www.krkinenagrade.si

Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani

Mentorica: izr. prof. dr. Veronika Kralj-Iglič

Somentorica: doc. dr. Helena Abramovič

Mikrovezikli izolirani iz periferne krvi – klinično pomemben artefakt izolacije

Roman Štukelj

www.krkinenagrade.si

Namen dela

• izboljšanje razumevanja mehanizmov vezikulacije membran

• izboljšanje razumevanja presnove holesterola (hol)

• primerjava koncentracije mikroveziklov (MV) v izolatih iz periferne krvi pri zdravih prostovoljcih in bolnikih z rakavimi obolenji

• povezava med koncentracijo holesterola v krvi in koncentracijo MV v izolatih

• vpliv temperature med izolacijo na koncentracijo in velikost mikroveziklov

2

www.krkinenagrade.si

Mikrovezikli (MV)

• z membrano obdani nanodelci (< 1 µm)

• odcepijo se od membrane v zadnji fazi brstenja in so več ali manj prosto gibljivi s cirkulacijo (kri,limfa)

• prenašajo genetski material, receptorje, infektivne delce, holesterol, ...

• predstavljajo dodatno zalogo holeterola v krvi

Slika: prikazuje brstenje membrane eritrocita (A) in mikrovezikle (B), slikano z vrstičnim el. mikroskopom.

3

www.krkinenagrade.si

Materiali in metode

4

www.krkinenagrade.si

Rezultati

5

I. MIKROVEZIKLI IN PRESNOVA

• Povprečna koncentracija MV je za 50 % večja po uživanju hrane kot po postu (p = 0,0010).

• Koncentracije skupnega Hol, LDL-hol in HDL-hol so po obroku ostale v okviru 2 % od prvotnega stanja.

• Koncentracija MV po obroku je negativno korelirala s koncentracijo skupnega holesterola, oz. koncentracijo LDL-hol po postu (p = 0,03 in p = 0,05).

www.krkinenagrade.si

Rezultati

II. VPLIV TEMP. NA KONC. MV V IZOLATIH IZ PERIFERNE KRVI

6

Graf: Povprečna vrednost števila mikroveziklov izoliranih iz vzorcev krvi pri različnih temperaturah.

www.krkinenagrade.si

Rezultati

7

Graf: Povprečne koncentracije MV v različnih skupinah bolnikov. Povprečne koncentracije MV v izolatih (s standardnimi deviacijami) v populacijah bolnikov z rakom prebavnih organov, bolnikov z drugimi boleznimi prebavnih organov in zdravih prostovoljcev.

III. PRIMERJAVA KONC. MIKROVEZIKLOV V IZOLATIH IZ PERIF. KRVI PRI ZDRAVIH PROSTOVOLJCIH IN BOLNIKIH Z RAKAVIMI OBOLENJI

www.krkinenagrade.si

Sklepi

• Po jedi se znatno in statistično pomembno poveča koncentracija mikroveziklov v izolatih iz periferne krvi.

• V okviru obstoječih možnosti predlagamo izboljšavo protokola. Postopek izolacije mikroveziklov daje manj artefakta pri temperaturi 37 ºC kot pri sobni temperaturi.

• Bolniki z rakom prebavnih organov imajo v izolatih iz krvi statistično pomembno več mikroveziklov kot osebe z drugimi boleznimi prebavnih organov in več kot zdrave osebe.

8