Kromatografi Lapis Tipisssss

7/27/2019 Kromatografi Lapis Tipisssss

1/4

Kromatografi Lapis Tipis

Penggunaan KLT

KLT digunakan secara luas untuk analisis solute-solut organic terutama dalam bidang biokimia,farmasi, klinis, forensic, baik untuk analisis kualitatif dengan cara membandingkan nilai Rf

solute dengan nilai Rf senyawa baku atau untuk analisis kualitatif.

Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen dalam campuran,

identifikasi senyawa, memantau berjalanya suatu reaksi,menentukan efektifitas pemurnian,

menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta untuk memantau kromatografi

kolom, melakukan screening sampel obat.

1.Analisis Kualitatif

KLT dapat digunakan untuk uji identifikasi senyawa baku. Parameter pada KLT yang

digunakan untuk identifikasi adalah nilai Rf. Dua senyawa yang dikatakan identik jika

mempunyai nilai Rf yang sama jika diukur pada kondisi KLT yang sama.

Untuk meyakinkan identifikasi dapat dilakukan dengan menggunakan lebih dari satu fase

gerak dan jenis pereaksi semprot. Teknik spiking dengan menggunakan senyawa baku yang

sudah diketahui sangat dianjurkan untuk lebih memantapkan pengambilan keputusan

identifikasi senyawa.

2.Analisis Kuantitatif

Ada dua cara yang digunakan untuk analisis kuantitatif dengan KLT. Pertama, bercak

diukur langsung pada lempeng dengan menggunakan ukuran luas atau dengan teknik

densitometri. Cara kedua adalah dengan mengerok bercak lalu menetapkan kadar senyawa

yang terdapat dalam bercak tersebut dengan metode analisis yang lain misalkan dengan

metode spektrofotometri. Pada cara pertama tidak terjadi kesalahan yang disebabkan oleh

pemindahan bercak atau kesalahan ekstraksi, sementara pada cara kedua sangat

memungkinkan terjadi kesalahan karena pengambilan atau karena ekstraksi.

Pada system serapan dapat dilakukan dengan model pantulan atau transmisi. Pada cara

pantulan, yang diukur adalah sinar yang dipantulkan, yang dapat menggunakan sinar tampak

maupun ultraviolet. Sementara, cara transmisi digunakan dengan menyinari bercak dari satu

sisi dan mengukur sinar yang diteruskan pada sisi lain.


2/4

Gangguan utama pada system serapan adalah fluktuasi latar belakang (background) yang

dapat dikurangi dengan bebrapa cara, misalnya dengan menggunakan alat berkas ganda,

system transmisi dan pantulan secara bersamaan, atau dengan system dua panjang

gelombang.

3.Analisis Preparatif

Analisis preparatif ditujukan untuk memisahkan analit dalam jumlah yang banyak lalu

senyawa yang telah dipisahkan ini dianalisis lebih lanjut, misalkan dengan spektrofotometri

atau dengan teknik kromatografi lain.

Pada KLT preparatif ini, sampel ditotolkan dalam lempeng dengan lapisan yang besar lalu

dikembangkan dan dideteksi dengan cara yang non-destruktif. Bercak yang mengandung

analit yang dituju selanjutnya dikerik dan dilakukan analisis selanjutnya.

Penggunaan KLT Untuk Analisis Obat

KLT biasanya merupakan metode pilihan pertama jika seseorang ingin memisahkan satu

campuran. KLT digunakan secara luas untuk analisis obat. Berikut adalah penggunaan KLT

untuk analisis beberapa sediaan farmasi:

Obat (Sediaan) Fase Diam Fase Gerak Deteksi

Asetaminofen

(serbuk)

Silika gel Heksan-aseton

(75;25)

UV

Akonitin nitrat

(serbuk)

Silika (KOH 0,1

M, MeOH)

NH4OH-MeOH

(1,5;100)

Iodoplatinat yang

diasamkan

Akriflavin (serbuk) Silika (KOH 0,1 M,MeOH)

NH4OH-MeOH

(1,5;100)

