Ho Lester Ol

7/25/2019 Ho Lester Ol

1/3

Holesterol

Holesterol spada u grupu steroida sa karakteristinim

cilkopentanoperhidrofenantrenskim prstenom. On je neophodan za normalno funkcionisanje

organizma jer:

- uestvuje u izgradnji membrana svih ivotinjskih elija i subcelularnih estica-prekurzor je unih kiselina

-prekurzor je svih steroidnih hormona

Holesterol je prisutan u svim plazma lipoproteinima, ali oko 60% od ukupnog

holesterola se transportuje putem LDL-a. Oko 2/3 CH je esterifikovano masnim kiselinama sa

dugim lancima, najvie sa linoleinskom kiselinom koja je najzastupljenija masna kiselina kod

ljudi. Esterifikacija CH i hidroliza CH-E se neprestano odvijaju u organizmu. Hidroliza CH-E

se odvija u jetri, a njihova sinteza u plazmi prebacivanjem ostataka masnih kiselina sa lecitina

na slobodan holesterol. Ova reakcija je katalizovana enzimom lecitin: holesterol

aciltransferazom.

Pokazano je da postoji pozitivna veza izmeu koncentracije holesterola i KVB, pa se

on i koristi kao marker u praenju i tretmanu ovih bolesti. Za razliku od drugih parametarakoji se mere u laboratorijama, lipidi i lipoproteini imaju poseban pristup definisanju

normalnih oekivanih vrednosti. Problem nastaje u definisanju koja koncentracija lipida i

lipoproteina odvaja osobe sa povienim mastima koje imaju KVB ili e tek razviti KVB od

tzv. normalne populacije. Znai kritine vrednosti za serumske lipide i lipoproteine se

definiu tako da odvajaju osobe sa razliitim stepenom rizika od pojave bolesti, tj. da li su

osobe u visoko rizinoj, grenino rizinoj ili ne rizinoj grupi.

Cilj je odrati u organizmu to nie vrednosti CH

vrednosti nie od 4,68 mmol/L (smrtnost 3,3/1000), optimalne ili ne rizine vrednosti

4,68 mmol/L 5,2 mmol/L (smrtnost poveana za 25%), granine ili umereno rizine

vrednosti

5,2 mmol/L 6,2 mmol/L (smrtnost poveana za 85%), rizine vrednosti

vee vrednosti od 6,2 mmol/L (smrtnost poveana za 230%) veoma rizine vrednosti

poeljne vrednosti su ispod 5,2 mmol/L (58% populacije nema ovu vrednost), a za

osobe kod kojih je registrovane stenoza na koronarnim krvnim sudovima cilj je da se

holesterol snizi ispod 4,68 mmol/L

Faktori koji utiu na koncentraciju CH:

1. Genetski faktori- najznaajniji jer se smatra da je varijacije u koncentraciji CH u plazmi

ima genetsku osnovu.

2. Godine- CH se poveava sa godinama

3. Pol- koncentracija CH kod mukaraca je via nego kod premenopauznih ena. Kodpostmenopauznih ena CH je vii nego kod mukaraca istih godina.

4. Ishrana- zasiene masne kiseline poveavaju holesterol, mononezasiene mk. imaju tenju

ka snienju holesterola, polinezasiene mk. sniavaju holesterol. Trans masne kiseline

poveavaju LDL pa treba to manje da se unose hranom. Holesterol unet hranom poveava

konc. CH u cirkulaciji. Steroli biljnog porekla (fitosteroli) i neka vlakna (iz voa i povra)

sniavaju njegovu koncentraciju kao i konc. LDL-a. Riblje ulje ga takoe sniava, ali u

manjoj meri nego TG i Lp(a).

5. Gojaznost- ona je u najveoj meri povezana sa hipertrigliceridemijom, ali posto se

gojaznost poveava sa godinama onda e i ona uticati na holesterol.

6. Fizika aktivnost- ona smanjuje serumski holesterol.


2/3

7. Hormoni- hormon rasta, tiroksin, glukagon sniavaju holesterol, anaboliki stereoidi i

prigesteron ga poveavaju. Prestanak luenja estrogena kod postmenopauznih ena je

povezano sa poveanjem koncentracije CH, Tg, Lp(a) i homocisteina.

8. Bolesti kao izvor varijacija- IM, DM, uzimanje lekova za sniavanje lipida, za korekciju

HTA, renalne bolesti itd.

