比治山大学現代文化学部紀要，第 9号， 2∞2 Bul. Hijiyama Univ. No.9， 2∞2

Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病〉

和泉嘉己・小村亮・久島公夫・山下美佐子・田中公夫

Takaki IZUMI， Takashi KOMURA， Kimio KUSHIMA，

Misako YAMASHITA and Kimio TANAKA

Abstract

155

The eosinophilia marrow morpholgy showed similarites， characterized as it was by

Myelomonocytic (M4) diffrentiation and eosinophilia. The specificity of the hematogic-cytogenetic

association has led the F AB (coperative) Study Group to single out M4 with eosinophilia as the

separate diaggnostic sub group M4Eo which accounts for 3 % of all AML cases.

Inv(16) (p13q22) is the most common type of chromosome 16 rearrangment and indeed the

most common rearrangement of any type associated with M4 and eosinophilia variant abnormalities

including t (16; 16) (p13 ;q22).

Variant translocations involving 16q22 and chromosome segments other than 16p13 have been

detected， again associated with the same M4 bone marrow morphology with an excess of

eosinophilis.

Cytogenetic analysis using quantitative high sensitivity fluorescence hibridization (FISH) .

Keywords: M4Eo， chromosome aberrations， Inv (16)， FISH

(1 ) はじめに

造血腫蕩のみならず腫蕩における細胞遺伝学は分子生物学の進歩と共に疾病の病態並びに成因追求

に大きな力となっている。個々の白血病症例における形態学的特徴すなわちFAB分類及びその染色

体異常の研究はその意味できわめて重要と思われ，今回はその染色体に着目しいわゆるFAB分類の

M4に見られる，好酸球増多が認められるAMLM4Eoと診

断されたケースでほとんとさがinv(16)の染色体異常が存在

した症例の染色体を主体として検索した。

AMLM4EOの他にも好酸球が著明に増加している白血

病が存在しており これらの症例についても検索した。

この48症例は次ぎの 5つのグループに分類した。

NPち， 1. Hyper eosinophilic syndorome 2. Chronic

eosinophilic leukemia 3. AMLM4Eο4. No.8染色体異常

を有する症例 5.No.16染色体異常を何らかの形で有する

もの (AML，M4Eoを除く)

M4をふくむFAB分類を参考に表 1に示す。

AMLM4Eo診断のクライテリヤとして

表 FAB分類(1982)

f .--AIL ペJL.オキシダーゼL1 1 小リンパ芽琢，小児に多いほ| 大リンパ芽球連在L3 I Burk出 リンパ盟型

11. AML I ペルオキシダーゼ0=.-

Ml I 骨髄芽琢性M2 I 骨値芽様性・前骨髄草案以降への分化M3 I 前骨量稼性M41 ・・単聖書性M5 I 単様性M61 赤白血病M7 I 急性E綾芽様性自

111. myelodysplastic syndrome (MDS) (1 ) primary a伺 ulr，剖 refractoryan側 ia(PARA) (2) primary ac刷 ir剖 sideroblasticanemia (PASA) (3) RA with excess of blasts (RAEB) (4) chronic myelα附脱yticleu嶋mia(CMMol) (5) RAEB in trans旬開削ion

156 和泉尭己・小村亮・久島公夫・山下美佐子・田中公夫

(1) 末梢血あるいは骨髄中に未熟型を含む一定の好酸球増多

(2) 骨髄中に 5%以上の芽球を有する

(3) 未熟な好酸球の組織浸潤

(4) 臨床的に急性白血病の症状のあること

(2) 対象と方法

対象:Eosinophilic leukemia を含む好酸球増多の認められる48症例

形態学的検索:骨髄穿刺液からの血液塗抹標本を作成し検索した(撮影はlQX100倍)

