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ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

QU-301

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: AIRE

ASESORA

Dr. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del análisis: 29 DE JUNIO DEL 2015

Fecha de término: 10 DE JULIO DEL 2015

Nombre Cargo

Rea García Cesar Alejandro Responsable

Rea García Cesar Alejandro Administrador

Macías Jasso Luz Evelia Laboratorista 1

Felipe Florido Mauricio Iván Laboratorista 2

Martínez Chiquito Josué Neftalí de Jesús Laboratorista 3

GENERACIÓN: 2014-2016

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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio: Habitación con poca luz solar, poca ventilación de aire y una temperatura aproximadamente de 25°C

SITIO DE MUESTREO

Nombre Ubicación /coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

Universidad tecnológica de

león

Edificio “F”

Blvd. Universidad tecnológica de león #225 col san Carlos

CP.37670

21.063223

-101.578865

Imagen No.1. Edificio “F” de la Universidad Tecnológica de León

2. Evidencia fotográfica del sitio Fecha: 29 de junio del 2015 Hora: 2:12 pm

Fecha: 29 de junio del 2015 Hora: 2:18 pm

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: Aire Hora de toma de muestra: 2:10 pm Hora de siembra: 2:10 pm

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS): Salón de QU-301 Edificio “F” (21.063223-101.578865)

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire) 5 minutos

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra: Rea García Cesar Alejandro

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra: Rea García Cesar Alejandro

2.Parámetros Fisicoquímicos

Color:N/A Temperatura (oC) ambiental: 25°C pH: N/A

Olor: N/A Describir condiciones climatológicas: Día nublado con un poco de viento

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra

Imagen Caja Petri con agar sabouraud expuesta al aire para la toma muestra

Imagen. Momento de la toma de muestra

Edificio F

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

La identificación bacteriana es de gran importancia porque a través de las diferentes pruebas bioquímicas que se le realizan a las bacterias y hongos se puede establecer de manera específica las bacterias presentes en determinadas zonas de muestreo, y poder identificar la función que realizan en los diferentes ciclos biogeoquímicos y como contribuyen a estos.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Composición)

Medio No. 1: Agar Sabouraud FÓRMULA (en gramos por litro) Peptona...........................5.0. Tripteína...........................5.0. Glucosa.............................40.0. Cloranfenicol....................0.05. Agar..................................15.0. pH final: 5.6 ± 0.2 Medio No. 2: Agar harina de maíz Harina de maíz……………….40 g Agar…………………………….. 20 g Tween 80………………………10 ml Agua destilada……………..1000 ml

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción Colonias lisas, plegadas, rugosas o membranosas,

brillantes, de color blanco o ligeramente beige.

Descripción Colonias lisas, brillantes que con el tiempo se vuelven plegadas, rugosas o membranosas, de color blanco o ligeramente beige.

Imagen

Imagen No. 1. Cultivo de Candida albicans en agar Sabouraud

Dextrosa

Imagen

Imagen No. 2. Cultivo de Candida en agar harina de maíz

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3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y Composición)

Medio No. 1: Agar BD Sabouraud con Gentamicin y Cloranfenicol Ingredientes. Digerido pancreático de caseína……….5.0 gr Digerido péptico de tejido animal……..5.0 gr Glucosa……………………………………………..40.0 gr Agar……………………………………………………15.0 gr Gentamicina………………………………………….0.04 gr Cloranfenicol…………………………………………..0.4 gr pH de 5.6 ± 0.2 Medio No. 2: Agar Sabouraud glucosa con cloranfenicol Ingredientes. Digerido pancreático de caseína……….5.0 gr Digerido péptico de tejido animal……..5.0 gr Glucosa……………………………………………..40.0 gr Agar……………………………………………………15.0 gr Cloranfenicol…………………………………………..0.4 gr pH de 5.6 ± 0.2

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción Colonias ovaladas, lisas, plegadas, rugosas o membranosas, brillantes, de color blanco brillante su crecimiento tarde de 5 a 8 días

Descripción Colonias de un color verde claro, de forma ovalada de apariencia mucosa, tarde en crecer de 5 a 8 días, brillantes, lisas y membranosas

Imagen

Imagen No. 3. Cultivo de C. albicans Agar BD Sabouraud con Gentamicin y Cloranfenicol

Imagen

Imagen No. 4. Cultivo de C. albicans en Agar Sabouraud glucosa con cloranfenicol

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4. Procedimiento de Aislamiento (describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar Material

