ارزیابی دستگاه شمارشگر سلولهای خونی

تربقانی شریعت آتوسا دکترسالمت مرجع آزمایشگاه

Electrical Optical

Inlet

Outlet

Light SourceBeam

AperturePhotodiode

Container

Aperture Tube with Aperture

Cell

9% NaCl Electrolyte

Vacuum Pump

Constant Current Source

Electrodes

Direction of Flow

CoincidenceCarry overPost aperture recirculation

1. Inadequate mixing2. Pipetting fault3. Inappropriate dilution4. Delay in transferring suspension to counting chamber5. Electric interference6. External noise7. Aperture blockage8. Aspiration failure9. Contaminated diluent10. Air bobbles11. Residual lysic agent12. Inadequate drainage

RBC/ WBC imprecision linearity

WBC incomplete lysis

Platelet solution with dust imprecision

CV%Calibration

stability

کاتالوگ مطالعه5 و کاربری و نگهداری با آشنائی SET UPروز

دستگاه چارت رسم و کنترل خون از استفاده دستگاه کالیبراسیون

خونگیری شرایط انعقاد ضد غلظت مناسب ظرف مناسب درپوش ظروف شستشوی آزمایش ساعت 4-1زمان انعقاد ضد با شدن مخلوط

برق نوسانات زمین به اتصالمحلولهادفعزمینه

RBC < 0.03 × 10 12/l WBC < 0.04 × 10 9/l HGB < 0.2 g/l PLT < 5 ×10 9/l

اقل حد یا 3-5نمونه و روتاتور روی با 20دقیقه بارشود ته و سر دست

باشد نداشته حباب باشد نداشته لخته

Each step in triplicate (each dilution read in duplicate)

10-20 normal individuals Hct can be corrected 1.5-3%

2% for 0.440.442%=0.0088 .44-.0088=0.43

CF(coefficient factor)= [(manual-analyzer) / (analyzer )]100

Sample manual mean cell counter mean

1 11,11.5,11 11.7 12,12,12 12 2 12,12.8,13 12.6 13,12.8,12.8 12.87

3 14,14.2,13.9 14.03 14.5,14.5,14.8 14.6 4 13,13.5,13.6 13.37 13.6,13.1,13.4 13.37 5 14.3,14.6,14.5 14.47 15,15,15.1 15.03

Mean(manual)=11.7+12.6+14.03+13.37+14.47 = 13.23 5

Mean(cell counter)=12+12.87+14.6+13.37+15.13=13.57 5

CF=(13.23 – 13.57 ) / 13.57 = -0.025

98 X (-0.025) = -2.45 → 98 – 2.45 = 95.55

Concentration 1.5 mg / cc or 3 mg / 2 cc

Solution 3% 3 gr / 100 cc or 3000 mg /100030000 mg 1000 cc 3 mg X X= 0.1 cc or 100 µl

Solution 6% 6 gr / 100 cc or 6000 mg /100060000 mg 1000 cc 3 mg X X= 0.05 cc or 50 µl

.A سالم نمونه

.B لیپمی نمونه

.C ( هموگلوبین سیتمی لیتر (18-20پلی دسی در میلیگرم

.D میکروسیتیک (MCV <75 fl , Hg=10-11 gr/dl)آنمی.E لکوسیتوز(WBC=20-40×10 9 /l ).F لکوپنی(WBC = 0.5-2 × 10 9 /l) .G ترومبوسیتوز(PLt = 500-700 × 10 9 /l ).H ترومبوپنی(PLt = 50-80 × 10 9 /l).I ماکروسیتیک (MCV>100 , Hg = 10-11 gr/dl)آنمی.J جاندیس(Bil > 30 µmol/l)

.Kپاراپروتئینمی

کنترل خون – هر کنترل منحنی روز 5بررسی

از خارج های کرده 4Sd+نمونه مردود را شود 5هر محاسبه معیار انحراف میانگین دوباره روز

استفاده ساخت سری بایک محلولهایی از مدت این درشود

20 کاری روز دوپلیکیت صورت به را کدام هر که نمونه دو روز هر

دهید دستگاه به از خوانده دو تفاوت مطلق قدر بیشتر 5/5اگر معیار انحراف

. کرد حذف را خوانده دو آن باید بود

10 انجام جهت که متفاوت های دامنه با تازه خون نمونهکدام CBCآزمایش هر یکسان شرایط در را شده آوری جمع

یخچال 10را در را ها نمونه سپس کرده آزمایش بارمدت. به از 5بگذارید پس همانروز پایان در را ها نمونه روز

آزمایش اول ران مانند دوباره رسید اطاق دمای به که آنجداگانه. طور به روز هر برای توان می صورت این در کنید

