UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA El Ao de la Diversificacin Productiva y Fortalecimiento de la Educacin

INFORME N6

TTULO: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOINTEGRANTES: 20121330 Chiok, Ana Paula 20130086 Cornejo, Antuane de Ftima 20130433 Ramrez, Fiorella20120465 Teodoro, Rosalvina

GRUPO: (E*) Jueves 11am 1pm

MESA N: 3

MICROBIOLOGIA GENERAL2015I. INTRODUCCIN

Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para cultivar bacterias, hongos y otros microorganismos. stos no pueden estudiarse individualmente debido a su microscpico tamao, por lo que slo pueden ser estudiados en poblaciones; pero para ello, es necesario cultivarlos en medios artificiales.Los medios de cultivo para los microorganismos pueden ser slidos, lquidos o semislidos. Los medios lquidos se pueden transformar en slidos al adicionarles agar, gelatina o gel de slice. Al disminuir la cantidad del agente solidificante, se obtiene el medio semislido. Antes de preparar un medio de cultivo, es necesario entender sus necesidades bsicas. Cualquier medio debe contener los siguientes factores: agua, carbono, energa, nitrgeno, minerales, pH y factores de crecimiento. Los componentes de los medios son muy variados. La eleccin se basa en el propsito del estudio. Existen medios sintticos preparados con una composicin exacta conocida y medios no-sintticos que contienen ingredientes de composicin imprecisa. Un medio de cultivo apropiado para el crecimiento de microorganismo debe contener los nutrientes esenciales; por ejemplo, para el aislamiento de bacterias, la mayora de los medios son ricos en protenas o derivados como proteosas, peptonas, pptidos o aminocidos.Existen diferentes tipos de medios de cultivo como el qumicamente definido, cuyo objetivo es el de crecimiento de quimioauttrofos y fotoauttrofos; el medio complejo para el crecimiento de la mayora de los microorganismo quimiohetertrofos; el medio reductor, donde crecen microorganismos anaerbicos estrictos; el medio selectivo, cuyo objetivo es la supresin de microorganismo no deseados y el favorecimiento del crecimiento de los microorganismos deseados; el medio diferencial, para la diferenciacin de colonias de los microorganismo deseados de otras; y el medio de enriquecimiento, cuyo objetivo es similar al medio selectivo pero destinado a aumentar la cantidad de microorganismos deseados hasta niveles detectables. Antes de 1930, la preparacin de los medios de cultivo inclua la incorporacin y medicin de cada uno de los componentes del medio e incluso la preparacin de la mayora de los medios de uso rutinario es un proceso mucho ms simple, debido a que estn disponibles comercialmente en forma de polvos deshidratados completos y solo hay que disolverlos en la cantidad de agua indicada, ajustarles el pH, distribuirlos en tubos y esterilizarlos.

1.1 Objetivos

Preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes caractersticas para el cultivo de microorganismos

II. MARCO TERICO:

2.1 MEDIOS DE CULTIVOUn medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metablica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriendo nos a las bacterias con exclusividad. ( VERA ,2000) Las exigencias nutritivas de las bacterias y de los microorganismos en general, son muy variadas; mientras que unas son capaces de crecer en condiciones ms diversas, otras tienen necesidades mucho ms determinadas; por ello los medios tienen que ser adecuados a la especie microbiana que se desea cultivar y de acuerdo a los fines que se persigue. La preparacin de los medios es importante, no solo para conseguir el desarrollo de los microorganismos fuera de su ambiente natural, sino porque en su crecimiento en medios adecuados los microorganismos demuestran una serie de propiedades de gran valor para su identificacin o utilizacin.

2.2 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 2.2.1 CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

AGAR :

Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar bacteriolgico el componente dominante es un polisacrido que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepcin de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de los 40C, dependiendo de su grado de pureza.

EXTRACTOS. Su preparacin consiste en que ciertos rganos o tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hgado, cerebro, semillas, etc.) son extrados con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboracin de los medios de cultivo. Los ms utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta.

