Laporan Akhir Penetapan Kadar Formalin Dengan Spektro-Visibel

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM KIMIA ANALISIS

PENETAPAN KADAR FORMALIN DENGAN METODE

SPEKTROFOTOMERI VISIBLE

OLEH :

KELOMPOK 7

GOLONGAN III

NI LUH GEDE TIARA YANTI (1108505049)

PUTU EKA MASMITHA UTAMI DEWI (1208505096)

I GDE PASEK PADMANABA (1208505097)

M. AVERIL PRIMA PUTRA RASHID (1208505098)

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2014

1

PENETAPAN KADAR FORMALIN DENGAN METODE

SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL

I. TUJUAN

Menetapkan kadar formalin dengan metode spektrofotometri visibel

II. DASAR TEORI

2.1 Formalin

Gambar 1. Struktur Kimia Formalin(OECD SIDS, 2002)

Formalin merupakan larutan yang terdiri atas 37% formaldehid dalam air.

Menurut Farmakope Indonesia Edisi 3, kadar formaldehid tidak kurang dari

34,0% dan tidak lebih dari 38,0% dan dapat dicampur dengan air dan dengan

etanol (95%) P. Pemeriannya berupa cairan jernih, tidak berwarna atau hampir

tidak berwarna; bau menusuk, uap merangsang selaput lendir hidung dan

tenggorokan. Jika disimpan di tempat dingin dapat menjadi keruh. Formalin dapat

dicampur dengan air dan dengan etanol (95%) P (Depkes RI, 1979).

Formalin adalah nama dagang larutan formaldehid dalam air dengan kadar

35-40%. Formalin biasanya mengandung golongan alkohol (metanol) sebanyak

10-15% yang berfungsi sebagai stabilisator supaya formaldehidnya tidak

mengalami polimerasi. Formalin merupakan bahan pembunuh hama atau

desinfektan, bahan pengawet mayat, menurut BPOM kadar formalin dalam

makanan adalah sekitar 1,88-413,89 ppm (mg/kg) (Sudjarwo dkk., 2013).

Berbagai metode untuk identifikasi formaldehid/formalin telah diusulkan.

Metode spektrofotometri telah digunakan secara luas untuk determinasi dari

formaldehid. Sebagian besar dari metode ini berdasarkan reaksi dari formaldehid

dengan reagen organik dan/atau reagen anorganik,seperti reagen Schiff,

2

pararosanilin, p-fenilendiamin, asam kromotropat, p-aminoazobenzen, brilliant

cresyl blue-bromate, dan malachite green-sulfite (Li et al, 2007)

Nash (1953) memperkenalkan metode kolorimetri kedalam analisis kimia

untuk HCHO (formaldehid). Metode ini berdasarkan pada reaksi Hantzsch

(gambar 2) dari formaldehid dengan asetilaseton atau 2,4-pentanadion dalam

ammonia (Li et al, 2007). Ketika formaldehid ditambahkan ke dalam larutan

netral dari asetilaseton dan garam ammonium, warna kuning perlahan-lahan

terbentuk yang memperlihatkan terjadinya sintesis dari diasetilhidrolutidin (DDL)

(Nash, 1953). DDL memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang 412

nm (Salem et al, 2010).

Gambar 2. Reaksi Formalin dengan Reagen Nash (Li et al, 2007).

2.2 Spektrofotometri UV-Vis

Spektroskopi didefinisikan sebagai interaksi antara radiasi elektromagnetik

(REM) dengan sampel. Jika panjang gelombang REM yang digunakan

bersesuaian dengan panjang gelombang ultraviolet-visibel maka disebut dengan

spektroskopi ultraviolet-visibel yang biasa disingkat dengan UV-vis. Radiasi

elektromagnetik atau cahaya merupakan suatu bentuk energi yang tingkah lakunya

digambarkan dengan sifat-sifat gelombang dan partikel. Sifat-sifat optis radiasi

elektromagnetik seperti difraksi paling sesuai dijelaskan dengan menggambarkan

cahaya sebagai suatu gelombang. Beberapa interaksi antara radiasi

elektromagnetik dengan materi seperti absorpsi dan emisi dapat disebut dengan

memperlakukan cahaya sebagai suatu partikel (Gandjar dan Rohman, 2012).

3

Pada umumnya terdapat dua tipe instrumen spektrofotometer uv-vis,

yaitu single-beam dan double-beam.

a. Single-beam instrument

Single-beam instrument dapat digunakan untuk kuantitatif dengan

mengukur absorbansi pada panjang gelombang tunggal. Single-beam

instrument mempunyai beberapa keuntungan yaitu sederhana, harganya

murah, dan mengurangi biaya yang ada merupakan keuntungan yang nyata.

