UNIVERSIDAD VERACRUZANA Instituto de Medicina Forense

“Estudios preclínicos farmacológicos de extractos de raíz

Anthurium schlechtendalli Kunth en la remisión o prevención del daño

hepático inducido por 4-ter-octifenol en Modelos Murinos”

PROTOCOLO DE TESIS QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRIA EN MEDICINA FORENSE

PRESENTA GLADIS GUADALUPE ESPINOSA MARTINEZ

DIRECTOR:

DR. OCTAVIO CARVAJAL ZARRABAL

CO- DIRECTOR: MTRA. DULCE MARÍA BARRADAS DERMITZ

BOCA DEL RIO, VERACRUZ.

2    

CONTENIDO

Pág.

LISTA DE FIGURAS

LISTA DE TABLAS

LISTA DE ABREVIATURAS

1.-INTRODUCCIÓN………………………………………………………………3

2.-JUSTIFICACIÓN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8

3.- HIPÓTESIS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …9

4.-OBJETIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10

5.- MATERIALES Y MÉTODOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ......11

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. ..23

3    

CAPITULO I

1.- INTRODUCCIÓN

1.1 Hígado y Hepatotoxicidad

El hígado es un órgano complejo que realiza múltiples funciones; su relación con

otros órganos y rutas metabólicas así como sus funciones de desintoxicación

(Gomes da Silveira y Ribeiro Filho, 2006) le confieren un importante papel en la

salud de un individuo pues cualquier deficiencia en alguna de sus funciones puede

ocasionar graves transtornos con el paso del tiempo.

Las enfermedades hepáticas conllevan una alta tasa de mortalidad en el mundo. La

principal de ellas, la insuficiencia hepática aguada (IHA), es definida como el

“compromiso grave de inicio súbito de la función del hígado, en ausencia de daño

hepático previo, que se manifiesta por ictericia y luego encefalopatía dentro de las

ocho semanas del inicio del cuadro” (Soza Ried, 2002).

En los últimos años la incidencia de enfermedades hepáticas ha aumentado en la

población mexicana. Actualmente ocupan el cuarto lugar como causas de muerte en

México después de las enfermedades cardiovasculares, el cáncer, la diabetes

mellitus y la cirrosis hepática (INEGI. Estadísticas de mortalidad, 2011).

El hígado se afecta en numerosos procesos inflamatorios como infecciones víricas,

toxicidad por fármacos y sus metabolitos, metabolopatías, procesos autoinmunes y

distintos defectos genéticos. En los últimos años numerosas publicaciones sugieren

que las reacciones adversas a fármacos son responsables de una mayor proporción

de casos de lesión hepática de lo que inicialmente se pensaba, constituyendo un

desafío para el médico de atención primaria, al que acuden con frecuencia pacientes

tratados con varios fármacos que presentan, muchas veces en el curso de revisiones

rutinarias, una alteración en la analítica hepática (Farrel, 2004).

4    

La hepatotoxicidad (HTX) se define como la lesión o daño hepático causado por la

exposición a un medicamento u otros agentes no farmacológicos. Con el término

reacción medicamentosa adversa se designa a la aparición de efectos de deletéreos

no intencionales que se producen con dosis farmacológicas utilizadas con fines

profilácticos y terapéuticos (Farrel, 2004).

Estas reacciones adversas que afectan al hígado son más difíciles de definir, por lo

que dicho concepto ha sido establecido por reuniones de consenso e incluye, al

menos, una de las siguientes alteraciones de los análisis bioquímicos hepáticos: 1)

aumento de Alanina aminotransferasa ( ALT) superior a dos veces el límite alto de la

normalidad, 2) aumento de la concentración de bilirrubina directa (BD) sérica más de

dos veces el límite alto de la normalidad, 3) aumento de aspartato aminotransferasa

(AST), fosfatasa alcalina (FA) y la concentración total de bilirrubina, siempre que uno

de ellos supere más de dos veces el límite alto de la normalidad (Benichou, 1990).