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestin enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja casena carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en ppticos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales. FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario aadir a los medios de cultivo de algunos patgenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo, sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones aspticas directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo despus de que este haya sido auto clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que tambin aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Un ejemplo podra ser la catalasa presente en las clulas sanguneas destruye el perxido de hidrgeno que algunas bacterias que no poseen este enzima acumulan como producto del metabolismo del oxgeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo del crecimiento bacteriano a veces, es necesario aadir algunos componentes al medio de cultivo. Debido a que la mayora de as bacterias son neutrfilas, se suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos bipotsicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la desviacin del pH. INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces aadir indicadores acido-base que nos lo indiquen. AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerofilos anaerobios se aaden estos agentes reductores siendo, los mas empleados la cisteina y el tioglicolato entre otros. AGENTES SELECTIVOS. La adicin de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo. As, por ejemplo, la adicin de cristal violeta, sales biliares, azida sodica, telurito potasico, antibiticos, etc., a la concentracin adecuada har que acten como agentes selectivos frene a determinados microorganismos.

2.3 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.Segn el manual de laboratorio de microbiologa escrito por Manrique L.2.3.1. MEDIOS LIQUIDOS.

a) NO SINTTICOS. Leche, solucin acuosa de substratos naturales como peptona, extracto de levadura, extracto de carne, etc. La composicin es indefinida.b) SINTTICOS. Son medios cuyos constituyentes qumicos son definidos. Aminocidos, azucares, o factores de crecimiento, como vitaminas.

2.3.2 MEDIOS SLIDOS.

a) INICIALMENTE LQUIDOS, aquellos presentan este estado en el momento en que son preparados. A su vez pueden ser:

i) Reversibles: los que una vez slidos, pueden ser lquidos nuevamente, sin alterar sus caractersticas nutritivas; generalmente haciendo uso del calor. Agar comn, gelatina, etc.ii) Irreversibles: los que una vez solidificados no pueden ser licuados nuevamente por medios del calor, porque tienen elementos termolbiles en su constitucin. Agar sangre, agar huevo, etc.

b) INICIALMENTE SLIDOS, trozos de papa, zanahoria, etc.

Por la funcin que desempean tambin pueden ser:

COMUNESPermite el crecimiento indiscriminado de todo tipo de microorganismos. Agar nutritivo, caldo nutritivo, caldo con suero, agar leche peptonizado.

ESPECIALES

a) Medios mejorados.Son aquellos a los que se les agrega determinadas sustancias nutritivas como: sangre, yema de huevo, suero, etc., que estimula las exigencias nutritivas de ciertos microorganismos. Agar sangre, agar sabourand, etc.

b) Medios selectivos.Se caracterizan porque se incluyen sustancias que favorecen el desarrollo de determinadas especies inhibiendo el de otras. Mc Conkey agar, SS agar, Agar tergitol, Bismuto sulfito agar, etc.

c) Medios de diferenciacin.Ponen de manifiesto algunas propiedades bioqumicas del microorganismo, como formacin de gas, cambios en el pH, fenmenos de xido reduccin. Medios azucarados como caldos glucosado, lactosado, agar gelatina, agar Kligler, medio nitratado, etc.

