LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGIUJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA

KELOMPOK : D1ANGGOTAWahyu Kurnia Putri 132210101008Fikriatul Hidayah132210101010Ayunda Nur Hidayatiningsih132210101014Elok Faiqo Hasani132210101018Wilda Yuniar132210101024Meylani Nur Riskiana132210101026Nur Khijjatul Meiliyah132210101028

BAGIAN BIOLOGI FARMASI FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS JEMBER2014

BAB IPENDAHULUAN

1.1. Latar BelakangMikroorganisme merupakan salah satu sumber penyakit yang dapat menjangkiti manusia. Ketika seorang manusia telah terinfeksi oleh mikroorganisme dan menjadi sakit, maka diperlukan pengobatan agar manusia tersebut kembali menjadi sehat. Salah satunya adalah dengan terapi antimikroba. Antimikroba dapa menghambat perumbuhan mikroorganisme yang menginfeksi manusia. Sehingga dalam penggunaan dalam jangka waktu tertentu dan dosis tertentu, mikroorganisme tersebut dapat dihambat pertumbuhannya dan berangsur-angsur mati.Namun tidak semua antimikroba efektif untuk menghambat pertumbuhan semua mikroorganisme. Antimikroba memiliki daya hambat yang berbeda-beda terhadap mikroorganisme. Oleh karena itu, diperlukan uji aktivitas antimikroba untuk mengetahui bagaimana kefektifan aktivitas antimikroba dalam menghambar pertumbuhan mikroorganisme agar pengobatan terhadap pasien memiliki efek terapi yang bagus. 1.2. Rumusan MasalahRumusan permasalahan dalam praktikum uji aktivitas antimikroba ini adalah sebagai berikut:1. Apa sajakah metode yang digunakan untuk mengukur daya antimikroba?2. Bagaimana keunggulan dan kerugian dari metode tersebut?3. Termasuk metode apa uji aktivitas antibakteri yang dilakukan dalam praktikum uji aktivitas antimikroba?4. Bagaimana mekanisme kerja antibiotik yang dilakukan dalam pengujian?5. Bagaimanakah prinsip terbentuknya zona hambat?6. Bagaimana konsentrasi dan jenis bakteri uji mempengaruhi zona hambat yang terbentuk?7. Bagaimana evaluasi akhir uji potensi aktivitas bakteri?1.3 TujuanTujuan dari praktikum uji aktivitas antimikroba ini adalah:1. Mampu melakukan uji aktivitas antimikroba2. Mampu melakukan uji potensi antimikroba1.4 Manfaat1. Mengetahui metode yang digunakan untuk mengukur daya antimikroba 2. Mengetahui keunggulan dan kerugian dari metode tersebut3. Mengetahui termasuk metode apa uji aktivitas antibakteri yang dilakukan dalam praktikum uji aktivitas antimikroba 4. Mengetahui mekanisme kerja antibiotik yang dilakukan dalam pengujian5. Dapat mendeskripsikan prinsip terbentuknya zona hambat6. Mengetahui pengaruh konsentrasi dan jenis bakteri uji terhaadap zona hambat yang terbentuk7. Dapat menjelaskan evaluasi akhir uji potensi aktivitas bakteri?

BAB IITINJAUAN PUSTAKA

Antibakteri adalah senyawa yang digunakan untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri yang bersifat merugikan. Pengendalian pertumbuhan mikroorganisme bertujuan untuk mencegah penyebaran penyakit dan infeksi, membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi, dan mencegah pembusukan serta perusakan bahan oleh mikroorganisme (Sulistyo, 1971). Mekanisme penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibakteri dapat berupa perusakan dinding sel dengan cara menghambat pembentukannya atau mengubahnya setelah selesai terbentuk, perubahan permeabilitas membran sitoplasma sehingga menyebabkan keluarnya bahan makanan dari dalam sel, perubahan molekul protein dan asam nukleat, penghambatan kerja enzim, dan penghambatan sintesis asam nukleat dan protein. Di bidang farmasi, bahan antibakteri dikenal dengan nama antibiotik, yaitu suatu substansi kimia yang dihasilkan oleh mikroba dan dapat menghambat pertumbuhan mikroba lain. Senyawa antibakteri dapat bekerja secara bakteriostatik, bakteriosidal, dan bakteriolitik (Pelczar dan Chan, 1988).Menurut Madigan dkk. (2000), berdasarkan sifat toksisitas selektifnya, senyawa antimikrobia mempunyai 3 macam efek terhadap pertumbuhan mikrobia yaitu:1. Bakteriostatik memberikan efek dengan cara menghambat pertumbuhan tetapi tidak membunuh. Senyawa bakterostatik seringkali menghambat sintesis protein atau mengikat ribosom. Hal ini ditunjukkan dengan penambahan antimikrobia pada kultur mikrobia yang berada pada fase logaritmik. Setelah penambahan zat antimikrobia pada fase logaritmik didapatkan jumlah sel total maupun jumlah sel hidup adalah tetap.2. Bakteriosidal memberikan efek dengan cara membunuh sel tetapi tidak terjadi lisis sel atau pecah sel. Hal ini ditunjukkan dengan penambahan antimikrobia pada kultur mikrobia yang berada pada fase logaritmik. Setelah penambahan zat antimikrobia pada fase logaritmik didapatkan jumlah sel total tetap sedangkan jumlah sel hidup menurun.3. Bakteriolitik menyebabkan sel menjadi lisis atau pecah sel sehingga jumlah sel berkurang atau terjadi kekeruhan setelah penambahan antimikrobia. Hal ini ditunjukkan dengan penambahan antimikrobia pada kultur mikrobia yang berada pada fase logaritmik. Setelah penambahan zat antimikrobia pada fase logaritmik, jumlah sel total maupun jumlah sel hidup menurun.