Aunque las reacciones adversas hepáticas (RAH) se consideren relativamente raras

en el conjunto de las reacciones adversas (4-10%), tienen una especial

trascendencia clínica debido a su potencial gravedad con hasta un 5% de mortalidad

según las series Davis, 1977; Pillans, 1996; Friis y Andreasen, 1992; Zimmerman,

1992. Es más, la hepatotoxicidad representa un problema sanitario de primer orden

en aumento en las últimas décadas, dado que es una de las principales causas de

muerte secundaria a medicamentos y supone la principal causa de retirada,

suspensión de comercialización y restricción de las indicaciones de productos

farmacológicos del mercado farmacéutico en Europa y en Estados Unidos (Bakke, et

al, 1995; Larrey, 2002; Temple y Himmel, 2002).

Los avances científicos y tecnológicos conllevan a la mejoría del diagnóstico y

tratamiento de muchas patologías, pero también están aumentando la incidencia de

enfermedades iatrogénicas. Dado que el hígado es el principal órgano implicado en

el metabolismo de nutrientes, fármacos y otros xenobióticos potencialmente tóxicos

que deben atravesarlo antes de alcanzar el torrente sanguíneo y otros tejidos, lo

hace particularmente susceptible a los fenómenos de toxicidad química. Es más, el

número de sustancias ajenas al organismo con actividad biológica capaces de

5    

inducir enfermedad hepática es muy amplio, habiendo sido incriminados en la

actualidad más de 1.100 fármacos en episodios de hepatotoxicidad, excluyendo

drogas de abuso y remedios de herboristería (Biour,2000).

1.2 factores de riesgo

Las causas de la Insuficiencia hepática pueden ser clasificadas en las siguientes

categorías:

Ø Infecciones virales

• Virus hepatotropos: hepatitis A, B, D, y E.

• Virus no hepatotropos: Citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr,

herpes simple virus, varicela zoster, adenovirus y virus de la fiebre

hemorrágica.

Ø Fármacos y toxinas

Daño relacionado con la dosis: acetaminofeno, tetracloruro de carbono,

Amanita phalloides, fósforo amarillo, toxina de Bacillus cereus, anti-

inflamatorios no esteroideos, sulfonamidas, tetraciclina, éctasis

(metildioximetanfetamina) y remedios basados en plantas medicinales.

Ø Reacción idiosincrásica: halotano, isoniazida, rifampicina, ácido valproico,

disulfiram.

• Cardiovascular. Insuficiencia cardiaca derecha, síndrome de Budd-Chiari,

enfermedad veno-oclusiva del hígado, golpe de calor.

• Metabólica. Hígado graso del embarazo, enfermedad de Wilson, síndrome de

Reye, galactosemia, intolerancia hereditaria a la fructosa, tirosinemia.

• Otras causas. Infiltración neoplásica (linfoma o metástasis), hepatitis

autoinmune.

6    

Frecuentemente el consumo de productos herbolarios o comúnmente denominados

"naturistas", no cuenta con una regulación sanitaria apropiada y se pueden comprar

libremente. Diversas hierbas y preparados herbales han sido implicados como causa

de daño hepático tanto en forma aguda como crónica. Algunas hierbas con toxicidad

demostrada son Teucrium chamaedrys (camedrio o germander), Celedonium

majus (celandina mayor), Piper methysticum rhizoma (kava-kava), Larrea

tridentata (chaparral o gobernadora), Cassia angustifollia (senna), Camellia

sinensis (té verde),Cimifuga racemosa (cohosh negro).

Las Hierbas y flores contienen diferentes polifenoles :flavonoides (rutina , hiperósido

, isoquercetina , quercitrina ,quercetina , I3 , II8 - biapigenin , amentoflavona ,

astilbina miquelianin ), ácidos fenólicos (ácido clorogénico ,De ácido 3 - O-

coumaroylquinic ) , diferentes naphtodianthrones( Hipericina , pseudohipericina ,

protohipericina ,protopseudohypericin ) , floroglucinoles ( hiperforina ,adhiperforina ) .

Parece que la acción farmacológica de estos compuestos biológicamente activos

contenidos en la planta.

Una de las plantas sujetas a estudio es Anthurium schelechtendalii Kunth (raíz de

piedra) miembro de la familia Araceae. Esta familia es principalmente tropical con

una mayor diversidad de especies en Asia y América tropical (Croat, 1998; 2004). En

México se han registrado 121 especies y 18 géneros, siendo los géneros

Philodendron y Monstera los más numerosos (Espejo y López–Ferrari, 1993). La

mayoría de las especies se concentran en las zonas tropicales de los estados de

Chiapas, Oaxaca, Yucatán y Veracruz, aunque existen algunos elementos de zonas

templadas; por ejemplo, Arisaema (Bunting, 1965).