Beberapa instrumen menghasilkan single-beam instrument untuk pengukuran

sinar ultra violet dan sinar tampak. Panjang gelombang paling rendah adalah

190 sampai 210 nm dan paling tinggi adalah 800 sampai 1000 nm (Skoog,

1996).

b. Double-beam instrument

Double-beam dibuat untuk digunakan pada panjang gelombang 190

sampai 750 nm. Double-beaminstrument dimana mempunyai dua sinar yang

dibentuk oleh potongan cermin yang berbentuk V yang disebut pemecah

sinar. Sinar pertama melewati larutan blangko dan sinar kedua secara serentak

melewati sampel, mencocokkan fotodetektor yang keluar menjelaskan

perbandingan yang ditetapkan secara elektronik dan ditunjukkan oleh alat

pembaca (Skoog,1996).

Hukum Lambert Beer menyatakan bahwa, bila cahaya monokromatik

melewati medium tembus cahaya, laju berkurangnya intensitas oleh bertambahnya

ketebalan, berbanding lurus dengan intensitas cahaya. Hal ini berarti bahwa

intensitas cahaya yang dipancarkan berkurang secara eksponensial dengan

bertambahnya ketebalan medium yang menyerap. Dengan menyatakan bahwa

lapisan manapun dari medium itu yang tebalnya sama akan menyerap cahaya

masuk dengan fraksi yang sama (Bassett et al., 1994).

Hukum Lambert Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan oleh

larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan.

A = - log T = - log It / Io = . b . C

4

Dimana :

A = Absorbansi dari sampel yang akan diukur

T = Transmitansi

Io = Intensitas sinar masuk

It = Intensitas sinar yang diteruskan

= Koefisien ekstingsi

b = Tebal kuvet yang digunakan

C = Konsentrasi dari sampel

(Gandjar dan Rohman, 2007).

Dalam Hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan

oleh larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan.

Dalam Hukum Lambert Beer tersebut ada beberapa pembatasan yaitu :

- Sinar yang digunakan dianggap monokromatis.

- Penyerapan terjadi dalam suatu volume yang mempunyai penampang luas

yang sama.

- Senyawa yang diserap dalam larutan tersebut tidak tergantung terhadap

yang lain dalam larutan tersebut.

- Tidak terjadi peristiwa fluoresensi atau fosforesensi.

- Indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan.

(Gandjar dan Rohman, 2012)

Berikut adalah hal-hal yang harus diperhatikan dalam analisis

spektrofotometri UV-Vis yaitu :

a. Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis

Hal ini perlu dilakukan jika senyawa yang dianalisis tidak menyerap pada

daerah tersebut. Cara yang digunakan adalah dengan merubah menjadi

senyawa lain atau direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang

digunakan harus memenuhi beberapa persyaratan yaitu :

- Reaksinya selektif dan sensitif

- Reaksinya cepat, kuantitatif dan reprodusibel

- Hasil reaksi stabil dalam jangka waktu yang lama


5

b. Waktu Operasional

Tujuannya adalah untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil. Waktu

operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu pengukuran

dengan absorbansi larutan (Gandjar dan Rohman, 2007).

c. Pemilihan Panjang Gelombang

Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah

panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Untuk memilih

panjang gelombang maksimal, dilakukan dengan membuat kurva hubungan

antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada

konsentrasi tertentu.

Ada beberapa alasan menggunakan panjang gelombang maksimal, yaitu:

- Pada panjang gelombang maksimal, kepekaannya juga maksimal karena

pada panjang gelombang maksimal tersebut perubahan absorbansi untuk

setiapsatuan konsentrasi adalah yang paling besar.

- Di sekitar panjang gelombang maksimal, bentuk kurva absorbansi datar

dan pada kondisi tersebut hukum Lambert-Beer akan terpenuhi.

- Jika dilakukan pengukuran ulang, maka kesalahan yang disebabkan oleh

pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali, ketika digunakan

panjang gelombang maksimal


d. Pembuatan Kurva Baku

Dibuat seri larutan baku dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai

konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi

diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbansi

dengan konsentrasi Bila hukum Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku

berupa garis lurus. Kemiringan atau slope adalah a (absortivitas) atau

(absortivitas molar). Kurva baku sebaiknya sering diperiksa ulang.

Penyimpangan dari garis lurus biasanya disebabkan oleh: kekuatan ion yang

tinggi, perubahan suhu, dan reaksi ikutan yang terjadi (Gandjar dan Rohman,

2007).