Mekanisme penghambatan antibakteri dapat dikelompokkan menjadi lima, yaitu menghambat sintesis dinding sel mikrobia, merusak keutuhan dinding sel mikrobia, menghambat sintesis protein sel mikrobia, menghambat sintesis asam nukleat, dan merusak asam nukleat sel mikrobia (Sulistyo, 1971).Daya antimikrobia diukur secara in vitro agar dapat ditentukan kemampuan suatu zat antimikrobia (Jawetz , 2001). Adanya fenomena ketahanan tumbuhan secara alami terhadap mikrobia menyebabkan pengembangan sejumlah senyawa yang berasal dari tanaman yang mempunyai kandungan antibakteri dan antifungi (Griffin, 1981). Uji aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan metode difusi dan metode pengenceran. Disc diffusion test atau uji difusi disk dilakukan dengan mengukur diameter zona bening (clear zone) yang merupakan petunjuk adanya respon penghambatan pertumbuhan bakteri oleh suatu senyawa antibakteri dalam ekstrak. Syarat jumlah bakteri untuk uji kepekaan atau sensitivitas yaitu 105-108 CFU/mL (Hermawan dkk., 2007).Metode difusi merupakan salah satu metode yang sering digunakan. Metode difusi dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu metode silinder, metode lubang atau sumuran dan metode cakram kertas. Metode lubang atau sumuran yaitu membuat lubang pada agar padat yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang disesuaikan dengan tujuan penelitian, kemudian lubang diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji. Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayati dan Agustini, 2007). Uji aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan metode difusi dan metode pengenceran. Disc diffusion test atau uji difusi disk dilakukan dengan mengukur diameter zona bening (clear zone) yang merupakan petunjuk adanya respon penghambatan pertumbuhan bakteri oleh suatu senyawa antibakteri dalam ekstrak. Syarat jumlah bakteri untuk uji kepekaan atau sensitivitas yaitu 105-108 CFU/mL (Hermawan dkk., 2007).Resistensi bakteri terhadap antibiotik merupakan salah satu masalah seluruh dunia di negara maju maupun negara berkembang (Okeke dkk, 2005), pada rumah sakit dan juga komunitas (Lestari dkk, 2009). Pengobatan infeksi S. aureus menjadi lebih sangat kompleks sehubungan dengan kemunculan berbagai jenis antibiotic resistensi di seluruh dunia. Strain Methicillin resisten S. aureus (MRSA) menjadi pusat perhatian sejak resisten terhadap semua antibiotik -lactam dan juga dalam kasus - kasus antibiotik grup lain, terutama di rumah sakit. Pada tahun 2001, Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) menyatakan strategi global pertama untuk menangani fenomena ini, salah satu rekomendasinya yaitu dengan memantau kecenderungan penggunaan obat antimikroba dalam standar mikrobiologi (Anonim, 2010c).Carter dkk. (2000) menyebutkan bahwa telah ditemukan strain Staphylococcus yang telah resisten terhadap antibiotik jenis amino-glikosida seperti kanamisin, gentamisin, dan streptomisin. Strain ini menghambat aktivitas amino-glikosida dengan mekanisme adannya interaksi gugus amina beserta hidroksil dengan subunit ribosom 30S pada Dna ribosomal. Gen penyandi yang berperan dalam resistensi Staphylococcus terhadap amino-glikosida adalah acetyltransferases (ACT), nucleotidyltransferases (ANT) dan phosphotransferases (APH) (Shaw dkk., 1993). Resistensi bakteri dapat terjadi melalui mekanisme intrinsik (kegagalan antibiotika masuk ke dalam sel), perubahan permeabilitas membran sel, perubahan pada ribosom maupun pembentukan enzim yang menginaktifkan antibiotika (Sjahrurachman, 1996).

Penyiapan Mikroba UjiMikroba yang digunakan dalam penelitian ini meliputi bakterigram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri yang digunakan adalah Escherichia coli selaku bakteri gram negatif, dan Staphylococcus epidermidis selaku bakteri gram positif. Bakteri diambil dari biakan agar miring yang ditumbuhkan pada nutrient broth (NB) dan diinkubasi 24 jam. Biakan dalam media cair tersebut diencerkan dengan air saline (NaCl 0,9%) sampai kekeruhannya menyamai standar Mc. Farland (108 CFU).Kloramfenikol dipilih sebagai kontrol positif terhadap bakteri karena berspektrum luas sehingga efektif untuk bakteri gram positif dan gram negatif. Bersifat mudah larut dalam lemak sehingga menembus sel bakteri (Siswandono,1995).Adanya aktifitas antibakteri ditandai dengan terbentuknya zona hambatan yang bersifat radikal atau iradikal. Zona radikal tampak berupa daerah yang jernih tanpa terlihat pertumbuhan mikroba uji, sedangkan zona iradikal masih ada pertumbuhan mikroba tetapi dihambat atau pertumbuhan itu lebih kecil dibanding pertumbuhan yang tidak dihambat, oleh karena itu zona iradikal berupa zona yang keruh tetapi masih lebih jernih dibandingkan pertumbuhan disekitarnya.Carter dkk. (2000) menyebutkan bahwa telah ditemukan strain Staphylococcus yang telah resisten terhadap antibiotik jenis amino-glikosida seperti kanamisin, gentamisin, dan streptomisin. Strain ini menghambat aktivitas amino - glikosida dengan mekanisme adannya interaksi gugus amina beserta hidroksil dengan subunit ribosom 30S pada Dna ribosomal. Gen penyandi yang berperan dalam resistensi Staphylococcus terhadap amino-glikosida adalah acetyltransferases (ACT), nucleotidyltransferases (ANT) dan phosphotransferases (APH) (Shaw dkk., 1993). Resistensi bakteri dapat terjadi melalui mekanisme intrinsik (kegagalan antibiotika masuk ke dalam sel), perubahan permeabilitas membran sel, perubahan pada ribosom maupun pembentukan enzim yang menginaktifkan antibiotika (Sjahrurachman, 1996).

BAB IIIMETODOLOGI PRAKTIKUMPada praktikum mikrobiologi dengan kegiatan Uji Aktivitas Antimikroba alat dan bahan yang dibutuhkan adalah sebagai berikut:a. Alat: Jangka sorong Cork borer Seperangkat alat KLT Ringb. Bahan: Media Mueller Hinton Sampel Cakram antibiotik Biakan bakteri

Prosedur kerja yang dilakukan dalam praktikum Uji Aktivitas Antimikroba sebagai berikut:1. Persiapan biakan bakteri uji

Cairkan media MH steril yang berada dalam tabung reaksi. Tuang ke dalam cawan petri secara aseptis. Tunggu hingga media membeku.

Beri bakteri uji pada permukaan media agar menggunakan metode swap.

2. Metode sumuran

Buat sumuran pada media agar dengan menggunakan cork borer steril.

Masukkan sampel uji dan larutan baku standart antibiotik ke dalam sumuran.

Inkubasi 37o selama 24 jam.3. Metode paper filter disk

Tempelkan paper filter disk steril ke atas media agar yang sudah diberi bakteri uji.

Teteskan 10 mikro liter sampel dan larutan baku standar antibiotik ke atas paper filter disk .

Inkubasi 370 C selama 24 jam.

4. Metode TLC bioautography

Siapkan sampel yang sudah dieluasi dengan sistem KLT tertentu. Keringkan lempeng KLT hingga benar benar bebas dari fase gerak.