SDوCV عن��وان ب��ه ک��ه ک��رده Within-runمحاس��بهPrecision . و روز یک در که آزمایشهائی نتایج بود خواهد

عن�وان 2طی ب�ه ش�ده آزم�ایش ک�اری Between-runرانPrecision . بود خ�واهد

بررسی کنترل Precision Between-dayبرای خون از . شود محاسبه متوالی روز ده آزمایشهای نتایج شود استفاده

20 را کنترل نمونه یک روز هر آزمایش 20روز محاسبه را کنیددقت عدم ، رایج فرمولهای کمک با

نمائید

test unit Level 1

Level 2

Level 3

Level 4

Level 5

Hematocrit L/L 0.14 0.33 0.56 0.70

Hemoglobin g/dl 4.5 10.5 17 23

Mean corpuscular volume Fl 80 100

White blood cell count K/µl 0.5 3 12 30

Platelet count K/µl 10 50 100 600 1000

CV برای قبول within-dayیا within-runقابلباشد ( TE ×0.25برابر ) می

CV برای قبول برابر between-dayقابل TE) 0.33 ×T )باشد می

Test Allowable total error (TE )

Within-run CVWithin-day CV

White cell count Target + 15% 3.75%

Erythrocyte count Target + 6% 1.5%

Hematocrit Target + 6% 1.5%

Hemoglobin Target + 7% 1.75%

Platelet count Target + 25% 6.25%

نمونه یک ،high آزمایش هم سر پشت بار سه را (H1,H2,H3 )کرده

نمونه یک آزمایش lowسپس بار سه را( . L1.L2.L)کنید

های C / Dنمونه های E / Fنمونه های G / Hنمونه زیر فرمول کمک با پارامترها، از یک هر برای سپس

. نمائید محاسبه%carry over =

بار سه قرمز گلبول شمارش برای اگر مثال برایزیر شرح به پائین نمونه بار سه سپس باالو نمونه

باشد:6.28-6.27-6.30 0.74-0.52-0.49 شد خواهد محاسبه زیر روش به

. نمائید مقایسه سازنده ادعای با را نتایج

به کرده رقیق سریال طور به را الزم های نمونه منظور بدینمحدوده در که . reportable rangeطوری باشد دستگاه

آماری محاسبات طریق از که مقادیری با را فوق مقادیر سپس. نمائید مقایسه آمده بدست

های نمونه مرحله این . G وE و Cبرای باشد می نیاز مورد ب�ا ک�ه ف�ردی نمون�ه از پالکت platelet rich plasmaجهت

. نمائید استفاده شده مخلوط به مبتال بیمار نمونه از میتوان لکوسیت استفاده CMLبرای

کرد. پارامترهای قرمز گلبول و هموگلوبین برای

MCV.MCH.MCHC. شود محاسبه شود استفاده فرد پالسمای از کردن رقیق جهت

هر و گردد تهیه رقت پنج اقل ،حد پارامترها از یک هر برای. برید کار به را میانگین ، کرده آزمایش بار سه تا دو را نمونه

Low pool High pool

Mixture 1 5 part 0 0%

Mixture2 3 part 1 part 25%

Mixture3 2 part 2 part 50%

Mixture4 1 part 3 part 75%

نتیجه یکی نمائید ثبت نتیجه دو رقت، هر برایشده محاسبه ریاضی نتیجه یکی و دستگاه با آزمایش

( اول سری اعداد سری دو خطی رگرسیون منحنیمحاسبه مقادیر دوم سری و شده آزمایش مقادیر

. ) آورید بدست را است شده صورت به باید دو این . R2 > 0.95همبستگی باشد

خون نمونه و 100حداقل سالم افراد شامل که فردمورد قبول قابل سیستم و فوق دستگاه با ، بیمارباشد

. میگیرد قرار آزمایش تا کرد آزمایش دوپلیکیت صورت به را نمونه هر است بهتر

شود جلوگیری راندوم خطای از ( مختلف روزهای طی ها نمونه است آزمایش ( 20بهتر روز

شود ( £ ترجیحا کوتاه زمانی فاصله در را ها نمونه است بهتر

پارامترهای ( تا کرد آزمایش دستگاه دو توسط بالفاصلهنکنند تغییر زمان گذشت اثر در خونی

: تهیه برای الزم نکات تمام باید که است ذکر به الزم تبصرهخون نمونه انجام CBCی زمان ، مناسب انعقاد ضد ،مانند

شود ..... . گرفته نظر مد و کردن مخلوط ، آزمایش

پیشنهاد روش FDAطبق با کانتر سل دستگاهبرای دلیل همین به قراربگیرد مقایسه ،مورد مرجعهمچنین و هماتوکریت و هموگلوبین های پارامتربا دستی روش از سفید، گلبولهای افتراقی شمارشگسترش دو حداقل تهیه و کارآزموده کارشناسان

