Bacillus anthracis

Bacillus anthracis- opte osobine -Gram pozitivan bacilraspored: pojedinano i u parovima (u direktnom preparatu) ili u lancima (na preparatu iz kulture)nepokretankapsula proteinskog sastava:- polimer D-glutaminske aminokiseline - rijetko se uoava na preparatu iz kulturesporogen: centralna spora koja ne deformie tijelo bacila

Bacillus anthracis- faktori virulencije -kapsulasporaspora 92000

Bacillus anthracis- faktori virulencije -egzotoksin (A-B toksin): 3 komponente

protektivni antigen (B):vezuje se za receptore na razliitim elijama (mozak, srce, crijeva, plua, pankreas, makrofagi...)letalni faktor (A):metaloproteaza smrt elije (nedovoljno poznat mehanizam)edem faktor (A):poveava koncentraciju cAMP edem

Egzotoksin: A-B toksin PA: protektivni antigen = BLF: letalni faktor = AEF: edem faktor = A

Bacillus anthracis- epidemiologija -spore prisutne u zemljiod antraksa oboljevaju prije svega travojedi

Bacillus anthracis - epidemiologija -

Bacillus anthracis - epidemiologija -

Bacillus anthracis- bolesti -koni antraks - inokulacijapluni antraks - inhalacijagastrointestinalni antraks - ingestijaspore u pluima

svaki od 3 oblika antraksa moe prei u sepsu

Koni antraks

Bacillus anthracis- bakterioloka dijagnostika -uzorci: bris lezije na koi, sputum, stolica, krvdirektni preparat: Gram pozitivni bacili u lancima; moe se uoiti kapsula, rijetko sporakapsulakapsulakapsulasputumkrv

Mikrobioloka dijagnoza

konana dijagnoza na osnovu morfolokih, kulturelnih i biohemijskih osobinaBioloki ogled- inokulacija suspenzije miuAscolijeva reakcija termoprecipitacijeELISA, pasivna hemaglutinacija

Bacillus anthracis- bakterioloka dijagnostika -izolacija: krvni agaridentifikacija:ispitivanje mikroskopskih osobina preparat sa kulture: bacili u lancima, centralna spora koja ne deformie tijelo bacila

Bacillus anthracis- bakterioloka dijagnostika -ispitivanje kulturelnih osobinakrupne hrapave (R) kolonije bez hemolize

Bacillus anthracis- bakterioloka dijagnostika -ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina- razlikovanje B. anthracis-a od drugih Bacillus-amolekularne metode (PCR) test pokretljivostinepokretnaB. anthracispokretna

Bacillus anthracis- prevencija i kontrola -vakcinisanje ivotinja (iva atenuisana vakcina)

spaljivanje leeva ivotinjauginulih od antraksavakcinisanje ovaca 1882.

Bacillus anthracis- prevencija i kontrola -potpuna kontrola i eradikacijanije mogua zbog sporavakcine za humanu upotrebu (mrtva cijeloelijska, acelularni filtrat - protektivni antigen)

Kolika je opasnost od napada antraksom?

Antraks je 2001. g. bio namjerno razaslan u potanske ustanove irom Sjedinjenih Drava putem pisama koja su sadravala prah sa antraksom. Centri za kontrolu i spreavanje bolesti klasificiraju antraks kao agens A kategorije. Agensi A kategorije se smatraju najveom prijetnjom za nacionalnu sigurnost zbog lakoe prenoenja, te visoke smrtnosti i ozbiljnosti oboljenja.

Bacillus anthracis: bioloko oruje

Dobili ste pismo!Anthrax pisma, listopad 2001

Bacillus cereus- opte osobine -Gram-pozitivan bacilpokretannema kapsulucentralna spora koja ne deformie tijelo bacilaflagele

Bacillus cereus- faktori virulencije -sporaenterotoksini: - termolabilan - dijarealni toksin (A-B toksin) poveava koncentraciju cAMP dijarea- termostabilan - emetiki toksincereolizin (hemolizin)fosfolipaza C (lecitinaza)

Bacillus cereus- epidemiologija -spore ubikvitarne

Bacillus cereus- bolesti -trovanje hranom:dijarealni tip (meso, povre)

emetiki tip (ria)

