เชอพษสนขบา (Rabies) เปนเชอไวรส สนขเปนพาหะส าคญทท าใหเกดโรคพษสนขบา หากรกษาไมทนจะท าใหเกด การตาย
อมมโนโกลบลนปองกนโรคพษสนขบาส าหรบคน (Rabies Immunoglobulin, RIG) ในประเทศไทยมอย 2 ชนดคอ
1. ชนดทผลตจากซรมมา ( Equine Rabies Immunoglobulin, ERIG)
2. ชนดทผลตจากซรมคน (Human Rabies Immunoglobulin, HRIG)
Current Rabies Products
- TRCS ERIG
- TRCS SPEEDA (Chromatographically Purified
Vero Cell Rabies Vaccine (CPRV))
Future Rabies Products - Lyophilized TRCS ERIG
-Founded in 1922
- Mission of QSMI : to produce vaccines , snake
antivenoms and to conduct research on snakes,
snake venoms and rabies
-Snake farm established in 1923
-Horse farm started in 1956 with approx 450 horses now
-Manufacturing snake antivenoms since 1923
-BCG vaccine production started since 1953.
History of QSMI
CURRENT ACTIVITIES
OF
QUEEN SAOVABHA MEMORIAL INSTITUTE (QSMI)
- SERVICE
- RESEARCH AND DEVEVOPMENT
- PRODUCTION
Service Activities
1. Treatment of animal bites ,vaccination against rabies
and rabies immunization decrease to about 5,000 cases
(year 2015 is 5,803)
2. Animal toxin clinic about 100 cases (84 cases in 2015)
3. Travelers immunization clinic increase from 10,000 to
21,090 in 2015
4. Snake farm for public : visitors increase from 40,000 to
54,729 in 2015
5. Joint collaborative projects in clinical and laboratory
diagnosis of human and animals suspect of being
rabid, route of rabies vaccine administration (with
ministry of public health, livestock department, WHO
and US communicable disease center).
Numbers of out patients in Clinical Service and Research Department from 2012-2015
Years 2012 2013 2014 2015 Vaccination against Rabies 6,395 5,098 4,882 5,803 Immunization Clinic 10,882 12,501 13,615 21,090 Toxin Clinic 112 94 162 84
Total 19,944 20,249 21,216 29,535
คน
ปงบประมาณ
NO. OF PATIENTS
YEAR
Research and Development Activities
- Research for improvement of product and diagnosis
- Biomedical and clinical research in areas of rabies,
snakes ,snake venoms and horses
- Collaboration and joint research projects between QSMI
and other educational and research institute
- Future plan : New tuberculosis vaccine
- WHO collaborating centers for :
Research on rabies pathogenesis and prevention
Poisonous snake toxicology and research
Production /Filling/ Laboratory Activities
Total Capacity:
BCG VACCINE : 5,000,000 doses (500,000 vials) /year
TRCS SPEEDA (rabies vaccines) : 1,000,000 vials/year
EQUINE RABIES IMMUNOGLOBULINS : 300,000 vials/year (1,000 IU/5ml)
ANTIVENOMS FOR POISONOUS SNAKEBITE : 200,000 vials/year King Cobra Antivenin (Ophiophagus hannah)
Cobra Antivenin (Naja kaouthia)
Banded Krait Antivenin (Bungarus fasciatus)
Malayan Pit Viper Antivenin (Calloselasma rhodostoma)
Russell’s Viper Antivenin (Daboia russelli siamensis)
Green Pit Viper Antivenin (Trimeresurus albolabris)
Malayan Krait Antivenin (Bungarus candidus)
Neuro polyvalent Antivenin ; (Naja kaouthia , Ophiophagus hannah , Bungarus
fasciatus, Bungarus candidus)
Haemato polyvalent Antivenin ; (Calloselasma rhodostoma , Trimeresurus
albolabris, Daboia russelli siamensis)
GMP CERTIFICATE and ISO/IEC 17025 LABORATORY ACCREDITED