- 4 cajas Petri - 4 matraz Erlenmeyer de 250 ml - 2 probetas - 1 pipeta - 1 autoclave - 2 espátulas - 1 mechero bunsen - 4 charolas de pesado - 1 pizeta - 1 bascula de pesado - Algodón - Gasas - Papel de aluminio - Agar sabouraud

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra): Preparación de medios de cultivo:

- 1.- Pesar 1.95 gr de agar sabouraud para disolver en 30 ml de agua destilada en un matraz - 2.- Introduccion el matraz con el agar al autoclave para esterilizar durante 20 min - 3.- Una vez transcurrido los 20 min dejar enfriar a temperatura ambiente - 4.-Posteriormente pasar el agar a una caja Petri donde se tiene que dejar que se solidificar. Esto se

tiene que hacer en la campana de flujo laminar Siembra: 1.- Se llevó la caja Petri con el agar a la zona de muestreo. 2.- Luego se abrió la caja y se expuso al aire durante 5 minutos. 3.- Se deja encubar durante una semana para ver el crecimiento de alguna bacteria en este caso C. Albicans Selección de la colonia: Para la selección de un colonia de la primera siembra se divide la caja petir, (con el agar donde nada más crese la bacterias o hongo que se está buscando) en cuatro sectores para luego con una asa tomar un pequeña muestra de la colonia seleccionada y colocarla en uno de los cuatro sectores en forma de zigzag, si se quiere tomar otra colonia diferente el asa se tiene que esterilizar metiéndola a la llama de un mechero

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5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico ) para la identificación del microorganismo seleccionado

Pruebas para identificación.

Candida

Albicans

chromID™

Candida

Hidrólisis

específica de un

substrato

cromogénico,

hexosaminidasa

(patente de

bioMérieux).Las

colonias de

Candida albicans

se colorean de

azul

Crecimiento

en Sabouraud

con 6.5% de

cloruro de

sodio

Agar Sabouraud

con 6.5% de

cloruro de sodio

La Candida

Albicans es las

únicas bacterias

que cresen en

este medio

Se lleva a cabo en

Agar Sabouraud . Se

identifica una colonia

y se observa al

microscopio para

identificar algunos

rasgos característicos

Fermentación

de azucares

Se lleva a cabo

en caldo base

rojo fenol con

maltosa,

lactosa,

dextrosa,

galactosa y

sacarosa y se

observa la

generación de

gas

Observaciones

microscópicas a

partir del cultivo

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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADA Tipo de colonia 1: Descripción

Presuntiva colonia de Candida Albicans a los 2 días de haberse sembrado. Punto blanco, brillante de aspecto mucoso y forma circular

FOTO 1

Tipo de colonia 2: Descripción

Presuntivo colonia de Candida albicans a los 4 días de haberse sembrado. Punto blanco, brillante de aspecto mucoso y forma circular con un aumento de tamaño.

FOTO 2

Tipo de colonia 1: Descripción

Presuntiva colonia de Candida Albicans a los 8 días de haberse sembrado. Colonias de color anaranjado, de color amarillo y una de mayor diámetro de color blanco. De aspecto mucoso y menbranoso

FOTO 3

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4. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA DEL RESULTADO DEL ANALISIS MICROSCOPICO

Vista al microscopio con un enfoque al 40x. Con un frotis

Vista al microscopio con un enfoque al 100x. Con un frotis

5. ANALISIS BIBLIOGRÁFICO DE LA IDENTIFICACION DEL MICROORGANISMO AISLADO

Nombre de la prueba

Medio de cultivo utilizado

Resultado obtenido (positivo/negativo)

Evidencia fotográfica

1.-

chromID™ Candida

Hidrólisis específica de un substrato cromogénico, hexosaminidasa (patente de bioMérieux).

Las colonias de Candida albicans se colorean de azul

Fundamento de la prueba

Los agares cromogénicos son medios selectivos y diferenciales disponibles comercialmente. Contienen como base glucosa y peptona, la selectividad es dada por el cloranfenicol, contiene una mezcla de sustratos cromógenos que liberan unos componentes coloreados diferentes cuando son degradados por enzimas específicas producidas por ciertas especies de Candida. Este medio permite el desarrollo de las especies más comunes de Candida y hongos levaduriformes mediante la formación de colonias coloridas diferenciadas: C. albicans (azul), C. dubliniensis (verde oscuro), C. tropicalis(azul oscuro), C. krusei (violeta pálido), C. glabrata (violeta intenso). (http://www.biomerieux.es)

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2.- Crecimiento en Sabouraud con 6.5% de cloruro de sódio

Agar Sabouraud con 6.5% de cloruro de sodio

Es la única bacteria que crece en este agar

Fundamento de la prueba

Esta prueba se realiza con el fin de determinar la capacidad de crecimiento de Candida albicans en un medio Sabouraud hipertónico incubado a temperatura ambiente (25°C), a diferencia de C. dubliniensis que no crece a estas concentraciones de sal

3.-

Observaciones microscópicas a

partir del cultivo

Agar Sabouraud

Colonia de color blanco mucoide.

