KONTROLA POLNOG CIKLUSA

U cilju:-Indukcije estrusa-Sinhronizacije estrusa-Supresije estrusa-Kontrole plodnosti (detekcijom progesterona u mleku i mlečnoj masti)

-Superovulacija sa ciljem embriotransfera

Indukcija estrusa

Cilj:-Skraćenje trajanja prolongiranih intervala osemenjavanja (kašnjenja pojave estrusa u postpartumu)-kontinuirana proizvodnja mesa-kontinuirana proizvodnja mleka tokom cele godine (ravnomerna teljenja po mesecima)

Sprovodi se:-kod primitivnih rasa-kod svih krava kod kojih kasni pojava estrusa u postpartumu (više od 90-og dana od teljenja)

Uslov: grla u priplodnoj kondiciji

Postupak:Upotreba PMSG -12 mg norgestomet (implants/pesarij) + 600 i.j. PMSG -800 i.j. PMSG-1000 i.j. PMSG

-I.m. PMSG (egzogeni FSH + LH)

-Upotreba prostaglandina-analoga PGF2alfa (Estrumate, Synhrogal, Gonid....)-i.m., dvokratno, razmak 11-14 dana, doza 2x500 ng (2 x 2 ml), V.o. posle 3 dana

-Upotreba prostaglandina-analoga PGF2alfa u kombinaciji sa gonadotropnim hormonima hipofize ili rilizing (GnRH) hormonima hipotalamusa (Lutal, Receptal, Talamgal, Cystorelin...)

-Upotreba rilizing hormona hipotalamusa (GnRH) pri izvođenju V.O., - ovulacija nastaje za 24 h - cilj je sprečavanje kašnjenja ovulacije zbog deficitarne ishrane (kašnjenje ovulacije od 2-7 dana, pa je v.o. bezuspešno)

Sinhronizacija estrusa

Cilj:-Plansko usmeravanje proizvodnje mleka i mesa

-oplodnja većeg broja plotkinja u kraćem vremenskom intervalu-racionalno korišćenje prostornih kapaciteta i ambijentalnih uslova stajepo fazama proizvodnje (porodilišta, telićarnici, tovilišta, staje za krave u laktaciji)-bolja organizacija V.O. i prihvatanja teladi u sinhronizovanim teljenjima- industrijski organizovana proizvodnja mleka i mesa (kontinuirana i ravnomerna)

Uslov: grla u priplodnoj kondiciji

Postupak: kod grla kojima je ustanovljen estrusU periodu od 12 – 20 dana-aplikacija gestagena (progestagena), progesterona u cilju inhibiranja gonadotropne aktivnosti hipofize (nakon prestanka aplikacije javlja se folikularna aktivnost i estrus)

Peroralna aplikacija CAP (chloro-acetoxyprogesteron)-sintetički derivat progesterona-12 do 15 dana uzastopno po 2ml (20mg)/dan nezavisno od faze estrusnog ciklusa-CAP potiskuje i sprečava pojavu estrusa (estrus za nekoliko časova prestaje ukoliko je grlo bilo u estrusu)Po prestanku aplikacije CAP, 8-og dana započinje rast folikula

- Aplikacija i.m. CAP 2 x 10 mg/dan u trajanju 12-15 danaPo prestanku aplikacije CAP naglo počinje rast folikula, pojava estrusa 4-og dana, Ovulacija 5 ili 6-og dana (v.o. Dvokratno, 5 i 6-g dana po prestanku aplikacije CAP)

-Upotreba vaginalnih pesarija (200 mg fluorogestana), estrus se javlja u periodu 1-6 dana po vađenju pesarija

-Upotreba prostaglandina (Estrumate) -analoga PGF2alfa (primenjuje se u anestričnih krava, i periodu 40 do 60 dana postpartuma)

Način primene Estrumate :-2 x u razmaku od 11 dana po 500ng (2ml), 3 dana po drugoj aplikaciji V.O.

