PERCOBAAN I

PENENTUAN KANDUNGAN NITRIT MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

A. TUJUAN PERCOBAAN

Dapat memahami prinsip dasar instrument spektrofotometer UV-Vis

Dapat melakukan preparasi sampel dalam analisis kandungan nitrit menggunakan spektrofotometer UV-Vis

Dapat menentukan kandungan nitrit menggunakan spektrofotometer UV-Vis dalam sampel

B. DASAR TEORI

Metode analisiss spektrometri adalah metode analisis yang banyak dipakai dalam analisis kimia, khususnya pada spectra elektromagnetik daerah ultraviolet dan tampak. Prinsip dasar spektroskopi adalah interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan suatu sampel, dan adanya interaksi tersebut menyebabkan terjadinya perpindahan electron valensi molekul atau atom ke tingkat energi orbital yang lebih tinggi. Kemudian jumlah intensitas radiasi yang diserap oleh sampel dihubungkan dengan konsentrasi analit dalam suatu larutan sampel. Jumlah radiasi yang diserap oleh suatu larutan sampel digambarkan oleh hokum Beer-Bougeur-lambert :

A = - Log T = Log 1/T = Log Io/I = (bc

A = 2,00 log % T

Dimana :

A = absorbansi

T = transmitansi

B = panjang kuvet (cm )

( = absorsivitas molar ( cm-1.mol-1.liter )

C = konsentrasi larutan ( mol/L )

Io = intensitas sinar dating

I = intensitas sinar yang diteruskan

Ada tiga teknik yang biasa dipakai dalam analisis secara spektrometri. Ketiga teknik tersebut adalah :

1. Metode standar tunggalMetode ini sangat praktis karena hanya menggunakan satu larutan standar yang telah diketahui konsentrasinya (Cstd). Selanjutnya absorbsi larutan standar (Astd) dan absorbsi larutan sampel (Asmp) diukur dengan spektrometri. Dari hukum Beer diperoleh:

Astd = (.b.Cstd

Asmp = (.b.Csmp

(.b = Astd/Cstd

(.b = Asmp/Csmp

Sehingga,

Astd/Cstd = Csmp/Asmp

Csmp = (Asmp/Astd) x Cstd

Dengan mengukur absorbansi larutan sampel dan standar, konsentrasi larutan sampel dapat dihitung.

2. Metode Kurva KalibrasiDalam metode ini dibuat suatu seri larutan standar dengan berbagai konsentrasi dan absorbansi dari larutan tersebut diukur dengan AAS. Langkah selanjutnya adalah membuat grafik antara konsentrasi (C) dengan Absorbansi (A) yang akan merupakan garis lurus melewati titik nol dengan slope = .b atau slope = a.b. Konsentrasi larutan sampel dapat dicari setelah absorbansi larutan sampel diukur dan diintrapolasi ke dalam kurva kalibrasi atau dimasukkan ke dalam persamaan garis lurus yang diperoleh dengan menggunakan program regresi linear pada kurva kalibrasi.

3. Metoda Adisi StandarMetoda ini dipakai secara luas karena mampu meminimalkan kesalahan yang disebabkan oleh perbedaan kondisi lingkungan (matriks) sampel dan standar. Dalam metoda ini dua atau lebih sejumlah volume tertentu dari sampel dipindahkan ke dalam labu takar. Satu larutan diencerkan sampat volume tertentu kemudian diukur absorbansinya tanpa ditambah dengan zat standar, sedangkan larutan yang lain sebelum diukur absorbansinya ditambah terlebih dulu dengan sejumlah tertentu tarutan standar dan diencerkan seperti pada larutan yang pertama.