Bacillus cereus- bolesti -

infekcije oka: panoftalmitis (nakon traume oka)

oportunistike infekcije (infekcije rana i opekotina, sepsa, meningitis, apscesi mozga, endokarditis...) * kontaminant

Bacillus cereus- bakterioloka dijagnostika -uzorci: ostaci hrane (stolica - esta kolonizacija digestivnog trakta), brisevi....direktni preparat: Gram pozitivni bacili u lancima; moe se uoiti sporaizolacija: krvni agaridentifikacija:ispitivanje mikroskopskih osobina

Bacillus cereus- bakterioloka dijagnostika -ispitivanje kulturelnih osobina:krupne hrapave (R) kolonije, beta hemoliza

Bacillus cereus- bakterioloka dijagnostika -ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina- razlikovanje B. cereus-a od drugih Bacillus-aIdentifikacija na osnovu biohemijskih i kulturelnih osobina

Corynebacterium spp.

Corynebacterium- opte osobine- Gram pozitivni bacili (oblik palice)

Corynebacterium- opte osobine- raspored: kineska slova, X, V, Y...fakultativno anaerobninesporogeninepokretnirastu na obogaenim hranljivim podlogamaneke vrste su dio fizioloke mikroflore

Corynebacterium spp.specifian sastav elijskog zida: polimeri arabino-galaktana, kratkolanane mikoline kiseline: CMN grupa(Corynebacterium Mycobacterium Nocardia grupa)

Corynebacterium diphtheriae - faktori virulencije -DIFTERIJSKI TOKSINadherencija1tox gen2 bakteriji donosi lizogeni bakteriofag ( fag)samo lizogeni sojevi stvaraju toksin

Somatski Ag-glikolipidni, zajedniki za CMN grupu (visok procenat masnih kiselina u elijskom zidu)Cord faktor-nosilac virulencijeEgzotoksin:faktor A(invazin i nekrozin) i faktor B(inaktivira sintezu elijskom zidu)Produkuju ga sojevi inficirani beta fagom

Corynebacterium diphtheriae - faktori virulencije -DIFTERIJSKI TOKSINABC region R i T regioni

Corynebacterium spp.Corynebacterium diphtheriae striktno patogena i najvanija vrstadifteroidi1ostale vrste

humani patogenkapljina infekcija; direktan kontaktkliconotvoCorynebacterium diphtheriae - epidemiologija -

PATOGENEZAC.diphtheriae vee se na sluznicu respiratornog trakta ili kou gdje se razmnoava i lui difterini toksin to dovodi do nekroze sluzniceToksinB-fragment - vee na stanine receptore A (aktivni) fragment ulazi u stanicu, dovodi do smrti stanice Neke stanice pokazuju veu osjetljivost na toksin: srane (miokarditis), perifernih ivaca (demijelinizacija) i bubrega (tubularna nekroza) Nastaje sivkastosmea pseudomembrana (drijelo, tonzile, nos ili sve do traheobronhalnog stabla) est uzrok smrti je guenje zbog aspiracije membrane.

Respiratorna difterija

Kutana difterija patogeneza: adherencija multiplikacija i produkcija toksinalokalni i sistemski efektiCorynebacterium diphtheriae - bolesti -

lokalni efekti: nekroza epitelnih elijainflamacija pseudomembrane1sistemski efekti: apsorpcija toksina miokard, periferni nervni sistem (paralize),...Corynebacterium diphtheriae - bolesti -

KLINIKA SLIKADifterija prednjega dijela nosa gusti mukopurulentni iscjedak iz nosa sistemski simptomi su minimalni do umjereniTonzilarna difterija najei je oblik difterije nagli poetak s vruicom, malaksalou, grloboljomna tonzilama sivkaste membrane sa zelenkastim krpicama ili crnim nekrotinim dijelovima, koje se ire i na uvulu, meko nepce, orofarinks i nazofarinks tekoe s gutanjem, oteklina i limfadenopatije vrata (volovski vrat)

pseudomembrane"bull-neck1"

kutana difterija1

KOMPLIKACIJEMiokarditisnakon 1 2 tjedna bolesti, esto ve u toku poboljanja. od asimptomatskog miokarditis do zatajenja srca i cirkulatornog kolapsa Neuroloke komplikacijepolineuritis 20%neuropatije perifernih i kranijalnih ivacaparaliza mekog nepca i stranjeg farinksa smetnje gutanja