สมเดจพระมงกฎเกลาเจาอยหว รชการท 6 ทรงบรจาค เงนสวนพระองคสราง สถานเสาวภา สภากาชาดไทย ในป พ.ศ. 2465 โดยพระประสงคให เปนอนสรณส าหรบพระมารดา สมเดจพระนางเจาเสาวภาผองศร ส าหรบใชเปนสถานทส าหรบผลตและวจยวคซนและเซรมชนดตางๆ เชน วคซนปองกนโรค พษสนขบา วคซนบซจ เซรมปองกนโรคพษสนขบาและเซรม แกพษงชนดตางๆ
สถานเสาวภา สภากาชาดไทย
สถานเสาวภา สภากาชาดไทยไดมการผลตเซรมปองกนโรค พษสนขบาในจ านวนทพอเพยงกบความตองการของประเทศ ตงแตป พ.ศ.2544 และมการสงออกจ าหนายใหกบประเทศเพอนบานบาง ปจจบนสถานเสาวภา สภากาชาดไทยไดน า bulk rabies vaccines (SPEEDA) จากผผลตในประเทศจน (บรษท Liaoning Cheng Da Biotechnology จ ากด, CDBIO) ทผานการรบรองมาตรฐาน GMP มาแบงบรรจทสถานเสาวภา เพอใหมผลตภณฑรกษาและปองกนโรคพษสนขบาครบวงจรส าหรบจดจ าหนายในประเทศ พรอมทงไดมการศกษาทางคลนกทง IM และ ID ในคนไทยเรยบรอยแลว ไดรบอนมตเลขทะเบยนแบงบรรจจากส านกงานคณะกรรมการอาหารและยาตงแตป พ.ศ .2557 และออกจ าหนายภายใตชอวา “TRCS SPEEDA”
การผลตเซรมปองกนโรคพษสนขบา(TRCS ERIG)ในสถานเสาวภา
เรมโดยการฉดวคซนปองกนโรคพษสนขบาในมาทละนอยเพอใหมาสรางภมคมกนโรคพษสนขบาในเลอด (Immunization) จนถงระดบทตองการจงเจาะเลอดมาเพอน าพลาสมามาผลตเซรมปองกนโรคพษสนขบา
สตวทใชส าหรบ Immunization มหลายชนด แตนยมใชมาเพราะสามารถใหพลาสมามาก และสามารถคนเลอดแดงกลบเขาไปในมา ท าใหมาฟนตวเรว (Plasmapheresis) พลาสมาทไดตองเกบในตเยน จะมอาย 2 ถง 3 ป
มาทใชฉด Immunization ตองมสขภาพแขงแรงดงน - อาย 3½ - 10 ป - ปราศจากการตดเชอ ทงเชอจลนทรยและเชอไวรส เชน Equine infectious anemia (EIA) - มการฉดวคซนปองกนโรค - มการตรวจเลอด เพอตรวจสอบทางคลนกเปนระยะๆ - มการถายพยาธเปนระยะๆ - ปราศจากการใชยาปฎชวนะ รวมทงเพนนซลน
การผลตเซรมปองกนโรคพษสนขบาตองใชกระบวนการ Aseptic technique ท าในหองสะอาด ระดบความสะอาด A และB (clean room class A and B) และตองตรวจสอบความถกตองของหองสะอาดเปนระยะๆ
อปกรณทกชนดตองนงฆาเชอ วธการผลต วธท าความสะอาดเครองมอ และหองผลตตองผานการตรวจสอบความถกตอง
บคคลากรตองผ านการอบรมท งทาง เทคนคและสขลกษณะเปนอยางดกอนจะปฏบตงาน
Item DQ IQ OQ PQ
Critical Equipment
1. Filling/Washing/Stoppering/Capping
2. Autoclave
3. Hot Air Oven
4. Freeze Dryer
Utilities
1. WFI
2. HVAC
3. Environment monitored according to PIC/s
Qualification/Validation
การตรวจสอบความถกตองของกระบวนการผลต
- กระบวนการผลตตองพสจนวาท าใหผลตภณฑปราศจากไวรส
- อยางนอย 3 รนผลตตอเนองตองผลตไดปรมาณ ตวยาความบรสทธและความคงตวสม าเสมอ
- ผลตภณฑทกขวดตองตรวจสองผงและสงแปลกปลอม
การตรวจสอบทางหองปฏบตการ
- หองปฎบตการของสถานเสาวภาตองตรวจสอบผลตภณฑทกรนทผลตทงทางเคม ทางชววทยา และทางจลชววทยาตามมาตรฐานองคการอนามยโลกและตามต ารายาและตองออกใบรบรอง
- กองชววตถ กรมวทยาศาสตรการแพทย กระทรวงสาธารณะสขมการตรวจสอบยนยนผลการตรวจและออกหนงสอ Lot Release ทกรนผลตกอนจ าหนาย
1. Appearance : Clear or pale-yellow to light-brown solution 2. Identification : Identify specific antibodies against rabies virus 3. Sterility test : Sterile 4. Abnormal toxicity : None of the animals dies or shows signs
of illness 5. Potency : 1 ml of contains not less than 200 IU 6. Pyrogen test : Passed 7. Protein content : Not more than 17% w/v 8. pH : 6.0-7.0 9. Phenol content : Not more than 0.25% w/v 10. Moisture content : Not more than 3.0% 11. Determination of F(ab’)2 : Not less than 75%
Specifications of TRCS ERIG®
A statistical kinetic profile of TRCS
ERIG® has performed in QSMI’s clinic with
Good Clinical Practices and with local
regulatory requirements. The protocols were
approved by QSMI’s Ethic committee and Ministry of Public Health’s Ethic committee.