. گردد می ،استفاده نمونه هر برای :طبق فوق های آزمایش انجام روش تبصره

های باشد CLSIدستورالعمل

محاسبه با را نتایج ، آزمایشها انجام از و R2پسSlop – intercept-Bias قرار مقایسه مورد

محاس�به. از نت�ایج تفس�یر ب�رای چ�ه اگ�ر Tمی�دهیمduplicate test . کنیم می استفاده هم

برایflag NRBC & flag immature cell توجه بارا اختصاصیت و حساسیت شده، تهیه گسترشهای به

کنیم می محاسبه

که میگیرد صورت دستگاههائی مورد در ارزیابی این. دارند را نمونه اتوماتیک کردن مخلوط سیستم

. دهید قرار مالک را قرمز گلبولهای شمارش کار این برای14 را را 10نمونه هرکدام و کرده سروته آزمایش 3بار بار

پایه مقدار عنوان به نمونه هر برای را میانگین ، کردهbaseline. میشود گرفته نظر در

هارا داده 4نمونه قرار اطاق دمای در ساعت مورد اتوماتیک سیستم با دهید تکان هارا نمونه آنکه بدون

. دهید قرار آزمایش سیستم با دوباره و کرده سروته دست با را ها نمونه

. کنید آزمایش دستگاه اتوماتیک

( مرحله پایه مقادیر با چهارم و سوم مرحله دو در را نتایج . تا ( اختالف کنید مقایسه قابل baseline 1.5%اول

. میباشد قبول جدول در نتایج و آزمایش بار، سه اول نمونه مثال عنوان به

. است شده ثبت

RBC1Run1 4.1Run2 4.12Run3 4.11Average 4.114h Unmixed 4.094h Premixed 4.13Change unmixed% 0.49Change premixed % -0.49<1.5% ok

4.1+4.12+4.11 / 3 = 4.11 شده محاسبه میانگین آزمایش کردن مخلوط ،بدون سوم مرحله مطابق

و .4.09شده است آمده بدست ، دست با کردن ازمخلوط پس چهارم مرحله مطابق

شده انجام 4.13آزمایش

در دستگاه این از ، امکان صورت برنامه درکیفیت خارجی در ارزیابی و شود استفاده

. بگیرد قرار موجود سیستمهای سایر با مقایسه

توانائی دستگاه افزار نرم با کار نحوه به باید کار حین درو آن آن user friendlyهای . بودن کرد توجه نیز

GP19-A Laboratory Instruments and Data Management Systems: Design of Software User Interfaces and End-User Software Systems Validation, Operation, and Monitoring; Approved Guideline

General Principles of Software Validation; Final Guidance for Industry and FDA StaffDocument issued on: January 11, 2002

 U.S. Department Of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Devices and Radiological Health Center for Biologics Evaluation and Research

GP19-A Laboratory Instruments and Data Management Systems: Design of Software User Interfaces and End-User Software Systems Validation, Operation, and Monitoring; Approved Guideline , CSLI

Homogenous Non-homogenous

شد ارسال آماده و بندي بسته ها نمونه اينكه از بعد. شود انجام كار اين بايد

( ها نمونه از مناسبي تصادفي%( 5تعداد صورت به. باشد ها جعبه تمام از طوريكه به شود انتخاب

. شود داده كانتر سل به بار دو نمونه هر

اول بار دوم بار X

X1.1 X1.2 X1

X2.1 X2.2 X2

X3.1 X3.2 X3

…… ….. ….

اول بار دوم بار Wt Wt2

X1.1 X1.2 X1.1-X1.2 (X1.1-X1.2)2

X2.1 X2.2 X2.1-X2.2 (X2.1-X2.2)2

X3.1 X3.2 X3.1-X3.2 (X3.1-X3.2)2

……. …….. ………. ……….

Duplicate test

Ss 0.3 sd test for program

Stable Unstable

Test or Analyte Acceptable Performance

White cell differentiation Target ± 3 SD based on percentage of different types of white cells

Erythrocyte count Target ± 6%

Hematocrit Target ± 6%

Hemoglobin Target ± 7%

Leukocyte count Target ± 15%

Platelet count Target ± 25%

.I بسته درب با.II درب شدن باز از پس

كرده انتخاب تصادفي طور به را ويال چنددر بسته درب با را عدد چند و باز درب با را ويال چند

. ميداريم نگه اطاق دمايبخصوص ) كنيم مي آزمايش ساعت نيم هر يا و ساعت هر

از تخميني زيرا دارد اهميت بسيار بسته درب با) داريم سرد زنجيره بدون توزيع شرايط

با تشکر