Direktni preparat (Gram, specijalno bojenje za metahromatske granule)

Kultivisanje- krvni agarLffler podloga (koagulisan serum)insdalova podlogaselektivne podloge Clauberg II (sa kalijum teluritom)Biotipovi:mitis, gravis i intermediusKolonije su crne, glatke, sjajne sa ili bez uzdignutog centra

Corynebacterium diphtheriae - dijagnostika -bris rane

Identifikacijaispitivanje mikroskopskih osobina

Corynebacterium diphtheriae - dijagnostika -metahromatske granule

ispitivanje kulturelnih osobinaC. diphtheriae: kolonije na krvnom agaruC. diphtheriae: kolonije na podlozi sa teluritom

ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina sa Hisovim eerima (glukoza, maltoza i saharoza)

ispitivanje toksigeninosti izolata C. diphtheriaeElekov test1PCR(detekcija tox gena u uzorcima, kulturi)

LIJEENJEDifterini antitoksin (konjski hiperimuni antiserum) neutralizira cirkulirajui toksin, ali ne i onaj koji se ve vezao za stanice ili uao u njihovu unutranjost tako da nema specifine terapije miokarditisa ili neuritisaAntibioticipenicilin ili eritromicin 7-14 dana

vakcina: toksoid (anatoksin) difterijskog toksina DiTePer (DTP)Corynebacterium diphtheriae - prevencija -

Difteroidi oportunisti dio fizioloke mikroflore kliniki znaaj u porastuZnaajne vrste:C. JeikeiumC. amycolatumC. urealyticumC. pseudotuberculosisC. ulceransbolniki oportunistiki patogeniurinarne infekcijemogu da nose tox gen

kultivisanje (krvni agar, podloge sa teluritom)identifikacija: razlikovanje na osnovu biohemijskih testovaizvetaj iz laboratorije:"Difteroidi""Corynebacterium spp.

antibiogram (u zavisnosti od situacije) - problem rezistencije na antibiotikeTumaenje nalaza: procjena znaajnostiDifteroidi bakterioloka dijagnostika

Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes - opte osobine -Gram pozitivan bacil, esto tvori palisadepokretan na 25C, ali ne i na 37Cfakultativno anaerobanpsihrotolerantan - raste i na 4C, ali je optimalna temperatura za rast 37C

Listeria monocytogenes - Gram-pozitivni bacili -

Rod ListeriaKlasifikacija L.monocytogenes L.ivanovii L.seeligeri L.welshimeri L.iinnocua L.grayi L.murray

KultivacijaObine hranjive podloge, bolje uz dodatak krvi Aerobni uvjeti, bolje uz 5-10% CO2 Kolonije male, okrugle, glatke, prozirne, sivkasto-bijele Ispod kolonija uska zona -hemolize Pozitivan CAMP test sa vrstom S.aureus Hidrolizira eskulin Selektivne podloge za izdvajanje listerija

- hemoliza

CAMP test - L.monocytogenes iS.aureus

Oxford agar

Selektivna i diferencijalna podloga Litij-klorid (selektivnost) sprijeava rast gram-negativnih i nekih gram-pozitivnih bakterija Eskulin i ioni eljeza (diferencijacija) Eskulin 6,7-dihidroksi-kumarin + Fe crne kolonije

Oxoid kromogena podloga zalisterije

-glukozidaza (svelisterije) plavekolonije Fosfolipaza C(patogene listerije) prozirni prsten oko kolonija

Antigenski sastav

O i H antigen serotipizacija (5 serogrupe i 16 serotipova)Hemolizin - listeriolizin OFosfolipaza C (specifina za patogene listerije)Lipidna frakcijaProteinska frakcijaKompleks Ei de Patocka-slian endotoksinu

Listeria monocytogenes- faktori virulencije -fakultativno intracelularna bakterija invazija elija i intercelularno irenjeinternalin (membranski protein): olakava ulazak u eliju (makrofag, epitelna elija)listeriolizin O (hemolizin): razgrauje membranu fagocitne vakuole (stvara pore)fosfolipaza: hidrolizuje membranu fagozoma i membranu elije to omoguava irenje u neinficirane elijeActA protein: nalazi se na povrini bakterije i indukuje reorganizaciju aktinskih vlakna elije domaina