6

e. Pembacaan Absorbansi Sampel atau Cuplikan

Absorban yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2-0,8

atau 15%-70% jika dibaca sebagai transmittan. Anjuran ini berdasarkan

anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan T adalah 0,005 atau 0,5%.


III. ALAT DAN BAHAN

3.1 Alat

Ball filler

Botol vial

Gelas beaker

Kuvet

Labu ukur 5mL, 10mL,25 mL

Pipet tetes

Pipet volume

Spektrofotometer UV-visible

3.2 Bahan

Amonium asetat

Aquadest

Asam asetat

Asetil aseton

Larutan Formalin 37% b/v

IV. PERHITUNGAN

4.1 Perhitungan pembuatan Reagen Nash

Reagen Nash yang dibuat sejumlah 50 ml, sehingga jumlah masing masing

bahan adalah :

a. Amonium asetat = 50 ml

100 ml x 15 gr = 7,5 gr

b. Asam Asetat = 50 ml

100 mlx 0,3 ml = 0,15 ml

7

c. Asetil Aseton = 50 ml

100 ml x 0,2 ml = 0,1 ml

d. Aquadest = 50 ml

100 ml x 100 ml = add 50 ml

4.2 Pembuatan 10 mL Larutan Stok Formalin 2% b/v

Diketahui : Larutan formalin yang tersedia = 37% b/v

Konsentrasi yang diperlukan = 2% b/v

Volume larutan yang diperlukan = 10 mL

Ditanya : Volume larutan formalin 37% b/v yang diambil = .. ?

Penyelesaian :

M1V1 = M2V2

37 % V1 = 2 % . 10 ml

V1 = 2

gr100 ml x 10 ml

37 gr

100 ml

V1 = 0,54 mL

4.3 Pembuatan 10 mL larutan Formalin 100 g/mL dari larutan formalin 2% b/v

Diketahui : Konsentrasi formalin = 2% b/v

V Formalin 100 g/ml = 10 mL

2 % b/v = 2 gram/100ml

= 2 x 104g/ml

Ditanya : Volume larutan formalin 2% b/v yang diambil = .. ?

Penyelesaian :

C1V1 = C2V2

2 x 104 g/ml . V1 = 100 g/ml x 10 ml

V1 = 100

gml x 10 ml

2 x 104g

ml

.V1 = 0,05 ml

8

4.4 Perhitungan konsentrasi setiap larutan standar

Diketahui : Vlarutan stok formalin standar1 = 0,1 mL

Vlarutan stok formalin standar2 = 0,2 mL

Vlarutan stok formalin standar 3 = 0,3 mL



Vmasing-masing larutan = 5 mL

Clarutan stok formalin = 100 g/mL

Ditanya : Konsentrasi masing-masing larutan seri = ?

Penyelesaian :

- Untuk standar 1

Cstok formalin x Vstok formalin = Clarutan formalin x Vlarutan formalin

100 g/mL x 0,1 mL = Clarutan formalin standar 1 x 5 mL

Clarutan standar formalin standar 1 = 100 g /mL x 0,1 mL

5 g /mL

= 2 g/mL

- Untukstandar 2



Clarutanstandar formalin standar 2 = 100 g /mL x 0,2 mL

5 g /mL

= 4 g/mL

- Untuk standar 3



Clarutanstandar formalin standar 3 = 10 g/mL x 0,3 mL

5 g/mL

= 6 g/mL

- Untuk standar 4


100g/mL x 0,4 mL = Clarutan formalin standar 4 x 5 mL

9

Clarutanstandar formalin standar 4 = 100 g /mL x 0,4mL

5 g /mL

= 8 g/mL

- Untuk standar 5


100 g/mL x 0,5 mL = Clarutanformalin standar 5 x 5 mL

Clarutan standar formalin standar 5 = 100 g /mL x 0,5mL

5 g /mL

= 10 g/mL

4.5 Pembuatan Larutan Sampel Formalin

Diketahui : Clarutan stok formalin = 100g/mL

V larutan stok formalin yang digunakan = 0,25 mL

V larutan formalin yang ingin dibuat = 5 mL

Ditanya : Clarutan stok formalin yang digunakan = ?