Menurut hukum Beer akan berlaku hal-hal berikut:

Ax = k.Ck AT = k(Cs+Cx)

Dimana,

Cx = konsentrasi zat sampel

Cs = konsentrasi zat standar yang ditambahkan ke larutan sampel

Ax = absorbansi zat sampel (tanpa penambahan zat standar)

AT = absorbansi zat sampel + zat standar

Jika kedua rumus digabung maka akan diperoleh Cx = Cs + {Ax/(AT-Ax)}

Konsentrasi zat dalam sampel (Cx) dapat dihitung dengan mengukur Ax dan AT dengan spektrometri. Jika dibuat suatu seri penambahan zat standar dapat pula dibuat grafik antara AT lawan Cs garis lurus yang diperoleh dari ekstrapolasi ke AT = 0, sehingga diperoleh:

Cx = Cs x {Ax/(0-Ax)} ; Cx = Cs x (Ax/-Ax)

Cx = Cs x (-1) atau Cx = -Cs

Gambar : kurva kalibrai (kiri) dan kurva adisi standar (kanan) dalam analisis spektrometri

C. ALAT

1. Spektrofotometer sinar tampak dengan kuvet silika

2. Labu ukur 50 mL:250 mL;500 mL dan 100 m:

3. Pipet ukur 1 mL;5 mL;10 mL

4. Pipet tetes

5. Gelas piala 150 mL;250 mL; 600 mL

6. Erlenmeyer 250 mL

7. Dragball

8. Cawan arloji

9. Neraca analitik

D. BAHAN

1. larutan sampel

2. aquades bebas nitrit

3. sulfanilamide (SA)

4. N-(1-naphthyl) ethylene diamine dihydrochloride (NED dihydrochloride)

5. KMnO46. Larutan induk nitrit

7. H2SO4 pekat

8. FAS

9. Na2C2O4E. CARA KERJA

1. Pembakuan larutan induk nitrit, 250 mg/L NO2-N

a) Pipet 10 mL larutan KMnO4 0,05 N, masukkan kedala Erlenmeyer 250 mL

b) Tambahkan 1 mL H2SO4 pekat

c) Pipet 10 mL larutan induk nitrit, masukkan kedalam larutan KMnO4 dengan cara ujung pipet berada dibawah permukaan larutan KMnO4d) Diamkan selama 5 menit

e) Hilangkan warna permanganate dengan penambahan larutan FAS 0,05 N dengan penambahan secara bertahap sebanyak 10 mL

f) Titar kelebihan FASdengan larutan KMnO4 0,05 N sampai sedikit warna merah muda sebagai titik akhir

g) Hitung kandungan NO2-N dari larutan induk dengan rumus berikut :

Dimana:

C adalah kadar NO2-N dalam larutan induk, mg/mL NO2-N

V1 adalah jumlah mL total larutan KMnO4 yang digunakan

N1 adalah normalitas larutan KMnO4V2 adalah jumlah mL total larutan Na2C2O4 atau jumlah mL total larutan FAS

N2 adalah normalitas larutan Na2C2O4 (atau jumlah mL larutan FAS)

V3 adalah jumlah mL larutan induk NO2-N yang diambil (dititar)2. Pembuatan kurva kalibrasi

a) Optimalkan spektrofotometer sesuai petunjuk penggunaan alat

b) Ke dalam masing-masing 25 mL larutan standart tambahkan 0,5 mL larutan sufanilamida, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,5 mL larutan NED dihirochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm

e) Buat kurva kalibrasinya

3. Prosedur analisis sampel

a) Pipet 10 mL sampel, masukkan kedalam gelas piala 200 mL

b) Tambahkan 0,2 mL larutan sulfanilamide, kocok dan biarkan 2 menit sampai dengan 8 menit

c) Tambahkan 0,2 mL larutan NED dihirochlorida, kocok dan biarkan selama 10 menit dan segera lakukan pengukuran absorbansi (pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari 2 jam)

d) Baca masing-masing absorbansinya pada panjang gelombang 543 nm

e) Hitung kadar nitrit dalam sampel menggunakan kurva standar

PERCOBAAN II

PENENTUAN KANDU LOGAM BESI (Fe) DALAM OBAT ATAU MAKANAN MENGGUNAKAN AAS

A. TUJUAN PERCOBAAN

Mahasiswa dapat memahami prinsip dasar instrumen AAS

Mahasiswa dapat melakukan preparasi sampel obat atau makanan dalam analisis logam Fe menggunakan AAS

Mahasiswa dapat menentukan kandungan logam Fe dalam obat atau makanan

B. DASAR TEORI

Larutan sampel diaspirasikan ke suatu nyala dan unsur-unsur di dalam sampel diubah menjadi uap atom sehingga nyala mengandung atom unsur-unsur yang dianalisis. Beberapa diantara atom akan tereksitasi secara termal oleh nyala, tetapi kebanyakan atom tetap tinggal sebagai atom netral dalam keadaan dasar (groung state). Atom-atom ground state ini kemudian menyerap radiasi yang diberikan oleh sumber radisi yang terbuat dari unsur-unsur yang bersangkutan sehingga terjadi proses eksitasi energi atom. Panjang gelombang yang dihasilkan oleh sumber radiasi adalah sama dengan panjang gelombang yang diabsorpsi oleh atom dalam nyala.

