AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE
I. INTRODUCCION
En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran
usualmente como poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos,
caracterizarlos e identificarlos, necesitamos tenerlos como
cultivos puros.Un cultivo puro es aquel en el que todos los
microorganismos provienen de una sola clula.La obtencin de un
cultivo puro, a partir de una poblacin mixta, se lleva a cabo en
dos etapas:1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los
diferentes microorganismos queden lo suficientemente separados
sobre la superficie de un medio de cultivo slido, de manera que
luego de la incubacin ellos formen colonias visibles aisladas. Este
proceso se cmo como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes
tipos de colonias correspondientes a los diferentes microorganismos
presentes en la poblacin original.2. Luego de tener las colonias
aisladas, estn deben transferirse con el filamento a un que
contenga agar nutritivo estril para cultivar esa colonia aislada;
este proceso se conoce como trasplante.Para garantizar la pureza
del cultivo, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia
aislada.Se considera que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al
realizar este proceso, todas las colonias presenten las mismas
caractersticas El medio de cultivo utilizado en el proceso de
aislamiento depender, entro otros factores, de los requerimientos
nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la
presencia de microorganismos que, por sus caractersticas y/o por la
cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtencin
de los microorganismos objeto del aislamiento. Este ltimo caso, se
deben utilizar medio de enriquecimiento y medios selectivos que
inhiban el desarrollo de grmenes contaminantes.Basndose en el
origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles
microorganismos que se encuentren presentes en la misma y ese
conocimiento ayudara en la seleccin del medio y las condiciones del
cultivo adecuado.
II. OBJETIVO
2.1 OBJETIVOS GENERAL
Evaluacin de microorganismos
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran
en el medio ambiente Preparar los medios de cultivo para el
desarrollo de los microorganismos
III. MARCO TEORICO
3.1 Medio de cultivo:
El medio de cultivo se emplea para tres fines principales:
Desarrollar y conservar cultivos Estudiar la accin de los
microorganismos sobre alguna sustancia del medio Facilitar la
produccin por los microorganismos en algn producto determinado o
combinacin de productos.
Los medios de cultivo varan en complejidad, la cual va desde los
tejidos hasta las simples mezclas de sales orgnicas. Muchos
microorganismos requieren solo los medios de cultivo orgnicos,
otros necesitan medios especiales para su desarrollo o para ayudar
a la identificacin cuando las caractersticas del cultivo y las
reaccin es especificas son los factores determinantes
El medio de cultivo debe estar exento de sustancias que puedan
inhibir el desarrollo de los microorganismos que han de
cultivarse.
3.2 Esterilizacin:
El autoclave es un instrumento para hervir el agua bajo presin y
poder esterilizar desde materiales de vidrio y los medios de
cultivo, es decir liminar todo los microorganismos presentes.
Para el manejo de la autoclave se debe de tener en cuenta lo
siguiente:
Comprobar el nivel de agua y la carga Cerrar hermticamente la
tapa. Abrir la vlvula de vapor y encender Una vez que salga el
vapor por la vlvula, esperar al menos cinco minutos para expulsar
todo el aire y cerrar la vlvula Esperar que el manmetro descienda a
cero y abrir entonces la llave de vapor. Esperar unos 5 minutos y
abrir la tapa, y despus de unos minutos quitar la carga.
3.3 Materiales:
Placas Petri
Laplaca de Petries un recipiente redondo, decristaloplstico, con
una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de
dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente,
aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin conocida como
material de vidrio. Tiene usos enmicrobiologa.
Matraz Erlenmeyer
Se utiliza para el armado de aparatos de destilacin o para hacer
reaccionar sustancias que necesitan un largo calentamiento. Tambin
sirve para contener lquidos que deben ser conservados durante mucho
tiempo.
Bagueta
Varilla de Vidrio utilizada para agitar soluciones o lquidos,
con el fin de homogenizar
Probeta
Laprobetaes un instrumentovolumtricoque consiste en un cilindro
graduado de vidrio que permite contener lquidos y sirve para medir
volmenes de forma aproximada.
Cocina elctrica
Unacocina elctricaes una variacin de lacocinaque convierte
laelectricidadencalor
Papel aluminio
Elpapel aluminioes una hoja fina dealuminioque, a consecuencia
de ello, es extremadamente maleable y permite numerosos usos en la
vida cotidiana, entre las que est la de poder hacer de envoltorio
de diversos objetos conductores deelectricidady se utiliza tambin
como papel deembalajepara envolver alimento.