No existen hasta ahora estudios fitoquímicos específicos de Anthurium,

schelechtendalii, sin embargo existe un reporte de la actividad antiproliferativa de

los extractos de raíz y hojas (Stark, et al., 2009). Por otra parte, en las hojas de

Anthurium versicolor, se han encontrado antioxidantes y compuestos fenólicos tipo

flavonoides en forma de glucósidos (Aquino, et al., 2001).

7    

Es bien sabido que la mayor parte de nuestra comprensión fundamental de la

bioquímica humana, fisiología, endocrinología y farmacología procede de los

estudios originados de los mecanismos en modelos animales (Larsen, M.Ø., 2001

citado en Hau, J., 2003).

Se ha podido establecer en ratas que una resección del 95% del hígado es un buen

modelo de FHF (He Y, et al, 2003), mientras que en ratones una hepatectomia de

menos del 90% es el límite de seguridad como modelos de estudio de regeneración

hepatica ya que por encima de dicho valor se encuentra en un nivel de fallo hepático

mortal (Makino H, et al, 2005).

Se ha demostrado que el Octifenol estimula la producción de radicales libres, lo que

resulta en el deterioro oxidativo de los lípidos, proteínas y ADN, y el inicio de varias

condiciones patológicas en seres humanos y animales. Por otra parte, se ha

demostrado que, tanto in vivo y en hepatocitos cultivados, en paralelo a daños en el

hígado, Octifenol puede también determinar una fragmentación reconocible de ADN

nuclear y cariolisis (Kim et al. 2006). Por otro lado, el propóleos puede ser útil para

mejorar los efectos tóxicos de diferentes sustancias (Aso et al. 2004).

Por tanto, se realizara el presente estudio para investigar la capacidad de extractos

obtenidos de la raíz de A. Schelechtendalii para remitir o prevenir el daño hepático

por Octifenol en Modelos murinos.

8    

JUSTIFICACIÓN

Desde los inicios de la humanidad el hombre ha tenido como aliadas a las plantas.

Un ejemplo claro es la familia Araceae, pues en México, desde la época

prehispánica diversas especies de esta familia eran utilizadas con fines medicinales,

alimenticios, mágico-religiosos y ornamentales (Mandujano et al., 2002; Anderson et

al., 2001).

Sin embargo, algunas de las plantas de esta familia carecen de estudios químicos y

de su actividad biológica, entre ellas podemos citar a las especies del género

Anthurium, del cual poco se sabe de sus propiedades biológicas. Aunque se han

realizado escasos estudios y actualmente se conoce que los extractos de

Stenocereus eruca así como Dracontium loretense tienen efectos analgésicos y

antinflamatorios (Imai et al., 2006; Okazaki et al., 2007). Tomando en cuenta lo

anterior, en este proyecto se propone determinar la actividad antiinflamatoria, efecto

regenerativo y citotóxica de extractos orgánicos y metabolitos secundarios de raíz

Anthurium schelechtendalii kunth aplicados en específico a nivel hepático.

9    

HIPOTESIS

Si existen compuestos bioactivos provenientes de la raíz de Anthurium

schelechtendalii Kunth (Raíz de piedra) en los extractos en estudio, que muestren

capacidad de remisión o prevención del daño hepático inducido por 4-ter-octifenol,

se harán evidentes en los modelos murinos de experimentación a través de las

valoraciones y exámenes de parámetros bioquímicos e histopatológicos.

10    

3. OBJETIVOS

3.1 Objetivo General

Establecer la capacidad de extractos de raíz anthurium schlechtendalli kunth en la remisión o prevención del daño hepático por 4-ter-octifenol.

3.2 Objetivos específicos

1.- Establecer la Concentración Letal 50 (LC 50) de los extractos de Anthurium schlechtendalli Kunth en Artemia salina sp.

2.- Definir las alteraciones bioquímicas, histopatológicas (hígado) y de fragmentación de DNA inducidas por el 4-ter-octifenol, en los animales de estudio.

3.- Establecer la capacidad de remisión de extractos de anthurium schlechtendalli kunth frente al daño hepático inducido.