Penyelesaian :

CstokFormalin x Vstok Formalin = ClarutanFormalin x V larutanFormalin

100 g/mL x 0,25 mL = ClarutanFormalin x 5 mL

CstokFormalin = 25 g

5ml

= 5 g/mL

V. PELAKSANAAN PERCOBAAN

5.1 Prosedur Kerja

5.1.1 Pembuatan Larutan Formalin 2% b/v dari larutan Formalin 37% b/v

Diambil 0,54 mL larutan formalin 2% b/v dengan pipet volume

Dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan ditambahkan aquadest hingga

tanda batas dan digojog hingga homogen

5.1.2 Pembuatan Larutan Stok Baku Formalin 100 g/mL

Larutan formalin 2% b/v diambil sebanyak 0,05 mL menggunakan pipet

volume dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL

10

Ditambahkan aquadest hingga tanda batas kemudian digojog hingga

homogen

5.1.3 Pembuatan Reagen Nash

Ditimbang 7,5 gram Ammonium Asetat (NH4CH3COO) dan dimasukkan

dalam beaker glass

Ditambahkan 0,15 mL Asam Asetat (CH3COOH) dan 0,1 mL Asetil

Aseton. Dilarutkan dengan Aquadest hingga larut dan dimasukkan ke

dalam labu ukur 50 mL

Ditambahkan aquadest hingga volume 50 mL dan digojog hingga

homogen

Dimasukkan kedalam botol kaca gelap serta dibungkus dengan

aluminium foil

5.1.4 Pembuatan Larutan Standar

Dipipet masing-masing 0,1 mL, 0,2 mL, 0,3 mL, 0,4 mL dan 0,5 mL

larutan formalin 100 g/mL lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 5 mL,

ditambahkan aquadest sampai batas 5 mL

Kemudian masing-masing larutan dimasukkan ke dalam 5 buah vial yang

berbeda

Dari masing-masing vial tersebut dipipet 1 mL, dimasukkan ke dalam

vial baru, dan ditambahkan dengan 2 mL reagen Nash dan 2 mL

aquadest

Didiamkan kurang lebih selama 30 menit

5.1.5 Pembuatan Larutan Sampel Formalin

Sebanyak 0,35 mL larutan stok baku formalin 100 g/mL dipipet,

kemudian ditempatkan pada labu ukur 5 mL

Ditambahkan aquadest hingga tanda batas dan digojog. Larutan sampel

kemudian ditampung pada botol vial

11

Diambil 1 ml larutan sampel dan ditambahkan 2 ml reagen Nash dan 2

ml aquadest. Didiamkan kurang lebih selama 30 menit.

5.1.6 Penentuan Kadar Formalin

Diukur absorbansi salah satu larutan standar pada rentang panjang

gelombang 350-450 nm, ditentukan panjang gelombang maksimumnya

Dilakukan pengukuran absorbansi masing-masing seri larutan standar

pada panjang gelombang maksimum kemudian dibuat kurva kalibrasi

dan persamaan regresi liniernya

Ditetapkan kadar sampel formalin dengan mengukur absorbansinya

secara spektrofotometri visibel

Diukur absorbansi sampel formalin pada panjang gelombang

maksimumnya

Ditetapkan kadar formalin dengan memanfaatkan persamaan regresi

linear dari 5 variasi larutan standar dan dihitung persentase perolehan

kembali.

5.2 Skema Kerja

5.2.1 Pembuatan Latutan Formalin 2% b/v dari larutan 37% b/v

5.2.2 Pembuatan Larutan Stok Baku Formalin 100 g/mL

\

Diambil 0,54 mL larutan formalin 2% b/v dengan pipet ukur

Ditambahkan aquadest hingga 10 mL ke dalam labu ukur, digojog sampai

homogen

Larutan formalin 2% b/v diambil sebanyak 0,05 mL menggunakan pipet

volume

12

5.2.3 Pembuatan Reagen Nash

5.2.4 Pembuatan Larutan Standar

5.2.5 Pembuatan Larutan Sampel Formalin

Dibuat 5 variasi kadar larutan standar

Diambil larutan stok baku sebanyak 0,1 mL; 0,2 mL; 0,3 mL; 0,4

mL; 0,5 mL

Dimasukkan ke dalam labu ukur 5 mL, ditambahkan dengan aquadest

hingga tanda batas

Ditimbang 7,5 gram ammonium Asetat (NH4CH3COO), dimasukkan ke

dalam beaker glass

Ditambahkan 0,15 mL Asam Asetat (CH3COOH) DAN 0,1 mL Asetil

Aseton

Diencerkan dengan aquadest hingga 50 mL dan digojog sampai

homogen

Dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL. Ditambahkan aquadest hingga tanda

batas kemudian digojog hingga homogen.