細胞遺伝学的検索(Chromosomeanalysis) :染色体分析は患者から採取した骨髄細胞及びリンパ節等

を用い，図 1の方法で培養処理し，作成した。表2に染色体異常の記載に用いる記号を示した。

次に染色体分析を極めて簡便に，より正確に分析を可能にしたFISH法を用いたのでFISH法に

ついてのベる 6)。

像費分

量E

な

樋

好官同

良

写で択で

信還俗

低を高

る

を

並

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・

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袈紙

-m

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周

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好級官同

奥

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写

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車

同

役りるり

歓切ベ残

定決型抽恒

図 1 血液細胞の染色体観察の作業工程

表2 染色体異常の記載に用いるおもな記号

記号| 意 味

+ 1処色体の付加

一 l染色体の欠失

阪座仕anslo四 lion

inv 1 i金位inversion

d順I1欠失deletion

dup I重複duplicalion

Ins 婦入inserlion

11司民染色体isochromo卸 meder J i康生築色体derivalive

1 chrom情。me

dic Iニ動原体染色体dicenlric

例

+ 8. +12 -7. -y

l (9 ; 22)(q34 ; 11)

inv (16)(pl3q22) del (3)(p13). del (5)(q15q33) dup (I2)(q13→q22)

ins (3 ; 3)(q26 ; q21q26)

i (I7q). i (Iq)

d・r(3) l (3 ; ?)(q31 ; 1)

dic (3 ; 5)(q21 ; q13) chromosom・

T 環状染色体ringchromo田 m・Ir (8)(p22q24) marlマーカー鎌色体marker J +mar

chromosome I Iモザイク 46. XY. l (9; 22)(q34 ; qll)/46. XY

(shorl.y.句mでの記餓例}

47. XY. +21. l (9; 22)(034 ; 011). de¥CllHo31l

¥¥¥ごミアミミこよ染色体敏性染色体数的異常構造異常構造異常に関その築色体の切断の

与する染色体生じているバンド

Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病) 157

FISH法プロトコール

FISH法の標本作製:図 2にFISH法の概略を示す。 FISH法に用いるサンプは通常の方法で作

製した染色体標本や血液の塗抹標本であるo サンプル入手後できるだけ早くカルノア液(メタ

ノール:酢酸の 3: 1混合液)等で固定し， -20t:以下に保存する事が重要であるo 治療後な

ど，得られる細胞数が少なく染色体解析が困難な場合には骨髄細胞からデキストラン処理や

KCIを含む低張液で赤血球を除去し，カルノア固定を行い， -20t:以下に保存しておく o 標本

は空気乾燥法で作製する。作製した標本は室温中で一晩放置，又は65t:恒温槽中で3時間処理

し細胞の脱落を防ぐ。実体顕微鏡下で観察し ハイプリダイズしたい領域をダイヤモンドペン

で軽くマークしておく o 通常9mmX9mmの小さい領域内でも500個以上の細胞核や数個以上

の染色体分裂像が観察可能であるo

プロープの標識:ハイプリダイズに用いるプロープの標識をビオチンd-UTPやデイゴキシゲ

ニンd-ATPを用いニックトランスレーション法で行う。 BRL社とベーリンガーマンハイム社

の標識キットを用い 15t:で1.5時間処理 この状態で変性し このまま熱処理したスライド

上の染色体DNAや核内DNAとハイプリダイズさせるo この時，図 2の上から 3段目の絵にあ

るようにプロープ上の単鎖で残っている部分がスライド上の相補的DNAハイプリダイズするo

Hybr同zation

Det…ficat伽!~ !~!n:tlJJ:， antld igoXyg4 TRITC，側M

of DAPI

図2 FISH法の概略

158 和泉尭己・小村莞・久島公夫・山下美佐子・田中公夫

(3) 結果

①細胞形態学的検索

AMLM4Eoの骨髄標本では図3，4に示す様に，粗大な頼粒を持つ異型好酸球が認められ，好酸球

が有核細胞の35-40%と多数確認された。

表3に好酸球の割合を示す。

②細胞遺伝学的検索 (chrl∞lOSorT砲)

