MANUAL DEL OPERADOR

PARA DETECCIÒN Y ENUMERACIÒN DE LEVADURAS Y MOHOS

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Contenido

Información del Kit 4

Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

Contenido del Kit, Almacenamiento y Condiciones para Análisis . . . 4

Principio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Aplicabilidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Precauciones: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Preparación de la Muestra 6

Procedimiento de Prueba para Peel Plate YM 7

Interpretación de resultados 9

Control de Calidad 9

Descarte 10

Apoyo Técnico 10

Información de Ordenes 10

Garantía 11

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Información del Kit

IntroducciónLa prueba Peel Plate® YM (Yeast and Mold) detecta y enumera mohos y levaduras. El método es

aplicacable para la determinación de hongos en muestras al incubar a 25 ± 3 oC en la oscuridad.

Una muestra ó dilución de una muestra se agrega a la placa y luego se incuba por 3 a 5 días. Las

colonias de mohos y levaduras aparecen en color verde, azul ó cafe/azul o forma filamentosa. Los

mohos tambien pueden producir pigmentos naturales. Las pruebas Peel Plate YM están diseñadas

para laboratorios microbiológicos, pero tambien pueden ser utilizadas por los interesados en la

calidad de alimentos tales como agricultores, procesadores de leche y tratamiento de agua de

municipalidades. El límite de detección del método es de 1 ó más unidades formadoras de colonia

por mililitro ó gramo (UFC/mL ó g) de muestra. El rango cuantitativo preciso para levaduras y

mohos es de 10 a 150 UFC/prueba (conteos fuera de este rango se consideran estimaciones). Si

hay cantidades sustanciales de mohos presentes, dependiendo del tipo de moho, el límite superior

contable puede reducirse a discreción de analista.

Contenido del Kit, Almacenamiento y Condiciones de AnálisisCada kit (código PP-YM-100K) contiene 100 pruebas, dos bolsas de aluminio, cada una conteniendo 50 pruebas y un desecante azul.

Los kits no necesitan ser refrigerados durante su envío.

Almacene en refrigeración los kits en la bolsa de aluminio* hasta por 12 meses ó a

temperatura ambiente hasta por 1 mes.

Abra la bolsa y remueva el número de placas necesarias para análisis. Realice los análisis en

un área seca a temperatura ambiente. Serán mas fáciles de abrir, placas mantenidas a

temperatura ambiente por 1 hora ó más. Para almacenar las pruebas sin usar, reselle la

bolsa debidamente. Almacenamiento en húmedad o calor harán que las pruebas decoloren a

amarillo. No use pruebas decoloradas o de bolsas que tengan desecante rosado/blanco.

* Refrigeración se define como temperatura de 0 a 7 °C ó 0 a 4.5 °C para laboratorios certifcados

en Estados Unidos.

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PrincipioLa prueba Peel Plate YM esta basada en el medio papa dextrosa para cultivar e identificar

colorimétricamente el crecimiento de levaduras y mohos a 25 ± 3 oC en oscuridad. La prueba

Peel Plate YM contiene sustratos enzimáticos que se colorean azul cuando detectan las enzimas

fosfatasa y glucuronidasa producidas por el crecimiento de hongos. La prueba Peel Plate YM

también contiene agentes gelificantes y absorbentes que permiten absorber y difundir la muestra.

AplicabilidadEl método Peel Plate YM ha sido certificado por el AOAC Research Institute como Performance

Tested Method 061601. El rendimiento de este kit fue revisado por AOAC-RI y se encontró que

cumple con las especificaciones del fabricante. La prueba Peel Plate YM ha sido validada a 25 oC

± 3 oC por 3 a 5 días en leche al 2 %, queso cottage, crema agria, yogurt, mezcla para helado

de vainilla, mezcla de frutas, manzanas en rodajas, jugo de naranja, jugo de uva, harina de maíz,

tortillas de harina, aderezo de ensalada, hummus, tiras de pescado empanizadas y esponjas de

lavado de superficies de acero inoxidable. No se encontró diferencia significativa al método de

referencia de Agar de Dicloran Rosa Bengala Cloranfenicol (DRBC). Deben hacerse diluciones

en serie de las muestras para que los conteos estén en el rango contable de 1 a 150 UFC/mL.

Conteos menores de 10 por placa se consideran estimaciones.

Precauciones:• Siga Buenas Prácticas de Laboratorio al hacer análisis microbiológico. Evite

contaminación de las muestras.

• Realice las pruebas con manos limpias y con guantes, asumiendo la posibilidad de bacterias patogénicas.