Listeria monocytogenes- intracelularna patogeneza -zeleno: aktincrveno: L. monocytogenes

Listeria monocytogenes- intracelularna patogeneza -zeleno = aktin;crveno = L. monocytogenes

Listeria monocytogenes- bolesti -imunitet primarno posredovan T limfocitima 1. intrauterina infekcija: granulomatosis infantiseptica (apscesi u jetri, slezini, pluima, CNS-u) mrtvoroenost2. neonatalna listerioza: meningitis, meningoencefalitis, sepsa, pneumonija3. listerioza odraslih: najee asimptomatskiimunokompromitovani: meningitis, meningoencefalitis, sepsa...novoroene: makulopapulozna ospa

Listeria monocytogenes - epidemiologija -iroko rasprostranjena u priroditransmisija:1. transplacentarna transmisija2. u toku poroaja(kolonizacija vagine)

Listeria monocytogenes - epidemiologija -3. hrana: nepasterizovano mleko, sir, sirovo povre,...

Putevi prenoenjaTransplacentarni putAerogeni put (inhalacijom aerosola)Kontakt sa inficiranom ivotinjomSpolni kontaktAlimentarni put

Dijagnostika listerioze

Materijal za pretragu:Vaginalni i cervikalni bris, krv iz vene i pupanika, placenta, likvor Izolacija i identifikacija uzronika Imunofluorescencija, test aglutinacije na ploici pomou dijagnostikih seruma, RVKhistoloka pretraga Bioloki pokus: Antonov test inokulacija u konjuktivu kunia ili zamorca nakon 24-36h gnojni keratokonjuktivitis

Listeria monocytogenes- bakterioloka dijagnostika -uzorci: krv, likvor, sadraj apscesa, bris vaginejednostavni nutritivni zahteviidentifikacija: biohemijske osobineserologija: nepouzdana !!!

Zastupljenost

Proirena svugdje u okolini Tlo, voda, povrina biljaka, silaa, kanalizacija, probavni sustav mnogih vrsta ivotinja i ovjekaSirova i obarena hrana, mlijeko i mlijeni proizvodi, mekani sirevi, meso, povre i morska hrana

Listeria monocytogenes- prevencija i kontrola -mikrobioloka ispravnosthrane

...KRAJ

*Coryne-palica;*1 Imaju karakteristian raspored na preparatu, jer posle podele ostaju spojeni*Sve tri pomenute grupe bakterija imaju slian sastav elijskog zida, ali su samo Mikobakterije prave acidoalkoholo rezistentne bakterije. *1 Ne zna se nita o njihovim faktorima adherencije2 tox gen kodira difterijski toksin*Difterijski toksin je AB toksin (A-active i B-binding su dve polipeptidne subjedinice spojen disulfidnom vezom). C (katalitiki), R (receptor vezujui) i T (translokacijski) su 3 funkcionalna regiona u okviru odgovarajuih polipeptidnih subjedinica.*1 To su uslovno patogene bakterije, a neke od njih su deo nae fizioloke mikroflore*1 Na mestu infekcije, usled oteenja tkiva formiraju se skrame sa fibrinogenom, bakterijama, mrtvim elijama, itd.*1 Limfadenopatija*1 Pojavljuju se samo lokalni efekti, ne i sistemski*1 Bojenje po Najseru?2 Telurit je faktor selektivnosti: toksian je za ostale bakterije, a ne i za Corynebacterium diphtheriae.***1 Zasniva se na imunoprecipitaciji. Dolazi do dvostruke imunodifuzije: difunduju i toksin i antitelo.Izvodi se tako to se u Petrijevu olju (u kojoj se nalazi hranljiva podloga) stavi traka (na slici je postavljena vertikalno-Stef. Prim.) natopljena difterijskim antitoksinom (antitela). Zatim se zaseju bakterijski sojevi C. Diphtheriae (horizontalne linije na slici-Stef. Prim.).itanje rezultata testa: Bakterijski toksin difunduje u podlogu, a ka njima kreu i antitoksina antitela (na mestu njihovog susreta dolazi do precipitacije-formiraju se bele linije precipitacije).