Tempelkan lempeng KLT secara terbalik pada media agar yang sudah diberi bakteri uji (sampel kontak langsung dengan media)

Inkubasi 370 C selama 24 jam.

5. Analisis data

Data berupa diameter hambat pada setiap sampel dan larutan baku standar diukur dengan jangka sorong.

Lakukan analisis data berdasarkan uji aktivitas antibakteri dan uji potensi antibiotik.Prosedur Kerja Kelompok D11. Persiapan alat dan bahan

2. Pembuatan suspensi bakteri E. Coli Staphylococcus epidermidis dengan cara memanaskan ose, kemudian setelah ose dingin, digoreskan pada tabung reaksi dan cawan petri yang berisi biakkan bakteri. Kemudian ose dicelupkan pada tabung reaksi berisi NaCl

3. tabung reaksi berisi suspensi dan media berisi biakan bakteri acuan di vortex dan disamakan kekeruhannya

4. cotton swap disiapkan dan dicelupkan ke dalam suspensi bakteri dan dioleskan pada media MH yang telah disiapkan secara merata. Diamkan sekitar 10 menit.

\

5. Cakram kloramfenikol dan gentamisin dimasukkan ke dalam media MH yang telah dibagi menjadi 3 area dengan menggunakan spidol. Pengambilan cakram menggunakan pinset yang sudah dipanaskan supaya steril

6. Media yang telah diberi cakram dibungkus dengan plastic wrap dan dimasukkan ke dalam inkubator selama 24 jam dnegan suhu 37oC

Metode dan Hasil yang digunakan dalam praktikum Kelompok D1Metode: Metode CakramAntimikroba: Kloramfenikol dan GentamisinKontrol Negatif: Blank discNoKeteranganGambar

1.

Bakteri E.ColiDiameter: a. Blank disc : 0 cmb. Gentamisin: 1 cmc. Kloramfenikol: 2,2 cm

2.Bakteri Staphylococcus epidermidisDiameter:a. Blank disc: 0 cmb. Gentamisin: 3,5 cmc. Kloramfenikol: 2,5 cm

Kesimpulan :Antibiotik yang efektif untuk membunuh bakteri E.Coli adalah kloramfenikol. Sedangkan antibiotik yang efektif untuk membunuh bakteri Staphylococcus epidermidis.

Kelompok D2Metode: Metode SumuranAntimikroba: Minyak cengkeh dan minyak seraiKontrol Negatif: Aquadest sterilNoKeteranganGambar

1.

Bakteri E.ColiDiameter: a. Minyak cengkeh: 3 cmb. Minyak sereh: 1,5 cmc. Aquadest steril: 0 cm

2.Bakteri Staphylococcus aureusDiameter:a. Minyak cengkeh: 4,6 cmb. Minyak sereh: 3,4 cmc. Aquadest steril: 0 cm

Kesimpulan :Antimikroba yang efektif menghambat pertumbuhan bakteri E.Coli adalah minyak cengkeh. Begitu pula dengan bakteri Staphylococcus aureus dihambat pertumbuhannya dengan minyak cengkeh.

Kelompok D3Metode: Metode TLC dengan penotolan 4LAntimikroba: Minyak cengkeh dan minyak seraiNoKeteranganGambar

1.

Bakteri E.ColiDiameter: a. Minyak cengkeh: 2,6 cmb. Minyak sereh: 1,4 cm

2.Bakteri Staphylococcus aureusDiameter:a. Minyak cengkeh: 1,3 cmb. Minyak sereh: 1,2 cm

Kesimpulan :Antimikroba yang efektif untuk menghambat bakteri E.Coli adalah minyak cengkeh, sedangkan yang efektif untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus adalah minyak cengkeh juga.

Kelompok D4Metode: Metode TLC dengan penotolan 10 LAntimikroba: Minyak cengkeh dan minyak serai

NoKeteranganGambar

1.

Bakteri E.ColiDiameter: a. Minyak cengkeh : 1,7 cmb. Minyak sereh : 0,8 cm

2.Bakteri Staphylococcus aureusDiameter:a. Minyak cengkeh: 3,2 cmb. Minyak sereh: 1,2 cm

Kesimpulan :Antimikroba yang efektif untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan E.Coli adalah minyak cengkeh.

BAB IVPEMBAHASAN

4.1 Metode Yang Digunakan Untuk Mengukur Daya AntimikrobaPotensi antimikroba merupakan kekuatan suatu antibiotika dalam menghambat atau membunuh pertumbuhan mikrba. Satuannya dinyatakan dalam IU/mg (iu=international unit) atau g/mg. prinsip dari uji aktivitas antimikroba adalah dengan membandingkan respon mikroba yang diuji terhadap zat antimikroba. Uji aktivitas antimikroba dapat dilakukan melalui 2 cara, yaitu metode dilusi/turbidimetri dan metode difusi agar. Caranya sama dengan penentuan potensi antibiotika, tetapi hanya 1 dosis, umumnya 50%.Perbedaannya :1. Uji aktivitas bersifat kualitatif, menentukan ada atau tidaknya aktivitas antimikroba dalam suatu zat uji.2. Uji potensi bersifat kuantitatif, menentukan prosentase suatu antibiotik terhadap antibiotik pembanding sari jenis yang sama.Penentuan aktivitas antimikroba suatu ekstrak tanaman dapat dilakukan bila terpenuhi tiga syarat, yaitu:1. Ekstrak tanaman harus dapat kontak dengan dinding sel mikroorganisme2. Kondisi pengujian dibuat agar mikroorganisme dapat tumbuh saat tidak ada antimikroba3. Ada parameter ukur tingkat pertumbuhan mikroorganisme (Hoestmann, 1991)Dalam menentukan uji antimikroba, ada beberapa metode yang dapat dilakukan, yaitu sebagai berikut:1. Metode Penyebaran/Difusi (Diffusion Methods)Prinsip metode difusi adalah mengukur melalui luas daerah hambatan pertumbuhan bakteri karena adanya difusi antibakteri dari titik awal pemberian. Dalam metode difusi, dibagi lagi menjadi 3 metode metode Kirby Baurer, sumuran, dan pour plate. Berikut penjelasan dari ketiga metode :a. Metode Kirby BauerMetode ini untuk menentukan aktivitas agen antibakteri. Piringan yang berisi agen antibakteri diletakkan pada media agar yang telah ditanami bakteri yang akan berdifusi pada media agar tersebut. Aktivitas antimikroba dilihat dengan mengukur daerah di sekitar cakram, lubang, atau cangkir agar yang tidak ditumbuhi mikroba. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan bakteri oleh agen antibakteri pada permukaan media agar.Cara kerja pengujian antimikroba dengan metode Kirby-Bauer : Tanam mikroba dalam media agar padat yang sesuai. Cotton bud dicelupkan dalam biakan bakteri kemudian kapas dioleskan pada permukanaan agar Bakteri diinkubasi pada suhu 37oC Suspensi bakteri dibuat dengan menumbuhkan bakteri pada media cairn atrium klorida fisiologis dan diinkubasi pada suhu 37oC Oleskan pada seluruh permukan cawan MH, didiamkan selama 5 menit. Kertas cakram dicelupkan dalam larutan obat herbal dengan konsentrasi tertentu, kertas cakram diangkat dan ditiriskan, selanjutnya diletakkan di atas media MH. Kertas cakram ditekan menggunakan pinset supaya menempel sempurna di permukaan agar Inkubasi dilakukan selama 24-48 jam pada suhu pada suhu 37oCFaktor yang mempengaruhi metode difusi agar (Kirby-Bauer): Komposisi/ingredient medium pertumbuhanKomposisi yang umum dari medium pertumbuhan adalah pepton, tripton, ekstrak ragi, agar, mineral (Ca, Mg, Fe, NaCl, KH) Pemilihan medium pertumbuhan Pengaruh pH, perbedaan pH media yang digunakan dapat menyebabkan perbedaan jumlah zat uji yang berdifusi, juga dapat menentukan jumlah molekul zat uji yang mengion, serta dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri Ukuran inokulum. Inokulum merupakan campuran dari suspense dan media. Inokulum yang memiliki kandungan mikroorganisme besar akan semakin kecil luas daerah hambatannya. Inokulum ideal apabila kandungan mikroorganismenya 1-10% Stabilitas mikroba Akativitas antibiotika Waktu inkubasiMetode ini tidak dapat digunakan untuk mengukur derajat antimikroba suatu zat, metode ini hanya digunakan untuk menentukan tingkat kepekaan, yaitu peka (sensitive,susceptible), cukup peka (moderately sensitive, intermediate), danresisten (resistant.) Nilai kadar hambat minimum (KHM) berbandingterbalik secara proporsional (linear) dengan diameter zona hambat. b. Metode sumuranMetode sumuran hamper sama dengan metode disc diffusion, dimanapada media MH dibuat sumur dengan cork boarer. Pada lubang sumuran akan ditanami antimikroba dan mikroorganisme.