• Haga los análisis en una superficie nivelada y limpia, libre de polvo o de corrientes de aire.

• Evite contacto con las muestras o con el medio en las placas Peel Plate YM.

• Después de agregar muestra, coloque la cubierta adhesiva, sin arrugas o dobleces para evitar que el medio rehidratado se seque durante el tiempo de incubación.

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Preparación de la Muestra

Productos Lácteos Líquidos

• Muestras de leche (cruda, pasteurizada entera, baja en % de grasa y descremada) pueden ser analizadas directamente o diluídas en serie a un rango (1 a 150 UFC/mL).

Para diluir en serie, agregue 25 mL en 225 mL de agua peptonada al 0.1 % ú otro búfer microbiológico de dilución. Pipetas automatizadas de dilución y otros esquemas de dilución son aceptables.

Productos Lácteos Sólidos

• Agregue 25 g de producto sólido (helado, crema agria, heavy cream, etc.) a 225 mL de agua peptonada al 0.1 % ú otro búfer microbiológico de dilución para alcanzar el rango (1 a 150 UFC/mL).

• Para leche en polvo y evaporada/condensada, reconstituya con agua al contenido normal de sólidos y deje que los sólidos no disueltos sedimenten. Analice la fracción líquida.

Panaderia • Agregue 25 g de harina ó producto horneado a 225 mL de agua peptonada al 0.1 % ú otro búfer microbiológico de dilución, homogenize por 2 minutos y deje reposar para extraer muestra.

• Continue diluyendo 10 mL de la dilución previa en 90 mL de blanco de dilución hasta alcanzar el rango (1 a 150 UFC/mL).

Jugos de Fruta • Agregue directamente 1 mL de jugo. Jugos crudos de fruta pueden requerir ajuste de pH, jugos claros ó filtrados y diluciones de cítricos no necesitan ajuste de pH.

• Continue diluyendo 10 mL de la dilución previa en 90 mL de agua peptonada al 0.1 % ú otro búfer microbiológico de dilución para alcanzar el rango (1 a 150 UFC/mL).

Hisopo Ambiental • Consulte el Adendo para Preparación de Muestra para Peel Plate.

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Procedimiento de Prueba Peel Plate YM Paso 1

• Identifique la placa en el lado claro usando un marcador o un tira de código de barras. No marque o identifique la placa dentro del área circular de 47 mm.

Paso 2

• Invierta y aplique presión con los dedos en la plataforma trasera (como en la foto) y levante la tapa adhesiva.

• Levante la cubierta adhesiva completamente hasta exponer el disco de cultivo. Deje la parte posterior adherida a la parte posterior de la placa.

Paso 3

• Manteniendo la cubierta levantada y la placa en una superficie plana, dispense verticalmente 1.0 mL de muestra o dilución de la muestra en el centro del disco. Deposite muestra en 2 a 3 segundos y a 1-2 cm arriba de la superficie.

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Paso 4

• La muestra se difundirá a los bordes del disco.

• Re-aplique la cubierta adhesiva evitando dobleces o arrugas. Presione alrededor en la orilla para asergurarse de sellado apropiado.

Paso 5

• Incube las placas con la parte clara hacia arriba, como se muestra.

• Incube a temperatura ambiente ó a temperatura controlada, 25 ± 3 °C por 3 a 5 días.

• Las placas pueden colocarse una sobre otra alineando las protuberancias y la plataforma rectangular. Usando esta configuración puede colocar hasta 20 placas una sobre otra sin afectar la transferencia de calor.

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Análisis de Resultados de Peel Plate YM

• Al final del período de incubación, observe las colonias a través del lado claro de la prueba Peel Plate YM. Cada punto azul ó azul/gris/verde/cafe representa una UFC. La suma de estos puntos se reporta como UFC/ml de Levaduras y Mohos Totales de la muestra diluída.

• Multiplique las UFC/mL por la dilución para calcular UFC/(mL ó g) de la muestra original.

• En caso de hongos propagándose por la caja, marque una UFC por cada punto definido. Colonias mezcladas o propagadas se anotan como una UFC.

• Conteos de 10 a 150 UFC/placa se consideran contables. Resultados fuera de este rango son considerados estimaciones.

Interpretación de resultados

• Las pruebas Peel Plate YM han sido evaluadas en los alimentos listados usando agua peptonada al 0.1% pero no han sido evaluadas en todos los posibles productos, procesos alimenticios, protocolos de análisis ó con todas las posibles cepas de microorganismos.

