(Informações da aula) Isto foi o que eu escrevi em aula... precisamos acrescentar mais

Informações bibliográficas.

O que é reticulócito?

Hemácia jovem que perdeu o núcleo, mas tem organelas suficientes para completar a síntese da eritropoese no baço. É encontrado no sangue periférico no valor normal entre 0,5 - 1,5% do nº de hemácias. A contagem dos reticulócitos precisa ser concluída até 6h - 7h após a coleta para não haver erros, pois mesmo in vitro os reticulócitos continuam produzindo hemácias.

Objetivo:

A contagem de reticulócitos tem por objetivo avaliar a velocidade da eritropoese e principalmente avaliar como está a medula óssea do paciente.

Se o paciente for portador de alguma anemia como por exemplo, a ferropriva ou a megaloblástica , o médico precisa saber se a dose do medicamento está adequada e se está fazendo o efeito esperado, encontrando no resultado do exame um aumento do número de reticulócitos.

Outro exemplo é se o paciente estiver fazendo uma hiperhemólise, isso significa que há uma destruição excessiva do nº de hemácias, aumentando o nº de reticulócitos.

Materiais e métodos:

Microscópio óptico Sangue Pipeta Pasteur Estante para tubos Tubos vazios Lâminas Corante azul de cresil brilhante Coloração supra vital Luvas Caixa Coletora para descarte (Descarpack) Termômetro Aparelho para banho- maria ????

Utilizamos a proporção de 1:1 de sangue e corante, homogenizamos a amostra de sangue a ser utilizado e num tubo vazio colocamos 2 gotas de sangue e 2 gotas de corante azul de cresil brilhante e deixamos em banho -maria por 10 minutos a temperatura de 37graus , após este processo colocamos 1 gotas da solução na lâmina e fazemos o esfregaço, esperamos secar adicionamos 1 gota de óleo mineral e visualizamos no microscópio optico com objetiva de 100x ( imersão), contamos 10 campos microscópicos para obter o resultado do exame.

Discussão:

O resultado do exame é igual ao nº de reticulócitos encontrados dividos por 10.

Na 1º amostra foram encontrados 210 reticulócitos, correspondendo a 21%. Na 2º amostra forma encontrados 200 reticulócitos, correspondendo a 20% e na 3º amostra forma encontrados 180 reticulócitos, correspondendo a 18%.

Conclusão

Os resultados encontrados definem um aumento do nº de reticulócitos nas 3 amostras devido ao histórico do paciente.

Bibliografia:

Relatório de outra turma para termos uma ideia... Não é para ser igual!!!!

Introdução.

Os reticulócitos são eritrócitos jovens; contêm restos do ácido nucleico ribossomal, que estava presente em quantidades maiores no citoplasma dos eritroblastos que lhes deram origem. Os ribossomos são precipitados e corados com corantes como o azul-brilhante-de-cresil ou novo-azul-de-metileno para formar um precipitado azul ou púrpura de grânulos e filamentos.

Essa reação ocorre somente em colorações supra vitais, com sangue não-fixado. Aspectos morfológicos distinguem estágios de maturação dos reticulócitos. Os mais imaturos têm grande quantidade de material precipitável; nos menos imaturos, só são vistos pequenos pontos ou curtos filamentos. Os reticulócitos podem classificar-se em quatro grupos, do mais imaturo, com grande grumo de reticulina, ao mais maduro, com escassos grânulos.

Se uma distensão é seca, fixada com metanol e corada com algum corante básico, os reticulócitos aparecem como eritrócitos, com uma coloração basófila difusa.

A perda final do material basofílico ocorre na periferia, particularmente no baço. Crê-se que o processo de amadurecimento dura de 2 a 3 dias, dos quais 24h são gastos na circulação. O número de reticulócitos no sangue periférico é um reflexo acurado de atividade eritropoética, assumindo que sejam liberados normalmente da medula e persistam na circulação pelo período normal. Essa hipótese nem sempre é válida, pois um estímulo eritropoético provoca liberação prematura para a circulação. O período de maturação da periferia desses reticulócitos estimulados pode durar até 3 dias. Nesses casos, é possível deduzir esse alongamento do período de maturação e calcular uma contagem corrigida, com dados obtidos da medidado turnover do ferro plasmático. A informação suficiente entretanto, obtém-se só com a contagem de reticulócitos expressa como porcentagem e melhor ainda, tendo-se contagem de eritrócitos, como número absoluto.