2.4 MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS EN EL LABORATORIO CALDO NUTRITIVOMedio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est descrito en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.Medio no selectivo, contiene peptona y extracto de carne que constituye la fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.Puede ser utilizado adems, como pre-enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella sp.a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias. AGAR NUTRITIVOMedio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. AGAR MAC CONKEYMedio selectivo por contener sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias no entricas. Es tambin un medio diferencial porque contiene lactosa y un indicador de pH. Las bacterias capaces de fermentar este azcar producirn un cambio en el pH del medio por la liberacin de productos cidos. Como consecuencia sus colonias aparecern de color violeta, contrastando con la coloracin amarillenta de las colonias de bacterias incapaces de fermentar la lactosa. AGAR MANITOL SALADOMedio selectivo y diferencial muy utilizado para el aislamiento e identificacin de S. aureus. La alta concentracin de sal (NaCl al 7,5%) le proporciona su carcter selectivo, ya que slo este tipo de microorganismos osmotolerantes, adems de osmfilos, pueden multiplicarse en l. Por otra parte, el nico azcar presente es el manitol, que puede ser fermentado por las cepas patgenas de este gnero bacteriano, diferencindolas as de las que no lo son. La produccin de cidos provenientes de la fermentacin de cidos provenientes de la fermentacin del manitol es detectada por un viraje del indicador del pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. S. aureus, fermentador del manitol, dar lugar a colonias pequeas rodeada de un halo prpura (a veces permite el desarrollo de E. faecalis, pero con un crecimiento muy pobre). AGAR ALMIDONEl agar es bsicamente un medio de uso mltiple (por ejemplo, agar nutriente, agar infusin de corazn) al que se aade 0,4% de almidn soluble. Un plato de este medio es solo rayas o manchas inoculadas con el organismo de prueba. Despus de la incubacin (de preferencia durante varios das) que el medio est inundado de yodo de Gram. El yodo reacciona con el almidn para formar un complejo azul oscuro de color. Cualquier rea clara alrededor del crecimiento de la cultura despus de la adicin de yodo indica la degradacin del almidn por el organismo debido a su produccin de amilasa, una enzima extracelular. AGAR GELATINA El agar es bsicamente un medio de uso mltiple, que en este caso se le agrega gelatina en un 0.4 % entre otros agregados tenemos a la peptona 0.1% y extracto de levaduras. Este medio comercial permite determinar la actividad de la proteasa. Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuada, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOSEl desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. Disponibilidad de nutrientes adecuadosUn medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaba la prdida de los factores nutritivos lbiles.Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

Esterilidad del medioTodos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante). Condiciones adecuadas de humedadUn nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.

Consistencia adecuada del medioPartiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido.Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio. Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gasesGran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. Luz ambientalLa mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. pHLa concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. TemperaturaLos microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertermfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saprofitos tienen rangos ms amplios.

III. MATERIALES Y MTODOS

3.1MaterialesCALDO NUTRITIVOAGAR NUTRITIVOAGAR MAC CONKEYAGAR MANITOL SALADOAGAR ALMIDONAGAR GELATINA

MATERIALES Medios de cultivo o ingredientes deshidratados Agua destilada Algodn , gasa Balanza Erlenmeyers de 250 y 500 ml Esptulas Lpiz marcador de vidrio Papel indicador de pH Probetas de 100ml Papel aluminio y papel corriente no absorbente Tubos de ensayo

1.2 Mtodos:

IV. OBSERVACION Y DISCUSIN :

Pesamos todos los componentes en una balanza analtica y preparamos un Erlenmeyer, adecuado para el volumen que vamos a preparar y lo enrasamos con agua destilada hasta 120 ml.

Figura 2. En el proceso de pesado de ingredientes. Fotografa tomada durante la prctica.

Elaboramos tapones para cada Erlenmeyer y luego de colocarlos lo cubrimos con un papel que identifique el nombre del cultivo y del grupo que lo realiz, Se lleva a esterilizar en una autoclave durante 15 min a 121 C.

ESTAS FUERON LAS OBSERVACIONES :

Agar Mac ConkeyEl agar MacConkey es una de las primeras frmulas (publicadas en 1900 por MacConkey) para el aislamiento, cultivo e identificacin de Enterobacteriaceae y determinados organismos no fermentadores. Posteriormente, este medio fue modificado varias veces.El agar MacConkey es slo ligeramente selectivo, dado que la concentracin de sales biliares, que inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en comparacin con otros medios en placa entricos. El agar MacConkey tambin se utiliza en el examen microbiolgico dealimentos.En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar es el agente solidificante. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

