Proceso tinción de gram

Embed Size (px)

Text of Proceso tinción de gram

  • 1. Desarrolladapor el bacterilogo ChristianGram en 1884Permite la rpida evaluacin de morfologa ycomplejidad bacterianaTincin rpida y EconmicaPuede variar segn el protocolo usado(necesidad de estandarizar el protocolo)

2. Portaobjetos Agua destilada Pipetas Pasteur, haza, Mechero. Cristal Violeta Lugol Alcohol acetona Safranina (u otra tincin de contraste) 3. Colocar una pequea gota de Agua destiladaen el portaobjetos (con pipeta por ejemplo) Re-suspender muestra en el portaobjetos.Secar al mechero.La gota de agua debe Se debe calentar por 5ser pequeamin aprox, hasta que toda el agua se seque. 4. Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo todala muestra por 1min (variable segn lab.) Se lava con agua corrientePuede hacerse congotario o pizeta 5. Luego debe agregarse el lugol. Este debeaplicarse como el cristal violeta y tambindebe cubrir la muestra por 1 min. Luego selava con agua corriente. 6. El cubrir la muestra con alcohol acetona paradecolorarla es el paso ms critico delprocedimiento. Este debe cubrir la muestrapor el tiempo que puede ir de 15s a 30ssegn corresponda y la reaccin debe serdetenida con el lavado con agua corriente. Eltiempo debe ser el mismo para todas lasmuestras. Al ser tiempos por lo general muy cortos, se recomienda agregar el alcohol mientras ya se tiene la llave del agua corriendo, listo para el lavado. 7. El ltimo paso consiste en agregar unatincin de contraste, para teir las bacteriasque pierden el cristal violeta. Para esto seagrega safranina cubriendo la muestra por15s o por 1min, dependiendo. Luego se lavacon agua corriente y se deja secar. 8. Bacterias Gram positivas: Corresponden a las bacterias que mantienen lacoloracin del cristal violeta despus del alcoholacetona, lo que les da un color violeta/morado.StreptococcuspneumoniaeBacteria Gram positiva,desde cultivobacteriano en agarsangre. 9. Bacterias Gram negativas: Corresponden a las bacterias que pierden lacoloracin del cristal violeta despus del alcoholacetona y se tien con el colorante de contraste(safranina), lo que les da un color rosceo/rojizo. Escherichia coliBacteria Gram Negativa, cultivo desde agar Macconkey 10. Es conveniente estandarizar los tiempos de tincinpara cada laboratorio, ya que la calidad yconcentraciones de reactivos pueden variar bastante. Lo ms recomendable es realizar el gram de loscultivos de agares enriquecidos y de colonias aisladasy en crecimiento. Los gram directos de una muestra solo son tiles enciertos casos. Las bacterias anaerobias son ms difciles de teir,esto puede mejorar si se agrega bicarbonatomezclado a las tinciones. La muestra no debe ser excesiva para poderdeterminar las otras caractersticas de la bacteria,como forma y agrupacin. 11. Se presentan las imgenes sin modificaciones usadas en la presentacinReencuadre Brillo -27 Contraste -50 Reencuadre 12. Brillo +38Contraste +22Brillo +29Contraste +26 13. Brillo +80Saturacin -31Luminosidad +6