Dipipet sebanyak 0,35 mL larutan stok baku formalin 100 g/mL

13

2.2.6 Penentuan Kadar Formalin

Ditentukan panjang gelombang maksimumnya dandilakukan pengukuran

absorbansi masing-masing seri larutan standar pada panjang gelombang

maksimum

Diukur absorbansi salah satu larutan standar pada rentang panjang

gelombang 352 nm -451 nm dengan spektrofotometer UV-Vis

Dilakukan pengukuran absorbansi larutan sampel pada panjang gelombang

maksimum dengan spektrofotometer UV-Vis

Dibuat kurva kalibrasi larutan standar dan persamaan regresi liniernya

Dihitung nilai persentase perolehan kembali

Dihitung kadar sampel berdasarkan nilai absorbansi sampel dan persamaan

regresi linier larutan standar

Dipipet 1 ml larutan sampel dan ditambahkan 2 ml reagen Nash dan 2 ml

aquadest

Didiamkan kurang lebih selama 30 menit.

Ditempatkan pada labu ukur 5 mL, ditambahkan aquadest hingga tanda

batas dan digojog. Larutan ditampung pada vial

14

VI. HASIL PERCOBAAN

6.1 Data Pengamatan

6.1.1 Tabel Penimbangan

Sebelum dilakukannya kegiatan praktikum, terlebih dahulu dilakukan

pembuatan larutan baku dan larutan sampel dari formalin dengan melakukan

pengukuran sebagai berikut;

Tabel 1. Tabel Penimbangan Bahan

No Nama Bahan Jumlah

1 Pembuatan Reagen Nash

Amonium Asetet 7,5372 gram

Asam Asetet 0,15 mL

Asetil Aseton 0,1 mL

Aquadestilata ad 100 mL

2 Pembuatan Formalin 2 % b/v

Stok Formalin 37 % b/v 0,54 mL


3 Pembuatan Formalin 100 g/mL

Formalin 2 % b/v 0,05 mL


4 Pembuatan Larutan Standar I

Formalin 100 g/mL 0,1 mL


5 Pembuatan Larutan Standar II



6 Pembuatan Larutan Standar III



7 Pembuatan Larutan Standar IV


15


8 Pembuatan Larutan Standar V



9 Pembuatan Larutan Sampel



10 Pembuatan Larutan Siap Ukur

Larutan Standar/Seri masing-masing 1 mL

Aquadest untuk tiap Standar/Seri 2 mL

Reagen Nash untuk tiap Standar/Seri 2 mL

6.1.2 Hasil

Setelah larutan standar formalin dan sampel siap ukur selesai, dilakukan

proses analisa dengan menggunakan metode spektrofotometri. Dimana formalin

dianalisa pada rentang panjang gelombang 352-450 nm, dimana diperoleh hasil

absorbansi sebagai berikut;

Tabel 2. Hasil Pengamatan Larutan Formalin (Standar III)

No Panjang Gelombang

(nm)

Absorbansi larutan Standar

6 g/ mL

1 352 0,193

2 355 0,222

3 358 0,254

4 361 0,286

5 364 0,325

6 367 0,341

7 370 0,375

8 373 0,414

9 376 0,451

10 379 0,489

16

Dihitung pula absorbansi kelima standar dari variasi larutan formalin pada

panjang gelombang yang diperoleh dari analisa sebelumnya, serta diukur

absorbansi larutan sampel. Diperoleh hasil sebagai berikut;

Tabel 3. Hasil Analisa Absorbansi Larutan Seri dan Sampel pada maks

No Larutan Absorbansi pada 412 nm

1 Standar I, 2 g/mL 0,381

11 382 0,529

12 385 0,567

13 388 0,605

14 391 0,640

15 394 0,673

16 397 0,700

17 400 0,724

18 403 0,744

19 406 0,758

20 409 0,767

21 412 0,770

22 415 0,760

23 418 0,749

24 421 0,733

25 424 0,712

26 427 0,684

27 430 0,653

28 433 0,616

29 436 0,576

30 439 0,533

31 442 0,489

32 445 0,442

33 448 0,397

17

2 Standar II, 4 g/mL 0,487

3 Standar III, 6 g/mL 0,770

4 Standar IV, 8 g/mL 0,904

5 Standar V, 10 g/mL 1,145

6 Sampel 0,630

6.1.3 Spektrum Formalin dengan Reagen Nash pada Rentang Panjang Gelombang

Diperoleh spektrum formalin yang direaksikan dengan reagen Nash dan

diamati pada rentang panjang gelombang 352 nm sampai 450 nm sebagai berikut:

Gambar 3. Spektrum Formalin dalam Reagen Nash.