V. CONCLUSION La composicin qumica de diversos medios de cultivo diseados para cultivar microorganismos en el laboratorio puede resumir la nutricin microbiana de estos.De acuerdo al tipo de bacteria que se requiera sembrar, se usar un tipo especfico de medio de cultivo, esto, ya que cada bacteria requiere cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus colonias, adems de que cierto tipo de medios de cultivo, nos pueden mostrar de acuerdo a su composicin ciertas caractersticas que presentan determinado tipo de bacterias, ya sea por su pH y que este sea determinado por los indicadores de los medios o por que reacciona con ciertos componentes del medio.Cada medio de cultivo tiene objetivos es por ello que cada medio tiene una composicin particular.Todos los medios al finalizar su preparacin deben esterilizarse para tener un medio limpio antes de sembrar nuestra muestra

VI. CUESTIONARIO1.- Cuales son las ventajas de los medios complejos para el cultivo de microorganismos.De los medios complejos no se conoce exactamente, cul es la composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi todos los elementos que un microorganismo puede requerir adems pueden ser utilizados en un cultivo con una amplia gama de microorganismos, incluidos aquellos en los que no se conocen sus requerimientos precisos de factores de crecimiento; con frecuencia resulta ms cmodo hacer crecer al microorganismo en un medio complejo, especialmente si los requerimientos de factores de crecimiento son numerosos, adems que no se necesitan aadir oligoelementos a los medios complejos, mientras que a los medio definidos es importante proveer los factores de desarrollo adecuado. En algunos estudios de bacterias es necesario utilizar medios qumicamente definidos, que se llaman sintticos, en los que todos los nutrientes esenciales se proporcionan qumicamente puros.

2.- Por qu no es necesario ajustar el pH en el caldo nutritivo y si lo es en el agar almidn?El motivo principal es que el agar no gelifica a pH cido, es por esto que se ajusta el pH. En el caso del caldo nutritivo no se tiene el problema, ya que no contiene agar sino que es un medio lquido. El error de pesadas tambin influencia en la variacin de pH. Por ejemplo cuando se prepara el agar almidn se realiza cuatro pesadas correspondientes a sus cuatro componentes agar, almidn, peptona y K2HPO4. Cada pesada tienen su margen de error, por lo que este margen de error ser el que determine la variacin del pH final; en el caso del caldo nutritivo este solo posee 2 componentes; extracto de carne y peptona, por lo que el margen de error por pesadas es menor. Es importante recordar el uso de buffers en los medios de cultivo, ya que estos sern los que eviten los cambios de pH final. El pH vara principalmente durante el tratamiento trmico que se le da al medio. Esta variacin flucta entre 0.1 y 0.2 unidades de pH.

3.- Determine la naturaleza qumica y la funcin nutritiva de cada uno de los ingredientes que contienen los medios que ha utilizado.CALDO NUTRITIVO: (Extracto de carne, 0.3% y peptona, 0.5%)Extracto de carne: Protenas, lpidos, carbohidratosPeptona: ProtenaAgar Mc ConkeyPeptona: ProtenaProteosa-peptona: Protena Lactosa: Disacrido,Carcter diferencialSales biliares: Sal NaCl: SalAgar: Polisacrido Rojo neutro: Sal Cristal violeta: Sal , carcter selectivoAgar Manitol SaladoExtracto de carne:Proteosa-peptona: ProtenaNaCl: Sal, Carcter SelectivoManitol: Polialcohol, Carcter selectivo diferencial Agar: PolisacridoRojo FenolAgar nutritivoExtracto de Carne: Protenas, lpidos, carbohidratos Peptona: Protena

Funcin nutritiva: * Peptona: Es el producto que resulta de la digestin e materiales altamente protenicos por ejemplo carne, casena, gelatina, la digestin del material proteico se realiza con cidos y diferentes tipos de peptonas (dependiendo de la protena usada y del mtodo de digestin), sirven para hacer medios de cultivo bacteriolgicos. Existen diferencias entre las peptonas en cuanto a su propiedad para determinar el vencimiento bacteriano. Principal fuente de nitrgeno orgnico, puede contener algunas veces carbohidratos y vitaminas, esto con relacin a la clase de material digerido.