c. Metode Ditch dan Gradient / Plate techniquePada metode ditch ini, sampel uji berupa mikroba yang diletakkan pada parit yang dibuat dengan cara memotong media agar pada bagian tengah secara membujur dan mikroba uji maksimal 6 macam digoreskan kea rahparit yang berisi agen antimikrobaSedangkan pada metode gradient, konsentrasi agen antimikroba pada media agar bervariasi antara 0 hingga maksimal. Media agardicairkan dan larutan uji ditambahkan. Campuran kemudian dituang dalam cawan petri dan di letakkan dalam posisi miring. Nutrisi kedua selanjutnya ditung di atasnya. 2. Metode E-testMetode E-Test digunakan untuk mengestimasi MIC (Minimum Inhibitory Concentration) atau KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) yaitu konsentrasi minimal suatu agen antibakteri untuk dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme.Pada metode ini digunakan strip plastik yang mengandung agen antibakteri dari kadar terendah hingga tertinggi dan diletakkan pada permukaan media agar yang telah ditanami bakteri. Pengamatan dilakukan pada area jernih yang ditimbulkannya yang menunjukkan kadar agen antibakteri yang menghambat pertumbuhan bakteri pada media agar.

3. Metode Pengenceran / dilution methodsMetode pengenceran dapat digunakan untuk menguji beberapa zat antimikroba secara simultan, namun membutuhkan biaya mahal dan memakan waktu yang cukup lama. Kegunaan metode dilusi adalah untuk menentukan kadar hambat maksimum (KMH), KMH sendiri adalah kadar obat terenda untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitu dilusi cair (broth dilution) dan dilusi padat (solid dilution).a. Metode dilusi cair Metode ini mengukur MIC (Minimum Inhibitory Concentration) atau KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) dan MBC (Minimum Bactericidal Concentration) atau KBM (Kadar Bunuh Minimum). Cara yang dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran agen antibakteri pada medium cair yang ditambahkan dengan bakteri uji. Larutan uji agen antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan bakteri uji ataupun agen antibakteri dan diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah inkubasi ditetapkan sebagai KBMb. Metode dilusi padatMetode ini sama dengan metode difusi cair namun bedanya pada metode dilusi padat menggunakan media padat (solid). Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi agen antibakteri yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa bakteri uji.4. Metode BioautographyMetode ini digunakan untuk mengetahui senyawa baru atau senyawa yang belum diketahui aktivitas antimikrobanya. Metoden ini menggunakan prinsip difusi senyawa yang terpisah dengan KLT (Kromatografi Lapis Tipis) atau Kromatografi Kertas. Caranya yaitu dengan menempatkan Lempeng kromatografi pada permukaan agar yang telah diinokulasi dengan bakteri. Setelah sekitar 30 menit, lempeng dipindahkan dan diinkubasi. Senyawa antimikroba akan berdifusi ke dalamlapisan agar dan menghambat pertumbuhan mikroba. Pada bioautografi langsung, zona hambatan diamati secara langsung pada lempeng kromatografi yang sebelumnya telah disemprot dengan suspense mikroba. Sedangkan pada bioautografi pencelupan, dilakukan dengan mencelupkan lempeng kromatografi ke dalam media.5. Metode lainnyaa. Metode daya bunuh serum (serum killing power method)Pada metode ini, digunakan sampel darah pasien yang sedang menerima terapi antibiotik. Kemudian suspense mikroba ditambahkan pada serum pasien. Pertumbuhan dalam serum setelah diinkubasi menunjukkan antibiotic ang diberikan tidak efektif.b. Metode otomatis (automated method)Metode otomatis menggunakan instrument yang dapat mengidentifikasi mikroorganisme dan menentukan kepekaan terhadap antibiotik.c. Metode Gores Silang (Cross Scratching Method) Metode ini merupakan metode bakuuntuk menguji aktivitas penghambatan suatu bahan uji terhadap jamur T. mentagrophytes. Cara kerja metode gores silang: Celupkan kertas saring ke dalam larutan yang diuji lalu diletakkandi atas lempeng agar yang telah digores dengan inokulum jamur. Media agar kemudian diinkubasi selama 3-7 hari pada 24-25 0 Pertumbuhan jamur diamati