Holesterol se odreuje enzimskim ili hemijskim metodama. Metode su direktne ili

indirektne (ekstrakcijom ili nekim drugim izolacionim postupkom se tretira uzorak pa se

analizira konc. izdvojenog CH). U direktne metode spadaju:

1. hemijske metode sa solima gvoa i Huangova metoda

2. enzimske metode.

Direktne metode

1. Hemijske metode

Libermann Burchard (L-B) metodaHolesterol kao tipian alkohol reaguje sa jakim, koncentrovanim kiselinama pri emu

nastaje obojeni produkt. U sastav reagensa ulaze siretna kiselina i anhidrid siretne kiseline

koji slue kao rastvarai i dehidratacioni agensi, kao i sulfatna kiselina koja ima ulogu takoeu dehidrataciji kao i u oksidaciji.

CH se izlae dejstvu jakih kiselina, koje prvo uklanjaju molekule vode, pa se oksiduju

intermedijarni produkti, a krajnji proizvod je holestaheksan sulfonska kiselina, zeleno obojeno

jedinjenje iji se intezitet boje meri na 410nm.

intenzitet boje je vei za CH-E

interferencije: bilirubin (pozitivna interferencija jer sa L-B reagensom i solima Fe gradi

biliverdin, koji apsorbije u istoj oblasti kao i obojeni proizvod), vitamin A

Tanost je dobra ako se ispune uslovi uniformnosti metode, temperature i talasne duine

Metode sa solima gvoa

CH + FeCl3(konc H2SO4) + glacijalna CH3COOH= boja

boja stabilnija od L-B

7x osetljivija

isti intenzitet boje za oba oblika CH

interferencije: halogeni, peroksidi, hemoliza, lekovi, vitamini

Metoda sa p-toluensulfonskom kiselinomCH + pTSA + anh. CH3COOH + glacij. CH3COOH + konc H2SO4 =boja

isti intenzitet boje za oba oblika CH

intrferira bilirubin

2. Enzimska metoda

Metoda je tana, precizna i jednostavna za upoterbu. Prvo se vri hidroliza holesterol estara

enzimom CH esteraza.

CH esteraza

CH-E + H20 = CH + SMK

3-OH grupa holesterol se oksiduje do keto grupe enzimom CH-oksidaza.

CH oksidaza

CH + O2 = holest 4 en 3 on + H2O2

nastaje vodonik peroksid ija se koncentracija meri u reakciji koja je katalizovana

peroksidazom, preko formiranja boje sa odgovarajuim hromogenom


3/3

a) Trinder ova reakcija

peroksidaza

2 H2O2 + fenol + 4-aminofenazon = hinonimin + 4 H2O

Intezitet boje se meri na 510 nmInterferencije se javljaju u prisutvu poviene koncentracije bilirubina, askorbinske kiseline i

drugih supstanci koje troe vodonik peroksid (negativna interferencija), dok hemoliza i

mokrana kiselina ne ometaju njegovo odreivanje.

katalaza

b) H2O2+ metanol = formaldehid + H2O

formaldehid + acetilaceton + NH4+ = 3,5-diacetil-1,4-dihidrolutidin

katalazac) H2O2+ etanol = acetaldehid + H2O

acetaldehid DH

acetaldehid + NADP+ = acetat + NADPH + H+

Moe da se meri i koliina utroenog kiseonika polarografski, tako se izbegava interferencija

bilirubina

U direktnim metodama interferiraju: turbiditet, lipemija, ikterinost, hemoliza

Indirektna metoda

Centers for Disease Control and Prevention (CDC)CDC RF metoda Abell et. al. (Indirektna metoda, uklonjene su interferirajue supstance)

modifikacija L-B metode

modifikacija uvoenjem saponifikacije

Rastvor seruma se tretira alkoholnim rastvorom KOH da bi se izvrila hidroliza-saponifikacija

CH-E(potrebno je obezbediti slobodan CH jer on i CH-E ne daju isti intezitet boje sa L-B

reagensom). CH se ekstrahuje iz smee heksanom, a potom se ekstrahovani rastvor sui na

vakumu, a osueni ostatak se rastvara u L-B reagensu . Razvija se boja iji se intenzitet meri

na 620 nm. Kao standard se koristi ist holesterol.

Modifikacija dodatkom digitonina koji e precipitiratii slobodni CH. Precipitat se

resaponifikuje i odreuje sa LB reagensom.

Documents

Ho Lester Ol