Agua destilada
Elaguadestiladaes aquella sustancia cuya composicin se basa en
la unidad demolculasde H2O. Es aquella a la que se le han eliminado
los iones e impurezas mediante destilacin. La destilacin es un
mtodo en desuso para la produccin de agua pura a nivel industrial.
Esta consiste en separar los componentes lquidos de unamezcla.
Agar plate count
Plate Count Agar (PCA), tambin llamado mtodos estndar de agar
(SMA), es un medio de crecimiento microbiolgico comnmente utilizado
para evaluar o para monitorizar "total" o el crecimiento de
bacterias viables de una muestra. PCA no es un medio selectivo. La
composicin del agar para recuento en placa puede variar, pero por
lo general contiene (w / v): [1]
0,5% de peptona Extracto de levadura 0,25% 0,1% de glucosa 1,5%
de agar pH ajustado a neutro a 25 C
IV. MATERIALES Y METODOS
4.1 Materiales:
Placas Petri Matraz Erlenmeyer Bagueta Probeta Cocina elctrica
Papel aluminio Agua destilada Agar plate count Papel Kraf
4.2 Mtodos
Desarrollar la prctica teniendo en cuenta el siguiente
procedimiento:
a) Preparacin del medio de cultivo
En un matraz disolver el agar en polvo con agua destilada, luego
llevar al fuego para su completa disolucin. Tapar la boca del
Erlenmeyer con cierta cantidad de algodn.
b) Esterilizar el medio de cultivo y las placas Petri
c) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se
quiera analizar, dejando al descubierto las placas Petri por un
espacio de 5 a 10 minutos. cumplido el tiempo necesario, anotar el
lugar, fecha y nombre del estudiante, luego incubar a una
temperatura de 25 a 30"C, por un espacio de 4 a 5 das.
d) Observar el desarrollo de colonias y determinar:
Numero de colonias Frecuencias de tipos de colonias
Caractersticas particulares: color, aspecto general, etc.
V. PROCEDIMIENTO
Preparacin de Cultivo Agar
a) Preparar la muestra de 15 ml por placa Petri.
b) Tenemos una relacin que por cada 60 g de agar se diluye en
940 ml de agua destilada.
60 g.940 ml X 150 ml
X= 9.47 g agarc) En un matraz con 150 ml de agua destilada se
vierte 9.47 g de agar para as obtener nuestro cultivo.d) El cultivo
disuelto se lleva a la cocinilla durante 10 min para terminar de
disolverse.e) Se esterilizolas placas Petri y la solucion de agar a
una presin de 2.5 Kpa con una Temperatura de 10 Cf) Esperar que
enfrie la solucin.g) Vertir 15 ml del cultivo agar en las placas
Petrih) Recoger la muestra: abrir la placa Petri y dejar 5 min al
medio ambiente, luego ponerla a 30 C en la estufa para su
incubacin.i) Luego de 24 h. se observ la formacin de la colonia
microbiana.j) Luego de 48 h. se aprecia en su totalidad la formacin
de colonia microbiana.
Nombre del localKiosco Nuevo
Fecha 13 05 14
Hora 8: 25 am
responsableMamani Nina, ElvisQuispe Gomez, Fiorella
VI. RESULTADOS
En el conteo de la poblacin microbiana se identific a 14 =
0.14x10^2Radio = 4.5 cm
VII. CONCLUSIONES
La formacin de colonias microbiana son distintas de acuerdo al
lugar de la toma de muestra.
VIII. CUESTIONARIO
1. Definir y dar ejemplos de:
a) Bacterias mesfilas.
Microorganismos cuya temperatura ptima de crecimiento se
encuentra dentro de un rango de 25 40 C, dentro de este grupo se
encuentran la mayora de los microorganismos contaminantes de los
productores farmacuticos, alimentos y cosmticos y los
microorganismos patgenos para el hombre EJEMPLO: Neisseria
gonorrhoeae
b) Bacterias termfilas.
Microorganismos cuya temperatura optima es de 50 60 C, hay
algunos con temperaturas optimas an ms altas 80 121 C a estos se
los denomina hipertermofilos o termfilos extremos.
EJEMPLO: Thermus aquaticus (temperatura optima 72 C, crece entre
50 80 C)
c) Bacterias Psicrofilas.