4.2 Keunggulan dan Kelemahan Metode Uji Aktivitas Antimikroba1. Metode SumuranPada metode ini, sumuran dibuat pada agar dengan garis tengah sesuai dengan kebutuhan. Kemudian antibiotik atau zat yang diuji dimasukkan ke dalamnya. Pada praktikum, ke dalam sumuran dimasukkan minyak cengkeh dan minyak serehZona hambat yang dihasilkan pada metode sumurana. Minyak CengkehDaun cengkeh mengandung minyak atsiri yang komponen utamanya yaitu eugenol. Selain eugenol, juga mengandung berbagai bahan lainnya yang jumlahnya relatif sedikit, misalnya eugenol asetat, methil amil keton, kariofilen, furfurol, dan vanillin. Bahan-bahan tersebut hampir semuanya tergolong dalam golongan fenol yang pada dasarnya mempunyai sifat antibakteri (Kumala dan Indriani, 2008).Hasil penelitian menunjukkan bahwa minyak cengkeh dengan konsentrasi 1:1, 1:2 dan 1:3 mampu menghambat bakteri Gram Positif (B.cereusdanS.aureus) dan Gram Negatif (E.colidanShigella sp), daya hambat minyak cengkeh terhadap bakteri semakin besar dengan semakin tingginya konsentrasi (Taufiket al.)b. Minyak SerehKomponen kimia dalam minyak sereh wangi cukup kompleks, namun komponen yang terpenting adalah sitronellal dan geraniol. Senyawa-senyawa tersebut memiliki aktivitas antibakteri, ditulis Suprianto (2008).Pengujian sensitivitas bahan alam seperti minyak dari tumbuhan ini digunakan hanya untuk menguji potensinya saja. Induet al. (2006) menyatakan bahwa padafilter paper method,jika diameter zona hambat kurang dari 12 mm maka senyawa tersebut tidak memiliki aktivitas antibakteri (resisten) ; jika diameternya 12-16 mm, maka termasuk intermediet dan jika diameter zona hambatnya lebih dari 16 mm, maka senyawa tersebut termasuk sensitive.2. Metode Difusi CakramCara yang mudah untuk menetapkan kerentanan organisme terhadap antibiotik adalah dengan menginokulasi pelat agar dengan biakan dan membiarkan antibiotik terdifusi ke media agar. Cakram yang telah mengandung antibiotik diletakkan di permukaan pelat agar yang mengandung organisme yang diuji. Pada jarak tertentu pada masing-masing cakram, antibiotik terdifusi sampai titik antibiotik tersebut tidak lagi menghambat pertumbuhan mikroba. Efektivitas antibiotik ditunjukkan oleh zona hambatan. Zona hambatan terlihat sebagai area jernih atau bersih mengelilingi cakram tempat zat dengan aktivitas antimikroba terdifusi. Diameter zona dapat diukur dengan penggaris dan hasil dari eksperimen ini merupakan satu antibiogram. Ukuran zona hambatan dapat dipengaruhi oleh kepadatan media biakan, kecepatan difusi antibiotik, konsentrasi antibiotik pada cakram filter, sensitivitas organisme terhadap antibiotik, dan interaksi antibiotik terhadap media.suatu zat yang mempunyai efek samping signifikan tidak boleh digunakan (Harmita dkk, 2008).Kelebihannya adalah mudah dilakukan, tidak memerlukan peralatan khusus dan relatif murah. Sedangkan kelemahannya adalah ukuran zona bening yang terbentuk tergantung oleh kondisi inkubasi, inokulum, predifusi dan preinkubasi serta ketebalan medium. Apabila keempat faktor tersebut tidak sesuai maka hasil dari metode cakram kertas relatif sulit untuk. Selain itu, metode cakram kertas ini tidak dapat diaplikasikan pada mikroorganisme yang pertumbuhannya lambat dan mikroorganisme yang bersifat anaerob obligat(Jawetzet al., 2005).Keuntungan :a. Pelaksanaannya lebih mudah dan dalam satu media dapat digunakan lebih dari satu organisme uji.b. Pengujian secara lebih banyak dalam satu kali kegiatan dan memerlukan tenaga yang tidak terlalu banyak.Kerugian :a. Tidak diketahui secara pasti aksi penghambatan yaitu bakterisidal ataukah bakteriostatik karena banyak faktor yang mempengaruhi antara lain, ketebalan media, macam media, inokulum dan laju difusi bahan antimikroba.b. Hanya dapat diketahui daya bakteiostatiknya saja sedang daya bakterisidal tidak dapat ditemukan.

3. Metode BioautografiBioautografi merupakan suatu metode yang spesifik untuk mendeteksi bercak pada kromatogram hasil kromatografi lapis tipis atau kromatografi kertas yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri, antifungi, dan anti viral. Bioautografi juga merupakan suatu metode yang cepat untuk mendeteksi antibiotik yang belum diketahui yang mana metode kimia atau fisika yang terbatas untuk substansi yang murni. Sementara deteksi kimia reaksi warna hanya spesifik digunakan sebagai pembanding hasil bioautografi sehingga kedua meode tersebut saling melengkapi (Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi,Stahl, Egon, I TB Bandung, 1985)Keuntungan :a. Dapat mendeteksi bercak pada kromatogram hasil KLT yang mempunyai aktivitas sebaga antibakteri, antifungi, antibiotik, dan antiviral.b. Dapat digunakan untuk mendeteksi antibiotik yang belum diketahui mekanismenya.c. Merupakan metode yang sederhana dan mudah dilakukan.d. Cepat dalam pengerjaannya.Kerugian :a. Tidak bisa digunakan untuk senyawa yang tidak mempunyai aktivitas membunuh ataupun menghambat mikroorganisme.b. Hasil tidak valid karena kemungkinan adanya kontaminan dari luar atau karena zat yang diidentifikasikan tidak mengandung khasiat bakteri antibakteri.c. Mempunyai faktor kesalahan yang besar