-Estrumate u kombinaciji sa progesteronom-Implant progesterona (trajanja 9 dana) + i.m. Estrumate pri izvlačenju implanta -Implant progesterona (trajanja 9 dana) + i.m. Estrumate 2 x (pri izvlačenju implanta - 9 i 11 dana)

Sintetički prostaglandin (Estrumate)Primena: Terapija neplodnosti krava (corpus luteum perzistens, endometritis, mumifikacija ploda)

Progesteron-skraćuje period involucije materice (50 mg progesterona na svakih 10 dana u postpartumu(veći efekti primene u kombinaciji sa estradiolom)

Supresija (potiskivanje) estrusa

Cilj: potiskivanje pojave estrusa radi većih prirasta i mirnijeg temperamenta (grla u tovu (junica, krmača, ovaca), sportskih grla (omica, kobila)

Postupak:-aplikacija progesterona i sintetskih derivata gestagena (progestagena), u cilju inhibiranja gonadotropne aktivnosti hipofize i blokade funkcije jajnika- Aplikacija i.m. Ili intrauterino (kuglice)-Dugotrajna primena izaziva trajni sterilitet

-Supresija estrusa : ovriektomijom

Kontrola plodnosti (detekcijom progesterona u mleku i mlečnoj masti) Dijagnoza estrusa (očekivanog dana – 0-og dana)

-progesteron < 2,2 ng/ml mleka= Indikacija estrusa-progesteron 2,2 – 3,5 ng/ml mleka = estrus pod znakom pitanja-progesteron > 3,5 ng/ml mleka = nema estrusa (praćenje nivoa progesterona 5, 8, 12 i 20-0g dana polnog ciklusa)Dijagnoza ranog graviditeta (20-og dana po osemenjavanju)

-progesteron > 11 ng/ml mleka= Indikacija graviditeta-progesteron 2,2 - 11 ng/ml mleka= graviditet pod znakom pitanja-progesteron < 2,2 ng/ml mleka=nema graviditeta

100% tačnost u dva slučaja:progesteron < 2,2 ng/ml mleka= Indikacija estrusa, nema graviditeta

Superovulacija

Superovulacija- veštačko povećanje broja zrelih jajanih ćelijaPoliovulacija – prirodni fenomen povećanja broja zrelih jajanih ćelija

Značaj: povećanje reproduktivnog kapaciteta ženskih životinja (povećanje % pojave blizanaca- značajno zbog tova u sistemu krava-tele(povećanje % pojave blizanaca uz upotrebu seksiranog semena pri V.O: - značajno kod širenja novih rasa (uveženih), kao i visokomlečnih zapata

-Značaj superovulacije pri planiranju i izvođenju ET (MOET)

-Postupak: -primenom gonadotropnog hormona (FSH), na nekoliko dana pre očekivanog estrusa

Vrijabilnost u postignutim rezultatima izražena

Faktori koji utiču na varijabilnost:

1.) Rasa- genetski faktori2.) Vrednost gonadotropnih preparata (PMSG, FSH)3.) Ovarijalno stanje u vreme tretmana4.) Doza primenjenog preparata5.) Sezonski uticaj na varijacije superovulatorne aktivnosti

(ambijent, temperatura, trajanje dnevne svetlosti, ishrana)

EMBRIO-TRANSFER

Značaj:Povećanje reproduktivnog kapaciteta superiornih –genetski vrednih ženskih grla

Faze:-Selekcija i priprema donora i primaoca embriona-Uzimanje (sakupljanje), čuvanje i transport embriona-Kultivisanje i konzervisanje embriona-Transfer (presađivanje) embriona u primaoce i provera stanja bremenitosti

Selekcija donora i recipijenata embriona

Donori embriona:

-Genetski najvrednija grla (krave, junice, telad pre puberteta (do 200 kg t.m), zdrava grla, u priplodnoj kondiciji, normalnog trajanja polnog ciklusa, funkcionalnih polnih organa

-Uzimanje embriona od zaklanih grla

Primaoci embriona:Genetski manje vredna grla (krave i junice), zdrava grla, u priplodnoj kondiciji, normalnog trajanja polnog ciklusa, funkcionalnih polnih organa

Priprema donora i primaoca embriona

Priprema donora embriona (najbolje mlade krave i dobro razvijene junice sa redovnim polnim ciklusom)

Izazivanje superovulacije primenom gonadotropnih hormona i sintetičkih prostaglandina najčešći primenjivani metodi:

- u periodu od 9-12-og dana polnog ciklusa (corpus luteus faza) I.m. 3000 i.j. PMSG (za krave), 2500 i.j.PMSG (junice) i 2 dana kasnije 500 mg sintetičkog prostaglandina (Estrumate ...)

