Técnicas de tinción más utilizadas en el campo de la

histología

Técnica de la Parafina

Preparación de tejidos obtenidos de una Preparación de tejidos obtenidos de una necropsia, biopsia o intervención necropsia, biopsia o intervención quirúrgicaquirúrgica

Nos permite conocer la morfología macro Nos permite conocer la morfología macro y microscópica del órgano a estudiary microscópica del órgano a estudiar

PasosPasos1.1. Obtención de la muestraObtención de la muestra2.2. FijaciónFijación3.3. DeshidrataciónDeshidratación4.4. AclaramientoAclaramiento5.5. Impregnación con parafina líquidaImpregnación con parafina líquida6.6. Inclusión en bloques de parafina sólidaInclusión en bloques de parafina sólida7.7. CorteCorte8.8. TinciónTinción9.9. MontajeMontaje10.10. Observación al microscopioObservación al microscopio

Técnica de Congelación Técnica de Congelación FracturaFractura Mediante esta técnica es posible estudiar al Mediante esta técnica es posible estudiar al

microscopio electrónico estructuras celulares microscopio electrónico estructuras celulares puestas al descubierto por medio de la fractura puestas al descubierto por medio de la fractura de una muestra congelada a muy bajas de una muestra congelada a muy bajas temperaturas.temperaturas.

Rápida (Urgencia)Rápida (Urgencia) Cortes “frescos”Cortes “frescos” Preserva glucógeno y lípidosPreserva glucógeno y lípidos

Obtención de la muestraObtención de la muestra

Congelación a base de nitrógeno líquidoCongelación a base de nitrógeno líquido

Corte en un gabinete refrigerado Corte en un gabinete refrigerado (criostato)(criostato)

Colorantes Un colorante es un cuerpo coloreado que puede Un colorante es un cuerpo coloreado que puede

comunicar su color a otro cuerpo.comunicar su color a otro cuerpo.

Según su origen:Según su origen:-Naturales-Naturales-Sintéticos o Artificiales-Sintéticos o Artificiales

Según sus propiedades químicas:Según sus propiedades químicas:-Ácidos-Ácidos-Básicos-Básicos-Neutros-Neutros-Indiferentes-Indiferentes

Ventajas de los colorantes

Facilita la identificación de células, bacterias o en general objetos microscópicos.

Los colorantes tiñen de forma parcial, total o gradual las diferentes estructuras que integran los objetos y principalmente los productos que deseas observar.

Desventajas de los colorantes

Después de su empleo difícilmente puedes utilizar sobre las preparaciones teñidas otro colorante, en consecuencia, después de emplear las tinciones haz modificado las propiedades fisicoquímicas del contenido de tu preparación ya que el empleo de colorantes esta basado en características físicas y químicas

Tipos de coloraciones

Directas: se producen por inmersión en el baño colorante.

Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto que hade colorearse debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

Hematoxilina-eosina El método supone la aplicación de la tinción de

hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos azul y púrpura,como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

La hematoxilina, como tal, aunque esté disuelta en agua o en alcohol de 96° o de 100°, es incapaz de colorear, para poder hacerlo, debe sufrir una oxidación.

La hematoxilina oxidada es hemateína y bajo este cambio físico -químico y la unión con una base es capaz de colorear

Azul de metileno

El azul de metileno se usa para observar agrupamientos y morfología de bacterias y levaduras las cuales difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.

Azul de tripano

Permiten diferenciar células vivas de células muertas. Las células vivas o tejidos con la membrana celular intacta no son coloreados debido a que las células son muy selectivas a los compuestos que dejan pasar a través de la membrana.

En las células viables, el azul de tripano no es absorbido; sin embargo, atraviesa la membrana de las células muertas. Por lo tanto, las células muertas se muestran de un distintivo color azul bajo el microscopio. 

Técnica de Sudán IV

Se emplea en la coloración de las vainas mielínicas de las fibras nerviosas compuestas por lipoproteínas.

El Sudán IV, llamado Escarlata R, se basa en que el colorante es más soluble en lípidos que en el propio disolvente en el que va contenido.

Ácido peryódico - Schiff

Es y ha sido utilizada durante mucho tiempo por numerosos investigadores como método de identificación de macromoléculas con hidratos de carbono,porque permite la tinción de componentes celulares que contienen hidratos de carbono de un color púrpura.

Un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos.

Entonces en esta técnica, el ácido peryódico oxida a los grupos oxidrilos (OH) de dos carbonos cercanos, formando de esta manera grupos aldehídos compuestos por carbono, oxigeno y hidrogeno. así la leucofuccina puede reaccionar con estos y dejar una tinción rojiza.

Artificios

Artefacto es todo aquello que puede dificultar, confundir o hacer que se malinterprete un corte de tejido histológico visto al microscopio. 

Hay dos tipos de artefactos: Pre y post-histología.

Los artefactos pre-histológicos son las características y las estructuras que son introducidos antes de la colección de los tejidos finos. Un ejemplo común de éstos incluye: tinta de los tatuajes y de las pecas (melanina) en muestras de la piel.

Los artefactos post-histológicos resultan del procesamiento del tejido fino. El procesando puede conducir comúnmente a los cambios como la contracción, a cambios del color en diversos tipos de los tejidos finos y a las alteraciones de las estructuras en el tejido fino. 

Un plegamiento, destrucción de estructuras microscópicas, efectos luminosos de difracción y refracción, burbujas de aire o aceite, sobreexposición a colorantes, fijadores, etc., o la poca exposición a ellos, efectos de temperatura, contracción o expansión son algunos de los artefactos más comunes.