Penyerapan energi/sinar (absorbansi) oleh atom pada panjang gelomabang tertentu akan mengikuti hukum Lambert-Beer, yakni absorbansi berbanding lurus dengan panjang kuvet yang dilalui sinar dan konsentrasi uap atom dalam nyala. Tetapi panjang kuvet dapat dibuat konstan sehingga absorbansi hanya berbanding langsung dengan konsentrasi analit dalam larutan sampel.

Hukum Lambert-Beer sebagai berikut:

Keterangan:

A = absorbansi

T = transmitansi

b = panjang kuvet (cm)

= absortivitas molar (L/cm.mol)

c = konsentrasi larutan (mol/L)

Io = intensitas sinar datang

I = intensitas sinar yang diteruskan

C. ALAT

Spektroskopi Serapan Atom (AAS)

Neraca

Gelas beker

Labu ukur

Pipet volume / pipet gondok

Pipet tetes

Kaca arloji

Pengaduk kaca

Erlenmeyer

Dragball

Corong kaca

dll

D. BAHAN

Larutan induk Fe 1000 ppm

Sampel obat/makanan yang mengandung Fe

Akuades

HNO3 pekat

E. CARA KERJA

1. Preparasi Sampel

a. Destruksi (lebih diutamakan)ambil 0,005 g sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan 10 mL HNO3 pekat kemudian panaskan sampai sampel larut seluruhnya dan larutan menjadi kering/hampir kering. Encerkan sampel dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

b. Tanpa Destruksi

Ambil 0,05 gram sampel dan larutkan di dalam beker dengan HNO3 pekat kemudian diencerkan menggunakan labu ukur 10 mL. 1mL larutan tersebut diambil dan diencerkan menggunakan 10 mL labu ukur.

2. Metode Standar Kalibrasi

Buatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL.

3. Metode Standar Addisi

Buatlah larutan standar Fe 0.0 ; 0.5 ; 1 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm dengan mengencerkan larutan induk Fe 100 ppm dengan larutan HNO3 0,1M menggunakan labu ukur 10 mL. Kemudian ditambahkan 1mL larutan sampel pada setiap variasi konsentrasi.

4. Pengukuran Standar dan Sampel

Lakukan pengukuran larutan standar dari metode standar kalibrasi dan standar addisi yang dimulai dari konsentrasi terendah secara berurutan. Catat absorbansi masing-masing larutan standar tersebut. Buatlah grafik standar antara konsentrasi versus absorbansi. Kemudian lakukan pengukuran larutan sampel yang telah dibuat. Apabila absorbansinya berada di luar kurva standar maka lakukanlah pengenceran terhadap larutan sampel. Hitunglah kandungan logam besi (Fe) dalam sampel menggunakan kurva standar.

PERCOBAAN IIIEKSTRAKSI DAN ANALISA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS BAHAN ALAM

TUJUAN

1. Mengekstraksi senyawa kimia dari bahan alam dengan menggunakan ekstraksi cair-cair.

2. Menganalisis ektrak daun nyamplung dengan metode kromatografi lapis tipis.

DASAR TEORI

Ekstraksi merupakan salah satu metode pemisahan kimia (partisi kimia) berdasarkan perbedaan distribusi komponen sampel di dalam dua pelarut dengan sifat kepolaran yang berbeda. Adapun metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut:

1. Cara dingin

a. Maserasi

Proses pengekstrakan dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang.

b. Perkolasi

Ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan pada temperatur ruang.