Safety, Pharmacokinetic Immunogenicity, Purity and Efficacy Study
Products Total
number of patients
Local reactions Systemic reaction
No. of patients % No. of
patients %
TRCS ERIG® batch no. 10/44 (year 2001) 11/44 (year 2001) 10/45 (year 2002) 4620 (year 2003) year 2004 year 2005 year 2006 (non-volunteer subjects)
24 196 32 82 332 123 134
4 21 6 5 20 10 10
16.6 10.7 18.7 6.1 6.0 8.1 7.4
1 1 2 4 9 4 2
4.1 0.5 6.2 4.9 2.7 3.2 1.5
Safety and Immunogenicity study of TRCS ERIG
The results showed that TRCS ERIG® is safe with no serious adverse events and no anaphylactic reactions or severe serum sickness were reported.
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
2001 2002 2003 2004 2005 2006
%
year
Percentage of the incidence of local reaction and systemic reaction of TRCS ERIG®
Localreaction
Pharmacokinetic analysis
• Determine the content of F(ab’)2 in the collected blood by ELISA technique
(Q Group) administered with TRCS ERIG®
(P Group) split IgG chromatographed using.
• F(ab’)2 was found immediately after administration and further increased up to day 3.
Comparison of Q-group and P-group
0
50
100
150
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Time (hour)
Amou
nt o
f F(a
b')2
(ug/
ml)
P-group
Q-group
Comparison of F(ab')2 in ug/ml between Q-group and P-group
Hours 6 12 24 48 72 96 168 216 264 336
P-Group 37.52 39.39 45.35 45.79 120.69 84.37 63.02 49.78 42.54 47.52
Q-Group 38.81 39.75 44.54 44.63 119.74 82.26 60.86 50.45 49.63 53.69
Comparison of Q-group and P-group
0
50
100
150
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Time (hour)
Amou
nt o
f F(a
b')2
(ug/
ml)
P-group
Q-group
The results showed that the content of F(ab’)2 in the collected blood
of subjects administered by TRCS ERIG® and split IgG chromatographed are equal.
Efficacy of RIG determined by challenging with CVS-strain in Hamster
RIG
% Efficacy
QSMI Whole IgG
HRIG 20 IU/ml
HRIG 40 IU/ml
Whole IgG (commercial) TRCS ERIG F(ab’)2
(commercial)
Without vaccine 44 40 33 30 44 22
%Efficacy
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
QSMI Whole IgG HRIG 20 IU HRIG 40 IU Whole IgG (c ommerc ia l) TRCS ERIG Split F(ab’)2, c hromatograph Control
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
QSMI Whole IgG
HRIG 20 IU HRIG 40 IU Whole IgG (commercial)
TRCS ERIG
F(ab’)2
F(ab’)2
(commercial)
Control
Determinion of the content of F(ab’)2 and foreign proteins
QSMI has determined the contents of F(ab’)2 and foreign proteins in production batches of TRCS ERIG® produced by current technique and the old methods compared to commercial split IgG chromatographed, commercial whole IgG and crude plasma by using SDS Page and HPLC technique and found that TRCS ERIG® contains high content of F(ab’)2 and high purity (foreign protein content is too small quantity and cannot be detected).
Purity study of TRCS ERIG®
Lane Description / Source Protein (mg/ml)
Volume (Ul )
F(ab’)2
1 TRCS ERIG® 1 15 92.10
2 TRCS Antirabies Serum (dialysis bag with caprylic acid), old method
1 15 88.02
3 TRCS Antirabies Serum (dialysis
bag without caprylic acid), old method
1 15 84.46
4 Horse F(ab)’2 (Reference) 1 15 97.38
5 Commercial ERIG A (whole IgG) 1 15 91.88
6 Commercial ERIG B (split IgG ) 1 15 85.86
7 Crude plasma (Horse) 1 15 -
% Content of F(ab’)2
Potency and stability of TRCS ERIG®
การศกษาความคงตวแบบเรง ของ TRCS ERIG®
อณหภมทใชศกษา (storage condition) : 25°C ภาชนะบรรจ (primary packagings) : Clear glass vials. Type I, size 6 ml with grey bromobutyl rubber stoppers and flip - off aluminum caps Appearance : Clear and pale yellow to light- brown colour solution, it may shown slightly turbidity or a small amount of particulate matters during storage.
การศกษาความคงตว (Long term stability study) ของ TRCS ERIG®) อณหภมทใชศกษา (storage condition) : Refrigerator (2-8°C) ภาชนะบรรจ (primary packagings) : Clear glass vials. Type I, size 6 ml with grey bromobutyl rubber stoppers and flip - off aluminum caps Appearance : Clear and pale yellow to light- brown colour solution, it may shown slightly turbidity or a small amount of particulate matters during storage.
