medio de cultivo.

6ezcle la bacteria con la gota de agua y extiéndala por toda la l!mina. $éjela secar al aire.

5"je la muestra pasando la lamina dos o tres veces por la llama del mecero.

0



Cubra completamente la muestra con azul de metileno o cristal violeta durante unminuto.

ave suavemente con agua y escurra. $eje secar al aire.

7bserve la l!mina con objetivo de inmersión 0&::x2, no olvide que tiene que usar una gota de aceite de inmersión sobre la muestra. $ibuje lo observado.

#% Tinción de Gram

/ome una lamina, m!rquela en un extremo por debajo con el nombre de la bacteriaque va a te4ir, la marca debe ser muy peque4a para no afectar la visión en elmicroscopio. #obre la l!mina coloque una peque4a gota de agua.

Caliente el asa redonda en el mecero. /ome la caja de la bacteria escogida, enfr"eel asa caliente tocando una parte del medio de cultivo donde no tenga bacteria./ome la bacteria raspando suavemente, sin arrancar medio de cultivo.

6ezcle la bacteria con la gota de agua y extiéndala por toda la l!mina. $éjela secar al aire.

5"je la muestra pasando la lamina dos o tres veces por la llama del mecero.

Agregue a continuación la serie de reactivos. /enga presente que todos estos son pasosconsecutivos y siempre debe respetar el tiempo que se le indica.

Cubra la lamina con el colorante cristal violeta 0colorante primario2 durante unminuto. ave suavemente con agua y escurra la lamina.

Cubra la l!mina con lugol durante un minuto. ave suavemente con agua y escurrala lamina.

Cubra la lamina con alcool acetona 0decolorante2 durante (: segundos. avesuavemente con agua y escurra la lamina.

Cubra la lamina con fuscina de )ram 0colorante de contraste2 durante &D segundos.ave suavemente con agua y escurra la lamina.

7bserve la lamina con objetivo de inmersión 0&::x2, no olvide que tiene que usar una gota de aceite de inmersión sobre la muestra. $ibuje lo observado.

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BIBLIOGRA2IA

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