2. Cara panas

a. Refluks

Ekstraksi dengan pelarut pada temperature titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

b. Sokletasi

Ekstraksi yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.Kromatografi adalah suatu metode analitik untuk pemurnian dan pemisahan senyawa-senyawa organik dan anorganik. Metode ini berguna untuk fraksionasi campuran kompleks dan pemisahaan untuk senyawa yang sejenis. Dalam kromatografi, komponen-kompenen terdistribusi menjadi dua fasa, yaitu fasa diam dan fasa gerak. Transfer fasa gerak dan fasa diam terjaddi bila molekul-molekul campuran terserap pada permukaan partikel (terserap di dalam pori-pori partikel).

ALAT DAN BAHAN

ALAT

BAHAN

1. Corong pisah1 buah

1. Daun nyamplung10 lembar

2. Pipa kapiler

1 buah

2. Methanol

100 mL3. Chamber KLT1 buah

3. n-heksana

57 mL4. Hot plate

1 buah

4. Etil asetat

4 mL5. Lampu uv

1 buah

5. Kloroform

16 mL6. Gelas beaker 250 mL3 buah

6. Aseton

1 mL7. Gelas ukur 50 mL1 buah

7. Plat KLT

3 buahCARA KERJA

1. Daun nyamplung dimaserasi dengan metanol selama semalaman.

2. Maserat disaring dan ditambahkan n-heksana untuk kemudian diekstraksi dengan menggunakan corong pisah3. N-heksana dipisahkan dari campuran dan dievaporasi hingga diperoleh ekstrak kental.

4. Ekstak daun nyamplung dilakukan analisa dengan kromatografi lapis tipis dengan eluen yang berbeda. (n-heksana : etil asetat 4:6, kloroform : aseton 9:1, dan kloroform : n-heksana 7:3)

5. Hitung Rf dari masing-masing noda yang tampak.

PERCOBAAN IV

PEMISAHAN KOMPONEN SENYAWA DARI EKSTRAK KUNYIT (Curcuma longa L ) MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI KOLOM

A. TUJUAN

1. Memahami teknik penggunaan kromatografi kolom

2. Melakukan pemisahan komponen-komponen senyawa dari ekstrak kunyit menggunakan kromatografi kolom

3. Melakukan identifikasi kurkumin dari hasil pemisahan secara kromatografi kolom menggunakan KLT

B. DASAR TEORI

Kromatografi adalah suatu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik dan anorganik sehingga senyawa tersebut dapat dianalisis dan dipelajari. Kromatografi digunakan sebagian orang untuk mengetahui komponen apa saja yang terdapat dalam suatu sampel zat padat atau zat cair.

Metode kromatografi adalah cara pemisahan dua atau lebih senyawa atau ion berdasarkan pada perbedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion ion tersebut dalam dua fasa yang berbeda. Dua fasa ini bisa berwujud padat-cair, cair-cair, atau gas-cair. Zat terlarut didalam suatu fasa gerak mengalir pada suatu fasa diam. Fasa diam adalah fasa yang tidak bergerak, sedang kan fasa gerak adalah fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen komponen senyawa yang akan dipisahkan. Zat terlarut yang memiliki afinitas terhadap fasa gerak yang lebih besar akan tertahan lebih lama pada fasa gerak, sedangkan zat terlarut yang afinitas terhadap fasa gerak lebih kecil akan tertahan lebih lama pada fasa diam. Dengan demikian senyawa-senyawa dapat dipisahkan komponen demi komponen akibat perbedaan migrasi di dalam fasa gerak dan fasa diam. Jika terdapat komponen A yang terdistribusi dalam fasa gerak (mobile) dan fase diam (stationary) :

A mobile A stationary

Kd = f= fraksi mol A dalam fasa gerak = keakuratan hasil pemisahan dengan metode kromatografi bergantung pada beberapa faktor berikut :

1. Pemilihan absorben sebagai fasa diam

2. Kepolaran pelarut atau pemilihan pelarut yang sesuai sebagai fasa gerak

3. Ukuran kolom (panjang dan diameter)

4. Laju elusi atau kecepatan fasa gerak

Terdapat empat jenis kromatografi : kromatografi cair, kromatografi gas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kertas. Dalam kromatografi lapis tipis, fasa gerak adalah pelarut sedangkan fasa diamnya adalah plat tipis yang dilapisi absorben tertentu.