4.3 Termasuk ke dalam apa Metode Pengujian yang Dilakukan dalam PraktikumTingkat aktifitas suatu senyawa antimikroba dapat dilakukan dengan beberapa metoda diantaranya metoda difusi agar. Metoda difusi agar adalah suatu prosedur yang bergantung pada difusi senyawa antimikrobial ke dalam agar. Senyawa antimikrobial tersebut diserapkan pada kertas cakram yang berdiameter 6 mm. Kertas cakram ditempatkan pada permukaan media yang telah diinokulasikan dengan bakteri patogen atau jamur yang akan diuji. Setelah diinkubasi selama 24 jam pada temperatur 37oC, diamati diameter daerah hambatan di sekitar kertas cakram. Daerah hambatan yang terbentuk sebagai daerah bening disekitar kertas cakram menunjukkan mikroorganisme yang diuji telah dihambat oleh senyawa yang berdifusi ke dalam kertas cakram (Amsterdam, 1992).1. Metode difusi agarMetoda yang paling sering digunakan adalah metoda difusi agar yang digunakan untuk menentukan aktivitas antimikroba. Kerjanya dengan mengamati daerah yang bening, yang mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh antimikroba pada permukaan media agar (Jawetz et al., 2005)Metode difusi ini dibagi atas beberapa cara (Pratiwi, 2008):a. Cara silinder platCara ini dengan memakai alat pecadang berupa silinder kawat. Pada permukaan media pembenihan dibiakkan mikroba secara merata lalu diletakkan pencadang silinder harus benar-benar melekat pada media, kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Setelah inkubasi, pencadang silinder diangkat dan diukur daerah hambat pertumbuhan mikroba.b. Cara cakramCakram kertas yang berisi antibiotik diletakkan pada media agar yang telah ditanami mikroorganisme yang akan berdifusi pada media agar tersebut.c. Cara cup platCara ini juga sama dengan cara cakram, dimana dibuat sumur pada media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur tersebut diberi antibiotik yang akan di uji.2. Metode dilusiMetode ini mengukur MIC (minimum inhibitory concentration atau kadar hambat minimum, KHM) dan MBC (minimum bactercidal concentration atau kadar bunuh minimum, KBM). Caranya dengan membuat pengenceran antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji antibiotik pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun antibiotik, dan diikubasi selam 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan sebagai KBM (Pratiwi, 2008).3. Metoda BioautografiMerupakan metode spesifik untuk mendeteksi bercak pada kromatogram hasil KLT (kromatografi lapis tipis) yang mempunyai aktivitas antibakteri, antifungi, dan antivirus. Keuntungan metode ini adalah sifatnya yang efisien untuk mendeteksi senyawa antimikroba karena letak bercak dapat ditentukan walaupun berada dalam campuran yang kompleks sehingga memungkinkan untuk mengisolasi senyawa aktif tersebut. Kerugiannya adalah metoda ini tidak dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM (Pratiwi, 2008).4.4 Mekanisme Kerja Antibiotik yang Digunakan dalam Pengujian1. Mekanisme kerja antibiotik kloramfenikol terhadap aktifitas antimikrobaKloramfenikol adalah antibiotik yang mempunyai aktifitas bakteriostatik, dan pada dosis tinggi bersifat bakterisid. Aktivitas antibakterinya dengan menghambat sintesa protein dengan jalan mengikat ribosom subunit 50S, yang merupakan langkah penting dalam pembentukan ikatan peptida. Kloramfenikol efektif terhadap bakteri aerob gram-positif, termasuk Streptococcus pneumoniae, dan beberapa bakteri aerob gram-negatif, termasuk Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Salmonella, Proteus mirabilis, Pseudomonas mallei, Ps. cepacia, Vibrio cholerae, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Brucella dan Shigella.Kloramfenikol bekerja dengan jalan menghambat sintesis protein kuman. Yang dihambat adalah enzim peptidil transferase yang berperan sebagai katalisator untuk membentuk ikatan-ikatan peptida pada proses sintesis protein kuman.Dengan memproduksi protein yang sangat penting untuk metabolisme, mengganggu kemampuan sel untuk membuat protein bencana. bakteri yang sangat rentan yang tewas langsung sementara yang lain hanya diberikan tidak dapat membagi dan sistem kekebalan inang kemudian menghancurkan mereka setelah diketahui. Kloramfenikol memiliki spektrum luas terutama aktivitas terhadap bakteri aerobik banyak, Mycoplasma, organisme klamidia, dan bakteri anaerob.Kloramfenikol dapat diberikan secara oral atau topikal, biasanya tiga kali sehari. Puncak aktivitas terjadi sekitar 30 menit setelah dosis oral kecuali dalam sistem saraf dimana beberapa jam diperlukan untuk penetrasi darah / penghalang otak.Kloramfenikol adalah bakteriostatik (yaitu, berhenti pertumbuhan bakteri). Ini adalah sintesis protein inhibitor , menghambat transferase peptidil aktivitas bakteri ribosom , mengikat dan residu A2451 A2452 di 23S rRNA dari subunit ribosom 50S, mencegah pembentukan ikatan peptida.Sementara kloramfenikol dan macrolide kelas antibiotik baik berinteraksi dengan ribosom, kloramfenikol tidak macrolide sebuah. Kloramfenikol langsung mengganggu pengikatan substrat, macrolides hambatan sterik blok perkembangan dari peptida tumbuhAda tiga mekanisme ketahanan terhadap kloramfenikol: permeabilitas membran dikurangi, mutasi subunit ribosom 50S dan elaborasi asetiltransferase kloramfenikol. Sangat mudah untuk memilih untuk permeabilitas membran dikurangi menjadi kloramfenikol in vitro dengan bagian serial bakteri, dan ini adalah mekanisme yang paling umum tingkat kloramfenikol perlawanan-rendah. Tingkat tinggi resistance diberikan oleh gen-kucing; ini gen kode untuk sebuah enzim yang disebut asetiltransferase kloramfenikol yang inactivates kloramfenikol oleh kovalen menghubungkan satu atau dua asetil kelompok, yang berasal dari-S-koenzim A asetil, ke hidroksil kelompok pada molekul kloramfenikol . asetilasi ini mencegah kloramfenikol dari mengikat ribosom. Perlawanan-berunding mutasi ribosom subunit 50S jarang.