4.- Establecer la capacidad hepatoprotectora de los extractos de anthurium schlechtendalli kunth frente a la administración de 4-ter-octilfenol.

11    

CAPITULO V

MATERIAL Y METODOS

5.1 Área física

El trabajo experimental se realizara en el laboratorio de química del Instituto Tecnológico de Veracruz (ITV) en el puerto de Veracruz.

5.2.- Recolección del material vegetal

La recolección de la raíz de Anthurium schelechtendalii kunth se realizara en

tlacojalpan en el estado de Veracruz, México. Se colectara también un ejemplar para

el herbario, el cual fue depositado en el Herbario Instituto Tecnológico del Estado de

Veracruz. La raíz colocara en papel periódico y será envuelto para su transporte al

laboratorio.

5.3 Análisis estadistico

La bioquímica y datos morfológicos se expresan como la desviación estándar media ± (x ± SD). La significancia estadística se determinó con el análisis de los procedimientos de la varianza, con un hoc de Tukey después de la prueba de rango múltiple-para la comparación de los medios (P <0,05). Los datos fueron analizados utilizando iBMC SPSSc Estadísticas Versión 20, 2011.

5.4 Métodos

1.-Tratamiento preliminar: limpieza, reducción de tamaño y secado

• La muestra total se fracciono en dos partes (A y B). • Parte A 950 g ( Muestra Fresca) • Parte B 900 g (Muestra Seca). Se dejó secar a temperatura ambiente

aproximadamente 1 semana para material seco.

a).- De material fresco completo

El material se lava con agua corriente para quitar tierra, y después se enjuaga con

agua desionizada. se desmembra y se corta en trozos de aprox. 5-10 cm.

12    

2.- Extracciones

Primer experimento 100g para cada caso: maceración, infusión y extracción por

solvente

Modo 1: Extracción por MACERACIÓN

Solvente: agua; temperatura: ambiente; relación materia prima: agua=

Recipiente: de vidrio ámbar con tapa rosca, tiempo:

Modo 2: Extracción por INFUSIÓN

Solvente: agua; temperatura: ebullición; relación materia prima: agua= 100g: 500ml

Recipiente: vaso de pp de volumen adecuado, parrilla de calentamiento y agitación;

tiempo:

Modo 3: Extracción por solvente orgánico

Solvente: acetato de etilo; temperatura: ebullición (77 ºC); relación materia prima:

acetato de etilo= ; recipiente: Soxhlet; tiempo:

Primer experimento 100g para cada caso: maceración, infusión y extracción por

solvente.

b).- De material seco y molido

Modo 1: Extracción por MACERACIÓN

Solvente: agua; temperatura: ambiente; relación materia prima: agua=

Recipiente: de vidrio ámbar con tapa rosca, tiempo: 24 hrs

Modo 2: Extracción por INFUSIÓN

Solvente: agua; temperatura: ebullición; relación materia prima: agua= 100g: 500ml

13    

Recipiente: vaso de pp de volumen adecuado, parrilla de calentamiento y agitación;

tiempo:

Modo 3: Extracción por solvente orgánico

Solvente: acetato de etilo; temperatura: ebullición (77 ºC); relación materia prima:

acetato de etilo= ; recipiente: Soxhlet; tiempo:

3.- Tratamiento de los Extractos

EXTRACTOS ACUOSOS

Separar el material vegetal del extracto por filtración (matraz kitasato, embudo

Buchner con papel filtro no. 1 ó 2, bomba de vació por aspiración con agua) para los

casos de extracciones acuosas. Recolectar el extracto filtrado para proceder a su

secado.

Poner a secar el material vegetal sobre papel estraza.

Medir el volumen de extracto, y distribuirlo equitativamente en viales para secado

por liofilización previamente pesados, y el volumen restante prepararlo para el

secado por aspersión.

EXTRACTOS CON SOLVENTE ORGANICO

En caso de extractos sin sólidos, proceder a la evaporación del solvente en

evaporador rotatorio al vació. Registrar el peso del extracto (considerar el peso

original del matraz de evaporación para obtener el peso del extracto).

4.- Secado de los Extractos

Extractos acuosos

• Por Liofilización: se requiere congelar las muestras contenidas en los viales y

ya congeladas proceder al secado.