6.2 Perhitungan Hasil Percobaan

6.2.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi Larutan Seri Formalin

Diketahui : Absorbansi Standar I = 0,381

Konsentrasi Standar I = 2 g/mL

Absorbansi Standar II = 0,487

Konsentrasi Standar II = 4 g/mL

Absorbansi Standar III = 0,770

Konsentrasi Standar III = 6 g/mL

Absorbansi Standar IV = 0,904

Konsentrasi Standar IV = 8 g/mL

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450

Ab

sorb

ansi

Panjang gelombang

Spektrum Formalin dalam Pereaksi Nash

Formalin

18

Absorbansi Standar V = 1,145

Konsentrasi Standar V = 10 g/mL

Ditanya : Persamaan Regresi Linear Formalin = . . . . ?

Penyelesaian :

Dilakukan perhitungan menggunakan kalkulator yang di atur pada mode

Regresi Linear, dan dimasukkan konsentrasi dan nilai absorbansi yang

diperoleh ke dalam kalkulator. Sehingga diperoleh persamaan sebagai

berikut:

y = bx + a

y = 0,09725 x + 0,1539

Dimana y merupakan absorbansi dan x merupakan konsentrasi. Dari

persamaan diatas diperoleh kurva dengan nilai r sebesar 0,980. Dimana,

dengan nilai r diatas 0,95 dan mendekati 1,00 merupakan nilai regresi yang

baik dan dapat digunakan untuk menghitung konsentrasi sampel. Adapun

kurva kalibrasinya sebagai berikut:

Gambar 4. Kurva Kalibrasi Larutan Seri Formalin

6.2.2 Perhitungan Kadar Sampel Formalin

Diketahui : Absorbansi Sampel : 0,630

Persamaan Regresi Linear : y = 0,09725x + 0,1539

Ditanya : Kadar Formalin dalam Sampel = . . . . ?

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

0 2 4 6 8 10 12

abso

rban

si

konsentrasi

Kurva kalibrasi Seri Baku FormalinLinear (Seri Baku Formalin)

19

Penyelesaian :

mLg 4,9 x

0,09725

0,4761 x

0,4761 x 0,09725

0,1539 - 0,630 x 0,09725

0,1539 x 0,09725 0,630

0,1539 x 0,09725 y

Jadi, sampel yang memberikan absorbansi 0,630 memiliki konsentrasi

atau kadar sebesar 4,9 g/mL

6.2.3 Perhitungan Peresen Perolehan Kembali (Recovery Point) Sampel Formalin

Diketahui : Kadar Formalin dalam Sampel = 4,9 g/mL

Kadar Formalin Sampel Sebenarnya = 5 g/mL

Ditanya : Peresen Perolehan Kembali (Recovery Point) = . . . . . ?

Penyelesaian :

% Recovery =

x 100 %

= 4,9g/mL

5 g/mL x 100 %

= 98 %

VII. PEMBAHASAN

Kegiatan praktikum kali ini bertujuan untuk menentukan kadar formalin

dalamm sampel dengan menggunakan metode spektrofotometri visibel. Dimana

analisia spektrofotometri merupakan analisis kuantitaif yang pengukurannya

berdasarkan daya serapan radiasi elektromagnetik oleh sampel, dimana radiasi

elektromagnetik dalam hal ini berupa sinar monokromatis yang diserap oleh

gugus fungsional kromofor. Formalin merupakan senyawa non-absorbing atau

senyawa yang tidak dapat menyerap sinar monokromatis yang dikarenakan

formalin tidak memiliki gugus kromofor. Oleh karena itu, terlebih dahulu

20

formalin direaksikan dengan pereaksi tertentu untuk menghasilkan larutan

berwarna yang dapat menghasilkan gugus kromofor dan menjadikan formalin

menjadi senyawa turunan berupa absorbing derivative yang dapat diukur dengan

spektrofotometrer. Umumnya formalin direaksikan dengan reagen Nash dan hasil

reaksinya dapat diukur di daerah visibel pada panjang gelombang maksimum 412

nm (Gandjar dan Rohman, 2012; Wiryawan dkk., 2008).

Sebelum melakukan penetapan kadar formalin dalam sampel, dibuat larutan

formalin dengan kadar 100 g/mL. Pada laboratorium tersedia larutan formalin

dengan konsentrasi 37% b/v sehingga perlu dilakukan pengenceran. Pengenceran

pertama dari larutan formalin 37% b/v menjadi 2% b/v dengan cara dipipet 0,54

mL larutan stok formalin 37% b/v dan dilarutkan dengan aquadest 10 mL.