2. Mekanisme kerja antibiotik gentamisisn terhadap aktifitas antimikroba Gentamisin merupakan antibiotik turunan aminoglikosida yang sangat berarti terutama karena peranannya terhadap mukosa gram-negatif. Senyawa ini digunakan pada pasien yang resisten terhadap antibiotik lain. Mekanisme kerja gentamicin adalah dengan mengikat secara ireversibel sub unit 30S dari kuman, yaitu dengan menghambat sintesis protein dan menyebabkan kesalahan translokasi kode genetik. Gentamicin bersifat bakterisidal. Gentamicin efektif terhadap berbagai strain kumanGramnegatiftermasukspesiesEscherichia,Enterobacter,Klebsiella,ProteusdanPseudomonas. Terhadap mikroorganisme Gram-positif, gentamicin efektif terhadapStaphylococcus aureusdanStaphylococcus epidermis.Gentamisin tidak diserap pada pemberian oral, tetapi secara cepat diserap setelah suntikan intramuskuler dengan kadar puncak yang tercapai dalam waktu 0,5-1 jam. Waktu paruh plasmanya adalah 1-4 jam pada orang dewasa, 2,3-3,3 jam pada neonatus, 1,5-2,5 jam pada bayi diatas 20 bulan, dan 1 jam pada anak-anak yang lebih tua. Pada gangguan fungsi ginjal yang lanjut, peningkatan ini dapat mencapai 35 jam. Sejumlah kecil gentamicin diekskresi ke dalam empedu dan tidak ada bukti adanya sirkulasi enterohepatik pada antibiotik ini. Gentamicin menetap dalam jaringan untuk waktu yang lama. Gentamicin mengalami reabsorbsi pada lumen tubulus proksimal dan kadarnya dalam jaringan kortikal ginjal kadang-kadang mencapai 100 kali lebih tinggi ketimbang kadarnya dalam serum. Anribiotika ini didistribus i secara luas keseluruh tubuh, terutama ke dalam cairan ekstraseluler dengan volume distribusi 0,2 L/kg. Ikatan proteinya rendah yaitu berkisar antara 0-25 %. Ikatan protein serum gentamicin maupun aminoglikosida lain meningkat dengan meurunnya kadar magnesium dan kalisum.Gentamicin yang masuk ke dalam cairan otak, kadarnya hanya kecil sekali pada pasien dimana selaput otaknya tidak mengalami peradangan, tetapi jika terjadi peradangan kadarnya dapat sedikit lebih tinggi, meskipun demikian tidak cukup mencapai kadar terapi. Difusinya kejaringan mata buruk Gentamisin disekresi ke dalam sekret bronkus dengan kadar 25-50 % kadarnya dalam serum. Gentamicin menembus plasenta dan mencapai kadar puncak dalam serum maternal. 10 % gentamicin terikat dalam sel darah merah dan juga masuk ke dalam leukosit polimorfonuklear dimana kadarnya dapat mencapai 80 % dari kadar obat dalam cairan ekstraseluler. Kadar tertinggi ditemui dalam jaringan ginjal.4.5 Prinsip Terbentuknya Zona HambatPada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas bakteri adalah metode Difusi Agar yaitu dengan cara mengamati daya hambat pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari daerah di sekitar kertas cakram (paper disk) yang tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme. Zona hambatan pertumbuhan inilah yang menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap bahan anti bakteri (Jawelz, 1995).Tujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk mengetahui obat-obat yang paling cocok (paling poten) untuk kuman penyebab penyakit terutama pada kasus-kasus penyakit yang kronis dan untuk mengetahui adanya resistensi terhadap berbagai macam antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap antibiotik yakni memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang diberikan, akibat pemberian dosis dibawah dosis pengobatan dan akibat penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh antibiotic.Metode difusi cakram prinsip kerjanya adalah bahan uji dijenuhkan ke dalam kertas cakram (cakram kertas). Cakram kertas yang mengandung bahan tertentu ditanam pada media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan mikroba yang diuji, kemudian diinkubasikan 370C selama 24 jam. Area (zona) jernih disekitar cakram kertas diamati untuk menunjukkan ada tidaknya pertumbuhan mikroba. Selama inkubasi, bahan uji berdifusi dari kertas cakram ke dalam agar-agar itu dan sebuah zona inhibisi akan terbentuk. Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter zona hambat yang terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat pertumbuhannya, Diameter zona sebanding dengan jumlah bahan uji yang ditambahkan ke kertas cakram. Saat inkubasi cawan petri diletakkan dalam keadaan terbalik dengan tujuan untuk menghindari menetesnya air yang mungkin melekat pada dinding dalam pada tutup petri yang dapat mengakibatkan kontaminasi.Setelah diinkubasi selama 24 jam kemudian diamati apakah terbentuk daerah zona hambat atau tidak. Daerah zona hambat yang terbentuk diukur diameternya dengan menggunakan penggaris. Semakin besar diameternya maka semakin poten antibiotik yang terkandung dalam ekstrak tersebut.Kebanyakan antibiotik yang efektif kerjanya menggangu sintesis, penyusuhan atau fungsi komponen-komponen makromolekul sel. Seperti penghambtan pembentukan dinding sel oleh pelimiskin, penghambatan sintesis protein oleh kloramfenikol (Irianto, 2006).