Kromatografi kolom merupakan jenis kromatografi serapan yang didasarkan pada distribusi zat diantara padatan penyerap (fasa diam) dan pelarut (fasa gerak). Kolom kromatografi dapat berupa tabung kaca yang dilengkapi dengan kran pada salah satu ujungnya. Ukuran kolom biasanya berdiameter 1-5 cm dan panjangnya 10-100 cm. Perbandingan ukuran antara diameter dengan panjang kolom ditentukan oleh kesukaran pemisahan. Pada prinsipnya dalam kromatografi kolom, apabila suatu cuplikan yang merupakan campuran dari beberapa komponen dimasukan melalui bagian atas kolom, maka komponen yang diserap lemah oleh adsorben akan keluar lebih cepat bersama eluen, sedangkan komponen yang diserap kuat akan keluar lebih lama.

C. ALAT

Kolom kromatografi

1 buah

Chamber

1 buah

Lampu UV

1 set

Gelas beker

2 buah

Gelas ukur

1 buah

Pipet volume

1 buah

Pipet tetes

1 buah

Corong gelas

1 buah

Dragball

1 buah

Pengaduk kaca

1 buah

Pipa kapiler

1 buah

Hot plate

1 buah

Hair dryer

1 buah

Flakon kaca

10 buah

D. BAHAN

Ekstrak kunyit

1 tetes

CH2Cl2

100 mL

CH3OH

1 mL

Plat KLT

1 lembar

Silika gel

15 gram

E. CARA KERJA

Pembuatan kolom dilakukan dengan cara 15 gram silika gel dilarutkan dengan eluen CH2Cl2 : CH3OH (99 :1) kemudian dimasukan secara perlahan kedalam kolom kromatografi, kondisi kolom harus selalu basah dengan pelarut, kemudian teteskan ekstrak kunyit secara perlahan pada bagian atas kolom ( jangan sampai merusak permukaan kolom yang sudah rata). Lakukan elusi hingga komponen terpisah menjadi beberapa fraksi, tampung fraksi kedalam flakon kaca sesuai dengan perbedaan warna komponen, gabungan fraksi yang mengandung komponen pertama ini diuapkan kemudian ditotolkan pada plat KLT, dimasukan kedalam chamber yang berisi eluen CH2Cl2 : CH3OH (99:1), plat KLT dikeringkan, noda pada plat KLT dilihat menggunakan lampu UV.

PERCOBAAN V

PENENTUAN KADAR LOGAM KROM (Cr) DALAM SAMPEL

MENGGUNAKAN HPLC

A. TUJUAN

1. Menjelaskan prinsip kerja HPLC.

2. Menganalisis kaandungan logaam krom dalam sampel menggunakan HPLC baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORI

High Performance Liquid Chromatography atau kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) merupakan salah satu contoh kromatografi cair. Pemisahan dalam HPLC normalnya lebih efisien dan tidak membutuhkan kolom yang panjang. Proses pemisahan komponen - komponen dalam suatu sampel dengan menggunakan HPLC dibutuhkan tekanan yang cukup tinggi sehingga proses pemisahannya lebih sempurna dan cepat.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel dengan standard yang akan dianalisis atau dengan metode spiking sampel dengan standard yang akan dianalisis. Sedangkan analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti :

1. Metode standard tunggal atau spiking standard tunggal

2. Metode kurva kalibrasi/kurva standard

3. Metode standard adisi

C. ALAT

1. Seperangkat alat HPLC dengan detector UV 254 nm kolom C18

2. Syringe 25 l

3. Pipet ukur 10 ml

4. Pipet tetes

5. Erlenmeyer

6. Gelas beker 50 ml

7. Labu ukur 25 ml

8. Corong gelas

D. BAHAN

1. Sampel krom

2. Larutan standard krom

3. Aquabides

4. Kertas saring

E. CARA KERJA

Panaskan alat HPLC selama beberapa jam sebelum digunakan untuk menstabilkan alat dan mencuci kolom dengan eluen yang akan digunakan selama pemanasan. Ambil 1 ml larutan Cr(NO3)2 10 ppm dan encerkan menjadi 25 ml sehingga diperoleh larutan A. Kemudian injeksikan larutan A ke dalam tempat sampel HPLC menggunakan eluen aquabides dengan syringe. Catat waktu retensi, intensitas, dan luas puncak utama dari kromatogram standard tersebut. Ambil 1 ml sampel krom kemudian diencerkan sebanyak 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan B. Injeksikan larutan B ke dalam tempat sampel HPLC dengan syringe menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Selanjutnya tambahkan 1 ml larutan A ke dalam 9 ml larutan B kemudian dilarutkan menjadi 25 ml dengan aquabides sehingga diperoleh larutan C. Injeksikan larutan C pada HPLC menggunakan eluen dan kondisi yang sama. Analisislah kromatogram yang diperoleh dan hitung kadar krom dalam sampel :