表3に示す様に，染色体異常は，症例 1，2-異常認められる，症例 3，5， 6， 7， 8， 9， 11一以上有

り，症例12-24-異常認められる，症例25.......30はすべてAMLM4Eoの診断を有したもので l例t(16 ;

16) (p13 ; q22)を除いて全てinv(16) (p13q22)の異常が認められた。症例31-36-異常有り，症例37，

38， 39ー異常有り，症例41-48 一異常有り D

図 5，6 inv (16)陽性のAMLM4Eoの症例，図 7はAMLM4Eoのinv(16)の模式図，図 8は

AMLM4Eoの症例に見られたEt(16 ; 16) (p13 ; q22)の転座，函 9inv (16)のFISH法で検出する模式図，

図10はAMLM4Eo症例に見られるinv(16)の異常の 1色を用いたFISH法での検出で16q22部位での

MYH11遺伝子を含むY854E2YACプロープを赤色に呈色したものであるo 図11は図10と同一染色体

のDAPI像，図12，13， 14はEosinphilicleukemia (好酸球性白血病)に見られた染色体異常を示す。

図12はM4Eoのinv(16) (p13q22) ，図13はM4のt(8; 16)，図14はEosinophiliaをMPDのt(2;

7) (P21 ; P22)

(4) 考察

Eosinophilic leukemia (好酸球性白血病)に特徴的に診られる染色体異常は16番染色体の逆位の

inv (16)である。これは急性骨髄性白血病 (AML)，いわゆるFAB分類のM4にみられ，その中の一群

に好酸球増多が顕著なものをM4Eoとして分類されている。

AMLM4Eoとして診断される症例のほとんと:"'/.){inv(16)の染色体異常を，尚AMLM4Eoの出現頻度

はAML全体の約 3%である1)0 AMLM4Eo以外にも好酸球が増加している白血病が存在していると考

えられる D

我々は今回その可能性のある48症例の検討を行った。それらの症例を表 1に示す。

第lグループ(症例 1，2)はhypereosinophilic syndrome (HES)と診断のあるもの， eosinophilic

leukemiaはHESの中に含まれるお)。他にchroniceosinophilic leukemiaの可能性のあるもの(症例 3-

24)でこの中には骨髄増殖性疾患 (MPD)が多く含まれているo

造腫蕩性が好酸球にも含まれているがeosinophilicleukemiaの診断規準となる O その判定には，そ

の症例が染色体異常を持ち，更には好酸球頼粒を持つ細胞が染色体異常を有するか否かを調べる事が

重要であるo この第2グループ(症例 3-24)の中では染色体異常を有する症例 3，5， 6， 7， 8，

9， 11がその可能性を持つ。

好酸球の造腫蕩性の増殖の証明にはクローン性増殖をしめすことと分化の異常の証明が参考とな

るo好酸球の増加にはアレルギー疾患寄生中への感染などで付随的に生ずる事がよく知られており 3)，

造腫蕩性を持つものを非腫蕩性と区別する事が必要である o

第3のグループはAMLM4Eoの症例で、症例24-30で，これらは全例inv(16)かt(16 ; 16) (p13; q22)

の異常を持ち全例腫蕩性である。

第4のグループは 8番染色体の 8plO-p12に異常を有する症例 (31-36)であるo

第5のグループはAMLM4Eo以外の症例で16番染色体の16pll，16q13と16q22に異常を有する症例

Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病) 159

表 3 Eosinophylic leukemialを含む染色体異常

HES(hyper eosinophlic syndrome)