Pojava estrusa (tri dana kasnije) u krave davaoca (5-30 ovulacija)Estrus izražen i produženog trajanja (24-48 časova) V.O. 3 x (doza 80-100 x 106 sperm.)Posle 6-7 dana oplođene jajne ćelije su u vrhu materičnih rogova

i pristupa se sakupljanju embrionaPrimaocima embriona se daje istog dana 500 mg prostaglandina (sinhronizacija estrusa)

Metod aplikacije 2000 -3000 i.j. PMSG krajem 16-og dana ciklusa(regresiju žutog tela ubrzati istovremenim aplikovanjem sintetičkih prostaglandina)Ovulacija i V.O. 21.i 22 dana ciklusa

Metod aplikacije FSH 2x dnevno po 5 mg u toku 5 uzastopnih dana + aplikacija prostaglandina 2-og dana nakon

tretmana sa FSH

Stimulacija rasta folikula kod teladi donora (uzrasta 4-9 nedelja)

Postupak – i.m. 2000-3000 i.j. PMSG, 3 dana kasnije 5 mg estradiola,1 dan kasnije aplikacija HCG (Humani Goriogonadotropni hormon), ubrzava ovulaciju

V.O. 2 x (24-og i 48-og časa po aplikaciji HCG)

Superovulacija i oplodnja Superovulacija opterećuje put spermatozoida i oplodnju (transport spermatozoida redukovan za 20% u odnosu na krave sa monoovulacijom)Kod ovulacije 1-10 jajnih ćelija (oplodnja (84%)Ovulacija 11-20 jajnih ćelija (oplodnja 78%)Ovulacija više od 21 jajna ćelija (oplodnja 71,6%)

Priprema primaoca embriona

Recipijenti se sinhrono pripremaju zajedno sa kravama donorima embriona (estrus i 7. dan posle estrusa moraju biti istovremeni kod obe grupe krava)Važan uslov za prihvatanje embriona (ista faza polnog ciklusa)Estrus može biti spontan ili indukovan prostaglandinom (Estrumate) Priprema jedne krave donora istovremeno sa pripremom 8-10 krava recipijenta Indukcija estrusa u krava i junica u fazi žutog tela (8. do 15. dan ciklusa)Krave recipijenti 36 sati kasnije u odnosu na krave donore (koje su dobile PMSG) dobijaju i.m. Prostaglandin (zbog luteolize), a to je 12 sati ranije u odnosu na krave donore, koje su ušle u estrus.

Sedmog dana po estrusu, recipijentima se transferišu embrioni u onaj materični rog na čijem jajniku se konstatuje žuto telo.

Uzimanje embriona

Metodi uzimanja embriona: krvni (hirurški)beskrvni (nehirurški)

Krvni (hirurški) metod- primenjuje se na životinji koja je pod opštom narkozomRelaksiranog uterusa.Krava se postavi na leđa, noge se fiksirajuRez se pravi na abdomenu ispred vimena u dužini 10-15 cm Materica sa jajnicima se izvadi izvan rubova rane i pristupa ispiranju rogova.Materica se perforira blizu bifurkacije uteri , a rog se blago pridržava i u njega s e uvodi sterilisani urološki gumeni kateter (ubrizgava se 20 ml puferizovani fiziološki rastvor i izvlači u sterilisanu prihvatnu posudu) Postupak se ponavlja 2 x u oba roga.

Ovaj metod može se izvesti 3 x kod jedne iste krave u razmaku od 6 nedelja, Prosečno se po kravi dobija od 6-8 embriona

Ispirak iz materice se razlije u Petrijeve šolje i istaloži na dno posude. Pretraga se vrši lupom (10 do 40 x uveličanje)

Ispiranje uterusa se vrši od 7. dana posle oplođenja (jajne ćelije se nalaze u stadijumu Morule ili blastocista . Računajući od momenta aplikovanja PMSG jajne ćelije su 9.dana u 16-ćelilijskom stadijumu, 10. dana u stadijumu morule, a 11. dana u stadijumu blastocista (blastocisti su najpogodniji za sakupljanje i transplantacije).

Nehirurško ispiranje embriona

Infuzioni metod ispiranja uterusa pomoću katetera (dužine 60 cm, prečnika 0,6 cm za krave, 0,4 cm za junice,

sa balonom na vrhu 15-20ml vazduha)

Ispiranje se sastoji u tome što se balon naduva da začepi jedan rog utreusa, kateter se uvodi do polovine roga (kontrola preko rektuma), a zatim se vrši ubrizgavanje 50 ml tečnosti za ispiranje i izvlaćenje tečnosti

(10 x 50 ml u jedan rog) Postupak se ponovi i za drugi rog (10 x 50 ml), a pri premeštanju katetera iz roga u rog, vazduh u balončiću se ispušta.

Ukupno se potroši 1 l rastvora za ispiranje.

Svaki ispirak odlaže se u posebnu posudu i obeleži redosled

Prednosti postupka: ne oštećuje se uterus krave i može se više puta ponoviti postupak.