* Agar: Resiste la accin microbiana. Se usa como agente solidificante, gelifica a menos de 45C, no se considera nutriente para las bacterias.

* Fosfato y K2HPO4: Sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos. Se requiere como un componente del ATP y de las coenzimas como el NAD, NADP y las flavinas. Introducido como fosfato inorgnico utilizado para el crecimiento.

* Agua: Debe utilizarse solo agua desmineralizada que se haya comprobado no txica para los microorganismos.

* Extracto de carne: Sirve para proporcionar una mayor fuente de vitaminas y coenzimas, este extracto se prepara mediante ebullicin para desnaturalizar las protenas y as molculas pequeas de las clulas y concretar el extracto.

* Sales biliares: Mezcla normalizada de glicolato slido y laurocolato slidos a partir de bilis de buey, agente inhibidor selectivo.

* Proteosa-peptosa: Preparada por digestin de carne fresca escogida con papaoina. Produccin de toxinas bacterianas.

* Triptona: Hidrolizado pancretico o por tripsina de casena de alta calidad. Fuente rica en nitrgeno aminocido.

* Lactosa: Fuente de glucosa y galactosa.

* NaCl: Utilizado como agente inhibidor del crecimiento de ciertos microorganismos.

* Almidn: Fuente rica de carbohidratos.

* Extracto de levadura: Es una excelente fuente de sustancias estimulantes del crecimiento.

* Gelatina: Solidificante de los medios de cultivo y para la puesta en evidencia y diferenciacin de ciertas bacterias proteolticas.

4. Describa el autoclave y su forma de uso.La autoclave es una cmara equipada con dispositivos que permite que permiten que esta se llene de vapor y a su vez mantienen la temperatura y la presin necesaria por el tiempo requerido; lo que mata a los microrganismos no es la presin sino la humedad combinada con la alta temperatura del vapor. Utilizando vapor de agua a alta presin y temperatura para ello. El fundamento del autoclave es que coagula las protenas de los microorganismos debido a la presin y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos, as como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave.

5. Qu otros mtodos de esterilizacin se emplean para medios de cultivo? Qu ventajas otorgan? Hmeda, autoclave Seca, horno Gaseosa: xido, etileno, formaldehdo o H2O2. Filtracin: membranas de 0.45 y 0.22 m.Por mtodos fsicosAltas temperaturas (Calor)El calor en presencia o ausencia de humedad puede ser utilizado para desinfectar o esterilizar. La ventaja de los tratamientos en presencia de humedad (calor hmedo) es que se requiere menor temperatura para el mismo efecto. Esto se debe a la capacidad de penetrar en las clulas, desnaturalizando protenas y afectando todos los componentes celulares.Calor hmedoa) PasteurizacinLa pasteurizacin es un mtodo empleado para reducir la carga microbiana. No se destruyen por este mtodo las esporas bacterianas.b) Calentamiento a ebullicin El agua a ebullicin generalmente mata clulas vegetativas en menos de 10 minutos. Sin embargo ciertos virus, como el virus de la hepatitis, puede sobrevivir hasta 30 minutos mientras que las esporas de ciertasespecies de los gneros Clostridium y Bacillus soportan tratamientos de ms de una hora.Calor secoLa accin letal del calor seco se debe a la oxidacin de las protenas.a) IncineracinLos incineradores se utilizan en caso de materiales descartables. Tambin se usa la incineracin para esterilizar las ansas antes o despus de utilizarlas por mtodos qumicos Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

Con xido de etileno: Es un agente que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancergeno.Con aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc.Formaldehido:Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuestos al calor para una rpida esterilizacin (accin del gas formaldehido). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida.Posee como ventajas:* No deja ningn residuo txico. * Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso.* El material no precisa aireacin.* El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos.

BIBLIOGRAFA

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