Kemudian larutan formalin 2% b/v diencerkan menjadi 100 g/mL dengan

memipet 0,05 mL larutan formalin 2% b/v dan dilarutkan dengan aquadest 10

mL. Digunakan pelarut aquadest dalam pengenceran dikarenakan formalin dapat

bercampur dengan air dan alkohol, tetapi tidak bercampur dengan kloroform dan

eter (Windholz, 1976).

Kemudian dibuat formalin dengan lima variasi konsentrasi, yaitu 20

g/mL, 40 g/mL, 60 g/mL, 80 g/mL dan 100 g/mL. Dibuat variasi

konsentrai ini bertujuan untuk memperoleh komponen dasar perhitungan dalam

persamaan regresi linear dan untuk memperoleh kurva kalibrasi yang baik.

Dimana dengan menggunakan lima variasi konsentrasi diharapkan dapat

mengurangi kesalahan pengukuran yang diakibatkan oleh penggunaan variasi

dalam persamaan regresi yang sedikit. Dari masing-masing larutan dengan

berbagai konsentrasi tersebut, dipipet 1 mL dan ditambahkan dengan 2 mL reagen

Nash dan 2 mL aquadest yang direaksikan dalam botol vial. Larutan didiamkan

selama kurang lebih 30 menit. Pada umunya, beberapa metode pengembangan

untuk deteksi dan penetapan kadar formalin yang direaksikan dengan reagen Nash

diperlukan waktu reaksi minimal 10 menit dan maksimal 30 menit 2 menit. Pada

praktikum kali ini, dipilih waktu 30 menit yang diharapkan mampu menghasilkan

kompleks warna yang lebih stabil sehingga larutan yang dibuat dapat diukur di

daerah visibel, selain itu proses pendiaman juga bertujuan untuk mengoptimalkan

21

reaksi formalin dengan reagen Nash dikarenakan laju reaksi pembentukan

absorbing derivative dari formalin yang lambat (Li et al., 2007). Dimana pereaksi

yang digunakan harus memenuhi beberapa persyaratan yaitu; reaksinya selektif

dan sensitif, reaksinya cepat, kuantitatif dan reprodusibel serta hasil reaksinya

stabil dalam jangka waktu yang lama (Gandjar dan Rohman, 2007). Berikut

adalah reaksi pembentukan absorbing derivative dari formalin yaitu

diasetilhidrolutidin (DDL);

Gambar 5. Reaksi Formalin denga Reagen Nash memebntuk Diasetilhidrolutidin

yang emrupakan absorbing derivate (Li et al., 2007).

Larutan dengan berbagai konsentrasi yang telah direaksikan dengan perekasi

Nash selama 30 menit, selanjutnya diukur absorbansinya pada rentang panjang

gelombang 352-450 nm. Pengukuran ini dilakukan dengan instrumen

spektrofotometer yang telah dikalibrasi dengan larutan blanko terlebih dahulu.

Kalibrasi alat spektrofotometer dengan blanko penting dilakukan sebelum

melakukan analisis untuk mengurangi kesalahan serapan yang disebabkan oleh

serapan oleh pelarut ataupun komponen lain selain analit dalam larutan uji yang

dalam hal ini berupa preaksi. Blanko yang digunakan berupa reagen Nash,

dikarenakan dalam larutan uji dimungkinkan masih terdapat komponen dari

reagen Nash yang belum bereaksi sepenuhnya dengan formalin dan dalam reagen

Nash sudah terdapat aquadest yang juga digunakan sebagai pelarut larutan uji dan

peraksi (Gandjar dan Rohman, 2007).

Dilakukan analisis pada rentang panjang gelombang 352 nm sampai 450 nm.

Panjang gelombang ini merupakan panjang gelombang visibel larutan formalin

yang dimana dalam rentang panjang gelombang tersebut diharapkan terdapat

absorbansi maksimum. Dari pustaka, absorbansi maksimum dari formalin terdapat

22

pada gelombang dengan panjang 412 nm. Pengukuran ini dilakukan dengan

menggunakan larutan yang konsentrasinya berada pada posisi medial atau diantara

konsentrasi rendah dan tinggi yaitu 60 g/mL. Dengan konsentrasi tersebut,

diharapkan absorbansi yang dihasilkan pada rentang panjang gelombang memiliki

kesesuaian dengan absorbansi yang dihasilkan oleh larutan pada konsentrasi

rendah dan tinggi pada setiap panjang gelombang pengukuran (Salem et al, 2010).