U jednom postupku dobija se 5-6 embriona

Nehirurško ispiranje embriona

Infuzioni metod ispiranja uterusa pomoću dvokanalnih i trikanalnih katetera Ispiranje se sastoji u tome što se balon naduva da začepi jedan rog utreusa, kateter se uvodi do polovine roga (kontrola preko rektuma), a zatim se vrši ubrizgavanje 30-60 ml tečnosti za ispiranje i izvlaćenje tečnosti (samoispiranje), krave su u boksu koji je 30-400 uzdignut u prednjem delu,

kravama je aplikovan spazmolitik

(Postupak se ponovi i za drugi rog (10 x 30-60 ml), a pri premeštanju katetera iz roga u rog, vazduh u balončiću se ispušta.

Ukupno se potroši 1 l rastvora za ispiranje, koji je zagrejan na 37C.

Ispirak se sakuplja u prihvatnu posudu, a pošto se lupom pronađu embrioni u povraćenojtečnosti iz materice, mikropipetom se ubacuju po dva embriona u pajetu , a zatim se katetrom za V.O. Može izvršiti prenošenje u recipijenta ili medijum za duboko zamrzavanje.

Po obavljenom postupku kravama donorima se aplikuje prostaglandin (radi luteolize i sprečavanja pada proizvodnje mleka zbog visoke koncentracije progesterona)

Aplikuju se i antibiotici nakon ispiranja, u cilju sprečavanja infekcije i endometritisa.

Laboratorijska tehnologija embriotransfera (izolovanje embriona)

U laboratoriju preneta boca sa medijumom stavi se na sobnu temperaturu i za 20-30 minuta se istalože embrioni.

4/5 tečnosti iznad sedimenta se istaloži i ispusti tankim gumenim crevom kao nategom, a sediment se razdeli u 3- 5 Petrijevih šolja i pregleda pod stereo lupom pri uveličanju 15 do 25 x.

Uočeni embrioni u vidu sitnih okruglastih ćelija sa dvostrukom opnom (Zona Pellucida), prečnika 120-140 nm vade iz medijuma pomoću kapilarne pipete i stavljaju u medijum za kulturu tkiva PBS (puferizovani fiziološki rastvor) sa 20% fetalnog seruma.

Pregled i ocena embriona Ocenjuju se oblik, građa, prisustvo degenerisanih embriona (klase I, II, III)Upotreba embriona I klase (transfer u svežem stanju i duboko zamrzavanje)II klasa embriona (upotreba u svežem stanju), III klasa embriona se odbacuje

Kultivisanje i konzervisanje embriona

Kultivisanje embriona predtsavlja privremeno čuvanje embriona u medijumima (in vitro) Ili u jajovodima drugih životinja (kunići, ovce), takođe privremeno, mnajčešće 3 dana, sve do upotrebe embriona– transfera u krave primaoce, embrioni se razvijaju-dele

Pri kultivisanju embriona- nastaje usporavanje razvoja embriona. Pre transfera embriona ženka kunić se žrtvuje i pristupa hirurškom vađenju embriona

Konzervisanje embriona dubokim hlađenjem: Medijum glicerin i postupno zamrzavanje u tečnom azotu na -1960C.Procedura zamrzavanja embriona traje 1,5 do 2 sata

(u cilju sprečavanja kristalizacije embriona). Pri transferu zamrznutih embriona nema potrebe sinhronizovanja životinja primaoca sa životinjama donorima.

Uspeh u transferu zamrznutih embriona kreće se oko 30-40 %, a svežih embriona (1-2 sata posle uzimanja) uspeh se kreće ok 60-70 %.

Prenošenje (transfer) embriona u krave (junice) primaoce (recipijente)

Posutpci mogu biti hiruruški i nehirurški

Krvni (hirurški) metod Krava (junica) primaoc embriona mora biti u istoj fazi polnog ciklusa kao i donor (ukoliko se vrši transfer svežih embriona, 7. dan po oplodnji)

Primaoci embriona moraju imati razvijeno žuto telo (rektalnim pregledom konstat.)

Hirurški rez je ispred vimena ili na boku ispod tuber coxae, kroz otvor na abdomenu.Krava je narkotizovana, u ležećem položaju.Aplikacija je pomoću šuple igle, obične pipete ili male brizgalice. Embrion se prenosi u šupljinu materičnog roga, na čijoj strani se nalazi jajnik sa žutim telom.Operacije se izvodi u uslovima asepse i antisepse

Hirurški postupak u stojećem položaju krave (i.m. aplikuje se 20 ml spazmolitika, 20 minuta pre operacije)Rez se pravi na zidu abdomena, ispod tuber coxae, na strani na kojoj se nalazi jajnik sa žutim telom.