Microorganismos capaces de crecer a bajas temperatura. Existen
varias definiciones de psicrofilas, en un inicio se defina como
psicrofilo a cualquier microorganismo que poda crecer a 0 C. Sin
embargo, parecen haber dos grupos diferentes que pueden crecer a
esta temperatura. El primer grupo est constituido por los
psicrofilos estrictos o aquellos microorganismos que pueden crecer
a 0 C pero cuya temperatura optima es de 15 C. el otro grupo los
constituyen aquellos microorganismos que pueden proliferar a 0 C
pero que tienen temperaturas optimas mas elevadas 20 30 C llamados
psicrofilos facultitativos.EJEMPLO: Pseudomonas
RANGOS DE TEMPERATURA PARA EL CRECIEMINTO DE LOS
MICROORGANISMOS
GRUPOSMINIMO (C)OPTIMO (C)MAXIMO (C)
Bacterias Mesofilas5 - 1530 - 4040 - 47
Bacterias Termofilas40 - 4555 - 7560 - 90
Bacterias Psicrofilos-5 - 512 - 1515 - 20
2. lndicar las diferencias entre mohos y hongos. Ponga
ejemplos
2.1Los Mohos
Los mohos son parte del grupo de los hongos, representan un gran
campo de estudio para la microbiologa, sobre todo por su aplicacin
en los procesos productivos, as como en la vida cotidiana. Los
hongos, son hetertrofos, a diferencia de las plantas, estos, se
alimentan de materia orgnica muerta o de huspedes vivos, cuando
interactan como parsitos.
Los mohos tienen la capacidad de adaptarse a condiciones del
entorno que no todos los microorganismos son capaces de tolerar,
como un nivel de acidez o basicidad en un rango mayor que las
bacterias. Debido a que viven desde 2 hasta un valor de 9 de pH. Su
pH ptimo es aproximadamente 5.6, valor que no todas las especies
bacterianas soportan. Esta propiedad se utiliza para aislar
cultivos de bacterias de cultivos de mohos, debido a que si se
realiza un cultivo de mohos y bacterias, usualmente las bacterias
crecen y se reproducen a un ritmo mucho mayor que los mohos, por lo
tanto, suelen cultivarse a pH bajos, para inhibir el crecimiento
bacteriano y debido a que los mohos soportan un pH menor, se pueden
analizar con mayor facilidad. Adems se suele aadir cierta
concentracin de azcares, puesto que la mayora de bacterias son
intolerantes a ellas.
2.2 LOS HONGOS
Los hongos se reproducen sobre todo por medio de esporas, las
cuales se dispersan en un estado latente, que se interrumpe slo
cuando se hallan condiciones favorables para su germinacin. Cuando
estas condiciones se dan, la espora germina, surgiendo de ella una
primera hifa, por cuya extensin y ramificacin se va constituyendo
un micelio. La velocidad de crecimiento de las hifas de un hongo es
verdaderamente espectacular: en un hongo tropical llega hasta los 5
mm por minuto. Se puede decir, sin exagerar, que algunos hongos se
pueden ver crecer bajo los propios ojos.Las esporas de los hongos
se producen en esporangios, ya sea asexualmente o como resultado de
un proceso de reproduccin sexual. En este ltimo caso la produccin
de esporas es precedida por la meiosis de las clulas, de la cual se
originan las esporas mismas. Las esporas producidas a continuacin
de la meiosis se denominan meiosporas. Como la misma especie del
hongo es capaz de reproducirse tanto asexual como sexualmente, las
meiosporas tienen una capacidad de resistencia que les permite
sobrevivir en las condiciones ms adversas, mientras que las esporas
producidas asexualmente cumplen sobre todo con el objetivo de
propagar el hongo con la mxima rapidez y con la mayor extensin
posible.El micelio vegetativo de los hongos, o sea el que no cumple
con las funciones reproductivas, tiene un aspecto muy simple,
porque no es ms que un conjunto de hifas dispuestas sin orden. La
fantasa creativa de los hongos se manifiesta slo en la construccin
de cuerpos fructferos, los cuales, como indica el nombre, sirven
para portar los esporangios que producen las esporas.
Dibujar las diferentes estructuras bacterianas
BACTERIA MESOFILA
BACTERIA TERMOFILA
BACTERIA PSICROFILA
IX. BIBLIOGRAFIA
Maria A. R. Control Microbiologico Lima Peru.
Collins C. H.- Metodos Microbiologicos
Seeley, H.W.I, Jr and P.J. Van Demark. 1972. Microbes in action.
W.H. Freeman and Company
Benson H. J. 1979. Microbiological Application. A Laboratory
Manual in General Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company
Publishers. Dubuque, Iowa
Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin.
Brock Biologa de los Microorganismos Prentice Hall
Tortora, Funke and Case. Introduccin a la Microbiologa. 9na
Edicin 2007. Editorial Mdica Panamericana
X. ANEXOS N 1
FIGURA 1 : Rangos de Temperatura para el crecimiento
microbiano