Hasil dari analisis formalin pada rentang panjang gelombang menunjukkan

bahwa panjang gelombang maksimum dari formalin dalam praktikum sudah

sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa panjang gelombang maksimum

untuk penetapan kadar formalin adalah 412 nm. Pada panjang gelombang 412 nm,

diperoleh absorbansi paling maksimal dengan nilai 0,770. Panjang gelombang

maksimum ini selanjutnya digunakan untuk mengukur absorbansi larutan seri atau

variasi lima konsentrasi dan larutan sampel. Hasil yang diperoleh adalah sebagai

berikut: Pada konsentrasi 20 g/mL menghasilkan absorbansi sebesar 0,381; pada

konsentrasi 40 g/mL menghasilkan absorbansi sebesar 0,487; konsentrasi 60

g/mL menghasilkan absorbansi sebesar 0,770; pada konsentrasi 80 g/mL

menghasilkan absorbansi sebesar 0,904 dan pada konsentrasi 100 g/mL

menghasilkan absorbansi sebesar 1,145.

Dari nilai absorbansi diatas, diperoleh persamaan regresi linear sebesar y =

0,09725x + 0,1539. Dengan harga r = 0,980, dimana harga r dari suatu persamaan

regresi liear yang dapat digunakan untuk menetapkan kadar suatu sampel adalah

dari 0,95 hingga 1,00. Sehingga persamaan regresi linear diatas dapat digunakan

untuk menetapkan kadar formalin dalam sampel.

Dilakukan pengukuran absorbansi larutan sampel pada panjang gelombang

412 nm, dan diperoleh absorbansi sebesar 0,630. Absorbansi tersebut kemudian

dimasukkan kedalam persamaan regresi linier dan dihitung untuk memperoleh

nilai x yang merupakan kadar atau kosentrasi. Diperoleh konsetrasi atau kadar

formalin dalam larutan sampel sebesar 4,9 g/mL. Dimana, konsentrasi formalin

dalam sampel sebenarnya adalah 5 g/mL, sehingga diperoleh persen perolehan

kembali (recovery point) dari formalin dalam larutan sampel sebesar 98 %.

23

VIII. KESIMPULAN

Spektrofotometri visibel merupakan metode analisis instrumental, dengan

sepktrofotometer yang panjang gelombangnya berada pada sinar tampak atau

visibel (400-800 nm), sehingga senyawa yang akan dianalisis harus berwarna atau

dibuat berwarna. Penentuan konsentrasi suatu sampel dapat menggunakan kurva

kalibrasi, dan sampel yang ditetapkan kadarnya dalam praktikum kalini memiliki

konsentrasi sebesar 4,9 g/mL.

24

DAFTAR PUSTAKA

Bassett, K., R. C. Denney, G. H. Jeffery, dan J. Mendham. 1994. Buku Ajar

Vogel; Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik, Edisi 4. Jakarta: EGC

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1979. Farmakope Indonesia, Edisi

III. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.

Gandjar, I.G. dan A.Rohman. 2007. Kimia Analsis Farmasi. Yogyakarta: Pustaka

Pelajar.

Gandjar, I.G. dan A.Rohman. 2012. Analisis Obat secara Spektrofotometri dan

Kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.

Li, Qiong, Piyanete, Sritharathikhun and Motomizu, Shoji. 2007. Development of

Novel Reagent for Hantzsch Reaction for the Determination of

Formaldehyde by Spectrophotometry and Fluorometry. Analytical

Sciences. Vol. 23, hal.413-417

Nash, T. 1953. The Colorimetric Estimation of Formaldehyde by Means of the

Hantzsch Reaction. Biochemistry Journal. Vol. 55, hal.412-421

OECD SIDS. 2002.SIDS Initial Assessment Report for SIAM 14: Formaldehyde.

Paris: UNEP Publication.

Salem, M.Z.M., Bhm, Martin, Srba, Jaromr, and Barck, tefan. 2010.

Evaluation of Test Methods for Determination of Formaldehyde Emission

from Composite Wood Products. Proceedings of the International

Convention of Society of Wood Science and Technology and United

Nations Economic Commission for Europe. 11-14

Skoog. W.H. 1996. Fundamental of Analytical Chemistry. 6th

edition. USA:

Saunders Publishing.

Sudjarwo, Poedjarti S, Pramitasari A.R. 2013. Validasi Spektrofotometri Visible

Unutk Penentuan Kadar Formalin Dalam Daging Ayam. Berkala Ilmiah

Kimia Farmasi. Vol.2 No 1.

Windholz, M. 1976. The Merck Index : Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and

Biologicals. 9th edition.USA : Merck & Co.,Inc.

25

LAMPIRAN

Gambar 1. Spektrum Formalin 6 g/mL pada Rentang Panjang Gelombang 352

nm samapi 450 nm.

Documents

Laporan Akhir Penetapan Kadar Formalin Dengan Spektro-Visibel