Control de CalidadEl control de calidad debe ser realizado de acuerdo a Buenas Practicas de Laboratorio y con la frecuencia determinada por procedimientos estándar de operación de laboratorio. Una práctica común es usar Control de Dilución, Control Negativo y Control Positivo.

• Control de Dilución: Analice 1.0 mL de bufer de dilución estéril para verificar la ausencia de levaduras y mohos luego del periodo de incubación.

• Control Negativo: Prepare Control Negativo autoclaveando la dilución apropriada de muestra a 121°C por 15 minutos. Enfrie a 4 °C y analice 1.0 mL. Verifique la ausencia de levaduras y mohos luego del periodo de incubación.

• Control Positivo: Contamine una muestra con una levadura o moho conocido o una combinación. Diluya la muestra a un rango de 1 a 150 UFC/mL y analice 1.0 mL para verificar su presencia luego del periodo de incubación.

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DescarteLos cultivos microbiológicos y reactivos deben ser colectados en bolsas de riesgo biológico y

esterilizados en el autoclave. Deseche de acuerdo a las regulaciones locales, estatales y federales.

Apoyo TécnicoSi tiene preguntas contacte su representate local o Charm Sciences al +1.978.687.9200 ó

support@charm.com.

Información de OrdenesDescripción Cantidad Código del Kit

Pruebas Peel Plate YM 100 PP-YM-100K

1000 PP-YM-1000K

Existen pruebas Peel Plate para E. coli y coliformes, conteo de coliformes, enterobacteriaceae,

bacterias aeróbicas y heterotróficas. Visite el sitio web de Charm Sciences en www.charm.com por

más detalles.

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GarantíaCharm Sciences, Inc (“Charm”) garantiza que todos los productos reactivos, incluyendo pero sin limitación a los kits para pruebas, están libres de defectos por materiales y mano de obra y no tienen desviaciones de las especificaciones y descripciones de los productos reactivos Charm que aparecen en la documentación de producto Charm, siempre y cuando se almacenen en las condiciones adecuadas y se les de el uso normal y adecuado para cual fue previsto, hasta la fecha de vencimiento del periodo de conservación del producto reactivo, o si no se especifica, durante un año posterior a la fecha de entrega de dicho producto reactivo al comprador de consumo final. ESTA GARANTÍA SUSTITUYE TODAS LAS DEMÁS GARANTÍAS, YA SEAN ESTATUTARIAS, EXPRESAS O IMPLÍCITAS (INCLUYENDO LAS GARANTÍAS DE TÍTULO, NO INFRACCIÓN, COMERCIABILIDAD E IDONEIDAD PARA UN PROPÓSITO EN PARTICULAR Y TODAS LAS DEMÁS GARANTÍAS QUE SURJAN DE CURSO POR MANEJO O USO DE COMERCIO). La garantía que se suministra no puede ser alterada excepto mediante expreso consentimiento por escrito y firmado por un funcionario de Charm. Las interpretaciones, orales o escritas que no son coherentes con esta garantía no se han autorizando, y si se proporcionan, no son válidas.En caso de violación de esta garantía, la única obligación de Charm será reemplazar el producto reactivo o la parte de este, que se compruebe defectuoso por materiales o mano de obra, dentro del periodo de garantía, siempre y cuando el cliente notifique a Charm rápidamente de dicho defecto antes del vencimiento del periodo de garantía establecido. La única compensación que se proporciona por la presente no debe interpretarse como omisión de su propósito esencial mientras que Charm esté dispuesta a reemplazar cualquier producto o parte reactiva. Charm no tendrá responsabilidad por daños consecuentes, incidentales ni daño indirecto alguno que resulte en pérdidas económicas o a la propiedad causado a unos clientes debidas al uso de los productos reactivos. Excepto por la obligación de Charm establecida anteriormente, de reemplazar el producto reactivo que se compruebe defectuoso dentro del periodo de garantía, Charm no tendrá responsabilidad por daños de ningún tipo que surjan de o sean causados por resultados incorrectos o equivocados de pruebas obtenidas al usar dichos productos reactivos, sean o no causados por defectos en el producto reactivo.

659 Andover Street, Lawrence, MA 01843-1032, USAT +1.978.687.9200 | F +1.978.687.9216 | E info@charm.com | www.charm.com

© 2017 Charm Sciences, Inc. Charm y Peel Plateson marcas registradas de Charm Sciences. Verwww.charm.com/patents por una lista de patentes otorgadas, publicadas y pendientes y aplicadiones PCT.

OM-696-001 (EV OM-658-004) Mayo-2017

OM-696-001

*OM-691