MOLEKULOVO-CYTOGENETICKÁ ANALÝZA HER2 GÉNU PRI KARCINÓME PRSNÍKA.

RNDr. Andrea Blahová, RNDr. Ivana Hojsíková

Medirex Group Academy, n.o., Bratislava

Obr. 1.: Vľavo zdravá bunka s dvoma HER2 génmi v jadre a vpravo

bunka s amplifikovaným HER2 génom v jadre;

výsledkom je nadexpresia her2 receptorov na povrchu bunky.

MGA, n.o., ITMS: 26240120026

ÚVOD

Karcinóm prsníka patrí v súčasnosti k najčastejšie sa vyskytujúcim nádorovým ochoreniam u žien. Asi v 1/5 invazívnych karcinómov dochádza k namnoženiu

(amplifikácii) génu HER2. Gén je lokalizovaný na chromozóme 17 a v zdravej bunke je prítomný v dvoch kópiách. Patrí k protoonkogénom a kóduje

transmembránový glykoproteín s tyrozínkinázovou aktivitou. Proteíny pôsobia na povrchu bunky ako receptory a zohrávajú dôležitú úlohu v regulácii

bunkového delenia.

V nádorových bunkách, v ktorých došlo k amplifikácii HER2 génu, sa na povrchu bunky nachádza vysoké množstvo receptorov (obr.1). Následkom toho má

nádor vyššiu proliferačnú aktivitu, vyznačuje sa vyššou agresivitou a horšou prognózou. Avšak na druhej strane, iba HER2 pozitívni pacienti sú indikovaní

a benefitujú z liečby monoklonálnou protilátkou trastuzumab, ktorá sa cielene viaže na extracelulárnu doménu HER2 receptorov na nádorových bunkách, čím

inhibuje ich proliferáciu.

METÓDA

Základnou metódou na odhalenie produkcie HER2 proteínu je imunohistochémia (IHC). Nádory bez expresie alebo s veľmi slabou expresiou sa označujú ako HER2 negatívne (0, 1+) a nádory so zvýšenou expresiou ako HER2 pozitívne (2+, 3+) (obr. 2).

FISH vyšetrenie sa vykonáva na tkanivách prsníka fixovaných

v parafíne. Po deparafinizácii a po hybridizačnej reakcii sa

pomocou fluorescenčného mikroskopu stanovuje pomer kópií

HER2 génu v jednej nádorovej bunke ku kontrolnému signálu

(centroméra chromozómu 17) (obr.4). Ak je pomer väčší ako 2,

hodnotíme dané tkanivo ako pozitívne, ak je pomer menší ako

2, je nádor HER2 negatívny (obr.5).

VÝSLEDKY

FISH vyšetrenie HER2 génu na parafínových bločkoch sme zaviedli v roku 2009 a používame komerčne dostupné kity: PathVysion HER-2 DNA Probe Kit (Vysis) a

ZytoLight ® SPEC HER2/CEN 17 Dual Color Probe (Zytovision). Vyšetrili sme spolu 290 pacientov s výsledkom IHC 2+ (276 žien a 14 mužov). FISH vyšetrenie

stanovilo amplifikáciu HER2 génu v 51 prípadoch (17,8%), ostatných 239 vzoriek pacientov nemalo prítomnú amplifikáciu. V rámci projektu „Dobudovanie technickej

infraštruktúry v oblasti výskumu diagnostických postupov a metód v rámci včasnej diagnostiky najčastejších onkologických ochorení žien.“ sa v prípade FISH pozitivity vo

vybraných prípadoch plánuje realizovať vyšetrenie metódou array CGH.

ZÁVER

Stanovenie statusu HER2 je veľmi dôležitým bodom k správnej indikácii liečby trastuzumabom a je prediktorom odpovede na trastuzumab. Základnou metódou stanovenia

expresia HER2 génu ostáva imunohistochemické vyšetrenie, pretože výsledky IHC 1+ a 3+ korelujú s výsledkami FISH metódy. Len v prípadoch nejednoznačných IHC

výsledkov (2+) sa jednoznačne odporúča vyšetrenie FISH metódou, pomocou ktorej sa amplifikácia génu jednoznačne potvrdí alebo vylúči.

Obr. 3.

Obr. 4.

IHC

FISH

Obr. 2.: Porovnanie imunohistochemického a FISH vyšetrenia: IHC

zachytáva expresiu proteínu na povrchu bunky, cieľom detekcie FISH

metódy je DNA v jadre bunky.

Na určenie stavu HER2 génu pri nádoroch s hraničnou alebo nejednoznačnou IHC pozitivitou (2+)

využívame fluorescenčnú in situ hybridizáciu (FISH metóda). Jej princíp je založený na

komplementárnom párovaní vyšetrovanej DNA s DNA komerčne dostupnej fluorescenčnej sondy

(obr. 3) a následnom hodnotení preparátu vo fluorescenčnom mikroskope.

Obr.5.

Pomer signálov = 2

• prítomné 4 červené a

2 zelené signály

Pomer signálov < 2

• bez amplifikácie

Pomer signálov > 2

• amplifikácia HER2

génu

Obr. 8.: Amplifikácia HER2 génu u pacientky. Obr. 7.: Hraničná pozitivita , pomer signálov 2,2. Obr. 6.: Bez amplifikácie, pomer signálov 1,2.

Cytogenetický ideogram

Chromozóm 17

nádorová bunka s

amplifikáciou HER2

génu

Podporujeme výskumné aktivity na Slovensku/Projekt je spolufinancovaný zo zdrojov EÚ