PERCOBAAN VISPEKTROFOTOMETER UV-VIS
A. TUJUAN PRAKTIKUM1. Mengetahui prinsip dasar penentuan dengan
metode spektrofotometri2. Mengetahui persiapan larutan untuk
pengukuran spektrofotometri3. Mengetahui penentuan kadar sampel
dengan metode spektrofotometriB. DASAR TEORI Spektrometri UV-Vis
adalah salah satu metoda analisis yang berdasarkan pada penurunan
intensitas cahaya yang diserap oleh suatu media. Berdasarkan
penurunan intensitas cahaya yang diserap oleh suatu media
tergantung pada tebal tipisnya media dan konsentrasi warna spesies
yang ada pada media tersebut. Spektrometri visible umumnya disebut
kalori, oleh karena itu pembentukan warna pada metoda ini sangat
menentukan ketelitian hasil yang diperoleh. Pembentukan warna
dilakukan dengan cara penambahan pengompleks yang selektif terhadap
unsur yang ditentukan (Fatimah et al., 2005). Spektrofotometri
menyiratkan pengukuran jauhnya penyerapan energi cahaya oleh suatu
sistem kimia itu sebagai suatu fungsi dari panjang gelombang
radiasi, demikian pula pengukuran penyerapan yang menyendiri pada
suatu panjang gelombang tertentu (Underwood, 1986).Spektrofotometri
ini hanya terjadi bila terjadi perpindahan elektron dari tingkat
energi yang rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi. Perpindahan
elektron tidak diikuti oleh perubahan arah spin, hal ini dikenal
dengan sebutan tereksitasi singlet (Khopkar, 1990).Spektrofotometri
adalah suatu metode analisis yang berdasarkan pada pengukuran
serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan berwarna pada
panjang gelombang yang spesifik dengan menggunakan monokromator
prisma atau kisi difraksi dan detector vacuum phototube atau tabung
foton hampa. Alat yang digunakan adalah spektrofotometer, yaitu
sutu alat yang digunakan untuk menentukan suatu senyawa baik secara
kuantitatif maupun kualitatif dengan mengukur transmitan ataupun
absorban dari suatu cuplikan sebagai fungsi dari konsentrasi.
Spektrometer menghasilkan sinar dari spectrum dengan panjang
gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas
cahaya yang ditransmisikan atau diabsorbsi (Harjadi, 1990).
Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau
absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Sedangkan
pengukuran menggunakan spektrofotometer ini, metoda yang digunakan
sering disebut dengan spektrofotometri. Spektrofotometri dapat
dianggap sebagai perluasan suatu pemeriksaan visual dengan studi
yang lebih mendalam dari absorbsi energi. Absorbsi radiasi oleh
suatu sampel diukur pada berbagai panjang gelombangdan dialirkan
oleh suatu perkam untuk menghasilkan spektrum tertentu yang khas
untuk komponen yang berbeda (Saputra, 2009). Salah satu contoh
instrumentasi analisis yang lebih kompleks adalah spektrofotometer
UV-Vis. Alat ini banyak bermanfaat untuk penentuan konsentrasi
senyawa-senyawa yang dapat menyerap radiasi pada daerah ultraviolet
(200 400 nm) atau daerah sinar tampak (400 800 nm). Analisis ini
dapat digunakan yakni dengan penentuan absorbansi dari larutan
sampel yang diukur.Prinsip penentuan spektrofotometer UV-Vis adalah
aplikasi dari Hukum Lambert-Beer, yaitu:A = - log T = - log It / Io
= . b . CDimana : A = Absorbansi dari sampel yang akan diukurT =
TransmitansiI0 = Intensitas sinar masukIt = Intensitas sinar yang
diteruskan = Koefisien ekstingsib = Tebal kuvet yang digunakanC =
Konsentrasi dari sampel(Tahir, 2009).
C. ALAT DAN BAHANALAT Beaker glass Corong kaca Erlenmeyer Gelas
ukur Labu takar Neraca analitik Pipet tetes Pipet volume
Spektrofotometri U V-Vis Mikropipet Kuvet Rotary evaporatorBAHAN
Ekstrak biji lengkeng Aquadest Metanol Vitamin C, dan
1,1-diphenyl-2-picrihidrazil (DPPH), FeCl3 1%
D. CARA KERJA
Skema Kerja Pengelolahan Sampel
Buah lengkeng
- Dikumpulkan- Dikupas dan diambil bijinya- Di tumbuk sampai
halusBiji Lengkeng halus
- Dimaserasi dengan metanol 3x24 jam- DisaringAmpas/ Residu
Maserat
Ekstrak kental biji lengkeng
- Diuapkan dengan rotary evaporator
Skema Kerja Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Biji Lengkeng
- Di pipet 5 ml dari setiap konsentrasi- Ditambah 2 ml DPPH dan
metanol 5 ml- Dihomogenkan didalam vorteks- Diukur panjang
gelombang UV-Vis- Dilakukan pengumpulan dan analisaHasil Dan
PembahasanAbsorban100 ppm40 ppm80 ppm60 ppm20 ppm
Kesimpulan
Perhitungan1. Konsentrasi vitamin CNO.X(Konsentrasi)Y( % daya
hambat )XYX2
1545,28226,425
21053,45534,5100
31573,581103,7225
42080,501610400
52590,562264625
n = 5x = 75y = 343,47xy = 5738,6 X2 = 1375
b = = ===2,352
a = = ==33,38
r = ...........berarti persamaan lineary = a + bx50 = 33,38 +
2,352xx = jadi konsentrasi vitamin C x = 7,06 ppm
2. DPPHM = x 0,05 = x Massa = = 1,97 mg
3. Pembuatan larutan baku ekstrak biji lengkengPpm = , 1000 ppm
= 1000 g/ml= 1 mg/ml= 10 mg/ 10 ml (artinya 10 mg ekstrak lengkeng
dilarutkan dalam metanol)
C1 . V1 = C2 . V2Dik :C1 = 1000 ppmC2 = 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm,
80 ppm, 100 ppmV1 = ?V2 = 5 ml
Jawab :a. 20 ppm1000 ppm . ml = 20 ppm . 5 ml1000 . x = 100x = x
= 0,1 ml
b. 40 ppm1000 ppm . ml = 40 ppm . 5 ml1000 . x = 200x = x = 0,2
ml
c. 60 ppm1000 ppm . ml = 60 ppm . 5 ml1000 . x = 300x = x = 0,3
ml
d. 80 ppm1000 ppm . ml = 80 ppm . 5 ml1000 . x = 400x = x = 0,4
ml
e. 100 ppm1000 ppm . ml = 100 ppm . 5 ml1000 . x = 500x = x =0,5
ml