4.6 Pengaruh Konsentrasi dan Jenis Bakteri Uji Terhadap Zona Hambat yang terbentukPada masing-masing kertas cakram terlihat kenaikan diameter zona hambat mulai dari kertas cakram blank discs yang mengandung konsentrasi antibiotik 0% kertas cakram yang mengandung kloramfenikol 30 dan gentamisin 10. Kertas cakram blank discs tidak mengandung zat aktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri karena hanya mengandung larutan Nacl Fisiologis sebagai kontrol negatif sehingga tidak mampu membentuk zona hambat. Kertas cakram Gentamisin 10 mampu membentuk diameter zona hambat sebesar (3,5 cm) kertas cakram kloramfenikol 30 mampu membentuk diameter zona hambat sebesar (2,2 cm) Kertas cakram (gentamisin apa kloramfenikol) membentuk zona hambat yang paling besar karena mengandung zat aktif yang lebih banyak daripada Kertas cakram blankdiscs tidak mampu menimbulkan daerah bening atau zona hambat karena tidak memliki zat aktif yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri E.coli. Kertas cakram blank discs digunakan sebagai kontrol negatif (0%) untuk memastikan bahwa alat yang digunakan dalam pembuatan kertas cakram maupun NaCl fisilogis yang digunakan sebagai pengencer konsentrasi tidak mengandung zat antimikroba karena dapat mengacaukan hasil perhitungan diameter. Semakin besar konsentrasi antibiotik yang digunakan maka semakin besar zona bening (hambatan) yang dihasilkan (Dwidjoseputro, 2003). Chloramphenicol adalah antibiotik yang memiliki spektrum luas karena bisa bersifat bakteriostatik terhadap bakteri gram positif dan gram negatif. Chloramphenicol merupakan antibiotik dengan struktur sederhana sehingga mudah dibuat secara sintetik daripada mengisolasinya dari Streptomyces. Ukurannya relatif kecil sehingga mudah berdifusi ke dalam tubuh. Efek negatif chloramphenicol adalah dapat menekan pembentukan sel darah merah. Mekanisme kerja dari antibiotik ini adalah dengan cara bereaksi pada subunit 50S ribosom dan menghalangi aktivitas enzim peptidil transferase. Enzim ini berfungsi untuk membentuk ikatan peptida antara asam amino baru yang masih melekat pada tRNA dengan asam amino terakhir yang sedang berkembang. Sebagai akibatnya, sintesis protein bakteri akan terhenti seketika (Pratiwi, 2008). Pengaruh konsentrasi antibiotika terhadap pertumbuhan bakteri adalah semakin besar konsentrasi dari antibiotika maka kemampuan antibiotika untuk menghambat atau bahkan membunuh bakteri akan semakin besar yang terlihat dari semakin besarnya diameter zona hambatan (zona bening).Perbedaan ukuran diameter zona hambatan setiap macam zat antimikroba pada perlakuan terhadap pertumbuhan bakteri yang berbeda spesies disebabkan karena aktivitas antimikroba diantaranya dipengaruhi oleh faktor potensi dari obat antimikroba dan faktor yang menyangkut sifat dan bakteri itu sendiri khususnya susunan kimia dinding sel bakteri tersebut. Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri gram positif, sedangkan E.coli merupakan bakteri gram negative sehingga lebih resisten terhadap antimikroba. Dinding sel bakteri gram positif tersusun atas lapisan peptidoglikan relatif tebal, dikelilingi lapisan teichoic acid dan pada beberapa spesies mempunyai lapisan polisakarida. Dinding sel bakteri gram negatif mempunyai lapisan peptidoglikan relatif tipis, dikelilingi lapisan lipoprotein, lipopolisakarida, fosfolipid dan beberapa protein.4.7 Evaluasi Akhir Uji Potensi AntibiotikPada praktikum kali ini bakteri yang di uji adalah e coli dan staphylococcus epidermidis. Adapun antibiotik yang digunakan adalah kloramfenikol dan gentamisin. Antibiotik yang efektif terhadap bakteri e coli adalah kloramfenikol. Kloramfenikol bekerja dengan jalan menghambat sintesis protein kuman. Yang dihambat adalah enzim peptidil transferase yang berperan sebagai katalisator untuk membentuk ikatan-ikatan peptida pada proses sintesis protein kuman. Gentamisin juga memberikan efek terhadap bakteri e coli yang ditandai dengan adanya zona bening disekitar cakram namun diameternya tidak sebesar kloramfenikol. Hal ini juga disebabkan krean adanya perbedaan konsentrasi antibiotik yang digunakan.konsentrasi gentamisin yaitu 10mikro liter sedangkan kloramfenikol 30 mikroliter. Antibiotik yang efektif terhadap bakteri staphylococcus epidermidis yaitu gentamisin. Gentamisin merupakan antibiotik turunan aminoglikosida yang sangat berarti terutama karena peranannya terhadap mukosa gram-negatif. Mekanisme kerja gentamicin adalah dengan mengikat secara ireversibel sub unit 30S dari kuman, yaitu dengan menghambat sintesis protein dan menyebabkan kesalahan translokasi kode genetik. Gentamicin bersifat bakterisidal. Gentamisin memberikan hasil diameter yang lebih besar dibanding kloramfenikol meskipun konsentrasinya lebih kecil. Hal ini menunjukan gentamisin efektif atau poten terhadap bakteri staphylococcus epidermidis. Gentamisin bisa memberikan efek terhadap bakteri gram positif maupun gram negatif. Pada bakteri staphylococcus epidermidis kloramfenikol juga memberikan efek namun tidak sebesar gentamisin. Hal ini dibuktikan dengan adanya zona bening pada sekitar cakram meskipun tidak sebesar gentamisin. Pada bakteri staphylococcus terbukti bahwa lebih efektif gentamisin dibandingkan dengan kloramfenikol. Diameter zona hambat yang terbentuk pada bakteri staphylococcus lebih besar dibanding pada bakteri e coli karena bakteri e coli merupakan bakteri gram negatif sehingga lebih resisten terhadap antimikroba.

BAB VKESIMPULAN

5.1 Metode yang digunakan untuk uji aktivitas ada tiga :1. Metode difusion yang terdiri dari a. Metode Kirby Baurerb. Metode Sumuran c. Metode Ditch dan Gradient / Plate technique2. Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitua. Dilusi cair (broth dilution)b. Dilusi padat (solid dilution)3. Metode Bioautography5.2 Keunggulan dan kelemahan pada tiap metode yaitu Keuntungan metode cakram:Pelaksanaannya lebih mudah dan dalam satu media dapat digunakan lebih dari satu organisme uji.Kekurangan metode cakram Tidak diketahui secara pasti aksi penghambatan yaitu bakterisidal ataukah bakteriostatik karena banyak faktor yang mempengaruhi antara lain, ketebalan media, macam media, inokulum dan laju difusi bahan antimikroba.Keuntungan metode bioautografiDapat mendeteksi bercak pada kromatogram hasil KLT yang mempunyai aktivitas sebaga antibakteri, antifungi, antibiotik, dan antiviral.Kerugian:Hasil tidak valid karena kemungkinan adanya kontaminan dari luar atau karena zat yang diidentifikasikan tidak mengandung khasiat bakteri antibakteri.5.3 Pada praktikum ini metode yang digunakan termasuk kedalam metode difusi karena menggunakan metode cakram5.4 Mekanisme kerja antibiotik Mekanisme kerja antibiotik yang digunakan dalam pengujian yaitu Kloramfenikol bekerja dengan jalan menghambat sintesis protein kuman. Mekanisme kerja gentamicin, yaitu dengan menghambat sintesis protein dan menyebabkan kesalahan translokasi kode genetik.

5.5 Prinsip terbentunya zona hambatPrinsip terbentuknya zona hambat yaitu antibiotik menghambat atau membunuh bakteri yang terletak dalam media agar yang ditandai dengan adanya zona bening disekitar cakram antibiotik.

5.6 Gentamicin lebih efektif dibandingkan kloramfenikol terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis. Sedangkan kloramfenikol lebih efektif terhadap bakteri E.coli

DAFTAR PUSTAKA

Cara Pembuatan Simplisia. 198. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta Pratiwi, S. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Erlangga. Jakarta: 189-195Gunawan, S. G. 2007. Farmakologi dan Terapi. Jakarta : Gaya BaruJawetz, E., Melnick, J.L., dan Adelberg, E.A. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta : Salemba MedikaPratiwi, S. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta : ErlanggaRudi,L. 2010. Penuntun Dasar-Dasar Pemisahan Analitik. Universitas Haluoleo. Kendari)Ultee A, Gorris LGM, Smid EJ. 1998. Bacterial activity of carvacrol towardthefood-borne pathogen Bacillus cereus. J. Appl. Microbiol: 213218Corner, DE. 1995. Naturally occuring compounds inAntimicrobial in Food.Eds., by Davidson PM & Branen AL, Eds.Marcell Dekker, Inc., New York,pp. 441-468.