• Por Aspersión: se procede a aplicar la muestra en el secador por aspersión

14    

Extractos con solvente orgánico

• Secar con corriente de Nitrógeno

5.- Experimentos en modelos in vivo

Todos los experimentos en modelos in vivo siguieron protocolos aprobados

internacionalmente, así mismo fueron autorizados por el comité de ética de

investigación en pequeños animales de la universidad veracruzana-UV.

Diseño Experimental

a).- De material fresco completo

Modo 1.- Extracción por INFUSIÓN

Extracto Secado Dósis (mg/kg peso):

Acuoso por Infusión Por Liofilización 200, 400, 600, 800, 1000,

1200, 1400,1600.

Por Aspersión 200, 400, 600, 800, 1000,

1200, 1400,1600.

Los resultados se someten a ensayo PROBIT

El criterio de selección para el extracto a experimentar en cuanto a efecto

nefroprotector es el de aquel o aquellos extractos que presenten la DL50 mayor ( el

o los de menor toxicidad).

15    

6.- Fase experimental con modelos murinos

Las fases experimentales se llevaron a cabo estableciendo procedimientos

metodológicos realizados en modelo murino de rata, comparando los casos de

tratamiento contra grupos control. Con el diseño experimental planteado se realizara

la evaluación del efecto tóxico de 4-ter Octifenol en hígado, mediante indicadores

bioquímicos que reflejan el daño por estrés oxidativo, pruebas metabólicas y

actividad enzimática en suero que reflejan la modificación de las funciones hepática;

así mismo se utilizara la técnica histológica para evaluar los cambios patológicos de

los tejidos muestreados de animales en experimentación que recibieron 4-ter

Octifenol.

6.1 Valoración de daño hepático

Se determinaran un total de 16 indicadores bioquímicos en suero para estimar las

siguientes enzimas:

Se determinara glucosa (GLUC) con el método de oxidasa. colesterol total (CHOL),

triglicéridos (TGL), proteínas totales (PT), albúmina (ALB), bilirrubina directa (BD),

transaminasa glutámico pirúvica (TGP), transaminasa glutámico oxalacética (TGO),

fosfatasa alcalina (FA), colinesterasa, y amilasa se determinó con un analizador

automático (RA 1000 XT, Bayer Technicon) a través de métodos enzimáticos

colorimétricos utilizando kits comerciales obtenidos de Bayer y BioMerieux.

Fosfatasa Alcalina(FA), Creatinfosfokinasa (CPK), Gammaglutamiltranspeptidasa

(GGT), Aspartatoaminotransferasa (AST), Alaninoaminotransferasa (ALT), Albúmina

(Alb), Bilirrubina total (BT), Bilirrubina Directa (BD), Proteínas totales (PT), Glucosa

(G), Acido Úrico (AU), Urea, Calcio (Ca), Fosforo (Pho), Colesterol total (Chol-T),

Trigliceridos (TG) y Creatinina (CREA) mediante el empleo de un analizador

automatizado Hitachi 704 de la Boehringer Mannheim utilizando kits comerciales de

la misma firma. También se determino el coeficiente proteico Albumina/ Globulina.

16    

6.2 Efecto Hepatoprotector de cada extracto seleccionado

Ratas macho Wistar DE 9-10 semanas de edad, pesando 249 ± 10 g, se colocan en

jaulas metálicas para su adaptación bajo condiciones establecidas: temperatura,

humedad, con periodos de obscuridad luz cada uno de 12 h; y con acceso ad libitum

de agua y de una dieta comercial. Esta contiene: Fósforo, Calcio, Magnesio,

Proteína cruda, Vitamina D3.

17    

• Los animales (n=30) se mantienen por una semana en las condiciones

referidas para su adaptación. Se dividen al azar en 6 grupos con 5 ratas cada

uno.

• El tiempo total de experimentación para el estudio en estos 6 grupos es de 4

semanas.

Grupo  1    (n=5)  

Grupo  5  (n=5)  

 

Grupo  2    (n=5)  

 

Grupo  3    (n=5)  

 

Grupo  4  (n=5)  

 

Grupo  6    (n=5)  

 

Grupo control ( gc)

• Solo se le administra la dieta

Grupo daño hepático inducido (gdhi)

• (Dieta + Octifenol)

Grupo al que se le administra la Dieta y el extracto a una concentración

• (Dieta + ExtAx%)  

Grupo al que se le administra la Dieta y el extracto a otra concentración.