症例No. 性年齢病名MPD/HES

2 M 60 HES

備考

BMEO T

染色体異常

46.XY

46.XY

chronic eosinophilia leukemiaの疑いの人

FMMMFMMMFFFFFMFMFMFFFF-

qda斗

RdaU

可，hHUA3nU4Eqζqd8『

E1uaU守

'nHun3nU4E内

ζ司

d

a『

-nU

'E'E4

，，E咽

E41

唱，.4444E内，

ι内，

ι内，

ι内

£

司

4目「

EauT M

'L M

A

MPD EO WBC↑Th T MPD EO f 20%

63 RAEB BM.EO T 50%

72 MPD PB.EO↑63今6

70 RAEB EO T 43反応性? EO T 76 MPD EO↑

83 WNL EO T MPD EO↑

好酸球性白血病11

RA

MDS

75 MPD

28 MPD

56 MPD

76 MDS.RA

64 MPD WBC T貧血EOT 58 AMLM3→RA EO 1 80 MPD EO T

71 RAI secondary leu EO 1 MDS? EO r

37 MDS

EO↑A-bomb 1

EO t EO T

(acute eosinophic leukemia)

25 M 52 AMLM4EO M 11

26 M AMLM4EO

27 F 64 AMLM4EOorM2

28 M 43 AMLM4EO

29 M AMLM4EO

3o F AMLM4EO

8p10.8p11.8p12(chr8)に異常のある人31 M 86 MDS

32 F 48 MDS→ AMLM4 A-bomb 0.5Gy

33 F 37 AMLM4 11

34 M 62 Ph+ALL再発35 F 37 MPD

36 M 72 ALLL2 A-bomb 2.2km

16p 11.16Q13.16Q22.Q23(chパ6)に異常のある人37 M 68 hyperplastic AL EO↑

38 M 14 MPD pl ! 39 M 72 MDS EO↑Ba ↑

40 M AML

41 M AMLM5

42 F 54 AMLM2

43 M 58 AMLM5

44 M 64 AML

45 F 85 RAEB→AMLM2

46 M 22 RAEB

47 F MDS 貧血48 F MPD WBC 1 EO-?

t(2;7)(p21 ;p22)[1 15] 不可+8.t(1 ;7)(p 11;p 11)

i(17Q)[25/30]

+8.t(3;4)(Q21 ;p16)[6120]

+3mar[1/20] -Y[15120]

46.XY.+17[1/16] 46.XX

46.XX

46.XX

746.XX

46.XY

46.XY

46.XY

46.XX

46.XY

46.XX

46.XX

46.XX

46.XY

inv(16)(p13Q22)

" inv( 16)(p 13Q22)

inv( 16)(p 13Q22)

inv( 16)(p 13Q22)

t(16;16)(p13;Q22)

inv( 16)(p 13922)

del(8)(p 12)

add(8)(p 12)inv(3)(Q21 Q26)

t(8:16)(p21 :p13) 11

det(8)(p 12).add( 16)(Q22).t(9;22)

inv(8)(p 12Q23)

+deパ8)t(8:21)(副主p10)

add(16)inv(16)(p 13Q22)

-16.+mar 3q-.add( 16)(p 11 )

t( 16;21 )(p 11 ;Q22)

t(8;1 0)(p21 ;Q22)

der(16)t(11 ;16)(Q13:Q13) t(3;16)(p 1 O;p 11 ).add(21 )(Q22)

der(16)t(1 ;16)(Q25:Q13).del(5)(Q13Q33)

del(16)(Q23)

add(16)(Q22?)

t(7;16)(032:Q22)

公夫公夫・山下美佐子・田中莞・久島和泉尭己・小村160

EosincがWlicleuk，伺lialに多くみられる染色体異常(自験例+文献例)表4

文献預linv( 16)(p 13q22) t( 16; 16)(p 13;q22) del( 16)(q22)

8p 11-8p 12 13cases MPD +8 11 cases 11

i( 1 7 q) 6cases 11

AMLM4EO 直言実例

''a

，，，.，a，，，

a

，，，， ••

，.，

e'