= atau :

= dimana :

I = intensitas

A = luas permukaan peak

C = konsentrasi

PERCOBAAN VI

PENENTUAN ETANOL DALAM MINUMAN MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI GAS (GC)

A. TUJUAN PERCOBAAN

1. Menjelaskan prinsip kerja kromatografi gas.

2. Menganalisis kandungan etanol dalam minuman dengan menggunakan kromatografi gas, baik secara kualitatif maupun kuantitatif.

B. DASAR TEORI

Prinsip dasar kromatografi gas sama seperti kromatografi lainnya. Perbedaannya hanya pada eluen, dimana pada GC menggunakan eluen gas.

Analisis kualitatif dapat dilakukan dengan mencocokkan waktu retensi dan similarity indeks (SI) kromatogram sampel terhadap kromatogram standar, atau dengan metode spiking sampel terhadap standar.

Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa metode, seperti:

1. Metode standar tunggal.

2. Metode kurva kalibrasi/kurva standar.

3. Metode standar adisi.

C. METODOLOGI PERCOBAAN

1. ALAT

Seperangkat alat GC (detektor UV 254 nm, kolom C18)

Syringe 50 L Pipet volume 1 mL Pipet volume 5 mL Labu ukur 5 mL Gelas beker 25 mL Pipet tetes Glassfin2. BAHAN

Larutan standar etanol 98%

Sampel minuman beralkohol

D. CARA KERJA

Panaskan alat GC selama beberapa jam sebelum digunakan, dan mencuci kolom dengan eluen selama pemanasan.

Siapkan larutan standar, sampel, dan campuran standar+sampel (perbandingan 3:2 dan 6:4) masing-masing 5 mL.

Injeksikan larutan standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC menggunakan syringe.

Catat waktu retensi, intensitas, dan luas permukaan peak utama dari kromatogram.

Injeksikan larutan sampel minuman sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

Injeksikan larutan campuran sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC dengan eluen dan kondisi yang sama.

Analisa kromatogram yang dihasilkan, hitung kadar etanol dalam sampel minuman dan dalam larutan campuran dengan metode standar tunggal.

Buat 5 larutan deret standar dengan konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, dan 25% sebanyak 5 mL.

Injeksikan masing-masing standar sebanyak 0,5 L ke dalam tempat sampel GC, dilanjutkan dengan larutan sampel.

Analisa data kromatogram. Hitung kadar etanol dalam sampel dengan metode kurva kalibrasi.

Metode standar tunggal

As : respon sinyal standar

Ax : respon sinyal sampel

Cs : konsentrasi standar

Cx : konsentrasi sampel

PERCOBAAN VIIANALISA GUGUS FUNGSI MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER INFRA MERAH (IR)

A. Tujuan

Memahami prinsip kerja dari FTIR

Memahami dan mampu menganalisa gugus fungsi yang ada dalam suatu sampel menggunakan FTIRB. Dasar Teori

Pada spektrofotometer Infra merah (IR) didasarkan pada interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan vibrasi suatu molekul sehingga terjadi eksitasi tingkat energi vibrasi molekul. Besarnya energi ini tergantung pada massa atom tereduksi dari atom-atom yang berikatan, kekuatan, panjang dan jenis ikatan. Tingkat energi ini spesifik terhadap gugus fungsi tertentu sehingga dapat dijadaikan instrumen dalam menganalisis gugus fungsi dalam suatu sampel.C. Alat