• (Dieta + ExBy%)  

Grupo daño hepático Inducido, Administración de Octifenol y Extracto.

• (gdhi + ExtA% + Octifenol)

Grupo daño hepático Inducido, Administración de Octifenol y Extracto.

• (gdhi + ExtB% + Octifenol)

18    

PROCEDIMIENTOS Y DETERMINACIONES

• Peso: se pesaran semanalmente durante los 28 días del estudio

RECOLECCION DE SANGRE Y PLASMA TOTAL

• Después de la recolección de orina de 24 horas, las ratas se anestesian con

una inyección Intraperitoneales de ketamina (75 mg/kg) y xylazina (5mg/kg)

para recolectar sangre de la vena cava anterior, en un volumen aproximado

de 3.5 ml

• Esta sangre se coloca en tubos heparinizados.

• La sangre se centrifuga a 900 º g a 4ª C por 15 minutos. El plasma se

almacena a 80º C para los análisis correspondientes.

OBTENCION DE ORGANOS

Inmediatamente después de la muerte, el hígado derecho es removido y pesado. La

mitad del hígado derecho se almacena en nitrógeno líquido a -80ºC. La otra mitad

derecha se fijara en formaldehido al 10%.

Posteriormente a la inclusión del tejido en parafina se obtienen secciones de 5

micras las cuales se tiñen con tinción de hematoxilina-eosina.

Indicadores de daño

• Se removerá el hígado derecho, se seca sobre papel filtro y se pesan.

• Se fraccionaran muestras pequeñas de 2 x 2 cm de tejido de hígado (Lóbulo

Derecho) para colocarlos en formaldehido al 10% para estudios histológicos.

• Se obtendrán muestras de 1 g de tejido para hidrolizarlo con KOH 30% para

determinar glucógeno hepático (Fong et al., 1953); además se utilizó 0.5 g de

tejido (de hígado) para obtener un homogeneizado al 10% en KCl 1.15%,

19    

para medir el grado de lipoperoxidación en función de la cuantificación de

MDA con Acido 2-Thiobarbiturico (Uchiyama et al., 1978).

• La mitad de los órganos se congelan (debidamente etiquetados) a -80º C para

realizar estudios bioquímicos a realizar dentro de los 3 días siguientes

(medición de Glutatión y de Super oxido dismutasa).

20    

Metodología general

RECOLECCION  DEL  MATERIAL  VEGETAL  Y  TRATAMIENTO  PREVIO  A  LA  MUESTRA  

 

 

OBTENCION   DE   LOS   EXTRACTOS  DE   Anthurium schelechtendalii Kunth Y  SECADO   DE   LOS   EXTRACTOS  SEGÚN  SU  METODO.  

 

DETERMINAR  CL50  Y  DL50  MEDIANTE  LOS  ENSAYOS  CON  Artemia  salina  sp.  Y    POSTERIORMENTE  EN  MODELOS  in  vivo.  

 

PRUEBAS  PRECLÌNICAS  EN  LOS  MODELOS  MURINOS:  

-­‐ACLIMATIZACIÓN  DE  LOS  ANIMALES.  

-­‐TRATAMIENTO  DE  LOS  ANIMALES  

-­‐OBTENCIÒN  DE  MUESTRAS  

-­‐PROCESAMIENTO  DE  MUESTRAS  Y  

GENERACIÓN  DE  RESULTADOS.  

 

21    

Fase experimental con modelos murinos

   

 

 

   

22    

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Recolección del material vegetal

Tratamiento preliminar a la muestra

Extracciones de los extractos tanto acuoso como del material orgánico

Determinar Concentración Letal 50 (CL50) de los extractos mediante el ensayo de Artemia salina sp.

septiembre – mayo

2014

Recolección del material vegetal necesario para proceder a la extracción y generar mayor cantidad del extracto el cual se utilizara a conveniencia en el diseño experimental.

junio – julio

2014

1. Realizar el análisis para elegir a los modelos murinos

2. Adquirir a los modelos murinos, verificar que cumplen los criterios

3. Proceder a administrar 4-ter-octifenol en su alimentación para producir el daño hepático

4. Realizar la determinación de orina, sangre y biopsia histológica para corroborar el grado de daño Hepático

5. Administrar a los murinos con daño hepático el extracto de la raíz de piedra y monitorear si existe la remisión

6. Corroborar la mejoría de la enfermedad tomando muestra histológica para comparar.

agosto – diciembre

2014

Organizar los datos enero 2015

Análisis estadístico de resultados febrero 2015

Presentación de resultados y conclusiones abril 2015

23    

24    

REFERENCIAS

• Aso K., S. Kanno, Tadano T., S. Satoh, Ishikawa M., (2004) “Inhibitory effect of propolis on the growth of human Leukemia U937” Biol. Pharm. Bull. 27 (5): pp: 727-730.

