UPC II Microbiologia
Aula prtica 42012/2013
*Sumrio P4:Observao de bactrias do biofilme oralPreparao de esfregaoTcnicas de colorao:Coloraes simples (azul de metileno)Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)
*Tcnicas de colorao Permitem revelar a forma, a dimenso e os componentes das clulas bacterianas, bem como, os aspetos bioqumicos da sua estrutura.
Permitem observar clulas bacterianas em microscopia de campo claro.
Como o ndice de refrao do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, difcil o exame direto de preparaes no coradas, a no ser que se utilizem tcnicas especiais de iluminao.
*Tcnicas de colorao Preparao do esfregao
Fixao do esfregao
Colorao
Observao ao microscpio
*
Preparao e fixao do esfregaoPreparado sobre uma gota de gua abrangendo uma superfcie de 1 cm2As lminas usadas devem ser lavadas com uma mistura de lcool-ter (1:1)Fixao pelo calor em movimentos circulares.Evitar aquecer demasiado a preparao para no destruir as clulas
*
*
Em caso de incndio.
CobertorExtintorNO APAGAR O FOGO COM GUAManter a calma!! os movimentos rpidos alimentam a combustoTapar o frasco e a lamparina
*
*Azul de metileno
Mtodo de colorao simples utilizao de um nico corante.Corante bsico ou catinico - fixado pelas estruturas mais negativas da clula como os cidos nucleicos e a parede celular das bactrias
*
*Colorao com azul de metilenoCorar com azul de metileno durante 1 minutoLavar com guaSecar com cuidado e observar ao microscpiohttp://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704
*
*Colorao de GramGram +Gram -
Colorao diferencialDistingue bactrias Gram + de bactrias Gram-Indispensvel na identificao bacteriana
*
Bactrias Gram+ e Gram-
Composio diferente da parede celularGram+: Parede homognea e espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem de lipoprotenas.Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina, camada externa complexa, formada por lipoprotenas e polissacardeos
*
*
Colorao de GramVioleta de cristal1 minutoLugol (iodo)1 minutolcool
30-60 segundosSafranina
30-60 segundosdH2OdH2O
*
*Trabalho a realizar:Isolamento de colnias (biofilme oral):Repicagem (riscado em placa)
Preparao de esfregao a partir de meio lquido e slido
Tcnicas de colorao:Colorao de Gram
*
*
*
*
*
*
*
*