Spektrofotometer IR

Pencetak pellet

Neraca analitikD. Bahan

KBr

Anilin

Asam benzoatE. Cara Kerja

Haluskan serbuk KBr kemudain diambil 1 mg untuk dibuat pellet menggunakan alat pembuat pellet bertekanan tinggi. Selanjutnya, gerus sampel dan serbuk Kbr dengan perbandingan tertentu sampai homogen. Kemudian diambil 1 mg untuk di buat pellet. Pellet dianalisis menggunakan FTIR pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1. Analisa spektra IRPERCOBAAN VIII

ANALISIS STRUKTUR SENYAWA ALKOHOL MENGGUNAKAN SPEKTROMETER RESONANSI MAGNETIK INTI

A. Tujuan Percobaan

1. Mampu mengetahui manfaat spektrometer resonansi magnetik inti pada analisis kimia

2. Mengetahui bagaimana cara penggunaan spektrometer resonansi magnetik inti untuk analisis struktur suatu senyawa

B. Dasar Teori

Unsur yang mempunyai nomor atom dan nomor massa ganjil, inti atomnya mempunyai spin inti yang dapat diamati menggunakan spektrometer resonansi magnetik inti (NMR). Sebagai contoh sederhana adalah proton yang mempunyai nomor atom 1, perputaran (spin) pada proton tersebut dapat menimbulkan medan magnet yang disebut momen magnet. Perbedaan energi yang ditimbulkan oleh medan magnet yang kuat dapat dijelaskan dengan persamaan berikut :

dimanaE = perbedaan energi antara spin dan

(keadaan spin pada energi rendah dan spin pada energi tinggi)

= perbedaan giro energi (26753 / detik / Gauss untuk proton)

h = tetapan Planck

Ho = kekuatan medan magnet eksternal

sedangkan untuk energi foton dapat dijelaskan sebagai :

dimana = frekuensi gelombang elektromagnetik

maka

Medan magnet untuk frekuensi resonansi 60 Hz adalah sebesar 1402 Gauss. NMR menyajikan berbagai macam medan magnet yang diplot pada grafik dari absorbsi energi sebagai fungsi kekuatan medan magnet.

Jenis pertama spektometer NMR terdiri dari 4 bagian, yaitu :

1. Magnet yang stabil dengan pengontrol yang sensitif dan dapat menghasilkan medan magnet precise.

2. Frekuensi radio (transmitter RF)

3. Detektor yang mengukur energi RF absorbsi sampel

4. Pencatat (recorder)

Grafik absorbsi terjadi pada ordinat Y sebagai fungsi medan magnet pada axis X. Grafik medan magnet yang kuat akan berada di sebelah kanan (upfield), sedangkan grafik magnet yang lemah akan berada pada bagian kiri (downfield). Absorbansi pada proton yang lebih shielded pada upfield di sebelah kanan. Sebaliknya pada proton yang kurang shielded akan berada pada downfield berada pada posisi sebelah kiri.

C. Alat dan Bahan

1. Spektrometer Resonansi Magnetik Inti

2. Komputer pengendali

3. Tempat sampel (kuvet)

4. Pelarut TMS

5. Metanol

D. Cara Kerja

1. Menghidupkan alat NMR

a. Hidupkan magnetic console (diperlukan waktu sampai 7 hari agar medan magnet yang dihasilkan stabil)

b. Hidupkan FT NMR (diperlukan waktu 2 jam sebelum dilakukan pengukuran)

c. Hidupkan pompa untuk memutar (spinning sample)

d. Hidupkan komputer pengendali

e. Tentukan parameter-parameter untuk membuat medan magnet yang dihasilkan stabil

2. Melakukan pengukuran senyawa standar

Lakukan pengukuran untuk senyawa sekunder dan bandingkan spektra yang dihasilkan dengan spektra sekunder

3. Melakukan pengukuran

a. Masukkan sampel alkohol ke dalam tabung kuvet sampai kira-kira tingginya tabung

b. Tambahkan 3 tetes TMS

c. Masukkan tabung kuvet ke dalam tempat penyimpanan sampel dan biarkan selama 15 menit supaya suhu sampel sama dengan suhu pengukuran

d. Pasang tabung kuvet ke dalam tempat pengukuran, pastikan spinning pada posisi eject kemudian masukkan tabung dan putar dengan memutar knop pada posisi spin

e. Tentukan parameter pengukuran

f. Analisis spektra yang dihasilkan