• Bakke OM, Manocchia M, De Abajo F, Kaitin KI, Lasagna L., (1995) “Drug safety discontinuations in the United Kindom, the United States, and Spain from 1974 through 1993: a regulatory perspective” Clin Pharmacol Ther ; 58:108-117.

• Benichou c., (1990) “criteria of drug-induced liver disorders report of an international consensus meeting” j hepatol. ; 11:272-6.

25    

• Biour M, Poupon R, Grange JD, Chazouilleres O., (2000) “Drug-induced hepatotoxicity”. The 13th updated edition of the bibliographic database of drug-related liver injuries and responsible drugs. Gastroenterol Clin Biol, 24:1052-91.

• Davis M, Williams R., (1977) “ Hepatic disorders” In: Davies DM, editor. Textbook of Adverse Drug Reactions. Oxford: Oxford University Press, pp 146-172.

• Departamento de biochemistry of cience, ain sharms university, abashia cairo, egypt 11566 (2012) “antoioxidant effect of aqueous extract of propolis on hepatotoxicity induded by octyphenol in male rats” acta toxicol.argentin, 20(2) pp:68-81.

• Farrel GC., (2004) “Hepatopatía causada por fármacos, anestésicos y toxinas” En: Sleisenger y Fordtran eds. Enfermedades gastrointestinales y hepáticas: Fisiopatología diagnóstico y tratamiento. 7a ed. Buenos Aires: Ed. Panamericana, p. 1486-1537.

• Friis H, Andreasen PB (1992) “Drug-induced hepatic injury: an analysis of 1100 cases reported to the Danish Committee on Adverse Drug Reactions between 1978 and 1987” J Intern Med ;232:133-138.

• Gomes da Silveira, v., ribeiro filho, j., (2006) ” Anatomia y fisiologia hepatica” [En línea] disponible en: http://www.cirugiasanchinarro.com/pdf/libro/gonzales02.pdf

• He Y, Zhou J, Dou KF, Chen Y (2003) “A rat model for acute hepatic failure” Hepatobiliary Pancreat Dis. 2: 423-425.

• Kim SK, Kim BK, Shim JH, Gil JE, Yoon YD, Kim JH (2006) “Nonylphenol and octylphenol induced apoptosis in human embryonic stem cells is related to Fas-Fas ligand pathway” Toxicological Sciences. 94 (2) :310-321.

• Larrey D., (2002) “ Epidemiology and individual susceptibility to adverse drug reactions affecting the liver” Semin Liver Dis. 22:145-155.

• Lizardi cervera javier, almeda valdés paloma (2005) “insuficiencia hepática fulminante” dr. javier lizardi cervera subdirección académica: tercer piso del hospital. puente de piedra núm. 150 col. toriello guerra. méxico. d.f. médica sur número 3 julio-

26    

septiembre 2005 volumen 1 2 edigraphic.com derechos reservados, copyright ©: médica sur sociedad de médicos, ac.

• Makino H, Togo S, Kubota T., (2005) “A good model of hepatic failure after excessive hepatectomy in mice” J Surg Res. 127: 171-176.

• Pillans PI (1996) “Drug associated hepatic reactions in New Zealand: 21 years experience” N Z Med J. 23;109:315-319.

• Soza Ried, A., ( 2002)” Insuficiencia hepatica aguda” [En línea] Disponible en

• Temple RJ, Himmel MH., (2002) “Safety of newly approved drugs: implications for prescribing” JAMA. 1;287: 2273-2275.

• Uchiyama M, and Mihara M. (1978) “Determination of malonaldehide precursor in tissues by thiobarbituric acid test” Analytical Biochemistry. 86: 271-278.

• Zimmerman HJ (1999) “The adverse effects of drugs and other chemicals on the liver” 2nd ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.