5cases 5cases 4cases 4cases 3cases 3cases

-y

5q31-5q32 -1

12pll-12p12 +10

+15

である(症例37~48 但し， 40は除く， ND)oこの第 3，4のグループ中で好酸球の増加を持つ症例

は症例37と39の2例に認められた。第 5グループ中で 8番染色体の 8pl1-12に異常を持つ症例には

hyper eosinophilicが見られるという報告がある4)。今回16p11，16q22， 16q23の異常を有する症例

t (8 ; 16)， (p21; p13)， t (16 ; 21) (q24; q22)， t (16 ; 21)， (p11; q22)， der (11) 6 (11 ; 16)，

del (16)等染色体異常のパターンが多岐にわたった。

この様に我々の検索からeosinophilic leukemia (好酸球白血病)で、は16p11の異常やinv(16)， 8p11

の異常が多い事が判明した。

この他これまでの文献例(表4)ではトリソミー 8(+ 8 ) 5)， i (17q)，

どで特に 5q31と12p12の異常の関与が見られる3)。

これらの事例から染色体上の16q22，16p13， 8 p12-p13， 5 q31-q32， 12p12-p13には好酸球の造臆

蕩性の増加に関与する遺伝子が存在すると考えられる O これらの遺伝子から産生される蛋白質は好酸

球の分化，増殖に関与している遺伝子と判断される。又， 5 q31-q32にはGM-CSF等のIL-4，IL-5，

GM-CSFなどのサイトカインの遺伝子がマップされており，これらの遺伝子の発現が染色体異常で異

常となり，サイトカイン合成が増加することで好酸球の増加をもたらすと推定される O

-7， t (5 ; 12)の異常な

まとめ

Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病)はFAB (French Americann British Co-operation Group)

分類におけるAML(骨髄性白血病)のM4に属するその中で好酸球増多が認められた症例を

AMLM4Eoと表す。 M4とM4Eoを比較するとM4Eoが化学療法に対する反応性が良く，予後が良好で

ある。 M4Eoに特異な染色体異常inv(16)を確認し， M4Eoと診断する事が臨床的に極めて意義があり，

その点においても染色体分析を簡便に，より正確に分析可能にしたFISH法を用いた的確な判定は治

療方法にも多大な影響を及ぼすものと思われる。

(5)

参考文献

1.朝長万左男:白血病の治療と予後， Medical Practice 17 (8) ; 127 4 ~ 1281， 2000

2. D.G.Nothen: Hematology of Infancy and Childh∞d， W.B.SAUNDER COMPANY ; pp.797~819， 1987

3.榎原英夫他:好酸球の増加する疾患と治療，日常診療と血液 6(9) ; 1059~ 1067，1996

Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病) 161

4. L.Macdonald， P.]mason : New myeloproliferative disorder associated with chromosomal

translocations involvy 8 p11， a review， Leukemia]. ; 1628~ 1630，1995

5. Weid B.， Rieder H.， Wolf M.， et al : Chronic eosinophilic leukemia (CEL): a distinct

myeloproliferative disease Br， ].Hematology ; 117 ~ 123， 1997

6. Arif M.， et al : Independent c10lli回 oftrisomy 12 and retinoblastma gene deletion in japan悦 Bcell chronic

lymphocytic le叫cemia，detect<白byfluor，白白ncein situ hybridization， Le叫cemia9 ; 1822~ 1827，1995

和泉 莞己(コミュニケーション学科)

小村 嘉(広島大学総合科学部)

久島公夫(敬和学園大学)

山下美佐子(広島文教女子大学)

田中 公夫((賜環境科学技術研究所生物影響部)

(2002.10.22 受理)

162 和泉尭己・小村莞・久島公夫・山下美佐子・田中 公夫

図 3

図4

図5 図6

-Eosinophilic Leukemia (好酸球性白血病) 163

陶 川 町rw

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16 図7 図8

図 9

図10 図11

-164 和泉尭己・小村 嘉・久島 公夫 ・山下美佐子・田中 公夫

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図14