Bezkrvni (nehirurški) metod

Vrši se na stojećoj kravi (junici) uz rektalnu kontrolu pomoću katetera za esemenjavanje, koji se uvodi preko cervikalnog kanala u onaj materični rog na čijoj strani se nalazi jajnik sa žutim telom.

Embrion se unosi sa malo tečnosti u sam vrh materičnog roga, 7. dana ciklusa krava primaoca. Za transfer služi kateter, dužine 60 cm, debljine 4-5 mm. Na 20-30 minuta pre transfera recipijenti i.m. dobijaju relaksanse (sprečavanje napinjanja i istiskivanja embriona)

Transfer embriona mora biti higijenski, slično V.O. : -dezinfekcija vulve 70% alkoholom-Cevasti spekulum se redovno koristi (koji se uvodi u vaginu), a kroz njega kateter za embritransfer.

Kontrola gravidnosti i uspeh E.T.

Kontrola gravidnosti:

-rektalnim pregledom od 4 do 6 nedelje-Određivanjem nivoa progesterona u krvnom serumu

-Transferom svežih embriona (1 do 2 sata po ispiranju) postiže se gravidnost

60- 70% gravidnosti (ukoliko je uzimanje bilo 7. dana po oplodnji, jajne ćelije u stadijumu blastociste),

30% stadijum morule

7 % ako je stadijum 8 do 16 blastomera.

Starost Masa

oba testisa

g

Dnevna proizvodnja

spermatozoida

u 106 / biku

U 106 na 1 g testikularnog

tkiva

0-4 meseca 20 0 0

5-7 meseci 97 104 1

8-10 meseci 284 1750 7

10-12 meseci 370 3300 10

17 meseci 480 4480 11

3 godine 586 6040 11

4-5 godina 647 6530 11

7 godina 806 8000 11

Dnevna proizvodnja sperme bika u zavisnosti od starosti i mase testisa

Funkcije epididimisa transportna uloga (odgovoran trepljasti epitel i peristaltika)7-9 dana potrebno za put spermatozoida od germinativnog epitela do repa epididimisa (2-3 nedelje kod bikova koji se ne koriste)

Koncentracija spermatozoida Apsorpcija viška vode ( u glavi epididimisa koncentracija 4 x106/mm3

Zrenje (maturacija)(zaodevanje lipoproteinskom opnom- povećanje otpornosti na t i pH)

Lagerovanje spermatozoida

(rezerve sperme za 10 ejakulata)

Raspoređenost po delovima epididimisa:Glava epididimisa (14-20 x 109 –maturacija nije završena)Telo epididimisa (2,4 - 5,2 x 109)Rep 20-37 x 109

Ampule semenovoda (1,9 - 8,5 x 109 – ejakulat)

Dužina epididimisa 30 -50 m

Spermatogeneza

Faze:

I faza - Mitotička deoba spermatogonija (traje 15-17 dana) (spermatogonije se dele 4 x i svaka daje 16 primarnih spermatocita)

II faza – Mitotička deoba primarnih u sekundarne spermatocite (traje 15 dana)

III faza – Mejotička deoba sekundarnih spermatocita u spermatide (traje nekoliko časova)

IV faza – Transformacija spermatida u spermatozoide(traje 15 dana, do nekoliko meseci kod bikova koji se ne koriste)

Ukupno trajanje spermatogeneze oko 50 - 60 dana (maturacija oko 10 dana)

Uzrast bika

BojaKonzistenci

jaKoličina

u ml

Koncentrac. spermatozoida

u 109/1mlpH

1-2 godine

Beličasta (boja

slonovače)

Pavlake, mleka,

vodenasta

3

(1,5–8)

0,6

(0,2-1,0)

6,9

(6,6-7,4)

3-6 godina

Beličasta

(boje slonovače do

žute)

Pavlake, mleka

5

(3-12)

1,0

(0,5-3,0)

6,6

(6,4-7,2)

Fiziološki parametri ejakulisane sperme bika

Elektroejakulat: 2,7x 109 spermatozoida (1/4 dnevne produkcije testisa)

http://bp1.blogger.com/_VBXD7eRITTo/Rs7JHy1u1gI/AAAAAAAAAEc/77IJ5uoYSOI/s1600-h/130+calving+17.JPG

IPV - INFEKTIVNI PUSTULARNI VULVOVAGINITIS

IBR - INFEKTIVNI BOVINI RINOTRAHEITIS