Lot No.
36 months
Ap
pca
rance
pH
(6.0
-7.0
)
% P
rote
in
(ma
x 1
7.0
%)
Po
ten
cy (
min
2
00
IU
/ml)
Osm
ola
rity
2
60
-400
O
sm
/kg
F(a
b)’ 2
%
Pyro
ge
n
Ab
no
rmal
toxic
ity
Ste
rilit
y
11/44 6.9 8.3 197.9 305.00 86.9 Passed Conform Sterile
2/45 6.7 8.7 257.1 323.00 87.6 Passed Conform Sterile
10/45 6.8 7.4 226.4 325.00 87.0 Passed Conform Sterile
29/45 6.8 5.3 225.1 315.00 88.1 Passed Conform Sterile
2/45 6.70 8.66 257.1 347 83.25 Passed Conform Sterile
7/45 6.67 5.66 286.3 326 84.55 Passed Conform Sterile
10/45 6.80 7.35 226.4 349 85.74 Passed Conform Sterile
E4627 6.7 7.0 272.63 Conform >85.0 Passed Conform Sterile
E472501 6.54 6.14 364.92 368.00 87.00 Passed Conform Sterile
E472502 6.71 5.63 315.70 342.00 88.25 Passed Conform Sterile
E4712 6.5 6.9 235 317 88.1 Passed Conform Sterility
E4738 6.6 5.9 240 391 87.2 Passed Conform Sterile
TRCS SPEEDA Chromatographically Purified Vero Cell Rabies
Vaccine(CPRV)
ผลตโดยบรษท Liaoning Cheng Da Biotechnology จ ากด และสถานเสาวภา สภากาชาดไทย
Speeda Production Technology Background
• Virus strain & Cell line
– Vero cells from ATCC; PV2061 fixed rabies virus strain from CDC, USA.
• Cell Culture: Bioreactor Systems
– The main character of the technology is perfusion cultivate the Vero cell on high
density micro-carriers in bioreactor and keep harvesting the virus bulk. It keeps the
environment for cells’ growth to avoid the metabolizing accumulation produced by the
high density cells. The technology of perfusion not only increased the density of cells
grow, but also be helpful to the purification of the product.
• Purification Process: Chromatography
– The continuously harvested virus was concentrated by ultrafiltration and
chromatographic purification was then conducted with chromatography media using
the Sepharose gel system
– It is manufactured under good manufacturing practices (GMP) and strictly fulfills the
WHO recommendations.
Manufacturing Process
65
Vero cell Rabies Virus
Culture in Bioreactor
Virus infection in bioreactor
Harvest Virus
Concentration by Ultrafiltration
Inactivation with β-propiolactone
Purification by Chromatography
Formulation
Imported bulk, Filling & Freeze dried
Product Final Examination
TRCS SPEEDA
Bioreactor with perfusion cell culture
Keep continuously virus harvest to insure the batch consistency
High Potency (≥ 4.5 IU/dose) Reduce the risk of contamination
Perfusion cell culture technology Bioreactor with perfusion cultivate system High density micro-carriers technology Provide closed pipeline during the whole production process to avoid contamination instead of adding antibiotics.
Purification technology
Column Chromatography AKTA : GE Healthcare, USA
• Four series column chromatography
system can remove more than 99.9% impurities such as residual Vero cell DNA
(Less than 100 pg/dose), Bovine serum etc.
Purified bulk vaccine – SPEEDA
Rabies Vaccine for Human Use, Freeze-dried (0.5 ml of vaccine to be filled in vial and freeze-dried)
Ready to be filled in QSMI
COA from CDBIO (Manufacturer) Identification of bulk product before filling Sterility test Endotoxin test
Quality control of TRCS SPEEDA in QSMI
QSMI Certificate of Analysis
Quality control of TRCS SPEEDA
Description
Identification
pH (after reconstitution)
Moisture content
Sterility
Abnormal toxicity
Bacterial endotoxin
Potency
Thermostability test
Etc.
Lot Released (NCL)
NCL issued Certificate of Lot Released
Documents / Products for sending to NCL
QSMI Certificate of Analysis QSMI Summary Protocols Raw data
Future QSMI Rabies Products
Lyophilized TRCS ERIG
- Shelf life 5 years
- Can be stored at temperature 25 degrees celcius
- Under registration process at Thai FDA
To determine the immunogenicity and safety
after using rabies vaccine with modified
TRC-ID rabies with Lyophilized Equine
TRCS ERIG
mmunogenicity and safety
* p>0.05 ** p < 0.0001
Found same results of liquid and lyophilized
TRCS ERIG