UV 254 nm

Adrenalin asam sitrat

(serbuk)

Silika Asam format-aseton-

metilen klorida(0,5:50:50)

Etilendiamin/

ferisianida

Adrenalinhidroklorida (serbuk)

Silika (KOH 0,1 M,MeOH)

NH4OH-MeOH

(1,5;100)

KMnO4 yangdiasamkan

Alanin (serbuk) Silika n-butanol-air-asam

asetat (3:1:1)

Ninhidrin


3/4

Albenazol (serbuk) Silika Metal-klorid-asam

asetat-eter (6:1:1)

UV panjang

gelombang pendek

Allopurinol (serbuk) seluloa Butanol-amonium

hidroksida 5M

(jenuh)

UV 254 nm

Amiodaron

hidroklorida (serbuk

dan tablet)

Silika HF254 Kloroform-metanol-

asam asetat (80:15:5)

UV 254 nm

Amitriptilin (serbuk) Silika Methanol-kloroform

NH4OH (15:135:1)

UV 154 nm

Amobarbital

(serbuk)

Silika Etanol-kloroform-

NH4OH (15:80:5)

UV 154 nm

Amoksisilin (tablet,

kapsul, suspensi)

Silika Methanol-pirimidin-

kloroform-air

(90:10:80:10)

Ninhidrin

Ampisilin (kapsul,suspensi oral)

Silika Aseton-toluen-air-asam asetat

(650:100:100:25)

Ninhidrin

Apronal atau

apronalid (serbuk)

Silika Kloroform-aseton

(4:1)

KMnO4 yang

diasamkan

Vitamin C

(serbuk)

Silika Methanol-aseton-air

(20:40:3)

UV

Atropin (serbuk) Silika Kloroform-aseton-dietilamin (5:4:1)

Iodoplatinat

Atropine sulfat

(injeksi)

Silika Kloroform-

dietilamin (9:1)

Iodoplatinat

Azatadin maleat Silika Toluene-2-ropanol- UV 154 nm


4/4

Kromatografi Lapis Tipis Kinerja Tinggi (KLT-KT)

KLT-KT yang dimaksudkan untuk mendapatkan pemisahan dan hasil analisis yang lebih baik

disbanding dengan KLT biasa. Kelebihan KLT-KT disbanding dengan KLT terletak pada fase

diamnya dimana pada KLT-KT ini, fase diam yang digunakan berukuran sangat halus dan pori-

porinya seragam serta tebal lapisannya hanya 0,1 mm. Ukuran partikel fase gerak yang lebih

kecil ini akan menyebabkan semakin besarnya jumlah lempeng teoritis, karenanya pemisahan

menjadi lebih efisien.

Keunggulan KLT-KT lainnya adalah bahwa sample yang digunakan hanya sedikit hingga bercak

penotolannya berdiameter antara 0,1-0,5 mm. Lempeng dengan ukuran 10 x 10 cm sudah cukup

analisis, karenanya pada KLT-KT ini juga dapat menghemat fase gerak dibanding dengan KLT

biasa.

Fase diam yang digunakan pada KLT-KT hanya silika gel dan tidak menggunakan fase diam

lainnya sebagaimana dalam KLT-konvensional.

Penyiapan sampel pada KLT-KT serta pemilihan fase geraknya dapat dikatakan tidak ada

perbedaan dengan KLT, hanya saja konsentrasi sampel pada KLT-KT ini lebih kecildibandingkan dengan KLT biasa. Pada KLT-KT, resolusi sudah akan nampak nyata pada jarak

pengembangan sampel antara 3-6 cm.

(Sumber : buku Kimia Farmasi Analisis oleh Ir. Ibnu Gholib Gandjar)

(serbuk) dietilamin ((10:10:1)

Kaptopril (serbuk) silika Benzene-asam asetat

(75:25)

Uap iodium

Klorsoksazon

(serbuk)

silika Heksan-dioksan

(63:37)

UV 254 nm

Documents

Kromatografi Lapis Tipisssss