Fundamento de la prueba

(http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?inpopup=true&id=100778)

Este es un método presuntivo donde solamente se observan las colonias en el microscopio y por su morfología se clasifica el tipo de candida más idéntico.

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4.-

Fermentación

Caldo base rojo fenol con maltosa, lactosa, dextrosa, galactosa y sacarosa.

Se observa la generación de gas

Fundamento de la prueba

Las fermentaciones, indican un cambio marcado de color del medio de fucsia a amarillo intenso se indican positivas, en casi de no haber cambio de color la reacción se torna como negativa, y las reacciones débiles se

indican con un más ó menos

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IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO AIRE

1.- Nombre científico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados del perfil bioquímico planteado ( género y especie)

Presuntivamente es Candida Albicans

2. Taxonomía del o los microorganismo identificados Filo: Deuteromiceta

Subfilo: Saccharomycotina

Clase: Saccharomycetes

Orden: Saccharomycetales

Familia: Saccharomycetaceae

Género: Candida

Especie: albicans

3. Características generales

Candida albicans es un hongo dimórfico, es decir, se desarrolla de forma distinta en función de la temperatura de crecimiento, como levadura, normalmente a 37ºC en el huésped, y como hongo de aspecto filamentoso, a 25ºC en la naturaleza. Pertenece al filo Ascomycota y se reproduce de forma asexual por gemación. En forma de levadura presenta un aspecto de células redondas u ovaladas, de 3-8 x 2-7 micras de tamaño, agrupadas en pequeños grupos, mientras que, en forma de hongo filamentoso, las células se alargan y se diversifican tomando la apariencia de filamentos, pseudo-hifas o pseudo-micelio. Estos hongos están siempre presentes en la piel y en la mucosa del tracto digestivo, genitourinario y respiratorio de la mayoría de las personas, pero se encuentran controlados por otros microorganismos no patógenos. Cuando se produce un desequilibrio, el aumento desmedido de la población de hongos produce esta u otras micosis. La Candida Albicans se encuentra en todo tipo de ambiente, y pueden detectarse en interiores o exteriores durante todo el año. El crecimiento del hongo es promovido por condiciones húmedas y cálidas. En los exteriores puede encontrarse en áreas sombreadas y húmedas, o en lugares donde se descomponen hojas y otro tipo de vegetación. En interiores, puede encontrarse en lugares donde haya altos niveles de humedad.

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el(los) que intervienen

Ciclo del carbono, ciclo del azufre, ciclo del fosforo y ciclo del nitrógeno

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a través de los ciclos biogeoquímicos

Las fermentaciones degradan fundamentalmente los glúcidos de la materia orgánica, dando como producto final el CO2 que vuelve a la atmósfera Las putrefacciones son descomposiciones de materia orgánica compuesta principalmente por proteínas. Las bacterias y los hongos secretan enzimas que rompen parcialmente la materia muerta. La digestión final de esta materia tiene lugar en las células bacterianas y fúngicas a través de procesos de fermentación y respiración. El CO2 liberado en estos procesos regresa a la atmósfera para reanudar el ciclo

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6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la

microbiología en el área ambiental

De acuerdo con el hongo que se observó, presuntivamente se cree que es una Candida Albicans ya que presenta las características similares en su morfología y en microscopio presenta similitudes con dicho hongo. Con este estudio nos dimos cuenta de que unos hongos pueden ser tanto buenos como malos para el medio ambiente y que están presentes en todo lugar y tenemos que tener cuidado ya que los hongo pueden ser patógeno y causante de enfermedades como el hongo Candida Albicans que causa candidiasis (candidosis, moniliasis), o a la ves el hongos de Candida Albicans pueden ser bueno para el medio ambiente ya que degradan la materia orgánica medio la fermentación y la putrefacción dando como resultado la formación de CO2 y devolviéndolo al medio ambiente. Con esto se demuestra que la microbiología es muy importante en el área ambiental ya que con la microbiología podemos detectar los organismos ya sea baterías y hongos que están presentes en las diferentes matrices (agua, suelo, aire) realizando pruebas químicas para poder identificarlas mediante la recopilación de resultados que se obtienen en las diferentes pruebas y observa en que ciclo biogeoquímico aparecen y que función realizan en estos ciclos para que la vida pueda seguir tal y como la conocemos.