Objetivo( corantes)

Melhores resultados são obtidos com novo-azul-de-metileno do que com azul-brilhante-de-cresil: o material filamentoso cora-se de modo mais nítido e uniforme; a qualidade corante do azul-brilhante-de-cresil varia de partida a partida. O azur B purificado é um substituto satisfatório, pois apresenta a vantagem de não precipitar e ser obtido em forma pura. É usado de modo idêntico ao novo azul-de- metileno.

Discussão (Método)

Dissolver 1,0g de novo-azul-de-metileno ou azur B em 100ml de tampão fosfato isosmótico, pH 6,5. Misturar 2 ou 3 gotas da solução corante com 2 a 4 volumes de sangue do paciente, anticoagulado com EDTA em tubo de vidro 75 x 10 mm. Conservar a mistura a 37C por 15 a 20 minutos. Ressuspender as células por agitação delicada a fazer distensões do material em lâminas de vidro de maneira usual. Quando secas, examinar sem fixar ou contracorar.

O volume apropriado de sangue a acrescentar à solução do corante para melhor resultado depende da contagem de eritrócitos. Adicionar uma quantidade maior de sangue anêmico e menor de sangue e menor de sangue policitêmico do que de sangue normal. Em uma preparação bem corada, o material reticulo-filamentoso cora-se em azul-escuro, e os eritrócitos não reticulados coram se difusamente em matriz de azul-esverdeado pálido. As lâminas não devem ser contracoradas: o material retículo-filamentoso não fica melhor definido, e o corante precipitado pode causar confusão. Além disso, corpos de Heinz não serão visíveis em preparações fixadas e contracoradas. Se a preparação for examinada em contraste de fases, tanto os reticulócitos como os demais eritrócitos ficam muito nítidos. Com tal técnica, os reticulócitos tardios, caracterizados pela presença de restos de filamentos, são facilmente distinguidos de células com corpos de inclusão. As contagens satisfatórias podem ser feitas em sangue (não corado) conservado por pelo menos 24 horas, embora a contagem tenda a cair discretamente após 6 a 8 horas, a menos que o sangue seja conservado a 4C.

Conclusão (Contagem)

Escolher uma área de distensão onde os eritrócitos estejam íntregos, e a coloração boa. Um erro comum é fazer as distensões muito delgadas; contudo, os eritrócitos não devem sobrepor-se. Para a contagem, usar a objetiva de imersão x100 e, se possível, oculares com um diafragma ajustável. Na falta, um diafragma de papel ou cartolina, com um quadrado de 4 mm de lado cortado no centro, inserido em uma das oculares, serve como um substituto um pouco menos conveniente.

O procedimento de contagem deve ser apropriado ao número de reticulócitos presentes. Um grande número de células deve ser examinado, se desejar uma exatidão razoável, quando o número de reticulócitos for baixo. Quando o número for inferior a 10%, examinar campos sucessivos até contar, ao menos, 100 reticulócitos e contar eritrócitos em, ao menos, 10 campos, para ter uma média do número por campo. É essencial que as lâminas sejam bem distendidas para garantir uma distribuição homogênea das células nos campos sucessivos.

Quando o número de reticulócitos exceder 10%, o exame de um número relativamente pequenos de células será suficiente para se obter um erro-padrão < 10%.

Um método alternativo baseia-se na “amostragem balanceada”, usando-se uma ocular de Miller. Trata-se de um disco de cristal, que é inserido em uma das oculares, tendo um quadrado central, em um canto do qual há um quadradinho menor, com um nono da área total. Os reticulócitos são contados em toda a área do quadrado grande e os eritrócitos apenas no quadrado pequeno, o número de campos a examinar para obter-se um grau desejado de precisão depende da proporção de reticulócitos.

Bibliografia

Células sanguíneas: Um guia prático 4 edição; Bain, Barbara J

Hematologia prática:Lewis, Bain E Bates